CC BY
47
ТЕМА НОМЕРА
Андрей Бабенко
старший научный сотрудник лаборатории молекулярной диагностики и биотехнологии Института биоорганической химии НАН Беларуси, кандидат химических наук
Елена Субоч
научный сотрудник РНПЦ
онкологии и медицинской
радиологии
им. Н.Н. Александрова
Сергей Усанов
заведующий лабораторией белковой инженерии Института биоорганической химии НАН Беларуси, член-корреспондент
Молекулярная диагностика рака молочной железы
Своевременная и точная диагностика типа злокачественного новообразования любой локализации чрезвычайно важна для назначения оптимальной схемы химиотерапии как в постоперационный период, так и до хирургического вмешательства. Благодаря успехам молекулярной биологии за последние 10 лет в клиническую практику внедрены такие высокотехнологичные методы выявления различных маркерных мишеней, как полимераз-ная цепная реакция с ее разновидностями, гибридизация на микрочипах и некоторые другие. Значимых успехов удалось добиться в диагностике рака молочной железы. От 60 до 75% случаев развития этого заболевания связано с нарушениями биосинтеза и метаболизма стероидных гормонов (ОУР19, СУР1Б1), от 20 до 30% - с
гиперэкспрессией (повышенной активностью) гена ERBB2 (рис 1.) и 5-10% — с наследственными факторами ^СА1, BRCA2).
Согласно современным данным терапия этих условных групп рака молочной железы в значительной степени отличается. Использование классических препаратов типа тамоксифена в случае ERBB2-опосредованных опухолей не приведет к ожидаемому терапевтическому эффекту и грозит скоропостижной гибелью пациента. Это обусловливает актуальность выявления ERBB2-положительных опухолей как до, так и после оперативного вмешательства.
Несмотря на то что рынок диагностических тест-систем достаточно развит, по-настоящему удачных решений конкретных задач онкологии немного. На-
пример, повышенную активность маркерного гена ERBB2 зарубежные специалисты устанавливали с помощью ИГХ-тестов, но, как показала практика, методы не отличались достоверностью и в дополнение к ним был внедрен ПЦР. Причем было высказано предположение о том, что существует необходимость проведения тестов на наличие фрагментов белка ERBB2 и в сыворотке крови в период получения пациентами терапии без операционного вмешательства.
В Беларуси диагностику уровня экспрессии ERBB2 осуществляют с помощью ИГХ-теста, а в спорных случаях применяют более дорогостоящий анализ — FISH. В рамках ГНТП «Лечебно-диагностические технологии» и проекта Белорусского
18
НАУКА И ИННОВАЦИИ №1(95)_2011
НАУЧНЫЕ ПРОРЫВЫ
БЕЛОК ERBB2
i
. ^ -
I Внеклеточный J
I Трансмембранный
A
4 >—C.
V® V ^ ¿JlMttni!
fjj/ f <»P»ft1.»
Г i * *
V/ £
L>a
Внутриклеточный I
КЛЕТКА
Рис. 1. Локализация белка ERBB2 в клеточной мембране, его основные структурные элементы
республиканского фонда фундаментальных исследований в Институте биоорганической химии создан новый метод выявления ERBB2-положительных опухолей молочной железы с помощью ПЦР в режиме реального времени. Уникальность и инновация разработки обусловлены использованием в качестве исходной субстанции для проведения анализа молекул мРНК. Аналогичных методов диагностики в настоящее время в мире не существует. Высокая чувствительность и специфичность определения повышенной активности ERBB2 удачно сочетаются с простотой проведения анализа, а также сравнительно быстрым получением результата.
Разработанный нами комплекс наборов реагентов «сегЬВ2» и «РНК-ВТК» (рис. 2) прошел клинические испытания и зарегистрирован в Беларуси.
Министерством здравоохранения утверждена инструкция по применению данного комплекса в сочетании с ИГХ-тестом для выявления ERBB2-положительных опухолей молочной железы. Использование двух сравнительно недорогих тестов позволяет повысить
точность диагностики и своевременно назначить необходимые терапевтические препараты. Важно отметить, что набор «РНК-ВТК» может заместить все аналогичные реагенты, закупаемые за рубежом. При этом более низкая, чем у западных производителей, стоимость, простота выполнения процедуры, а так-
же непродолжительное время анализа и маркировка для in vitro диагностики делают его идеальным для исследований и диагностики. «РНК-ВТК» внедрен в практику 9-й городской клинической больницы.
C использованием разработанного комплекса проведено исследование активности гена ERBB2 в 155 образцах кДНК, полученных от больных раком молочной железы. Работы осуществлялись на базе Республиканского научно-практического центра онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова.
Лабораторные и клинические тесты показали, что комплекс для диагностики рака молочной железы может повысить вероятность правильной постановки диагноза и улучшить эффективность специализированной терапии. Использование отдельных его компонентов — набора «РНК-ВТК» и термостабильной ДНК-полимеразы — сэкономит значительные, до 1 млрд руб. в год, средства, затрачиваемые на импортные аналоги.
Рис. 2. Комплекс наборов реагентов для диагностики рака молочной железы методом ПЦР в режиме реального времени
№1(95)_2011 НАУКА И ИННОВАЦИИ
19
