CC BY
18
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
39
в плазме крови отмечен рост уровня КРФ на 80 %. Содержание внеклеточной РНК в эритроцитах больных РМЖ имеет незначительно выраженную тенденцию к снижению, а уровень внеклеточной ДНК в эритроцитах крови больных сравним с показателем контроля. Монотерапия арглабином способствует более отчетливой нормализации содержания внеклеточных РНК и ДНК в эритроцитах крови больных.
Заключение. У больных МРРМЖ II—III стадии до начала химиотерапии отмечено резкое снижение внеклеточных нуклеиновых кислот и КРФ; монотерапия арглабином сопровождается ростом изучаемых показателей по сравнению с величинами до лечения.
Т.Н. Заботина, О.В. Короткова, А.А. Борунова, Д.В. Табаков, Ш.Г. Хакимова, М.В. Савостикова, И.К. Воротников, З.Г. Кадагидзе ИММУНОФЕНОТИП ЛИНЕЙНЫХ И МИНОРНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ, ИНФИЛЬТРИРУЮЩИХ ОПУХОЛЬ, У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ФГБУ«РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва
Введение. Степень инфильтрации опухоли лимфоцитами сегодня рассматривается как благоприятный прогностический фактор эффективного ответа на проводимое лечение и общей выживаемости больных раком молочной железы (РМЖ), однако их роль в патогенезе рака до сих пор неизвестна.
Цель исследования — провести исследование иммуно-фенотипа лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, у первично-операбельных больных РМЖ.
Материалы и методы. Исследованы образцы опухолевой ткани 59 первично-операбельных больных РМЖ. Клеточные суспензии получали путем фрагментации ткани опухолей с использованием Medimachine (BD Biosciences), конгломераты удаляли фильтрацией Filcons, диаметр пор не превышал 50 мкм. Все полученные образцы подвергали цитоморфологическому контролю (цитопрепарат Cytospin, окраска по Лейшману, х 400), оценивали количество и качество опухолевых клеток, наличие лимфоидных элементов. Структуру субпопуляций клеток оценивали по связыванию с моноклональными антителами различной специфичности методом многопараметровой проточной цитометрии.
Результаты. При оценке степени инфильтрации опухолевых образцов лимфоцитами установлено, что лимфо-идные CD45+-клетки выявлялись в 100 % случаев методом проточной цитометрии, в то время как при морфологическом исследовании в ряде случаев лимфоидные элементы не были обнаружены. Содержание CD45+-лимфоцитов в полученных суспензиях сильно варьировало — от 0,1 до 28 %, среднее значение составило 3,9 ± 0,7 % (М ± m). Анализ частоты встречаемости образцов опухоли РМЖ с различной степенью инфильтрации показал, что в 50 % случаев содержание CD45+-клеток составило 1,1—9,0 %, в 36,3 % случаев оно оказалось менее 1 %, а в 13,7 % образцов ткани РМЖ количество CD45+-клеток было 10—28 %. Следует заметить, что линейная структура лимфоцитов
(Т-В-NK) не зависела от общего содержания лимфоидных клеток в ткани опухоли и составила в среднем по группе 86,8 ± 1,8 % Т-клеток с фенотипом CD45+CD3+CD19 - ; 3,29 ± 0,7 % В-клеток с фенотипом CD45+CD3 - CD19+ и 1,2 ± 0,2 % NK-клеток с фенотипом CD45+CD3 -CD16+CD56+. В структуре CD45+CD3+ Т-клеток соотношение CD4+ и CD8+ составило 1,3 ± 0,1. Эффекторное звено представлено специфическими CD3+CD8+ цитотоксически-ми Т-лимфоцитами (41,6 ± 1,8 %). При 4-цветном анализе фенотипа функционально значимых минорных субпопуляций оказалось, что более половины (54,0 ± 3,5 %) CD8 клеток имеют регуляторный фенотип CD45+CD8+CD11b - CD28 - , в то время как регуляторные СD4-лимфоциты (CD45+CD4+ CD25+highCD127+low/neg) составляют только 12,8 ± 1,5 %.
Заключение. Иммунофенотип лимфоцитов, инфильтрирующих ткань РМЖ, не зависит от степени инфильтрации опухоли. В структуре лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, преобладают CD3+ Т-лимфоциты, соотношение CD4/CD8 составляет 1,3 ± 0,1, фенотип эффекторных клеток соответствует цитотоксическим Т-лимфоцитам, регуляторные клетки представлены CD45+CD8+CD11b - CD28 - -лимфоцитами, но не CD45+CD4+CD25+hi®hCD127+low/neg.
М.П. Завелевич1, А.А. Фильченков1, С.Д. Завгородняя2, О.А. Ковалева1, Т.С. Иванивская1 НОВАЯ ПЕРЕВИВАЕМАЯ ЛИНИЯ CAR-1 ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА И ЕЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ЦИТОТОКСИЧЕСКОМУ ДЕЙСТВИЮ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ ИЭПОР им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, Киев, Украина; 2Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболот-ного НАН Украины, Киев, Украина
Введение. Исследование чувствительности к цитоток-сическому действию противоопухолевых препаратов перевиваемых линий лимфоидных клеток человека и ее связи с характеристиками этих клеток представляет значительный интерес для разработки новых моделей скрининга химиотерапевтических средств.
Материалы и методы. Перевиваемую линию лимфоидных клеток Car-1 получали пассированием первичной культуры мононуклеаров периферической крови больного с хроническим лимфопролиферативным заболеванием в кондиционированной среде. Иммунофенотипирование клеток проводили с использованием авидин-биотинового комплекса со щелочной фосфатазой в качестве ферментной метки и панели моноклональных антител к дифферен-цировочным антигенам В-лимфоцитов. Кариотип клеток исследовали с помощью стандартных методик. ДНК из клеток выделяли с использованием набора innuPREP Virus DNA Kit (Analityk Jena AC, Германия). Детекцию ДНК вируса Эпштейна — Барр (ВЭБ) проводили методом полиме-разной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени с использованием набора «ЭБАРПОЛ» (НПФ «Литех», Россия) на амплификаторе qTOWER 2.2 (Analityk Jena, Германия). В качестве контроля использовали стандартные линии В-лимфобластоидных клеток Raji и Namalwa, происходящие из лимфомы Беркитта и содержащие ДНК ВЭБ. Исследовали кинетику роста и гибели
№1 / том 15 / 2016
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
40 МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
клеток в культуре в присутствии вепезида или флудараби- фрагментация ДНК и индукция апоптоза. Эксперимента в стандартных концентрациях. тальными исследованиями установлены дополнительные Результаты. Клетки линии Car-1 обладали фенотипом свойства препарата: 1) накапливается преимущественно СБ5 - CD10+CD19+CD20+CD23+CD38+CD43+, отличались в опухолевой ткани, проявляя селективность действия; значительной гетерогенностью цитоморфологических при- 2) нарушает процессы инвазии и адгезии опухолевых кле-знаков. Число хромосом на метафазу колебалось от 22 ток и приводит к «капсулированию» опухоли; 3) являясь до 55, модальное число хромосом 46 обнаруживали в 32 % ловушкой для заряженных частиц, может эффективно ис-клеток. На 100 митотических клеток полиплоидия состав- пользоваться как в сочетанном применении с радиотерапи-ляла 8,7 ± 2,0 %; полиплоидные клетки были представлены ей, так и в качестве средства репарации пострадиационных три-, тетра- и пентаплоидами. Хроматидные аберрации лучевых поражений; 4) не вызывает резистентности, пре-встречались в 6 % метафаз. В клетках Car-1 обнаружено одолевая лекарственную устойчивость организма; 5) не ока-присутствие ДНК ВЭБ на таком же уровне, как и в клетках зывает острого патологического влияния на функции пече-Raji. Устойчивость к цитотоксическому действию флуда- ни и почек и не вызывает в органах и тканях специфических рабина фосфата и вепезида у клеток полученной переви- глубоких нарушений и длительных изменений в составе ваемой линии была сопоставима с таковой у клеток линии периферической крови. Namalwa. Заключение. Новый противоопухолевый препарат мо-Заключение. Из мононуклеаров периферической кро- жет быть использован при лечении многих онкологических ви больного с хроническим лимфопролиферативным за- заболеваний (карцином, сарком, лейкозов, лимфом и т. д.). болеванием была получена новая линия Car-1 лимфоидных клеток человека, содержащих геном ВЭБ, которая может С.А. Зайцев быть использована как для изучения механизмов природной ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ лекарственной устойчивости, так и для скрининга соедине- МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТОК ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ний с потенциальной противоопухолевой активностью. БОЛЬНЫХ IN VITRO ООО «Диатек», Кольцово, Новосибирская область С. Д. Задолинная, П. Штраух, А.А. Абдувалиев, Введение. Наблюдающийся в последние годы прогресс Ю.Ю. Асессорова, В. П. Татарский в снижении смертности от онкологических заболеваний ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ СВОЙСТВА НОВОГО связан как с разработкой новых высокоэффективных ле-N-ДИХЛОРАМИННОГО КОМПЛЕКСА МЕДИ карственных средств, так и с организацией в развитых Институт химии Университета Потсдама, Потсдам, странах обширных скрининговых обследований для выяв-Германия ления онкологических заболеваний на ранних стадиях Введение. Использование достижений в области хи- развития. Однако применяемые методы скрининга обла-мии, биофизики, фармакологии, иммунологии, клеточной дают рядом недостатков: отсутствие универсальных мето-и молекулярной онкологии позволяет оценить проблему дов, недостаточные чувствительность и специфичность, химиотерапии опухолей и подойти к направленному син- дороговизна применяемых методик. тезу биологически активных соединений. Одним из таких Цель исследования — разработка относительно недоро-соединений явился комплекс CuC13H19N2O3Cl3. гого универсального метода диагностики онкологических Цель исследования — изучение влияния противоопухо- заболеваний на ранних стадиях развития с приемлемыми левого препарата на различные внутриклеточные процес- характеристиками чувствительности и специфичности. сы, которые в совокупности приводят в действие триггер- Материалы и методы. Клеточная линия рака молочной ные механизмы гибели патологических клеток. железы MCF-7 получена из коллекции клеточных культур Материалы и методы. Современными методами уста- Института цитологии РАН (Санкт-Петербург). Клиниче-новлены строение, физико-химические свойства и спектр ский материал получен у 10 больных раком молочной же-биологического действия нового комплекса. Исследования лезы, колоректальным раком и меланомой, находящихся соединения in vitro, ex vivo и in vivo в модельных системах, в МБУЗ ГКБ № 1 (Новосибирск). Мононуклеарные клетки на культурах нормальных и опухолевых клеток, бактериях, (МНК) выделяли стандартным методом из перифериче-животных-опухоленосителях с различными локализация- ской крови пациентов на градиенте фиколла. Индекс ци-ми опухолевого процесса и онкологических больных с за- тотоксичности (ИЦ) рассчитывали по выходу лактатдеги-пущенными формами рака показали, что препарат являет- дрогеназы при совместном культивировании МНК ся новым индивидуальным химическим соединением и MCF-7, измеренному согласно инструкции производи-с высоким противоопухолевым и антиметастатическим теля (ЗАО «Вектор-Бест»). действием. Результаты. Установлено, что у пациентов с онкологи-Результаты. Полученный парамагнитный комплекс ческими заболеваниями на I и II стадиях среднее значение в зависимости от условий среды и клеточной мишени мо- ИЦ составляет 45,6 ± 7,3 и достоверно превышает этот жет проявлять активирующее действие (стимуляция аэроб- показатель у условно здоровых доноров — 5,6 ± 1,5. Чувст-ного дыхания), прооксидантное токсическое действие вительность метода при этом составила 100 % (по 10 паци-(окислительная деградация нуклеиновых кислот) и анти- ентам с 3 нозологиями). Специфичность теста (по ИЦ 250 оксидантные способности (тушение активных форм кис- условно здоровых доноров) составила 92 % по ложнопози-лорода). Доказанными механизмами действия препарата тивным результатам 1-го рода (определялись по снижению на опухолевые клетки являются ингибирование гликолиза, ИЦ при последующих измерениях, в динамике) и свыше
№1 / том 15 / 2016 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
