МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ТОНКОЙ КИШКИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ КАЛОВОМ ПЕРИТОНИТЕ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ОКСИТОЦИНА И АМОКСИКЛАВА Текст научной статьи по специальности «Биотехнологии в медицине»

■ УДК 616.381-002-089-092.9:611.814.1/3

К. С. НЕМАЛЬЦЕВА, Д. В. ВОЛКОВ, А. А. СТАДНИКОВ, В. С. ТАРАСЕНКО МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ТОНКОЙ КИШКИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ КАЛОВОМ ПЕРИТОНИТЕ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ОКСИТОЦИНА И АМОКСИКЛАВА

Оренбургский государственный медицинский университет, Оренбург, Российская Федерация

_ АННОТАЦИЯ_

Введение. Несмотря на достижения медицины, летальность пациента от перитонита остается высокой за счет выраженной интоксикации и явлений энтеральной недостаточности. Окситоцин в сочетании с антибактериальным препаратом позитивно влияет на репаративную регенерацию структур тонкой кишки на фоне калового перитонита.

Цель - оценить влияние сочетанного применения окситоци-на и амоксиклава на состояние клеточных элементов тонкой кишки в условиях экспериментального калового перитонита.

Материалы и методы. Экспериментальное исследование проведено в четырех сериях опытов на 36лабораторных беспородных белых половозрелых крысах самцах массой 250-300 г. В первую группу вошли 9 животных с экспериментальным каловым перитонитом, которым через 2 часа от начала эксперимента и затем ежедневно внутривенно вводился 0,9 % раствор хлорида натрия в расчете 6 мл/кг. Во второй группе 9 животных, которым внутривенно вводился окситоцин (Гедеон Рихтер ОАО, Венгрия) в расчете 5 мг/кг через 2 часа от начала эксперимента и затем ежедневно. Третью группу составили 9 животных с внутривенным введением через 2 часа от начала эксперимента и затем ежедневно амоксиклава (Сандоз ГмбХ, Австрия) 40 мг/кг. В четвертой группе - 9

животных, которым через 2 часа от начала эксперимента и затем ежедневно внутривенно вводился окситоцин и амок-сиклав. Моделирование экспериментального калового перитонита осуществляли путем введения животным в брюшную полость 30 % каловой взвеси из расчета 0,5 мл на 1 кг массы тела. Изучение полученных в эксперименте тканей тонкой кишки осуществлялось на светооптическом и иммуногисто-химическом уровне.

Результаты. Изучение структурных изменений тонкой кишки показывает эффективность сочетанного применения окситоцина и антибактериального препарата в лечебной коррекции калового перитонита. Эти наблюдения согласуются с ранее произведенными исследованиями.

Заключение. Сочетанное использование окситоцина и антибактериального препарата (амоксиклава) оказывает положительное влияние на репаративные процессы тонкой кишки в виде снижения полиморфноклеточной инфильтрации, уменьшения отека оболочек тонкой кишки, активизации процессов пролиферации энтероцитов и соединительнотканных элементов.

Ключевые слова: перитонит, окситоцин, амоксиклав, тонкая кишка, энтероциты, эндогенная интоксикация.

Для цитирования: Немальцева К. С., Волков Д. В., Стадников А. А., Тарасенко В. С. Морфофункциональные изменения тонкой кишки при экспериментальном каловом перитоните при использовании окситоцина и амоксиклава // Оренбургский медицинский вестник. 2024. Т. Х11, № 2 (46). С. 44-48.

Рукопись получена: 26.03.2024 Рукопись одобрена: 15.05.2024 Опубликована: 15.06.2024

KSENIA S. NEMALTSEVA, DMITRY V. VOLKOV, ALEXANDER A. STADNIKOV, VALERY S. TARASENKO MORPHOFUNCTIONAL CHANGES OF THE SMALL INTESTINE IN EXPERIMENTAL FECAL PERITONITIS AGAINST THE BACKGROUND OF THE USE OF OXYTOCIN AND AMOXICLAV

Orenburg State Medical University, Orenburg, Russian Federation

_ ABSTRACT_

Introduction. Despite the achievements of medicine, the mortality rate of the patient from peritonitis remains high due to severe intoxication and the phenomena of enteral insufficiency. Oxytocin in combination with an antibacterial drug has a positive effect on the reparative regeneration of small intestine structures against the background of fecal peritonitis.

Aim-to evaluate the effect of the combined use of oxytocin and amoxiclav on the state of the cellular elements of the small intestine in the conditions of experimental fecal peritonitis.

Materials and methods. The experimental study was conducted in four series of experiments on 36 laboratory mongrel white sexually mature male rats weighing 250-300 g. The first group included 9 animals with experimental fecal peritonitis, which were injected 0.9 % sodium chloride solution at a rate of 6 ml/kg daily 2 hours after the start of the experiment and then intravenously.

In the second group, 9 animals were injected intravenously with oxytocin (Gedeon Richter JSC, Hungary) at the rate of 5 mg/kg 2 hours after the start of the experiment and then daily. The third group consisted of 9 animals with intravenous administration 2 hours after the start of the experiment and then daily amoxiclav (Sandoz GmbH, Austria) 40 mg/kg. In the fourth group, 9 animals were injected intravenously with oxytocin and amoxiclav 2 hours after the start of the experiment and then daily. Simulation of experimental fecal peritonitis was carried out by injecting 30 % of fecal suspension into the abdominal cavity of animals at the rate of 0.5 ml per 1 kg of body weight. The study of the experimentally obtained tissues of the small intestine was carried out at the light-optical, electron microscopic and immunohistochemical levels.

Results. The study of structural changes in the small intestine shows the effectiveness of the combined use of oxytocin and an an-

tibacterial drug in the therapeutic correction offecal peritonitis. These observations are consistent with previous studies.

Conclusion. The combined use ofoxytocin and an antibacterial drug (amoxiclav) has a positive effect on the reparative processes of the small intestine in the form of a decrease in polymorphocel-

ВВЕДЕНИЕ

Среди многообразия нарушений гомеостаза при перитоните значительное место принадлежит изменениям в нейроэндокринном аппарате. Нейросекреторные клетки гипоталамуса осуществляют нейрогуморальную регуляцию висцеральных органов, различные стороны адаптивных реакций и морфогенетических процессов [1, 2, 3]. Гипоталамо-гипофизарная нейросекретор-ная система служит индикатором той или иной степени функционального напряжения организма в связи со своей чувствительностью как к стрессорному воздействию, так и к влиянию различных бактериальных патогенов. В связи с этим особый интерес представляет влияние пептидного гормона крупноклеточных ядер гипоталамуса окситоцина на гистоструктуры органов брюшной полости при возникновении острого перитонита. При перитоните, помимо выраженного интоксикационного синдрома, возникает клиника энтеральной недостаточности. При этом особый интерес вызывают морфофунк-циональные изменения в тонкой кишке, возникающие на фоне острого перитонита, и их динамика в аспекте гипоталамического нейроэндокринного контроля.

ЦЕЛЬ исследования - оценить влияние сочетанного применения окситоцина и амоксиклава на состояние клеточных элементов тонкой кишки в условиях экспериментального калового перитонита. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Экспериментальное исследование произведено в 4 сериях опытов на 36 лабораторных беспородных белых половозрелых крысах самцах массой 250-300 г. В первую группу вошли девять крыс с экспериментальным каловым перитонитом, которым через два часа от начала эксперимента и затем ежедневно внутривенно вводился 0,9 % раствор хлорида натрия в расчете 6 мл/кг. Во второй группе - девять животных, которым внутривенно был введен окситоцин (Гедеон Рихтер ОАО, Венгрия) в расчете 5 мг/кг через два часа от начала эксперимента и затем ежедневно. Третья группа состояла из девяти животных, которым через два часа после начала эксперимента внутривенно и затем ежедневно вводился амоксиклав (Сандоз ГмбХ, Австрия) 40 мг/кг. В четвертой группе - девять животных, которым через два часа от начала эксперимента и затем ежедневно производилось сочетанное введение окситоцина и амоксиклава. Всем лабораторным крысам за семь суток до введения в брюшную полость 30 % каловой взвеси, в медиальную поверхность левого бедра внутримышечно вводили стерильный 10 % раствор хлорида кальция из расчета 1,0 мг / 100 г массы тела животного [4]. Моделирование

lular infiltration, a decrease in edema of the membranes of the small intestine, activation of the proliferation of enterocytes and connective tissue elements.

Key words: peritonitis, oxytocin, amoxiclav, small intestine, enterocytes, endogenous intoxication.

экспериментального калового перитонита осуществляли путем введения животным в брюшную полость 30 % каловой взвеси из расчета 0,5 мл на 1 кг массы тела [5]. Через 24 часа после начала эксперимента под эфирным наркозом выполнялась срединная лапаротомия, санация брюшной полости путем промывания последней физиологическим раствором. Послеоперационная рана ушивалась наглухо. Животные выводились из опыта путем ингаляции летальной дозы эфира через 24, 48 и 72 часа по 3 особи в каждой группе путем декапитации.

Изучение гистоструктур тонкой кишки осуществлялось на светооптическом и имму ногистохимическом уровнях.

Для идентификации клеток с признаками апоптоза применяли иммуноцитохимические реакции на определение экспрессии синтеза про- и антиапоптических протеинов р53, bcl2, ki67.

Результаты исследований обработаны методами вариационной статистики с использованием пакета программ для ПК Microsoft Excel 7.0, Statisticа 10.0. РЕЗУЛЬТАТЫ

Анализ гистологических срезов тонкой кишки показал, что в первые сутки эксперимента нарушалось кро-во- и лимфообращение в виде стаза капилляров и венул с развитием отека. Наблюдалось венозное полнокровие ворсин с множественной инфильтрацией лейкоцитами и острым нарушением микроциркуляции (рис. 1).

Через 48 и 72 часа после начала эксперимента наблюдалась выраженная лимфоцитарно-гистиоцитарная инфильтрация собственной пластинки и очаговые диапе-дезные кровоизлияния, деформация ворсин и десквамация эпителия (рис. 2). Ко 2 суткам от начала эксперимента высота и толщина ворсинок значительно отличались от нормальных значений. Отмечено формирование зон некротических изменений слизистой оболочки кишечника, местами переходящие в подслизистую и серозные оболочки. Обнаружены некротические изменения в подслизистых ганглиях и нейронах межмышечного сплетения Ауэрбаха, деформация отдельных нейронов и разрыв ядер. Это сопровождалось отеком, кровоизлияниями, спастическими изменениями гладкомышечных клеток, которые подвергались деструктивным изменениям на фоне поражения нервно-мышечных структур.

Изменения в гистоструктуре висцеральных органов ЖКТ в условиях использования окситоцина в целом можно оценить как позитивные. Это проявилось прежде всего в уменьшении гиперемии серозных покровов и снижении числа гемокапилляров (табл. 1). Существенно уменьшался отек мезотелиоцитов и соединительнотканных структур, десквамация мезотелиальных клеток (рис. 3).

For citation: Nemaltseva K. S., Volkov D. V., Stadnikov A. A., Tarasenko V. S. Morphofunctional changes of the small intestine in experimental fecal peritonitis against the background of the use of oxytocin and amoxiclav. Orenburg Medical Bulletin. 2024;ХII;2(46):44-48. (In Russia). Received: 26.03.2024 Accepted: 15.05.2024 Published: 15.06.2024

Отек уменьшался в слизистой, подслизистой и наружной мышечной оболочке (рис. 4).

В межмышечном нервном сплетении Ауэрбаха не отмечены деструктивные изменения интрамуральных ганглиозных клеток (рис. 5).

• ^ ч .. . ......:

Рисунок 1 - Участок тонкой кишки крысы через 2 суток от начала эксперимента (микроабсцесс в слизистой, подслизистой и наружной мышечный оболочках). Фиксация: спирт-формол. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув.: об. 20, ок. 10 Figure 1 - A section of the rat small intestine 48 hours after the start of the experiment (microabcess in the mucosa, submucosa and outer muscle membranes). Fixation: alcohol-formol. Coloration: Mayer's hematoxylin and eosin. Uv.: vol. 20, approx. 10

Риунок 3 - Участок тонкой кишки крысы через 24 часа эксперимента. Фиксация - 10 % раствор нейтрального формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув.: об. 20, ок. 10. А - десквамация эпителия, Б - полиморфноклеточный инфильтрат Figure 3 - A section of the rat's small intestine after 24 hours of the experiment. Fixation is a 10 % solution of neutral formalin. Coloration: Mayer hematoxylin and eosin. Uv.: vol. 20, about 10. A - desquamation of the epithelium, B - polymorphocellular infiltration

Рисунок 2 - Фрагмент стенки тонкой кишки крысы через 2 суток от начала эксперимента. Отек структур ворсинок и десквамация эпителия. Фиксация: 10 % раствор нейтрального формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув.: об. 20, ок. 10. Figure 2 - A fragment of the wall of the small intestine of a rat 48 hours after the start of the experiment. Swelling of the structures of the lumps and desquamation of the epithelium. Fixation: 10 % solution of neutral formalin. Coloration: Mayer's hematoxylin and eosin. Uv.: vol. 20, approx. 10.

Рисунок 4 - Фрагмент слизистой оболочки тонкой кишки крысы через 3 суток эксперимента (введение окситоцина в условиях калового перитонита). Фиксация - 10 % раствор нейтрального формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув.: об. 20, ок. 10 Figure 4 - Fragment of the mucous membrane of the rat small intestine after 72 hours of the experiment (administration of oxytocin in conditions of fecal peritonitis). Fixation is a 10 % solution of neutral formalin. Coloration: Mayer hematoxylin and eosin. Uv.: vol. 20, about 10

кишечнои стенки свидетельствовали о постепенном возвращении к норме.

Таблица 1 -Морфометрические показатели структур тонкой кишки экспериментальных животных. Стадия: 48 часов после развития калового перитонита. Подсчет произведен в усл. полях зрения. Ув.: об. 40, ок. 10

Table 1 - Morphometric parameters of small intestine structures of experimental animals. Stage: 48 hours after the development of fecal peritonitis. The calculation was made in the followingfields of view. Uv.: vol. 40, about 10

Показатель Без лечения Введение окситоцина и амоксиклава

Количество тромбированных гемокапилляров брюшины, % 12,6 ± 2,1 3,9 ± 0,4*

Десквамация мезотелиоцитов, % 21,6 ± 1,6 8,8 ± 1,6*

Ki67 позитивные энтероциты, %о — 5,7 ± 0,4

p53 позитивные энтероциты, %о 4,6 ± 0,1 1,3 ± 0,2*

* Разница достоверна по сравнению с соответствующим показателем в группе без лечения (р < 0,04).

Рисунок 5 - Фрагмент мышечноИ оболочки тонкоИ кишки крысы через 2 суток эксперимента (серия опыта: использование оксито-цина и амоксиклава). Фиксация - 10 % раствор нейтрального формалина. Окраска: гематоксилин Майера и эозин. Ув.: об. 20, ок. 10. Стрелками указано межмышечное нервное сплетение Ауэрбаха Figure 5 - A fragment of the muscle membrane of the rat small intestine after 48 hours of experiment (series of experiments: the use of oxytocin and amoxiclav). Fixation is a 10 % solution of neutral formalin. Coloration: Mayer hematoxylin and eosin. Uv.: vol. 20, about 10. The arrows indicate the intermuscular nerve plexus of Auerbach

Применение окситоцина, особенно в сочетании с антибиотиком, достоверно повышало численность энтероци-тов с признаками апоптоза (по показателям экспрессии и синтеза протеина p53). При этом происходила активизация репаративных процессов в данных клетках (табл. 1), о чем свидетельствовало усиление синтеза протеина Ki67 (маркера пролиферации). Выявлены эпителиальные и соединительнотканные клетки, экспрессирующие синтез протеина Ki67 как маркера активизации гена пролиферации. Отмечалось уменьшение отека в наружной мышечноИ оболочке кишки. Кроме того, при снижении проапоптотической доминанты у эндотелиоцитов и гладких миоцитов наблюдалась устойчивая способность экспрессии синтеза протеина Ki67. Через 3 суток эксперимента морфометрические показатели структур _ СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ_

В сериях опытов, где с лечебной целью мы применяли окситоцин в сочетании с антибиотиком, через 48 часов в серозной оболочке наблюдаются менее выраженные структурные нарушения по сравнению с животными с экспериментальным каловым перитонитом, но без введения окситоцина. Существенно снижалось набухание мезотелия и соединительнотканных клеток, повышалась численность десквамированных мезоте-лиоцитов (табл. 1). Появились малодифференцирован-ные фибробласты, в том числе плазматические клетки и миофибробласты. Активация периваскулярных клеток приводила к новообразованию капилляров. Появились очаги новообразованных мезотелиальных клеток. Зоны некротических изменений стромального компонента брюшины значительно уменьшились.

Исследования влияния окситоцина на органы брюшной полости в эксперименте проводились неоднократно: в 2001-2002 гг. Б. А. Стадников и Е. А. Шеина установили, что при моделировании панкреатита введение окситоцина повышает репаративные процессы в тканях поджелудочной железы [6]; в 2008 г. С. В. Кретининым, В. С. Тарасенко экспериментально доказана эффективность применения комбинации «окситоцин + антибиотик» в лечении абдоминального сепсиса [7]. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Совокупность результатов по изучению структурных изменений тонкой кишки экспериментальных животных показала, что применение окситоцина для лечебной коррекции калового перитонита оказалось рациональным и достаточно эффективным.

Стадников А. А., Бухарин О. В., Перунова Н. Б. Роль окситоцина и микробиоты в репаративном гистогенезе при взаимодействии про-и эукариот // Морфология. 2020. Т. 157, № 2-3. С. 201.

Стадников А. А., Бухарин О. В. Гипоталамическая нейросекреция и структурно-функциональный гомеостаз про- и эукариот (морфологические основы реактивности, пластичности и регенерации). -Оренбург: ОрГМА, 2012. - 296 с.

Волков Д. В. Клинико-экспериментальное обоснование лечения эн-теральной недостаточности: диссертация. - Оренбург, 2015. - 215 с. Способ моделирования перитонита у крыс. Патент № 2376648; МПК 009В 23/28 / Новосельцев А. В., Чумаков П. А., СеменюкА. А., Кирсанов В. М. № 2008127554/14; заявл. 07.07.2008; опубл. 20.12.2009. Бюл. № 35.

1

2

5. Попова Т. С., Тамазашвили Т. Ш., Шестопалов А. Е. Синдром кишечной недостаточности в хирургии. - Москва: Медицина, 1991. - 240 с.

6. Стадников Б. А., Шеина Е. А. Влияние гипоталамических нонапепти-дов на регенерацию панкреатоцитов при остром экспериментальном панкреатите // Сборник трудов III научно-практической конференции

_REFERENCES_

1. Stadnikov A. A., Bukharin O. V., Perunova N. B. The role of oxytocin and microbiota in reparative hiSogenesis in the interaction of pro- and eukaryotes. Morphology. 2020;2-3:201. (In Russian)

2. Stadnikov A. A. Hypothalamic neurosecretion and Sructural and functional homeoSasis of pro- and eukaryotes (morphological bases of reactivity, plasticity and regeneration). Medicine. 2012;296. (In Russian)

3. Volkov D. V. Clinical and experimental subSantiation ofthe treatment ofen-teral insufficiency. Dissertations. 2015;215. (In Russian)

4. Novosel'tsev A. V., Chumakov P. A., Semenyuk A. A., Kirsanov V. M. Peritonitis modelling in rats. Patent N 2376648 of the Russian Federation. 2009. Byul. N 35. (In Russian)

врачей Приволжско-Уральского военного округа «Актуальные вопросы военной и практической медицины». - Оренбург, 2002. - С. 168-169. 7. Тарасенко В. С., Кретинин С. В., Фадеев С. Б., ПеруноваН. Б., Явнова С. В., Бухарин О. В. Применение комбинации окситоцина и цефотаксима в лечении экспериментального сепсиса // Хирург. - 2008. - № 8. - С. 11-15.

5. Popova T. S., Tamazashvili T. Sh., She^opalov A. E. Internal insufficiency syndrome in surgery. Medicine. 1991;240. (In Russian)

6. Stadnikov B. A., Sheina E. A. The effect of hypothalamic nonapeptides on the regeneration of pancreatocytes in acute experimental pancreatitis. Proceedings of the III scientific and practical conference of doctors of the Volga-Ural Military District «Topical issues of military and practical medicine». 2002;168-169. (In Russian)

7. Tarasenko V. S., Cretinin C. B., Fadeev S. B., Perunova N. B., Yavnov C. B., Bukharin O. V. The use of a combination of oxytocin and cefotaxime in the treatment of experimental sepsis. Surgeon. 2008;8:11-15. (In Russian)

ДОПОЛНИТЕЛЬНАЯ ИНФОРМАЦИЯ/ADDITIONAL INFORMATION_

Вклад авторов. Произведено экспериментальное исследование, на примере которого показана эффективность применения окситоцина в лечебной коррекции калового перитонита. Данное исследование позволяет предложить внедрение окситоцина в перечень препаратов для лечебной коррекции калового перитонита.

Author contribution. An experimental study was carried out, the example of which shows the effectiveness of oxytocin in the therapeutic correction of fecal peritonitis. This study allows us to propose the introduction of oxytocin into the list of drugs for the therapeutic correction of fecal peritonitis. Соблюдение этических стандартов. При выполнении исследований соблюдались «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных» согласно приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.1977 г и требования приказа МЗ СССР № 742 от 13.11.1984 г «Об утверждении правил проведения работ с использованием экспериментальных животных», Федеральный закон «О защите животных от жестокого обращения» от 01.01.1997 г, приказ МЗ РФ от 19.06.2003 г № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики»), все процедуры с использованием животных были одобрены локальным этическим комитетом ФГБОУ ВО ОрГМУ Минздрава России. Compliance with ethical standards. When performing the research, the «Rules for carrying out work using experimental animals» were observed in accordance with the order of the Ministry of Health of the USSR No. 755 of 12.08.1977 and the requirements of the order of the Ministry of Health of the USSR No. 742 of 13.11.1984 «On approval of the rules for carrying out work using experimental animals», the Federal Law «On the Protection of Animals from Cruelty» of 01.01.1997, the order of the Ministry of Health RF dated 06/19/2003, No. 267 «On approval of the Rules of Laboratory Practice»), all procedures using animals were approved by the local ethics Committee of the Federal State Budgetary Educational Institution of the Ministry of Health of the Russian Federation.

Финансирование. Авторы заявляют об отсутствии внешнего финансирования при проведении исследования. Funding source. This study was not supported by any external sources of funding.

Конфликт интересов. Авторы декларируют отсутствие явных и потенциальных конфликтов интересов, связанных с публикацией настоящей статьи.

Competing interests. The authors declares that there are no obvious and potential conflicts of interest associated with the publication of this article.

_ ОБ АВТОРАХ-

* Ксения Сергеевна Немальцева, ассистент;

адрес: г. Оренбург, пр-т Гагарина, 23;

ORCID: 0000-0003-3144-4870;

e-mail: [email protected]

Дмитрий Владимирович Волков, д. м. н.,

профессор;

ORCID: 0000-0002-5253-5379;

e-mail d. [email protected]

_ AUTHORS INFO_

* Ksenia S. Nemaltseva, assistant;

address: Orenburg, Gagarin Avenue, 23;

ORCID: 0000-0003-3144-4870;

e-mail: [email protected]

Dmitry V. Volkov, Doctor of Medical Sciences,

Professor;

ORCID: 0000-0002-5253-5379; e-mail d. [email protected]

Александр Абрамович Стадников, д. б. н.,

профессор;

ORCID: 0000-0002-6107-0534; e-mail: alexander. [email protected] Валерий Семенович Тарасенко, д. м. н., профессор;

ORCID: 0000-0003-1491-9213; e-mail: [email protected]

Alexander A. Stadnikov, Doctor of Biological

Sciences, Professor;

ORCID: 0000-0002-6107-0534;

e-mail: alexander. [email protected]

Valery S. Tarasenko, Doctor of Medical Sciences,

Professor;

ORCID: 0000-0003-1491-9213; e-mail: [email protected]

f Автор, ответственный за переписку / Corresponding author