CC BY
39
2012, Т. 2, № 1-2
Современное лабораторное обеспечение.
ний в общих анализах крови, мочи и скрининговом ультразвуковом исследовании внутренних половых органов. Молекулярно-генетическая диагностика (ПЦР) позволила исключить среди обследованных лиц присутствие хламидийной, микоплазменной и уреаплазменной инфекций. Посевы инкубировали в аэробных и анаэробных условиях (10% СО2, 10% Н2, 80% N2) в течение 2—4 суток. При посевах отделяемого цервикального канала отмечалась 100% контаминация. Во всех пробах обнаруживались ассоциации микроорганизмов, которые состояли из пяти культур и более. Микрофлора цервикально-го канала женщин чаще всего содержала анаэробные грамположительные палочки рода Lactobacillus spp., — 97,7% (29), Peptostreptococcus spp. — 40% (12), Bifidobacterium spp. — 36,7% (11) и Bacteroides spp. — 16,7% (5). У большинства женщин были обнаружены грибы рода Candida spр. — 93% (28) и E. coli в следующих вариациях: нормоферментативная — 36,7% (11), низкоферментативная — 20% (6) и гемолитическая — 13% (4). Из аэробных микроорганизмов чаще выделялась грамположительная микрофлора, которая была представлена КОС (коагулазоотрицатель-ными стафилококками), энтерококками и штаммами Corynebacterium spp. — 10% (3). Среди КОС были выделены S. saprophyticus — 53,3% (16), S. albus — 13,3% (4), S. haemolyticus — 10,0% (3), S. epidermidis — 13,3% (4). Из рода энтерококков идентифицированы E. faecium — 23,3% (7), E. faecalis — 20,0% (6). В единичных случаях были выделены Proteus mirabilis, S. aureus, Klebsiella oxytoca, Citrobacter diversus. Наиболее частыми были ассоциации микроорганизмов: Lactobacillus spp. + Bifidobacterium spp. + КОС + E. coli + Candida spp.; Lactobacillus spp. + Enterococcus spp. + КОС + E. coli + Candida spp. Общее колонизационное число микробиоты цервикального канала составило 105—108 КОЕ/мл. Наибольшее микробное число отмечалось у бактерий рода Lactobacillus spp. — 105—107 КОЕ/мл и Bifidobacterium spp. — 105-106 КОЕ/ мл. Микробное число других микроорганизмов не превышало 103—104 КОЕ/мл. Таким образом, у здоровых сексуально активных молодых женщин в норме в цервикальном канале обнаруживаются аэробно-анаэробные ассоциации, имеющие по всей вероятности сложные меж- и внутривидовые взаимоотношения компонентов данного микробного биотопа.
ВЫДЕЛЕНИЕ СТРЕПТОКОККОВ ГРУППЫ А В ДЕТСКОЙ БОЛЬНИЦЕ г. КОЛПИНО
О.Е. Пунченко1, С.Е. Морозова2
'ГБОУВПО «Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова», Санкт-Петербург; 2Детская городская больница № 22, Санкт-Петербург
В настоящее время ежегодно регистрируется 6—8 млн случаев респираторных стрептококковых инфекций. Чаще всего этиологическим фактором являются стрептококки серологической группы А. Но только заболевания, вызванные Streptococcus pyogenes, характеризуются развитием постстрептококковых аутоиммунных (ревматизм, гломеру-лонефрит) и токсико-септических (некротические фасциит и миозит, синдром токсического шока, метатонзиллярный и перитонзиллярный абсцессы) осложнений. Поэтому своевременная дифференциация S. pyogenes от других видов стрептококков, обладающих антигеном группы А, чрезвычайно важна для профилактики отдаленных последствий.
За 2011 год в бактериологическую лабораторию ДГБ № 22 поступило 817 образцов материала для исследования на S. pyogenes от детей в возрасте от 0,5 до 17 лет, находящихся на лечении в стационаре. Материал забирали и транспортировали в соответствии с МУ 4.2.2039-05, МУ 3.1.1885-04. Для диагностики стрептококковой инфекции использовали схему, предложенную Американской Академией Педиатрии. В качестве экспресс-метода использовали латекс агглютинацию PathoDx Strep A Kit (Oxoid, UK) для выявления стрептококков группы А. Первичный посев материала проводили на кровяной агар для оценки гемолитической активности. Культуры микроорганизмов с ß-гемолитической активностью исследовали для определения серо-группы, а также определяли у них чувствительность к бацитрацину (диск 0,04 ЕД) и наличие фермента L-пиродонилариламидазы (PYR диск).
Стрептококки были выделены из 86 (10,5%) образцов. При этом стрептококки группы А составили 81% (70 образцов), группы В — 17% (15 образцов). Чаще всего при обнаружении стрептококков группы А детям ставился первичный диагноз «ОРЗ» (40%). У 40% детей, проходящих лечение в хирургическом и инфекционном отделениях, было выявлено но-сительство в титрах более 105 КОЕ. Пик заболеваний зарегистрирован в октябре — 31 случай (44%). При дифференциации стрептококков внутри серологической группы S. pyogenes был подтвержден в 40 случаях, что составило 57% от стрептококков группы А и 46,5% от всех выделенных стрептококков.
Таким образом, экспресс-метод идентификации стрептококков группы А имеет ориентировочное значение и не заменяет посев материала на плотные среды и дальнейшую дифференцировку внутри группы.
МЕТИОНИН-ГАММА-ЛИАЗА - ПОТЕНЦИАЛЬНАЯ МИШЕНЬ ДЛЯ АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ СРЕДСТВ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ
С.В. Ревтович1, Е.А. Морозова1, Н.В. Ануфриева1, М.И. Котлов2, Т.В. Демидкина1, Ю.Ф. Белый2
1ФГБУ «Институт молекулярной биологии
им. В.А. Энгельгардта» РАН, Москва; 2ФГБУ«НИИЭМ
им. Н.Ф. Гамалеи» Минздравсоцразвития РФ, Москва
Метионин-гамма-лиаза (КФ 4,4.1,11, МГЛ) принимает участие в метаболизме серосодержащих аминокислот у многих патогенных бактерий. В связи с тем, что данный фермент отсутствует у млекопитающих, МГЛ может служить мишенью для новых антибактериальных средств, созданных на основе его ингибиторов и/или суицидальных субстратов. Нами был проведен поиск и анализ аминокислотных последовательностей, аннотированных как «МГЛ» в базах данных бактерий, вызывающих инфекционные заболевания человека. Для дальнейшей работы была выбрана предполагаемые МГЛ Clostridium difficile (возбудитель антибиотико-ассоциированных диарей и псевдомембранозного колита), C. tetani (возбудитель столбняка), Brucella melitensis (возбудитель бруцеллеза), Porphyromonas gingivalis (возбудитель агрессивного пародонти-та) и C. sporogenes (возбудитель газовой гангрены). Гены указанных белков были клонированы и экс-прессированы в клетках Escherichia coli, получены гомогенные препараты ферментов, проверена их реакционная специфичность и определены кинетические свойства. Показано, что лишь фермен-
Материалы X съезда ВНПОЭМП, Москва, 12-13 апреля 2012 г.
Инфекция и иммунитет
ты C. tetani, P. gingivalis и C. sporogenes обладали типичной ферментативной активностью. В то же время белки C. difficile и B. melitensis были ошибочно отнесены к МГЛ при аннотировании в соответствующих геномах. Для ферментов из P. gingivalis, C. tetani и C. sporogenes удельная активность равнялась соответственно 5,0 ед/мг, 16,6 ед/мг и 11,0 ед/мг белка. Стационарные кинетические параметры для этих ферментов в реакции гамма-элиминирования метионина составили соответственно Km = 1,77 мМ, kcat = 3,9 c-1; Km = 0,947 мМ, kcat = 12 с-1 и Km = 0,432 мМ, kcat = 9,86 c-1 и были сопоставимы с соответствующими параметрами для МГЛ из Citrobacter freundii. Таким образом, проведенная работа по получению и характеристике МГЛ позволяет приступить к поиску ингибиторов данных ферментов.
О ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЙ ЗНАЧИМОСТИ ТРОМБОПЛАСТИНА В ИНФЕКЦИОННОМ ПРОЦЕССЕ
А.Ю. Резникова, А.Н. Ложкина
Медицинская академия, Санкт-Петербург; Медицинская академия, г. Чита
Тромбопластин — мембранная фракция (фактор III свертывания крови, включающий тканевой фактор /TF/) — белково-липидный комплекс, традиционно рассматриваемый как индуктор тромботиче-ских состояний. Выработка и экспрессия тканевого фактора эндотелиальными клетками может быть индуцирована TNF-альфа, IL-1 (интерлейкином), IL-2, IL-8, тромбином, липополисахаридом грамо-трицательных бактерий, липоксигеназой, адреналином, липопротеинами очень низкой плотности, продуктами перекисного окисления липидов, лек-тинами, Р-селектином, различными метаболитами в зонах ишемии и ацидоза.
В условиях in vitro тромбопластин повышает количество фагоцитирующих клеток (фагоцитарный показатель) в 1,5 раза — с 60±1 в контроле до 95±3 в опыте /Р < 0,001/ (практически все видимые в поле зрения нейтрофилы с фагоцитированными микробными телами). Среднее число микробов, поглощенных одним активным нейтрофилом (фагоцитарный индекс) возросло в 3 раза — с 38±5 в контроле до 122+13 в эксперименте (Р < 0,001).
Очищенный нами тромбопластин и тромбопластин, выделенный по методу Quick, вводили белым беспородным крысам (n = 100). Внутривенное введение крысам тромбопластина (2 мл/кг; 20 мг/кг; 30-секундной активности) вызывает потребление тромбоцитов, гипер-гипокоагуляционные сдвиги и стимулирует фибринолиз. Введение смеси суспензии тромбопластина и лактозонегативной кишечной палочки (5 х 104 микробных тел/кг, 2,5 мл/кг), либо тромбопластина и суспензии Staphylococcus aureus (5 х 104 микробных тел/кг; 2,5 мл/кг) на 30% снижает летальность. У крыс, которым вводили стафилококк совместно с тромбопластином, наблюдалось более легкое течение заболевания: животные испытывали меньшее чувство жажды, диспепсии не наблюдалось, явления воспаления были не столь ярко выраженными; через сутки отмечалось значительное улучшение показателей; ускорялся фибринолиз.
Таким образом, тромбопластин в два раза увеличивает поглотительную способность фагоцитов в отношении стафилококков, облегчает тяжесть течения инфекционного процесса, на треть снижает летальность взятых в эксперимент животных.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ЖЕЛЧНОКАМЕННОЙ БОЛЕЗНИ
Т.В. Рукосуева, О.В. Перьянова, Е.В. Серова
ГБОУ ВПО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Минздравсоцразвития России, г. Красноярск
В последние годы отмечается рост числа больных желчнокаменной болезнью (ЖКБ). ЖКБ опасна тяжелыми осложнениями инфекционного характера, которые представляют прямую угрозу жизни пациента. Значение бактериохолии в возникновении заболеваний билиарной системы и ее влияние на результаты оперативных вмешательств является актуальным.
Исследован материал, полученный интраопе-рационно от пациентов с различными формами острого холецистита. При гангренозной форме в желчи и тканях стенки желчного пузыря доминируют представители семейства Enterobacteriaceae (64,5+8,6%). При этом 41,9±8,7% приходилось на долю E. coli. Для флегмонозного калькулезного холецистита (ФКХ) характерно присутствие примерно в равных долях энтеробактерий (33,9+6,0%) и грамположительных кокков (35,5+6,1%), среди последних преобладали коагулазоотрицательные Staphylococcus spp. Образцы, полученные от пациентов с ФКХ, дали самый высокий процент вы-севаемости, наиболее разнообразный видовой спектр микроорганизмов (P. aeruginosa, C. albicans, анаэробные бактерии и др.); достоверно чаще (р < 0,01) были выделены ассоциации микрорганиз-мов (59,1+7,0% проб). Анаэробная флора каждый раз ассоциировалась с особенно тяжелым течением болезни и была представлена бактериями рода Peptococcus (3,6± 1,7%). Другой видовой состав микроорганизмов был выявлен при посеве материалов от пациентов с острым калькулезным холециститом (ОКХ): энтеробактерии составили всего 17,7+9,5%, преимущественно выделялись грамположительные кокки — 53,0+12,5%, представленные главным образом E. faecalis (35,3+11,9% случаев).
Таким образом, спектр микроорганизмов выявляемых при данной патологии варьирует в зависимости от клинико-морфологической формы калькулезного холецистита. При изучении чувствительности выделенных культур к антибактериальным препаратам установлено, что анаэробные микроорганизмы показали высокую частоту резистентности к ме-тронидазолу, который считается препаратом выбора при лечении анаэробных инфекций. По результатам проведенных исследований рекомендовано назначать стартовую эмпирическую терапию острых форм калькулезного холецистита с учетом предполагаемой микрофлоры и особенностей резистентности билиарной микрофлоры.
К ГЕНОДИАГНОСТИКЕ ВОЗБУДИТЕЛЯ СОВРЕМЕННОЙ ХОЛЕРЫ ЭЛЬТОР
В.Н. Савельев, О.В. Васильева, И.В. Савельева, Б.В. Бабенышев, А.Н. Куличенко
ФКУЗ Ставропольский противочумный институтРоспотребнадзора, г. Ставрополь
Седьмая пандемия холеры, доминирующим этиологическим агентом которой более чем полувека является Vibrio cholera 01 biotype eltor, продолжается,
