CC BY
17
УДК 591.23:599.323.017.3
МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ МОРФОЛОГИЯ ЗАЖИВЛЕНИЯ МЕХАНИЧЕСКОЙ ТРАВМЫ ПЕЧЕНИ У ПЛОДОВ И НОВОРОЖДЕННЫХ КРЫСЯТ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
«ТРЕПЕЛ» И «СУВАР»
MICROSCOPIC MORPHOLOGY OF MECHANICAL INJURIES HEPATIC HEALING OF LIVER OF FETUS AND NEWBORN RATS WITH THE USE OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES «TREPEL» AND «SUVAR»
И. И. Малышев, Л. П. Романова, О. В. Воробьева I. I. Malyshev, L. P. Romanova, O. V. Vorobyeva
ФГОУ ВПО « Чувашский государственный университет имени И. Н. Ульянова», г. Чебоксары
Аннотация. В работе устанавлено стимулирующее влияние биологически активных веществ «Трепел» и «Сувар» на заживление механического повреждения печени у плодов и новорожденных крысят, которым травму наносили во внутриутробном периоде. Полученные данные позволяют утверждать, что биологические вещества «Трепел» и «Сувар» у опытных крысят подавляют экссудативную реакцию в ответ на повреждение, снижают активность фибробластов; одновременно они стимулируют регенераторные процессы со стороны гепатоцитов печени. В этих условиях пролиферирующие гепатоциты постепенно сдавливают и, таким образом, уменьшают участок повреждения. При этом соединительной тканью замещается лишь незначительная часть дефекта печени.
Abstract. The influence of biologically active substances «Trepel» and «Suvar» on mechanical injuries hepatic healing of fetus and newborn rats, which were injured in intrauterine period has been established in the article. Finding allow to claim that biologically active substances «Trepel» and «Suvar» suppress the exudative reaction of experimental rats in response to injures, decrease the activity of fibroblasts; simultaneously, they stimulate the regenerative processes of hepatocytes of liver. In this condition proliferative gradually squeeze and thus decrease the injured part. But for all that the small part of injured liver is replaced by connective tissue.
Ключевые слова: крысы, плоды, новорожденные, печень, механическая травма, биологически активные вещества, регенерация.
Keywords: rats, fetus, newborn, liver mechanical injury, biologically active substances, regeneration.
Актуальность исследуемой проблемы. Повреждения печени различного характера и во внутриутробном периоде, и у новорожденных часто имеют место. Тем не менее, в литературе, даже в условиях стимуляции регенерации различными терапевтическими и хирургическими методами, нам не встретилось описание полного, или практически пол-
ного, восстановления печени в раннем онтогенезе. В этой связи и в настоящее время актуальным является поиск средств, стимулирующих регенераторные процессы в печени после ее повреждения.
Целью настоящей работы явилось изучение влияния биологически активных веществ «Трепел» и «Сувар» на восстановление структуры печени после механической травмы у плодов и новорожденных крысят.
Материал и методика исследований. Эксперименты были поставлены на 28 беременных самках крыс массой 257-310 граммов. Объектом исследования явилась печень 112 плодов крыс, которым по описанной ранее методике [1] внутриутробно наносили травму. Животным, начиная с первого дня эксперимента, к основному рациону питания добавляли биологически активные вещества «Трепел» в дозе 1,25 мг/кг и «Сувар» -50 мк/кг; питание осуществляли в режиме свободного доступа к пище и воде. Оперированные плоды, родившиеся самостоятельно и выделенные с помощью кесарева сечения, выводились из эксперимента с помощью эфира в сроки от 1 до 30 суток. Печень оперированных животных после фиксации в 10 %-м нейтральном формалине полностью заключали в парафин. С парафиновых блоков изготавливали серийные гистотопографические срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином по ван Гизону, железным гематоксилином по Гейденгайну, выполняли реакцию Фёльгена. Пролиферативную активность печени оценивали с помощью подсчета митозов и двуядерных гепатоцитов (на 7000 клеток при увеличении х900); в тех же полях зрения подсчитывали двуядрышко-вые клетки. Количество ДНК в ядрах гепатоцитов определяли в микроскопе Биолам-70 с помощью фотометрирования с использованием микрофотонасадки ФМЭЛ-1 и фотометра ФЭУ-79А в проходящем свете с запирающим светофильтром с максимумом свето-пропускания на длине волны 570 нм с подаваемым напряжением 900В. Результаты подвергали обратному десятичному логарифмированию по формуле А=Lg Ui/U0, где А - оптическая плотность, Ui - показания вольтметра на ядре, U0 -показания вольтметра на неокрашенных участках препарата. Диплоидным эталоном служили лимфоциты периферической крови и малые лимфоциты лимфатических узлов. Статистическая обработка цифровых данных проводилась по программе «Статистика» с привлечением пакета программ Microsoft Office (Word Excel) Pentium 166 MMX. Статистическую достоверность определяли с помощью критерия Стьюдента (t).
В качестве контрольных были взяты 100 животных аналогичного возраста, которым внутриутробно проводилась операция механического повреждения печени, однако биологически активные вещества в рацион питания не включались.
Результаты исследований и их обсуждение. Макроскопически следы прокола на коже и печени животных обеих групп определялись только через 1 сутки после операции в виде красноватой точки, покрытой сверху красноватой нежной корочкой на коже и рыхлыми красноватыми массами на печени. В дальнейшем место повреждения можно было установить только при микроскопическом исследовании.
Микроскопически участок повреждения в первые сутки после операции у животных обеих групп был представлен дефектом ткани печени, заполненным эритроцитами и немногочисленными погибающими печеночными клетками. В сохранившейся ткани печени в гепатоцитах отмечались выраженные дистрофические и некробиотические изменения; вблизи от очага повреждения они были выражены в большей степени, чем в удалении.
На 3-и сутки после операции у животных контрольной группы вокруг очага повреждения обнаруживалось большое количество молодых мезенхимальных элементов; у экспериментальных крысят вокруг очага повреждения отмечались немногочисленные лимфоидные клетки. Количество клеток с дистрофическими и некробиотическими изменениями у опытных крысят было 18 %, у контрольных - 36 %.
Через 5 суток после операции центральная часть зоны повреждения у животных контрольной группы практически была заполнена клеточными элементами лимфоидного типа. На периферии клеточного инфильтрата обнаруживались вытянутые клетки фибро-бластического типа и прослеживалось небольшое количество нежных тонких волоконец. У экспериментальных крысят участок повреждения был представлен полостью, вокруг которой лежало небольшое количество лимфоидных клеток. Подсчет ге-патоцитов с дистрофическими и некробиотическими изменениями показал, что у опытных крысят их было значительно меньше (3 %), между тем как у контрольных животных их насчитывалось 21 %.
Участок травмы у животных контрольной группы на 7-е сутки после операции был представлен нежной волокнистой тканью, располагающейся по периферии участка; центральные его отделы были заполнены лимфоидными клетками. У крысят опытной группы участок травмы был представлен небольшой полостью без содержимого; на периферии зоны травмы определялось небольшое количество лимфоидных клеток, среди которых обнаруживались фибробласты и волокна, окрашивающиеся в бледно-розовый цвет по ван Г изону.
На 9-е сутки зона повреждения у животных контрольной группы была полностью заполнена волокнистой тканью, окрашивающейся в бледно-розовый цвет по ван Гизону. Здесь же находилось и некоторое количество лимфоидных клеток. У опытных животных на месте травмы отмечалась небольшая полость, окруженная небольшим количеством лимфоидных клеток и клеток типа фибробластов. Размеры полости были значительно меньше, чем у животных предыдущего срока наблюдения. На периферии участка у части животных лежали нежные тонкие волокнистые структуры.
У животных контрольной группы участок повреждения на 11-е сутки был представлен волокнистой тканью, окрашивающейся в бледно-розовый цвет по ван Гизону. Сохранившаяся ткань печени имела обычное строение. У опытных крысят на месте участка травмы отмечалась небольшая полость, размеры которой были значительно меньше, чем в предыдущий срок наблюдения (9 суток). Периферические отделы были представлены фибробластами и волокнистыми структурами.
Через 15 суток на месте участка повреждения у животных обеих групп обнаруживалась волокнистая соединительная ткань; различие заключалось в том, что у опытных крысят соединительнотканный участок был во много раз визуально меньше, чем такой же участок у животных контрольной группы.
На 20-е и 30-е сутки после операции у животных обеих групп на месте повреждения лежала волокнистая соединительная ткань, однако визуально у животных опытной группы этот участок был во много раз меньше, чем у контрольных крысят.
У животных обеих групп в печени после операции отмечалась активация митотического деления гепатоцитов (рис. 1).
Сутки
-------Опыт
------ Контроль
Рис. 1. Митозы гепатоцитов у животных опытной и контрольной групп в зависимости от времени после операции
Как можно видеть из рисунка, количество митозов у животных опытной группы насчитывается больше, и они прослеживаются в ткани печени дольше, чем в контроле.
Принципиально близкая картина прослеживается и в отношении двуядерных гепатоцитов. До 5-х суток включительно их количество в печени небольшое, на 7-е сутки число их резко возрастает, причем у животных опытной группы оно статистически достоверно больше, чем у животных контрольной группы (рис. 2).
Сутки
---------Опыт
-------- Контроль
Рис. 2. Двуядерные гепатоциты у животных опытной и контрольной групп в зависимости от времени после операции
Увеличение числа митозов и двуядерных клеток у опытных крысят протекает на фоне усиления белок-синтетической функции гепатоцитов, о чем свидетельствует значительное увеличение двуядрышковых гепатоцитов (рис. 3).
Сутки
--------Опыт
-------- Контроль
Рис. 3. Двуядрышковые гепатоциты у животных опытной и контрольной групп в зависимости от времени после операции
После операции механического повреждения печени у животных обеих групп возникало однотипное изменение плоидности гепатоцитов. В 1-е сутки у животных в печени большинство клеток были диплоидными; на 3-и сутки начали преобладать тетраплоид-ные гепатоциты, одновременно стали прослеживаться октаплоидные и 16-плоидные гепатоциты. Преобладание тетраплоидных гепатоцитов имело место до 15-х суток включительно, начиная с 20-х суток, гепатоциты печени вновь становились преимущественно диплоидными.
Резюме. Выполненное исследование устанавливает стимулирующее влияние биологически активных веществ «Трепел» и «Сувар» на заживление механической травмы печени у плодов и новорожденных крысят. Как показывают фактические данные, биологически активные вещества снижают экссудативную реакцию в ответ на повреждение, подавляют активность фибробластов и одновременно стимулируют пролиферативные процессы со стороны гепатоцитов. В этих условиях пролиферирующие гепатоциты сдавливают участок травмы, уменьшая его, и лишь незначительная часть зоны повреждения замещается соединительной тканью. У контрольных животных после механической травмы реактивно-воспалительные процессы в значительной степени преобладают над возникающими регенераторными проявлениями, в результате чего дефект печени на большем протяжении замещается соединительной тканью.
ЛИТЕРАТУРА
1. Романова, Л. П. Морфологические изменения печени плодов крыс после механической травмы / Л. П. Романова, И. И. Малышев // Столичное здравоохранение : материалы научно-практической конференции. - Чебоксары : Изд-во Чуваш. ун-та, 2004. - С. 80-81.
