Набор диагностикумов для иммуноферментной индикации антител против хламидий у крупного рогатого скота Текст научной статьи по специальности «Ветеринарные науки»

STUDY ANTIBACTERIAL AND ANTIFUNGAL PROPERTIES OF THE PREPARATION "ROKSATSIN"

Alimov AM, Amirova LO, Amirov DR Summary

Bacteria and fungistatic, bacterial and fungicidal activity of a new drug "Roksatsin. Found its expression in bacterio-and fungistatic action. The test drug does not possess fungicidal activity.

УДК 619:616.9

НАБОР ДИАГНОСТИКУМОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ИНДИКАЦИИ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ХЛАМИДИЙ У КРУПНОГО

РОГАТОГО СКОТА

Банзузи Б.А.С*., Равилов Р.Х*., Герасимов В.В**.

Казанская государственная академия ветеринарной медицины* Республиканский центр профилактики и борьбы со СПИД и ИЗ

Минздрава РТ* *

Ключевые слова: хламидиоз, ифа, тест-система, антитела, крупный рогатый скот.

Key words: Chlamydia, elisa, test system, antibodies, cattle.

Иммуноферментный анализ отличается высокой специфичностью, превышающую в несколько раз рутинные методы диагностики инфекционных болезней. Особенно это заметно при выявлении антител, в ИФА они определяются в первые 2-3 дня и отслеживаются в организме на протяжении 10-12 месяцев после взаимодействия с антигеном.

К преимуществам ИФА относят также: экспрессность, возможность исследовать антикомплементарные сыворотки, воспроизводимость, простота постановки реакции и учета ее результатов, стабильность регентов при хранении, автоматизация некоторых операций и т.д.

Хламидийные инфекции часто протекают в виде стертых, латентных, смешанных и вторичных инфекций, что в значительной степени затрудняет правильную оценку эпизоотической ситуации. В связи с этим при диагностике хламидиозов широко используют серологические методы, главным образом, РСК. В настоящее время применение иммуноферментного метода ветеринарными специалистами во многом сдерживается отсутствием в достаточном количестве необходимых компонентов (тест-систем и оборудования).

Учитывая это, нами была предпринята попытка использовать ИФА для серологических исследований подозрительного по заболеванию хламидиозом крупного рогатого скота.

При конструировании наборов для диагностики инфекционных заболеваний в ИФА главным моментом является подготовка антигена. Он должен хорошо адсорбироваться на твердой фазе (полистирол и др.), с высокой чувствительностью выявлять антитела и не вызывать ложноположительных реакций. Для этого в первую очередь необходимо максимально очистить микроорганизмы от питательной среды (бактерии) или клеточного дебриса (вирусы). В ИФА могут быть использованы как корпускулярные, так и некорпускулярные антигены. Для разрушения микробных клеток используют обработку детергентами (тритон Х-100, додецилсульфат и дезоксихолат натрия и т.п.), ультразвук, автоклавирование и др.

В реакции могут быть использованы как корпускулярные, так и некорпускулярные антигены. По литературным данным известно, что корпускулярные антигены весьма неэффективны для иммуноферментной индикации хламидийных антител, поэтому мы заранее отказались от их испытания в нашей работе.

Для сравнения в ИФА нами были получены и испытаны лизатные антигены хламидий. В качестве детергентов использовали: 0,1%-ный додецилсульфат натрия, 1%-ный дезоксихолат натрия, 1%-ный твин-80 и 1%-ный тритон-Х100. Исходным материалом для изготовления антигена служила очищенная и сконцентрированная хламидиосодержащая взвесь, которую предварительно инактивировали прогреванием при 600С в водяной бане в течение 120 минут. Затем суспензию обрабатывали на ультразвуковом дезинтеграторе (УЗДИ-А) на среднем режиме интенсивности озвучивания в течение 20 секунд. Обработанную ультразвуком суспензию “осветляли” на центрифуге ОС-6 М, в угловом роторе в течение 10 минут при 3500 об/минуту. Полученный надосадок «продавливали» через 20%-ный раствор сахарозы.

Очищенную суспензию обрабатывали указанными выше детергентами и ультразвуком в различных сочетаниях. Всего было испытано 5 вариантов обработки антигена хламидий. От детергентов и обломков клеток освобождались 3-х кратным переосаждением суспензии насыщенным раствором сульфата аммония. Надосадок, содержащий антиген ОД. psittaci, служил исходным материалом для дальнейших процедур очистки, которую проводили путем ультрацентрифугирования при 100000g в течение 6,5 часов в градиенте плотности сахарозы 5-55% ^^) с шагом 5%. Было получено по 11 фракций каждого варианта обработки хламидийной биомассы, из которых были изготовлены антигены для испытания в ИФА с положительными и отрицательными сыворотками крупного рогатого скота.

Наиболее специфичным оказался антиген, полученный из фракции собранной в 35%-ной сахарозе ступенчатого градиента, после центрифугирования взвеси хламидий, которая подвергалась обработке ультразвуком и 1%-ным дезоксихолатом натрия. Коэффициент его специфичности при концентрации антигена 6 мкг/мл составил 10,8.

При проверке полученного в идентичных условиях контрольного антигена из интактных желточных мешков куриных эмбрионов было установлено, что положительные и отрицательные контрольные сыворотки с ним не реагируют.

Специфический антиген не реагировал с гетерологичными сыворотками, содержащими антитела против возбудителей микоплазм и бруцелл.

Разработанная тест система была использована для исследования сывороток крови, полученных от подозрительных по заболеванию хламидиозом крупного рогатого скота. Испытано более 400 проб, 28,2% из них были оценены как положительно реагирующие с хламидийным антигеном. При этом в ИФА отдельные “полевые” сыворотки реагировали в титре 1:2560, что говорит о его высокой чувствительности метода.

Эти же пробы были испытаны в РСК: положительно и сомнительно реагирующие сыворотки составили 4,6%. Значение показателя "РСК отрицательно / ИФА положительно", равное 23,6%, говорит о более высокой чувствительности последнего.

Таким образом, наши исследования позволили подобрать эффективные режимы очистки и лизиса антигенов хламидий при конструировании иммуноферментной тест-системы для индикации антител у крупного рогатого скота.

НАБОР ДИАГНОСТИКУМОВ ДЛЯ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ИНДИКАЦИИ

АНТИТЕЛ ПРОТИВ ХЛАМИДИЙ У КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

Банзузи Б.А.С., Равилов Р.Х., Герасимов В.В.

Резюме

Подобраны эффективные режимы очистки и лизиса антигенов хламидий при конструировании иммуноферментной тест-системы для индикации антител у крупного рогатого скота.

THE DIAGNOSTICUM SET FOR ENZYME IMMUNOASSAY DISPLAY OF ANTIBODIES AGAINST CHLAMYDIA IN CATTLE

Banzouzi B.A.S., Ravilov R.Kh., Gerasimov V.V.

Summary

Select effective modes of treatment and lysis of chlamydial antigens in the design of ELISA test systems for the identification of antibodies in cattle.