Иммунофенотип линейных и минорных субпопуляций лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, у больных раком молочной железы Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»

39

в плазме крови отмечен рост уровня КРФ на 80 %. Содержание внеклеточной РНК в эритроцитах больных РМЖ имеет незначительно выраженную тенденцию к снижению, а уровень внеклеточной ДНК в эритроцитах крови больных сравним с показателем контроля. Монотерапия арглабином способствует более отчетливой нормализации содержания внеклеточных РНК и ДНК в эритроцитах крови больных.

Заключение. У больных МРРМЖ II—III стадии до начала химиотерапии отмечено резкое снижение внеклеточных нуклеиновых кислот и КРФ; монотерапия арглабином сопровождается ростом изучаемых показателей по сравнению с величинами до лечения.

Т.Н. Заботина, О.В. Короткова, А.А. Борунова, Д.В. Табаков, Ш.Г. Хакимова, М.В. Савостикова, И.К. Воротников, З.Г. Кадагидзе ИММУНОФЕНОТИП ЛИНЕЙНЫХ И МИНОРНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ЛИМФОЦИТОВ, ИНФИЛЬТРИРУЮЩИХ ОПУХОЛЬ, У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ФГБУ«РОНЦ им. Н. Н. Блохина» Минздрава России, Москва

Введение. Степень инфильтрации опухоли лимфоцитами сегодня рассматривается как благоприятный прогностический фактор эффективного ответа на проводимое лечение и общей выживаемости больных раком молочной железы (РМЖ), однако их роль в патогенезе рака до сих пор неизвестна.

Цель исследования — провести исследование иммуно-фенотипа лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, у первично-операбельных больных РМЖ.

Материалы и методы. Исследованы образцы опухолевой ткани 59 первично-операбельных больных РМЖ. Клеточные суспензии получали путем фрагментации ткани опухолей с использованием Medimachine (BD Biosciences), конгломераты удаляли фильтрацией Filcons, диаметр пор не превышал 50 мкм. Все полученные образцы подвергали цитоморфологическому контролю (цитопрепарат Cytospin, окраска по Лейшману, х 400), оценивали количество и качество опухолевых клеток, наличие лимфоидных элементов. Структуру субпопуляций клеток оценивали по связыванию с моноклональными антителами различной специфичности методом многопараметровой проточной цитометрии.

Результаты. При оценке степени инфильтрации опухолевых образцов лимфоцитами установлено, что лимфо-идные CD45+-клетки выявлялись в 100 % случаев методом проточной цитометрии, в то время как при морфологическом исследовании в ряде случаев лимфоидные элементы не были обнаружены. Содержание CD45+-лимфоцитов в полученных суспензиях сильно варьировало — от 0,1 до 28 %, среднее значение составило 3,9 ± 0,7 % (М ± m). Анализ частоты встречаемости образцов опухоли РМЖ с различной степенью инфильтрации показал, что в 50 % случаев содержание CD45+-клеток составило 1,1—9,0 %, в 36,3 % случаев оно оказалось менее 1 %, а в 13,7 % образцов ткани РМЖ количество CD45+-клеток было 10—28 %. Следует заметить, что линейная структура лимфоцитов

(Т-В-NK) не зависела от общего содержания лимфоидных клеток в ткани опухоли и составила в среднем по группе 86,8 ± 1,8 % Т-клеток с фенотипом CD45+CD3+CD19 - ; 3,29 ± 0,7 % В-клеток с фенотипом CD45+CD3 - CD19+ и 1,2 ± 0,2 % NK-клеток с фенотипом CD45+CD3 -CD16+CD56+. В структуре CD45+CD3+ Т-клеток соотношение CD4+ и CD8+ составило 1,3 ± 0,1. Эффекторное звено представлено специфическими CD3+CD8+ цитотоксически-ми Т-лимфоцитами (41,6 ± 1,8 %). При 4-цветном анализе фенотипа функционально значимых минорных субпопуляций оказалось, что более половины (54,0 ± 3,5 %) CD8 клеток имеют регуляторный фенотип CD45+CD8+CD11b - CD28 - , в то время как регуляторные СD4-лимфоциты (CD45+CD4+ CD25+highCD127+low/neg) составляют только 12,8 ± 1,5 %.

Заключение. Иммунофенотип лимфоцитов, инфильтрирующих ткань РМЖ, не зависит от степени инфильтрации опухоли. В структуре лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль, преобладают CD3+ Т-лимфоциты, соотношение CD4/CD8 составляет 1,3 ± 0,1, фенотип эффекторных клеток соответствует цитотоксическим Т-лимфоцитам, регуляторные клетки представлены CD45+CD8+CD11b - CD28 - -лимфоцитами, но не CD45+CD4+CD25+hi®hCD127+low/neg.

М.П. Завелевич1, А.А. Фильченков1, С.Д. Завгородняя2, О.А. Ковалева1, Т.С. Иванивская1 НОВАЯ ПЕРЕВИВАЕМАЯ ЛИНИЯ CAR-1 ЛИМФОИДНЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА И ЕЕ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К ЦИТОТОКСИЧЕСКОМУ ДЕЙСТВИЮ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ ИЭПОР им. Р.Е. Кавецкого НАН Украины, Киев, Украина; 2Институт микробиологии и вирусологии им. Д.К. Заболот-ного НАН Украины, Киев, Украина

Введение. Исследование чувствительности к цитоток-сическому действию противоопухолевых препаратов перевиваемых линий лимфоидных клеток человека и ее связи с характеристиками этих клеток представляет значительный интерес для разработки новых моделей скрининга химиотерапевтических средств.

Материалы и методы. Перевиваемую линию лимфоидных клеток Car-1 получали пассированием первичной культуры мононуклеаров периферической крови больного с хроническим лимфопролиферативным заболеванием в кондиционированной среде. Иммунофенотипирование клеток проводили с использованием авидин-биотинового комплекса со щелочной фосфатазой в качестве ферментной метки и панели моноклональных антител к дифферен-цировочным антигенам В-лимфоцитов. Кариотип клеток исследовали с помощью стандартных методик. ДНК из клеток выделяли с использованием набора innuPREP Virus DNA Kit (Analityk Jena AC, Германия). Детекцию ДНК вируса Эпштейна — Барр (ВЭБ) проводили методом полиме-разной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени с использованием набора «ЭБАРПОЛ» (НПФ «Литех», Россия) на амплификаторе qTOWER 2.2 (Analityk Jena, Германия). В качестве контроля использовали стандартные линии В-лимфобластоидных клеток Raji и Namalwa, происходящие из лимфомы Беркитта и содержащие ДНК ВЭБ. Исследовали кинетику роста и гибели

№1 / том 15 / 2016

РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ