CC BY
17
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Инфекция и иммунитет
дельно. Помимо этого, выявлялись антитела к ВГЧ 3, ЦМВ, ЭБВ, ВГЧ 6 и ВГЧ 8, а также хламидиям и ток-соплазмам.
Наиболее высокий средний уровень серопо-зитивности среди детей отмечался по отношению к ВГЧ 6 (79%), ЦМВ (56%), ЭБВ (55%) и ВГЧ 3 (44%). Антитела к ВГ 8 типа не были выявлены ни у одного ребенка. Антитела к токсоплазмам и хламидиям определились у 8,8 и 7,8% детей соответственно. IgG к ВПГ 1/2 обнаруживались в 29,4% случаев. В подавляющем количестве случаев выявлялись антитела к ВПГ 1 (28,4%). Серопозитивными к ВПГ 2 были только 1,96% детей, причем у этих лиц одновременно выявлялись и антитела ВПГ 1.
Стоит также отметить, что по сравнению с данными, полученными в предшествующих исследованиях за период с 2006 по 2012 гг., отмечается резкий рост серопозитивности по отношению к ВГЧ 6 (на 31,6%) и ЦМВ (11,3%), в то время как частота выявления антител к ВПГ 1/2 снизилась на 8,7%.
Таким образом, на настоящий момент отмечается высокая частота выявления антител к герпесви-русам хламидиям и токсоплазмам. Отмечается повышение серопозитивности по отношению к ЦМВ и ВГЧ 6. Все это требует пристального внимания врачей по отношению к проблеме диагностики и лечения ГВИ.
ОЦЕНКА ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ФАГОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАЗЛИЧНЫМИ ФОРМАМИ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ
А.В. Ершова, О.В. Бердюгина
ФГБУ Уральский НИИ фтизиопульмонологии МЗ РФ, г. Екатеринбург
Поиск способа совершенствования диагностики и повышения эффективности лечения больных туберкулезом сохраняет свою актуальность. В формировании и течении туберкулезного процесса важную роль играет и наличие патогенного штамма микобактерий, и иммунологическая реактивность организма.
Нами оценена фагоцитарная активность лейкоцитов крови у 93 больных различными формами туберкулеза легких, а именно: у больных с туберку-лемами (n = 25), инфильтративным туберкулезом (n = 23), инфильтративным туберкулезом с множественной лекарственной устойчивостью, МЛУ (n = 26), фиброзно-кавернозным туберкулезом, ФКТ (n = 19). Контрольная группа — 25 здоровых человек. Для исследования использованы наборы PHAGOTEST и BURSTTEST (GLYCOTOPE Biotechnology, Германия).
Абсолютное число моноцитов, способных к фагоцитозу, достоверно не отличалось во всех пяти исследуемых группах, относительное их число было снижено. Относительное количество фагоцитирующих моноцитов в группе контроля составило в среднем 74%, у больных этот показатель был снижен и составил в среднем 59% при туберкулемах и 47% — при инфильтративном туберкулезе с МЛУ Та же закономерность наблюдалась при оценке способности этих клеток к окислительному взрыву.
Общее число гранулоцитов возрастало по мере утяжеления процесса. Этот показатель был незначительно повышен при туберкулемах и инфильтра-
тивном туберкулезе — на 6 и 5%, при инфильтративном туберкулезе с МЛУ и ФКТ возрастал уже на 25 и 34% в сравнении с контролем. Число фагоцитирующих гранулоцитов было снижено при инфильтративном туберкулезе на 7%, повышено при ФКТ на 10%. Относительное содержание гранулоцитов способных к фагоцитозу снижалось во всех группах больных по сравнению с контрольной группой. Абсолютное число гранулоцитов, способных к окислительному взрыву снижалось при туберкулемах, но повышалось в трех других группах больных (при ФКТ на 32%). Выводы:
— проточная цитофлюориметрия позволяет оценить степень изменения функционально-метаболической активности фагоцитов у больных тубер -кулезом легких;
— изменение количества клеток, способных к фагоцитозу и окислительному взрыву, связано с тяжестью процесса. Наибольшей величины эти изменения достигают при ФКТ и инфильтративном туберкулезе с МЛУ
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ГЕПАТИТА А В НИЖНЕМ НОВГОРОДЕ В СОВРЕМЕННЫЙ ПЕРИОД
А.А. Залесских
ФБУН Нижегородский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. акад. И.Н. Блохиной Роспотребнадзора
В крупном городе европейской части России установлены особенности эпидемического процесса гепатит А-инфекции (ГА), проявившиеся в изменении интенсивности манифестного и латентного компонентов эпидемического процесса (ЭП). Выявлены изменения иммуноструктуры населения к вирусу гепатита А (ВГА). По сравнению с предыдущим годом увеличилась доля серопозитивных лиц с 5 до 24% в индикаторных группах детей 1—4 и 5—9 лет. Рост иммунной прослойки в этих возрастных группах свидетельствует об активизации циркуляции ВГА среди населения Нижнего Новгорода и является неблагоприятным фактором-предвестником периодического подъема.
Изучена информативность определения РНК ВГА в эпидемиологическом надзоре за инфекцией. Установлена целесообразность применения метода ОТ-ПЦР для выявления ВГА при мониторинге водных объектов хозяйственно-бытового назначения. Усовершенствована методика концентрирования ВГА в воде. Показано, что оптимальным является метод фильтрации с применением мембран с положительным зарядом (ММПА+). Генотипирование ВГА, выделенного у больных ГА в 2004—2009 гг., проведено методом прямого секвенирования, для чего подобраны праймеры к вариабельному участку VP1—2A генома ВГА, условия полимеразной цепной реакции (концентрации праймеров, матрицы, смеси нуклеотидов, полимеразы) и программа термоциклирования. Очистку ПЦР продуктов проводили с коммерческим набором реагентов «Axygen», секвенирование — на капиллярном секвенаторе ABI PRIZM.
Выявлена преимущественная (более 90%) циркуляция субтипа IA с единичными определениями субтипов IB (со степенью гомологии 92% к ближайшим депонированным вариантам GenBank) и IIIA.
2014, Т. 4, № 1
Материалы научно-практической конференции «От эпидемиологии к диагностике актуальных инфекций...»
Полученные результаты соответствуют данным литературы о преобладании в циркуляции у населения европейской части России субгенотипа 1А ВГА. Метод секвенирования дает представление о генотипе и о гомологии изучаемых штаммов.
КОНСТРУИРОВАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ МОНОКЛОНАЛЬНОЙ:ОПРЕДЕЛЕНИЕ КОНСТАНТ АФФИННОСТИ АНТИТЕЛ
Т.В. Замарина
ФКУЗ Волгоградский научно-исследовательский противочумный институт Роспотребнадзора
Одно из перспективных направлений современной иммунодиагностики мелиоидоза — это разработка препаратов и тест-систем на основе моно-клональных антител (МКА) к антигену 200 kDa Burkholderiapseudomallei, предназначенных для обнаружения и идентификации вирулентных штаммов данного микроорганизма.
Для изготовления высокочувствительной тест-системы необходимо подбирать такие компоненты, которые бы проявляли высокую активность, не обладали кросс-реактивностью и были при этом вы-сокоафинными. Поэтому при выборе компонентов тест-систем (МКА первого и второго порядка) необходимо тщательно изучить их свойства.
Аффинность МКА характеризует прочность связывания активных центров молекулы антитела (АТ) с определенным участком (эпитопом) антигена (АГ). Этот параметр необходимо учитывать при подборе компонентов иммуноферментных тест-систем, так как технология постановки твердофазного иммуно-ферментного метода (ТИФМ) предусматривает этапы отмывки, во время которых возможно разрушение комплекса антиген—антитело.
Целью данной работы являлся подбор высокоаффинных МКА для экспериментальной тест-системы имму-ноферментной, предназначенной для поиска B. pseudomallei и антигенов этой патогенной буркхольдерии.
Аффинность количественно измеряли с помощью определения константы связывания по J.D. Beatty в процессе выполнения непрямого варианта ТИФМ. Для этого производили двукратное титрование образцов МКА в лунках планшетов с предварительно сорбированным антигеном 200 kDa B. pseudomallei 100 (контрольная серия) и строили графики зависимости величины оптической плотности от логарифма разведения и вычисляли разведение МКА, которое соответствовало двукратному уменьшению количества связавшихся с носителем антител.
Величины констант аффинности (Kaff) для МКА, взаимодействующих с антигеном 200 kDa B. pseudomallei 100, варьировали от 9 х 105 до 2 х 108 М-1, что свидетельствовало о разной степени связывания МКА с гомологичными им участками контрольного АГ.
В результате проведенного исследования были определены МКА в качестве компонентов экспериментальной тест-системы: смесь МКА (3C6+5C2+2A6) на твердой фазе и МКА 5C2, для изготовления ИПК. Kaff МКА 3C6, 5C2, 2A6 были равны 9 х 105 М-1, 2 х 108 М-1 и 8 х 107 М-1 соответственно.
СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ УРОГЕНИТАЛЬНЫХ МИКОПЛАЗМ MYCOPLASMA HOMINIS И UREAPLASMA SPP. К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ
О.В. Заручейнова1, В.Н. Вербов1, Н.В. Семенов2
1ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера, Санкт-Петербург
2ГБУЗ Клиническая инфекционная больница им. С.П. Боткина, Санкт-Петербург
Урогенитальные микоплазмы M. hominis и Ureaplasma spp. вызывают такие распространенные заболевания, как эндометриты, негонококковые уретриты и бактериальные вагинозы. Они могут быть причиной преждевременных родов, рождения детей с малым весом и заражения крови. В настоящее время актуальной остается проблема повышения эффективности лабораторной диагностики этих инфекций. В большинстве случаев диагностика и лечение основываются на выявлении основного возбудителя без учета количественных критериев. Существует множество антимикробных препаратов, используемых при лечении мико-плазменных и уреаплазменных инфекций, но не проводится микробиологический контроль их эффективности (изучение антибиотикочувстви-тельности), предварительное определение которого при назначении лечения позволяет снизить удельный вес положительных результатов при повторном обследовании после курса антибиотико-терапии.
Целью данного исследования являлась оценка чувствительности M. hominis и Ureaplasma spp. к антибиотикам разных групп, наиболее часто назначаемых при лечении урогенитальных микоплаз-мозов, методом серийных разведений в жидких питательных средах с определением минимальных подавляющих концентраций (МПК). На клинических изолятах M. hominis и Ureaplasma spp. проводилось исследование их чувствительности к следующим антибиотикам: тетрациклинам (док-сициклин, тетрациклин), макролидам (джозами-цин, мидекамицин, эритромицин, кларитроми-цин, азитромицин, рокситромицин, спирамицин), фторхинолонам (офлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин, левофлоксацин, пефлоксацин, моксифлоксацин, ломефлоксацин), линкозамидам (клиндамицин, линкомицин) и аминогликозиду (гентамицин).
Результаты исследования показали, что группа тетрациклинов показала высокую активность к урогенитальным микоплазмам, только активность тетрациклина к Ureaplasma spp. оказалась умеренной. Также к Ureaplasma spp. практически все фторхинолоны показали достаточно высокую активность, как и макролиды, кроме спирамицина и мидекамицина. Для M. hominis из макролидов наиболее активным был джозамицин. Из фторхиноло-нов наибольшую активность к M. hominis проявили спарфлоксацин и моксифлоксацин. В отношении к M. hominis умеренную активность проявили лин-козамиды и гентамицин, к Ureaplasma spp. — только гентамицин.
