CC BY
24
findings in advanced idiopathic Parkinson's disease // J. Neurosurg. — 2009. — Vol. 23 (1). — P. 23-29.
7. Guridi J., Obeso J.A., Rodriguez-Oroz M.C., et al. L-dopa-induced dyskinesia and stereotactic surgery for Parkinson's disease. // Neurosurgery. — 2008. — Vol. 62 (2). — P. 311-323.
8. Jourdain V.A., Schechtmann G., Di Paolo T. Subthalamotomy in the treatment of Parkinson's disease: clinical aspects and mechanisms of action // J Neurosurg. — 2014. — Vol. 120(1). — P. 140-151.
9. Munhoz R.P., Cerasa A., Okun M.S. Surgical treatment of dyskinesia in Parkinson's disease. // Front Neurol. — 2014 — Vol. 5. — P. 65.
10. Obeso J.A., Jahanshahi M., Alvarez L., et al. What can man do without basal ganglia motor output? The effect of combined unilateral subthalamotomy and pallidotomy in a patient with Parkinson's disease. // Exp Neurol. — 2009. — Vol. 220 (2). — P. 283-292.
11. Sako W., Miyazaki Y., Izumi Y, Kaji R. Which target is best for patients with Parkinson's disease. A meta-analysis of pallidal and subthalamic stimulation // J. Neurol Neurosurg Psychiatry. — 2014. — Vol. 85(9). — P. 982-986.
12. Tarsy D. Does subthalamotomy have a place in the treatment of Parkinson's disease? // J. Neurol Neurosurg Psychiatry. — 2009. — Vol. 80 (9). — P. 939-940.
REFERENCES
1. Sayutina S.B., Shprakh V.V., Valiulin M.A., et al. Problems of diagnosis and treatment of Parkinson's disease in the Irkutsk region // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). — 2009. — Vol. 90. №7. — P. 176-178. (in Russian)
2. Sayutina S.B., Shprakh V.V., Blokhina I.A. Vascular parkinsonism // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). — 2011. — Vol. 105. № 6. — P. 13-16. (in Russian)
3. Fedotov S.L., Bykov Yu.N. Clinical and diagnostic characteristics of vascular parkinsonism // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). — 2014. — Vol. 124. №1. — P. 24-27.
4. Shprakh V.V., Sayutina S.B. Parkinson's Disease: Questions and Answers: monograph. — Irkutsk, 2010. — 124 p. (in Russian)
5. Shprakh V.V., Sayutina S.B. Problems of standardization of medical and diagnostic care for Parkinson's disease // Sibirskij Medicinskij Zurnal (Irkutsk). — 2012. — Vol. 113. № 6. — P. 95-97. (in Russian)
6. Coban A., Hanagasi H.A., Karamursel S., Barlas O.Br. Comparison of unilateral pallidotomy and subthalamotomy findings in advanced idiopathic Parkinson's disease // J. Neurosurg. — 2009. — Vol. 23 (1). — P. 23-29.
7. Guridi J., Obeso J.A., Rodriguez-Oroz M.C., et al. L-dopa-
induced dyskinesia and stereotactic surgery for Parkinson's disease. // Neurosurgery. — 2008. — Vol. 62 (2). — P. 311-323.
8. Jourdain V.A., Schechtmann G., Di Paolo T. Subthalamotomy in the treatment of Parkinson's disease: clinical aspects and mechanisms of action // J Neurosurg. — 2014. — Vol. 120(1). — P. 140-151.
9. Munhoz R.P., Cerasa A., Okun M.S. Surgical treatment of dyskinesia in Parkinson's disease. // Front Neurol. — 2014 — Vol. 5. — P. 65.
10. Obeso J.A., Jahanshahi M., Alvarez L., et al. What can man do without basal ganglia motor output? The effect of combined unilateral subthalamotomy and pallidotomy in a patient with Parkinson's disease. // Exp Neurol. — 2009. — Vol. 220 (2). — P. 283-292.
11. Sako W., Miyazaki Y., Izumi Y, Kaji R. Which target is best for patients with Parkinson's disease. A meta-analysis of pallidal and subthalamic stimulation // J. Neurol Neurosurg Psychiatry. — 2014. — Vol. 85(9). — P. 982-986.
12. Tarsy D. Does subthalamotomy have a place in the treatment of Parkinson's disease? // J. Neurol Neurosurg Psychiatry. — 2009. — Vol. 80 (9). — P. 939-940.
Информация об авторах: Шпрах Владимир Викторович — заведующий кафедрой неврологии и нейрохирургии, д.м.н., профессор; Петров Сергей Иннокентьевич — заведующий отделением нейрохирургии, к.м.н.; Чипизубов Василий Александрович — аспирант кафедры неврологии и нейрохирургии, врач-нейрохирург, 664049, Иркутск, мкр. Юбилейный, 100, e-mail: [email protected]; Ермолаев Юрий Фёдорович — доцент кафедры неврологии и нейрохирургии, к.м.н., доцент; Шарова Татьяна Викторовна — врач-невролог.
Information about the authors: Shprakh Vladimir V. — Head of the Department of Neurology and Neurosurgery, MD, PhD, DSc, Professor; Petrov Sergey I. — Head of the department of neurosurgery, MD, PhD; Chipizubov Vasily A. —
post-graduate student of the department of neurology and neurosurgery, neurosurgeon, 664049, Russia, Irkutsk, m. Yubileyniy, 100, e-mail: [email protected]; Ermolaev Yury F. — Associate Professor of Neurology and
Neurosurgery, MD, PhD; Sharova Tatiana V. — neurologist.
© ИЗАТУЛИН В.Г., ЛЕБЕДИНСКИЙ В.Ю., ШЕЛОМЕНЦЕВ Е.В., КОНДРАШИН С.Ю. — 2015 УДК 616.716.4:340.6
МЕТОДИКА ЗАБОРА ОРГАНОКОМПЛЕКСА ВИСОЧНО-НИЖНЕЧЕЛЮСТНОГО СУСТАВА ДЛЯ МОРФОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Владимир Григорьевич Изатулин1, Владислав Юрьевич Лебединский2, Евгений Владимирович Шеломенцев1, Сергей Юрьевич Кондрашин1 ('Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра гистологии, эмбриологии, цитологии, зав. — д.б.н., проф. Л.С. Васильева; 2Иркутский национальный исследовательский технический университет, и.о. ректора — д. ф.-м. н., проф. А.Д. Афанасьев, центры медико-биологических исследований и здоровьесберегающих технологий, научный руководитель — д.м.н., проф. В.Ю. Лебединский)
Резюме. Усовершенствована методика забора секционного материала органокомплекса высочно-нижнечелюст-ного сустава, методы его фиксации и изготовления макро- и микропрепаратов для морфологического исследования. Ключевые слова: органокомплекс, височно-нижнечелюстной сустав, морфологическое исследование.
METHODS OF FENCE ORGANOCOMPLEXES TEMPOROMANDIBULAR JOINT FOR MORFOLODGICAL EXAMINATION
V. G. Izatulin1, V. Y. Lebedinsky2, E. V. Shelomentsev1, S.Y Kondrashin1 ('Irkutsk State Medical University; 2Irkutsk National Research Technical University, Russia)
Summary. Improved methods of sampling sectioned material organocomplexes vysochnonizhnechelyustnogo joint, methods of fixation and production of macro- and micropreparations for morphological studies. Key words: organocomplexes, temporomandibular joint, morphological study.
Рис. 1. Доступ для забора органокомплекса ВНЧС (линия разреза).
Забор секционного материала является необходимой частью морфологического исследования [5, 8]. Несомненно, что от качества его проведения напрямую зависят результаты научного поиска. Большие сложности возникают при вычленении крупных подвижных соединений (суставов), так как необходимо помимо изъятия материала сохранить и определенное прижизненное топографо-ана-томическое соотношение образующих их структурных элементов. Это обстоятельство значительно усложняет процедуру забора биологического материала.
Вторая, возникающая при этом проблема — значительное увеличение органокомплекса, особенно в тех случаях, когда речь идет о парных и достаточно удаленных друг от друга суставах, таких, например как височ-но-нижнечелюстной сустав (ВНЧС). Также определенная сложность при заборе органокомплекса ВНЧС может возникнуть и из-за неправильного доступа к нему
[4].
Следует учитывать и еще одно немаловажное обстоятельство, если результаты исследования будут подвергаться сравнительному анализу, то материал следует забирать с использованием стандартизированного и унифицированного способа. Однако в доступной научной литературе нет единого подхода к решению этой проблемы.
Наряду с вышеизложенным, большие преимущества по прижизненному изучению вариаций строения ВНЧС дает компьютерная томография и другие методы рентгенологического исследования [1, 3, 6, 7] Однако эти методы характеризуют только внешние габаритные изменения основных структурных элементов этого сустава, но не позволяют выявить и оценить их тонкие приспособительные перестройки.
Это и инициировало цель исследования — разработать метод забора органокомплекса ВНЧС для морфологического его изучения и определить критерии оценки изменений основных структур этого функционально сложного, комплексного и комбинированного сустава.
Материалы и методы
Исследование выполнено на 40 трупах (80 суставов) людей мужского пола, второго периода зрелого и пожилого возрастов. Для изучения были забраны органоком-плексы ВНЧС у лиц, погибших от случайных причин, не связанных с травмой и заболеваниями челюстно-лице-вой области. Органокомплекс включает в себя парный
височно-нижнечелюстной сустав и окружающие его ткани.
П р и выполнении работы, которая была одобрена локальным этическим комите-
Рис. 2. Фрагмент ВНЧС (вид сбоку).
том, строго соблюдались принципы медико-биологической этики и правовые вопросы.
Для сохранения прижизненного взаиморасположения составляющих сустав структур забор материала осуществляли от трупов людей, замороженных до температуры -28--30 °С.
Обязательным требованием являлось то, что нижняя челюсть при наличии зубных рядов находилась в положении центральной окклюзии, а при их отсутствии — в положении центрального соотношения. Это позволяло сохранить взаимоотношение элементов сустава, близкое к прижизненному.
Результаты и обсуждения
Для осуществления доступа к ВНЧС и забора материала в околоушно-жевательной области проводили разрез, идущий кпереди от ушной раковины вертикально вниз до мочки уха, затем, огибая последнюю, спускающийся в поднижнечелюстную область, окаймляя угол нижней челюсти (рис. 1)
В верхних отделах на уровне скуловой дуги его соединяли с транскоронарным. После этого отсепаровы-вали кожно-подкожные лоскуты кпереди и кзади от линии проведенного разреза. Затем пилой в вертикальном направлении во фронтальной плоскости проводили распил височной кости через наружный слуховой проход до её каменистой части.
Второй распил во фронтальной плоскости проводили через угол нижней челюсти и середину скуловой дуги, через чешую височной кости до каменистой её части под утлом 30-35° к проекции первого распила (рис. 2). После этого выпиленный фрагмент отделяли от основания черепа (рис. 3).
Острым путем отсекали медиальную и латеральную крыловидные мышцы в месте их прикрепления к костям черепа. Аналогичное вмешательство проводили на ВНЧС и окружающих его тканях с противоположной стороны. Достоинство данной методики заключается в том, что она позволяет забрать органокомплекс тканей, включающий в себя ВНЧС, с сохранением топографо-анатомических соотношений его основных элементов, соответствующих их прижизненному состоянию.
Из полученных костно-мышечных препаратов формировали блоки кубической формы размером 45х45х45 мм. С целью предотвращения изменения топографо-анатомических взаимоотношений структур сустава материал без оттаивания помещали в 10% раствор формалина. По мнению А.П. Сорокина (1973), такая концентрация реактива не только позволяет фиксировать ткани, но и способствует лучшему сохранению взаимоотношений между структурами.
Через 5-7 суток препараты подвергали дальнейшей обработке, не опасаясь существенного изменения взаиморасположения структур орга-нокомплекса.
Полученный материал декальцинировали в 15% растворе азотной кислоты по стандартной методике. После декальцинации блокам придавали оптимальный размер: 35х35х35 мм. Далее материал промывали в проточной воде не менее суток, после чего обезвоживали. Установлено, что наилучшие результаты достигаются в том случае, если процесс обезвоживания начинать с 50°
Рис. 3. Фрагмент ВНЧС (вид со стороны внутреннего основания черепа).
спирта и постепенно проводить материал через спирты нарастающей концентрации: 50°, 60°, 70°, 80°, 96° — I, 96°- II, 100°- I, 100°- II, выдерживая в каждом по 3-5 суток [5].
Фиксацию в целлоидине начинали с 0,5% его концентрации, а далее использовали 2, 4, 6 и 8% его концентрацию с последующей заливкой материала в 10% раствор целлоидина. В каждом растворе блоки выдерживали не менее 7 суток.
Наклейку материала на деревянные блоки проводили чистым густым целлоидином, затем блоки ставили на хлороформную баню на 8 часов и плотно закрывали для равномерной усадки. Хранили блоки в 70° спирте.
Серийные срезы изготавливали на микротоме толщиной 10 микрометров. С каждого блока получали срезы только в одной плоскости (фронтальной, горизонтальной или сагиттальной).
Структуру, фиброархитектонику и зональное строение органа изучали макромикроскопическими методами с окраской препаратов пикрофуксином по А.П. Сорокину. Гистоструктуру элементов, образующих сустав, изучали после окраски микропрепаратов гематоксилин-эозином по методу Ван-Гизона, пикрофуксином по М.К. Васильцову [1]. Для количественной оценки морфофункциональных изменений, происходящих в ВНЧС при дефектах зубных рядов, проводили морфометрию составляющих его структурных элементов. Морфометрические исследования проведены на световом микроскопе БИ0ЛАМ-70.
На гистологических препаратах измеряли ширину суставной щели, коллагеновых волокон, составляющих остов хрящевых элементов ВНЧС, размеры остеонов, количество пластинок остеона, диаметр гаверсова канала, объёмное соотношение остеонов и вставочных костных пластинок; толщину кортикальной костной пластинки головки нижней челюсти и нижнечелюстной ямки, толщину суставного хряща. Содержание коллагена в хрящевых структурах сустава определяли после окраски препаратов пикрофуксином, методом цитофо-тометрии при длине волны 540 нм.
Таким образом, разработанная методика забора ор-ганокомплекса ВНЧС создает условия для проведения морфологического исследования основных структур этого сустава в условиях соответствующих их прижизненному состоянию, и позволяет дать им более достоверную характеристику.
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.
Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.
Работа поступила в редакцию: 21.04.2015 г.
ЛИТЕРАТУРА
1. Баданин В.В. Современные методы диагностики и ортопедического лечения заболеваний височно-нижнечелюстного сустава // Актуальные вопросы стоматологии. — М., 2004. — С. 235-237.
2. Васипьцов М.К. Метод полуколичественного определения содержания коллагена в гистологических препаратах // Материалы научно-практической конференции. — Иркутск, 1971. — С. 69-70.
3. Гопубева Г.И., Рубахина Н.А., Перфильев С.А. Использование спиральной компьютерной томографии при некоторых заболеваниях челюстно-лицевой области // Стоматология. — 2005. — №5. — С. 75-76
4. Левен И.И., Кондрашин С.Ю., Изатулин В.Г. Методика
забора височно-нижнечелюстного сустава // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. — 2003. — №4. — С. 50-51.
5. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. — Л.: Медицина, 1969. — 423 с.
6. Петросов Ю.А., Копакьянц О.Ю., Софарян Н.Ю. Заболевания височно-нижнечелюстного сустава. — Краснодар, 1996. — 352 с.
7. Рубахина Н.А. Заболевания височно-нижнечелюст-ного сустава и их рентгенологическое распознавание. — М.: Медицина, 1991. — 219 с.
8. Хэм А., Кормак Д. Гистология. — В 5 т. Т. 3. — Пер. с англ. — М.: Мир, 1983. — 293 с.
REFERENCES
1. Badanin V.V. Modern methods of diagnosis and orthopedic treatment of TMJ // Actual questions stomatologii. — Moscow,
2004. — P. 235-237. (in Russian)
2. Vasiltsov M.K. The method of semi-quantitative determination of collagen in histological preparations // Proceedings of the conference. — Irkutsk, 1971. — P. 69-70. (in Russian)
3. Golubeva G.I., Rubahina N.A., Perfilev S.A. The use of spiral CT in certain diseases of the maxillofacial area // Stomatologia. —
2005. — №5. — P. 75-76. (in Russian)
4. Leven I.I., Kondrashin S.Yu., Izatulin V.G.Methods of
sampling TMJ // Bulleten Vostochno-Sibirskogo Nauchnogo Tsentra SO RAMN. — 2003. — №4. — P. 50-51. (in Russian)
5. Merkulov G. Course patologogistologicheskoy technology. — Leningrad: Meditsina, 1969. — 423 p. (in Russian)
6. Petrosov Y.A., Kopakyants O.J., Sofaryan N.Y. Diseases of the temporomandibular joint. — Krasnodar, 1996. — 352 p. (in Russian)
7. Rubakhin N.A. Diseases of the temporomandibular joint and X-ray detection. — Moscow: Meditsina, 1991. — 219 p. (in Russian)
8. Ham A., Cormac D. Histology. — In 5 v. V. 3 — Moscow: Mir, 1983. — 293 p. (in Russian)
Информация об авторах: Изатулин Владимир Григорьевич — профессор кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии, д.м.н., 664003, г. Иркутск, ул. Красного Восстания, 3; Лебединский Владислав Юрьевич — научный
руководитель центров медико-биологических исследований и здоровьесберегающих технологий, д.м.н., профессор; Шеломенцев Евгений Владимирович — аспирант кафедры гистологии, эмбриологии, цитологии;
Кондрашин Сергей Юрьевич — к.м.н., врач-стоматолог.
Information About of Authors: Izatulin Vladimir G. — Professor of histology, embryology, cytology, MD, PhD, DSc, 664003, Russia, Irkutsk, Krasnogo Vosstania str., 3; Lebedinsky Vladislav Y.- scientific director of the centers of medical and biological problems and health- tech, MD, PhD, DSc; Shelomentsev Evgeny — graduate student of histology, embryology,
cytology; Kondrashin Sergey — dentist, MD, PhD.
