CC BY
10
УДК 591.11:591.23:599.323
ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ У КРЫСЯТ ПОСЛЕ МЕХАНИЧЕСКОЙ ТРАВМЫ ПЕЧЕНИ
НА ФОНЕ ПРИМЕНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
PHYSIOLOGICAL BLOOD INDICES OF YOUNG RATS AFTER MECHANICAL TRAUMAS OF LIVER IN THE CONDITION OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES
Л. П. Романова, И. И. Малышев, О. В. Воробьева L. P. Romanova, I. I. Malyshev, O. V. Vorobyova
ФГОУ ВПО « Чувашский государственный университет имени И. Н. Ульянова», г. Чебоксары
Аннотация. Выполненное исследование устанавливает стимулирующее влияние биологически активных веществ «Трепел» и «Сувар» на физиологические показатели крови при заживлении механической травмы печени у крысят.
Abstract. The performed investigation establishes positive influence of biologically active substances «Trepel» and «Suvar» on physiological blood indices in the process of healing of mechanical traumas of the liver of young rats.
Ключевые слова: крысята, печень, механическая травма, показатели крови.
Keywords: young rats, liver, mechanical trauma, blood indices.
Актуальность исследуемой проблемы. В ранее опубликованной работе [3] было показано, что биологически активные вещества «Трепел» и «Сувар» оказывают стимулирующее действие на заживление механической травмы печени у 18-дневных крысят. В результате их воздействия у крысят активизируются регенераторные процессы со стороны гепатоцитов, вследствие чего травматический дефект у них на большем протяжении замещается пролиферирующими печеночными клетками. В то же время в литературе [1], [2] имеются указания на то, что применение биологически активных веществ (в том числе «Трепела» и «Сувара») в ветеринарии улучшает физиологические и биохимические показатели крови у различных животных.
Целью настоящей работы явилось изучение физиологических показателей крови у крысят при механической травме печени в условиях применения биологически активных веществ «Трепел» и «Сувар».
Материал и методика исследований. В качестве экспериментальных животных были взяты 30 крысят 18-дневного возраста массой 23-29 г, которым через кожу стальной иглой с ограничителем выполняли прокол печени. Сразу после операции в основной рацион крысам добавляли биологические вещества «Трепел» из расчета 1,25 мг/кг и «Сувар» - 50 мг/кг; питание животных осуществляли в режиме свободного доступа к пище и воде.
Контролем были 30 крысят аналогичного возраста, которым после прокола печени питание было организовано основным рационом, без добавления биогенных веществ.
После операции животные обеих групп чувствовали себя хорошо, были активными, хорошо принимали пищу.
Животных выводили из эксперимента эфиром в сроки от 1 до 30 суток. Из печени животных вырезали кусочки размером 1 х1 см, куда включались участки печени с повреждением. Кусочки после фиксации в 10 %-м нейтральном формалине заключались в парафин, изготавливались серийные гистотопографические срезы, которые окрашивали гематоксилином и эозином и по ван Г изону. Для оценки пролиферативной активности печени производили подсчет митозов (на 7000 клеток при увеличении х900). Определение гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов осуществляли с использованием автоматического гематологического анализатора SIMEX KX-21; скорость оседания эритроцитов (СОЭ) устанавливалась методом Вестергена с использованием одноразовых пробирок с 3,8 %-м антикоагулянтом натрия. Общий белок в сыворотке крови определяли рефрактометром ИРФ-22 (А. М. Ахметов), количество общего кальция - комплексометрическим методом по Уилкинсону. Исследование в сыворотке крови активности лактат-дегидрогеназы (ЛДГ), аланинаминотрансферазы (АлАт), аспартатаминотрансферазы (АсАт) осуществляли с помощью анализатора BS 3000. Статистическая обработка материала производилась по программе «Статистика» с привлечением пакета программ Microsoft Office (Word et Excel) Pentium 166 MMX. Для определения различия статистических показателей между средними величинами использовали критерий Стьюдента (t).
Результаты исследований и их обсуждение. Микроскопически через 1 сутки после нанесения травмы у животных участок повреждения был представлен щелевидной полостью, заполненной эритроцитами и погибающими гепатоцитами. Через 3-5 суток у опытных крысят вокруг очага травмы появлялось небольшое количество молодых мезенхимальных клеток. В дальнейшем (на 5-е, 7-е, 9-е, 11-е сутки) зона повреждения была представлена полостью, по краю которой лежало небольшое количество лимфоидных клеток и (с 9-х суток) фибробластов. На 9- 11-е сутки среди клеток начинали прослеживаться нежные волоконца, окрашивающиеся по ван Гизону в бледно-розовый цвет. Размеры полости постепенно уменьшались от 5-х до 11-х суток. На 15-е, 20-е и 30-е сутки на месте погибшей ткани печени обнаруживался небольшой фокус волокнистой соединительной ткани.
У контрольных крысят с 3-х суток вокруг очага повреждения появлялось большое количество лимфоидных клеток. Фибробласты начинали преобладать в клеточном инфильтрате с 7-х и особенно с 9-х суток; при этом по периферии начинали прослеживаться нежные волокна. Постепенно развивающаяся соединительная ткань заполняла участок травмы, и на 11-е сутки она практически полностью замещалась волокнистой соединительной тканью. При этом очаг склероза был во много раз больше, чем такой же участок у опытных животных. На основании гистологического исследования было сделано заключение, что биологически активные вещества «Трепел» и «Сувар» снижают мезенхимальную реакцию, замедляют появление фибробластов и уменьшают их количество вокруг очага травмы и тем самым препятствуют коллагенизации и развитию соединительной ткани.
Произведенный подсчет митозов подтвердил ранее полученные результаты [3], говорящие о том, что у животных, получающих биогенные вещества, имеют место более высокие показатели митотического индекса по сравнению с контролем (табл. 1).
Таблица 1
Количество митозов гепатоцитов у животных опытной и контрольной групп в зависимости от времени после операции (%)
Время после операции (сутки) Количество митозов гепатоцитов
Опытные животные (М±м) Контрольные животные (М±м)
1 1,4±0,3 -
3 3,6±0,7 3,1±1,5
5 6,4±2,8* 4,5±2,1
7 6,3±2,6 * 3,8±1,9
9 5,6±2,7 * 0,9±0,4
11 4,5±3,4 -
15 0,8±0,1 -
*Р<0,001
Учитывая данные пролиферативной активности гепатоцитов, можно прийти к заключению, что у опытных крысят биологически активные вещества, снижая мезенхимальную и фибробластическую реакции, одновременно стимулируют пролиферацию печеночных клеток; при этом размножающиеся гепатоциты постепенно сдавливают участок повреждения, уменьшая его размеры, и, таким образом, в заключении он на большем протяжении оказывается заполненным пролиферирующими гепатоцитами. Развивающаяся позднее соединительная ткань занимает лишь небольшую часть дефекта печени.
У контрольных крысят пролиферативные проявления со стороны гепатоцитов выражены значительно слабее, а мезенхимальная и фибробластическая реакции в ответ на повреждение, наоборот, - резко. Поэтому зона повреждения у них на большем протяжении замещается соединительной тканью.
Гематологическое исследование выявило разницу в содержании гемоглобина и эритроцитов у животных опытной и контрольной групп (табл. 2).
Таблица 2
Гематологический спектр опытных и контрольных крысят ( М±т)
Время после операции (сутки) Опытные животные Контрольные животные
Эритроциты (млн/мкл) Г емоглобин (г/л) Лейкоциты (109/л) Эритроциты (млн/мкл) Г емоглобин (г/л) Лейкоциты (109/л)
1 5,6±0,30 119±0,50 4,7±0,01 5,5±0,08 120±0,09 5,4±0,01
3 5,7±0,08 121±0,90 4,9±0,02 5,6±0,01 121±0,10 6,5±0,92
5 6,4±0,01 129±0,10* 5,4±0,01* 5,6±0,01 120±0,10 7,3±0,01
7 6,6±0,01 128±0,10* 5,6±0,01* 5,4±0,01 119±0,10 7,5±0,01
9 7,0±0,01 135±0,10* 5,6±0,01* 5,3±0,01 119±0,10 7,1±0,02
11 7,1±0,01 135±0,10* 5,6±0,01* 5,4±0,01 120±0,10 6,5±0,01
15 7,3±0,01 137±0,10* 5,4±0,01* 5,0±0,01 118±0,10 6,3±0,01
20 7,4±0,01 137±0,10* 5,3±0,01* 4,6±0,01 116±0,10 6,1±0,02
30 7,3±0,01 137±0,10 5,7±0,03 5,0±0,01 118±0,10 5,7±0,01
* - знак достоверности (Р<0,05) здесь и далее
Из таблицы можно видеть, что у опытных крысят уровень гемоглобина и количество эритроцитов значительно выше, чем это имело место у контрольных животных. Число лейкоцитов у опытных крысят увеличивалось относительно в небольших пределах.
В табл. 3 представлены данные о содержании общего белка в сыворотке крови.
Таблица 3
Содержание общего белка в сыворотке крови у опытных и контрольных животных (М±м)
Время после операции (сутки) Общий белок в сыворотке крови (г/л) (опытные животные) Общий белок в сыворотке крови (г/л) (контрольные животные)
1 47,2±0,15 48,1±0,16
3 51,7±0,17 49,0±0,21
5 58,1±0,23 53,6±0,15
7 64,5±0,20* 51,9±0,23
9 62,8±0,19* 47,3±0,24
11 65,2±0,21* 52,7±0,17
15 67,1±0,22* 53,4±0,21
20 70,4±0,07* 50,9±0,15
30 71,8±0,25* 56,3±0,18
Таким образом, содержание общего белка в сыворотке крови у опытных животных превышает общий белок у контрольных крысят.
Исследование активности ряда ферментов также установило различие показателей у опытных и контрольных животных (табл. 4).
Таблица 4
Показатели ферментативной активности крови (М±м)
Время Опытные животные Контрольные животные
после АлАт АсАт ЛДГ АлАт АсАт ЛДГ
о пер ации (сутки) (Ед/л) (Ед/л) (Ед/л) (Ед/л) (Ед/л) (Ед/л)
1 12,1±0,37 26,7±0,52 58,1±2,08 14,5±1,64 24,5±2,73 44,6±3,72
3 12,8±1,08* 27,3±1,63* 60,5±1,70* 23,6±2,17 31,9±1,81 50,2±1,26
5 11,9±0,91 * 27,5±0,21* 64,3±0,81 * 22,7±1,72 36,4±0,10 51,7±0,25
7 10,8±0,07* 24,3±1,91* 66,5±1,14* 24,3±0,05 35,1±0,09 50,9±0,16
9 7,3±0,83* 20,7±0,70* 67,1±2,52* 24,5±1,56 32,4±1,82 51,8±1,63
11 7,0±0,02* 19,2±0,09* 66,3±1,73* 16,3±2,35 24,5±1,62 52,6±0,92
15 5,7±0,62* 9,6±1,05* 60,6±1,55* 12,5±1,73 15,6±0,93 49,2±2,47
20 6,1±0,09* 7,4±1,08* 58,2±1,93* 10,9±1,54 14,4±1,08 50,7±1,93
30 5,3±0,05* 6,5±0,64* 58,4±0,91 * 9,3±0,57 10,7±0,82 45,3±0,91
Из табл. 4 можно видеть, что у опытных крысят активность АсАт и АлАт ниже, чем у контрольных крысят, а активность ЛДГ - значительно выше.
При исследовании кальция в сыворотке крови животных было отмечено, что его содержание волнообразно изменялось в течение эксперимента и колебалось в узком диапазоне от 1,9±0,01 до 2,6±0,02 ммоль/л; у опытных и контрольных животных были получены практически близкие цифры.
Резюме. Оценивая полученные в данной работе результаты, можно прийти к заключению, что скармливание 18-дневным крысятам биологически активных веществ «Трепел» и «Сувар» оказывает стимулирующее воздействие на гематологическую и биохимическую картину крови. При сопоставлении данных морфологического, гематологического и биохимического исследований можно заметить, что между ними прослеживаются определенные параллели. В частности, меньшая активность АсАт и АлАт в сыворотке крови опытных крысят подтверждает морфологические данные о том, что у животных этой группы насчитывается значительно меньше дистрофически измененных гепато-цитов по сравнению с контролем. Анализируя данные пролиферативной активности гепа-тоцитов и показателей крови, можно видеть, что у опытных крысят наблюдается прямая зависимость между количеством эритроцитов и содержанием гемоглобина, с одной стороны, и уровнем пролиферативной активности печеночных клеток - с другой. Таким образом, создается вполне определенное мнение, что активация гематологических и биохимических показателей крови у опытных животных лежит в основе активации пролиферации гепатоцитов в ответ на повреждение.
ЛИТЕРАТУРА
1. Архипова, М. Н. Совершенствование функциональных систем у боровков в биогеохимических условиях Чувашского Центра с назначением биогенных соединений / М. Н. Архипова, А. А. Шуканов // Материалы I Всероссийской молодежной научной конференции. - Сыктывкар : Институт физиологии Уральского отделения РАН, 2008. - С. 198-199.
2. Григорьев, С. Г. Корреляционный анализ физиологических процессов у боровков, содержащихся в биогеохимических условиях Чувашского Засурья / С. Г. Григорьев, А. А. Шуканов // Аграрная наука. -2009. - № 1. - С. 22-24.
3. Романова, Л. П. Особенности заживления механической травмы печени у молодых крысят в условиях стимуляции биологически активными веществами / Л. П. Романова, И. И. Малышев // Аллергология и иммунология. - 2009. - № 1. - С. 114-115.
