CC BY
111
УДК 619: 616.98: 579.882.11 619: 616-073
РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ «НАБОРА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
МЕТОДОМ ИФА»
Хисматова Д.Ю., Евстифеев В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А.,
Хусаинова Г.И.
ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных», г.Казань
Ключевые слова: хламидиоз, крупный рогатый скот,
серологическая диагностика, реакция связывания комплемента,
иммуноферментный анализ.
Key words: chlamydiosis, cattle, serological diagnosis, reaction
complement fixation, enzyme-linked immunosorbent assay.
Введение. Хламидиоз - инфекционное заболевание животных, птиц и человека, в том числе и крупного рогатого скота, имеющее широкое распространение. Ущерб от хламидиоза складывается за счет потерь от абортов, мертво- и слаборождений, гибели молодняка, выбраковки производителей, недополучения продукции животноводства и многого другого, что обуславливает необходимость эпизоотического контроля за этой инфекцией.
В настоящее время, несмотря на невысокую эффективность, для серологической диагностики хламидиоза КРС используют реакцию связывания комплемента (РСК), т.к. другие методы, например ИФА, хоть и разработаны, но не подкреплены наличием доступных отечественных тест-систем на рынке ветеринарных диагностических препаратов.
Исходя из этого, ранее нами были проведены исследования по разработке специфического хламидийного антигена для ИФА и на его основе создан «Набор препаратов для диагностики хламидиоза КРС методом ИФА», который был испытан в лабораторных и производственных условиях.
Материалы и методы. Для исследований использовали 1971 сыворотку крови КРС из 45 не благополучных по хламидиозу животноводческих хозяйств РТ и других регионов РФ.
ИФА ставили в непрямом варианте согласно «Инструкции по применению набора препаратов для диагностики хламидиоза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа (ИФА)», утвержденной для производственных испытаний.
Учет результатов реакции проводили инструментально на спектрофотометре модели Bio-Rad Model 680 при длине волны 490. Для
оценки результата вычисляли критический уровень (ОП крит.), который определяется как значение оптической плотности отрицательного контроля (ОП отр.) умноженное на 2:
ОП крит. = ОП отр. х 2
Результат считали положительным, если значение оптической плотности данного образца выше критического уровня (ОП исп. > ОП крит.).
Если оптическая плотность испытуемой пробы меньше или равна оптической плотности отрицательного контроля (ОП исп. < ОП отриц.), то результат считали отрицательным.
Если же оптическая плотность испытуемого образца больше оптической плотности отрицательного контроля и меньше или равна ОП крит. (ОП крит. > ОП исп. > ОП отр.), то результат реакции считается
сомнительным.
Параллельно все сыворотки крови исследовали в РСК, используя «Набор антигенов и сывороток для серологической диагностики хламидиоза сельскохозяйственных животных» (№ РОСС Яи. ФВ01. Н21898) производства ФГУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» (г. Казань). Результаты оценивали визуально, по феномену гемолиза эритроцитов. Полное отсутствие гемолиза эритроцитов оценивали как положительную реакцию (4 креста), а полный гемолиз соответственно как отрицательную реакцию.
Собственные исследования. Испытания экспериментальных серий «Набора препаратов для диагностики хламидиоза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа» проводили в 2 этапа: в
лабораторных и «производственных» условиях.
На первоначальном этапе, в лабораторных условиях, в РСК и ИФА с применением разработанного набора исследованию было подвергнуто 963 пробы сывороток крови КРС из 41 неблагополучного хозяйства РТ и других регионов России. При этом в РСК положительно реагировало 172 пробы, что составило 17,8%. При этом средний титр положительно реагирующих сывороток (М±м) был равен 1:13,4±8,3. При исследовании аналогичных проб сывороток крови в ИФА положительная реакция выявлена в 234 (24,9%) случаях. Средний титр положительных проб (М±м) в ИФА составил 1:3256±52,1. Сопоставление результатов двух тестов показало, что в ИФА выявлялось в 1,4 раза больше положительных результатов, чем в РСК.
Основываясь на положительных результатах первого этапа испытаний, дальнейшие исследования проводились на базе ФГУ «Татарская межрегиональная ветеринарная лаборатория» (г.Казань). Было исследовано 1008 проб сывороток крови КРС из 4 не благополучных по хламидиозу животноводческих хозяйств РТ и других регионов РФ.
В ходе проведенных производственных испытаний установлено, что из 1008 сывороток крови в РСК реагировало положительно 60 проб (5,9%), а в ИФА 123 (12,2%). Таким образом, в ИФА было выявлено в 2 раза больше положительных результатов, чем в РСК.
Следует отметить, что в сравнительных опытах результаты ИФА показали хорошую корреляцию с данными базовой реакции - РСК, хотя она и не была полной. Расхождения в результатах ИФА и РСК, по-видимому, связаны с разными классами иммуноглобулинов (антител), выявляемых этими реакциями.
Также очень важно подчеркнуть, что количество серопозитивных проб в обоих тестах напрямую зависело от интенсивности проявления клинических признаков заболевания у животных, т.е. в хозяйствах, где течение хламидиоза носило острый характер, процент серопозитивности животных был значительно выше, чем в хозяйствах с латентной стадией течения хламидийной инфекции. В ряде случаев результаты серологических исследований подтверждены в РИФ.
Заключение. В ходе проведенных исследований нами были определены оптимальные условия проведения реакции, что увеличивает точность и чувствительность иммуноферментного анализа при диагностике хламидиоза крупного рогатого скота
Результаты испытания «Набора препаратов для диагностики хламидиоза КРС методом ИФА» показали его высокую эффективность, что позволяют рекомендовать испытанную тест-систему для ретроспективной диагностики хламидиоза КРС.
ЛИТЕРАТУРА: 1. Вейсбург В.Г., Хатс Т.П., Войс С.Р. // Хламидии и хламидофиллы. // Российский ветеринарный журнал 4, 2008г. С. 570-574. 2. Домейка М.А., Ришкявичене В.П., Люткивячене В.И. // Некоторые методические особенности проведения иммуноферментного анализа для изучения хламидиозов КРС. // Тезисы докладов научно-практической конференции - «Ферментативные препараты в ветеринарии и
животноводстве». Каунас, 28-29 сентября 1989г. С. 32-33. 3. Евстифеев В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А., Равилов А.З. // Изучение набора диагностикумов для иммунофкрментного анализа при хламидиозе свиней. // Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 80-летию ФГУП «Щелковский биокомбинат» -
«Ветеринарная биотехнология настоящее и будущее.» 20-23 сентября, 2004г. С. 189-191.4. Schmeer N., Perez-Martinez J.A., Schnorr K., Storz J., and Krauss H. // Analysis of the IgG response of cattle to natural and experimental Chlamydial infections. // IV infectional symposium of veterinary laboratory diagnosticians, 2-6 june, 1986. P. 472-475.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИСПЫТАНИЯ «НАБОРА ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ХЛАМИДИОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА МЕТОДОМ ИФА»
Хисматова Д.Ю., Евстифеев В.В., Хусаинов Ф.М., Барбарова Л.А.,
Хусаинова Г.И.
Резюме
В работе приведены результаты лабораторных и производственных испытаний «Набора для диагностики хламидиоза крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа (ИФА)». Установлено, что эффективность диагностики хламидиоза у КРС с применением разработанного набора в 2 раза выше, чем в РСК.
TEST RESULTS: «SET FOR DIAGNOSIS OF CHLAMIDIOSIS IN CATTLE IFA
METHOD»
Khismatova D.J., Evstifeev V.V., Khusainov F.M., Barbarova L.A.,
Khusainova G.I.
Summary
In article the basic development cycles of test-system for diagnostics of a Chlamydiosis of a cattle in Elisa test have been described. It's results laboratories and industrial test are resulted. Established that efficiency for diagnostics of a Chlamidiosis of a cattle with application the developed testsystem in 2 above than in reaction complement fixation.
УДК 619:611.6:636.93
АНАТОМО-ТОПОГРАФИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ГИСТОСТРУКТУРА СЕМЕННИКОВ НОРКИ АМЕРИКАНСКОЙ
В ПЕРИОД ГОНА
Хонин Г.А., Шестаков В.А., Кулинич Е.Н., Вологжин Е.Г.,
Овчинников Д.К.
ФГОУ ВПО «Институт Ветеринарной Медицины ОмГАУ»
Ключевые слова: семенники, сперматогонии, белочная оболочка, гистоструктура, норка американская.
Key words: milt, spermatogonium, tunica albuginea, histostructure, the american mink.
Одна из задач практического звероводства - формирование в звероводческих хозяйствах высокопродуктивного поголовья. Особую
