CC BY
16
ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МЕДИЦИНА
Ж. Р. Хасенбекова, С. С. Буркитбаева, Д. Д. Мухамбетов, К. Х. Алмагамбетов
КОРРЕКЦИЯ ВТОРИЧНОГО ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ НАСТОЙКОЙ SAUSSUREA AMARA
Национальный центр биотехнологии Республики Казахстан (Астана)
При различных инфекциях, травмах, хирургических вмешательствах, при действии на организм неблагоприятных факторов химической и физической природы может развиваться вторичная иммунная недостаточность [3]. Для ее коррекции необходим широкий арсенал препаратов, оказывающих иммуностимулирующее действие. Все большее развитие получают исследования, направленные на выделение из различных трав, семян, морских водорослей, грибов биологически активных субстанций, обладающих иммуномодулирующим действием [1].
Одним из перспективных фитопрепаратов в этом аспекте является настойка Saussurea amara. Экспериментальные исследования по изучению влияния настойки Saussurea amara на некоторые показатели иммунной системы у интактных животных не показали значимого эффекта [9].
Изучены результаты исследований воздействия настойки Saussurea amara на иммунную систему при вторичном иммунодефицитном состоянии, вызванном циклофосфаном.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Объектом исследования послужила настойка Saussurea amara, полученная из надземной части растения в Институте фитохимии МОН РК, в виде густого экстракта, растворенного в 70% этиловом спирте в соотношении 1:30. В работе исследованы следующие дозы: 10, 15, 25 мг/кг в расчете на сухое вещество. Настойка вводилась белым беспородным крысам обоего пола весом 180-220 г интрогастрально в разведении с водой до 1 мл утром натощак. Анализировались исходные данные, а также показатели на 10, 20, 30 сут эксперимента.
Модель вторичного иммунодефицитного состояния была вызвана введением циклофосфа-на в лимфотоксической дозе 100 мг/кг, однократно, внутрибрюшинно. Известно, что циклофосфан относится к группе алкилирующих цитостатиков. Он подавляет как гуморальный, так и клеточный иммунитет. Клетками-мишенями преимущественно являются В-лимфоциты, Т-хелперы, предшественники Т-супрессоров, зрелые Т-супрессоры, предшественники эффекторных клеток. При введении циклофосфана в картине периферической крови наблюдается лейкопения, лимфопения [5, 7].
Препаратами сравнения были левамизол и экстракт элеутерококка. Левамизол - это синтетический иммуномодулятор (2, 3, 5, 6-тетрагидро- 6 -фенимилидазо-(2, 1- ^-тиазола гидрохлорид), являющийся производным имидазола. Он влияет
на метаболизм, функцию Т-лимфоцитов и фагоцитоз. Левамизол применяли через сут перораль-но в дозе 3 мг/кг. В качестве растительного препарата взят экстракт элеутерококка на основе 40% этилового спирта, известный как тонизирующее средство, влияющее на деятельность центральной нервной системы. В литературе описано его иммуномодулирующее действие, в частности, его влияние на Т-клеточное звено иммунной системы [1]. Животным экстракт элеутерококка вводили интрогастрально в среднетерапевтической дозе в расчете на массу животного.
Определяли общее число лейкоцитов и лимфоцитов в периферической крови; относительное и абсолютное число Т-, В-, О-лимфоци-тов; число Т-лимфоцитов в субпопуляциях. Забор крови осуществляли из хвостовой вены крыс. Лимфоциты выделяли в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографина, плотность 1,077 г/л. Жизнеспособность лимфоцитов оценивали по суправитальной окраске 1% раствором трипанового синего. Около 95-97% лимфоцитов были жизнеспособны.
Число Т-, В-, О-лимфоцитов и число Т-лимфоцитов в субпопуляциях определяли в реакции розеткообразования, в основу которого положен метод, описанный А. В. Wilson и R. A. Cooms. Общее число розеткообразующих клеток (Е-РОК) определяли по методу J. Wybran et al. Количество В-лимфоцитов оценивали по уровню ЕА-, ЕАС-розеткобразующих клеток. Число субпопуляций Т-лимфоцитов определяли методом тео-филлинзависимого розеткообразования [10].
В ходе эксперимента животные были разделены на равные группы (n=9): 1) опытные группы, получавшие настойку в дозах 10, 15 и 25 мг/кг на фоне циклофосфановой иммунодепрес-сии; 2) группы сравнения, получавшие левамизол и экстракт элеутерококка на фоне циклофосфано-вой иммунодепрессии; 3) контрольная группа -животные, получавшие водно-спиртовой раствор в эквивалентном объеме на фоне введения цик-лофосфана; 4) группа нелеченных животных, получавших циклофосфан; 5) интактная группа -здоровые животные, не получавшие лечение.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В результате введения циклофосфана в лимфотоксической дозе 100 мг/кг накануне введения настойки Saussurea amara получали выраженную лейкопению (4,2-4,4х109/л) и лимфопе-нию (66,1х109/л) в периферической крови. При введении настойки наблюдалось полное восстановление числа лейкоцитов к 30 сут эксперимента во всех дозах. Уровень относительного числа лимфоцитов восстанавливался при использовании настойки Saussurea amara во всех дозах к 10 сут, абсолютное количество восстанавилось полностью только к 30 сут. Наилучшие показатели отмечались при дозе 15 мг/кг.
Выраженное стимулирующее влияние на Т -клеточное звено иммунной системы настойки Saussurea amara отмечалось при дозе 25 мг/кг на
Медицина и экология, 2007, 2
10 сут эксперимента, когда уровень Т-лимфоци-тов достиг показателей интактной группы. Подобное увеличение числа Т-лимфоцитов в эти сроки отмечено лишь в группе животных, получавших экстракт элеутерококка, их данные превысили показатели контрольной группы на 4548% [1]. Увеличение Т-лимфоцитов происходит за счет увеличения теофиллинрезистентной субпопуляции (Т-хелперы), также как и в группе, получавшей экстракт элеутерококка.
В дозах 10 и 15 мг/кг на 10 сут наблюдалось незначительное повышение числа Т-лимфоцитов (табл. 1). На 20 сут показатели во всех группах незначительно увеличивались и были сопоставимы с данными контрольной группы. Та же картина регистрировалась в группе, получавшей синтетический иммуномодулятор левамизол. Только в группе, получавшей настойку Saussurea amara в дозе 15 мг/кг, число Т-лимфоцитов превысило значения контрольной группы и групп сравнения на 15%. Также в этой дозе на 30 сут опыта отмечено увеличение тео-
филлинрезистентной субпопуляции на 26% по сравнению с контрольной группой (табл. 2). Восстановление абсолютных показателей происходило параллельно. Для теофиллинчувствитель-ной субпопуляции при иммунодепрессии были характерны другие изменения: с 20 сут отмечалось увеличение числа лимфоцитов, к 30 сут оно достигало наибольших показателей при дозах 25 и 15 мг/кг - на 34% выше данных контрольной группы и группы циклофосфана.
Значительное увеличение количества В-лимфоцитов (как относительных, так и абсолютных показателей) отмечено при дозе 10 мг/кг на 10 сут. В этом случае показатели опытной группы были на уровне группы сравнения, получавшей экстракт элеутерококка - на 77% больше показателей контрольной группы. На 20 сут наибольшее увеличение также отмечено в группе, получавшей настойку Saussurea amara в дозе 10 мг/кг, где значения превысили контрольные показатели на 27 %, а показатели группы циклофосфана на 47%. На 30 сут при дозах 10 и 15 мг/кг показате-
Таблица 1.
Показатели Т-, В-, О-лимфоцитов при коррекции циклофосфановой иммунодепрессии
настойкой Saussurea amara
Срок Группа Т-лимфоциты В-лимфоциты О-лимфоциты
% 109/л % 109/л % 109/л
Исходные данные" SA"" 25 мг/кг 26,2 0,75±0,01 16,3 0,47±0,02 57,4 1,66±0,04
15 мг/кг 25,8 0,72±0,007 14,6 0,41±0,02 59,4 1,68±0,05
10 мг/кг 26,1 0,74±0,01 14,8 0,42±0,02 59,0 1,68±0,05
циклоф зосфан 26,0 0,75±0,03 14,8 0,42±0,02 59,2 1,71±0,08
ЭЭ""" 26,2 0,75±0,01 16,3 0,47±0,02 57,4 1,66±0,04
левамизол 26,0 0,77±0,01 15,9 0,47±0,03 58,1 1,72±0,05
контрольная 25,8 0,76±0,1 19,0 0,82±0,03 53,0 2,29±0,06
интактная 37,3 2,68±0,13 27,1 1,95±0,05 35,6 2,56±0,1
10 сут SA 25 мг/кг 37,0 1,72±0,1** 31,1 1,45±0,03** 31,9 1,49±0,1
15 мг/кг 29,1 1,5±0,08 32,7 1,86±0,07 39,2 1,76±0,12
10 мг/кг 33,2 1,62±0,11** 33,7 1,64±0,04 33,0 1,6±0,06
циклоф зосфан 26,8 1,17±0,07 17,1 0,75±0,03 56,1 2,46±0,1
ЭЭ 40,7 1,81±0,12 31,3 1,39±0,06 28,0 1,24±0,05
левамизол 31,0 1,36±0,1 19,0 0,84±0,05 50,0 2,22±0,1
контрольная 28,0 1,21±0,08 19,0 0,82±0,03 53,0 2,29±0,06
интактная 37,0 2,62±0,14 26,5 1,88±0,06 36,5 2,58±0,15
20 сут SA 25 мг/кг 25,5 1,55±0,09 21,5 1,39±0,0** 53,0 3,19±0,1
15 мг/кг 30,1 1,91±0,16 25,0 1,59±0,0** 44,9 2,85±0,09
10 мг/кг 30,5 1,82±0,13 28,0 1,67±0,0** 41,4 2,47±0,05
циклоф зосфан 29,0 1,65±0,1 19,0 1,08±0,05 52,0 2,96±0,05
ЭЭ 38,6 2,22±0,14 34,2 1,97±0,12 27,1 1,56±0,1
левамизол 33,0 1,9±0,14 22,0 1,28±0,05 45,0 2,63±0,1
контрольная 30,0 1,75±0,08 22,0 1,28±0,06 48,0 2,8±0,09
интактная 37,3 2,65±0,18 27,1 1,93±0,06 35,6 2,53±0,1
30 сут SA 25 мг/кг 37,5 2,55±0,17* 22,0 1,48±0,06 40,5 2,72±0,16
15 мг/кг 38,4 2,62±0,14 29,0 2,13±0,1** 32,6 2,39±0,07
10 мг/кг 35,1 2,54±0,11 30,5 2,19±0,0** 34,4 2,48±0,08
циклоф зосфан 30,0 2,05±0,1 25,0 1,7±0,08 45,0 3,07±0,09
ЭЭ 33,2 2,26±0,12 25,6 1,74±0,08 41,2 2,8±0,09
левамизол 35,0 2,37±0,07 25,0 1,69±0,08 40,0 2,71±0,12
контрольная 31,0 2,08±0,1 24,0 1,61±0,07 45,0 3,02±0,06
интактная 37,7 2,7±0,07 27,8 1,99±0,04 34,5 2,48±0,14
* р<0,05 по сранению с контролем; ** р<0,001 по сравнению с контрольной группой и группой циклофосфана; " результаты, взятые после введения циклофосфана, накануне лечения настойкой Saussurea amara; "" настойка Saussurea amara; """ экстракт элеутерококка
ли были сопоставимы с данными интактной группы. Абсолютное количество В-лимфоцитов при применении настойки Saussurea amara в дозах 10 и 15 мг/кг на протяжении всего эксперимента было увеличено, уже на 10 сут их число приблизилось к показателям интактной группы. В дозе 25 мг/кг к 30 сут показатели полностью не восстанавливались и были ниже данных контрольной группы и группы, получавшей циклофосфан.
На количество О-лимфоцитов настойка Saussurea amara действует разнонаправленно. К 10 сут в группе, получавшей 25 и 10 мг/кг, число О-лимфоцитов снизилось в 1,5 раза относительно контрольной группы. При дозе 15 мг/кг количество О-лимфоцитов приблизилось к данным ин-тактной группы. К 30 сут число О-лимфоцитов восстановилось во всех группах. Изменения абсолютных данных происходило параллельно изменениям в относительных цифрах.
Сравнительный анализ показателей контрольной группы, получавшей водно-спиртовый
раствор, и опытных групп, получавших исследуемую настойку, показал, что иммуномодулирую-щее действие настойки Saussurea amara обусловлено не этиловым спиртом, в котором он растворен, а биологически активными веществами, входящими в состав этого растения. В частности, в состав настойки Saussurea amara входят сескви-терпеновые лактоны - гваянолиды, а также полисахариды, флавоноиды, кумарины, фенолкар-боновые кислоты, дубильные вещества, эфирные масла. Согласно литературным данным, сескви-терпеновые лактоны, содержащиеся в растениях вида Saussurea, обладают высокой биологической активностью [2, 7, 8].
ВЫВОДЫ
1. На фоне иммунодефицитного состояния, вызванного алкилирующим цитостатиком циклофосфаном, наблюдается стимулирующее действие настойки Saussurea amara на Т- и В-клеточное звено иммунной системы в зависимости от дозы и сроков введения.
Таблица 2.
Субпопуляции Т-лимфоцитов при коррекции циклофосфановой иммунодепрессии
настойкой Saussurea amara
Срок Группа Т-теофил. резист Т-теофил.чувств. Коэф. соотношения Тр/Тч.
% абс. % абс.
Исходные данные" SA"" 25 мг/кг 16,4 0,12±0,003 6,8 0,05±0,002 2,39±0,09
15 мг/кг 17,1 0,12±0,002 7,2 0,05±0,002 2,4±0,12
10 мг/кг 17,5 0,19±0,005 6,7 0,07±0,002 2,61±0,11
циклофосфан 17,2 0,13±0,003 6,9 0,05±0,002 2,49±0,08
ЭЭ""" 17,6 0,13±0,005 6,7 0,05±0,002 2,62±0,12
левамизол 17,2 0,13±0,004 6,8 0,05±0,002 2,52±0,09
контрольная 17,2 0,13±0,004 6,6 0,05±0,004 2,61±0,13
интактная 23,7 0,63±0,02 10,5 0,27±0,01 2,25±0,07
10 сут SA 25 мг/кг 25,0 0,43±0,02* 7,1 0,12±0,01* 3,52±0,24**
15 мг/кг 21,5 0,32±0,02* 6,5 0,09±0,01 3,30±0,15**
10 мг/кг 20,0 0,32±0,03* 6,8 0,11±0,01* 2,97±0,24
циклофосфан 17,8 0,21±0,01 5,7 0,06±0,007 3,26±0,23
ЭЭ""" 25,6 0,46±0,04 8,6 0,15±0,01 2,97±0,14
левамизол 20,5 0,28±0,01 6,8 0,09±0,001 3,01±0,14
контрольная 18,2 0,22±0,01 6,6 0,08±0,008 2,79±0,14
интактная 23,3 0,61±0,03 10,3 0,27±0,03 2,26±0,08
20 сут SA 25 мг/кг 18,1 0,28±0,02 6,7 0,1±0,01 2,7±0,1**
15 мг/кг 21,0 0,4±0,05 6,8 0,13±0,01 3,08±0,2**
10 мг/кг 22,2 0,4±0,04 7,8 0,14±0,02 2,84±0,15**
циклофосфан 18,5 0,3±0,02 6,4 0,1±0,007 2,98±0,14
ЭЭ""" 25,1 0,56±0,05 8,6 0,19±0,01 2,91±0,11
левамизол 22,5 0,43±0,04 7,2 0,19±0,01 3,12±0,15
контрольная 19,0 0,33±0,02 7 0,12±0,009 2,77±0,2
интактная 24,0 0,63±0,02 10,8 0,28±0,01 2,23±0,06
30 сут Sa 25 мг/кг 25,6 0,65±0,05* 9,7 0,25±0,02* 2,64±0,16
15 мг/кг 26,0 0,73±0,04* 9,7 0,27±0,02* 2,69±0,12
10 мг/кг 24,8 0,63±0,04* 9 0,23±0,02* 2,75±0,13
циклофосфан 20,0 0,41±0,03 7,5 0,15±0,01 2,69±0,13
ЭЭ""" 22,2 0,5±0,03 9,1 0,2±0,01 2,44±0,06
левамизол 23,7 0,56±0,01 8,1 0,19±0,01 2,92±0,09
контрольная 20,5 0,42±0,02 7,2 0,15±0,01 2,89±0,13
интактная 24,0 0,65±0,02 10,6 0,28±0,01 2,28±0,08
* р<0,001 по сравнению с контрольной группой и группой циклофосфана; ** р<0,001 по сравнению с интактной группой; " результаты, взятые после введения циклофосфана, накануне лечения настойкой Saussurea amara; "" настойка Saussurea amara; """ экстракт элеутерококка
Медицина и экология, 2007, 2
2. Увеличение числа Т-лимфоцитов во всех дозах при циклофосфановой иммунодепрес-сии происходит преимущественно за счет субпопуляции теофиллинрезистентных клеток (Т-хелперов).
3. К 30 сут эксперимента отмечается полное восстановление показателей Т-, В-, О-лимфоцитов во всех опытных группах за исключением общего числа В-лимфоцитов при использовании настойки Saussurea amara в дозе 25 мг/кг.
ЛИТЕРАТУРА
1. Исмаилов И. З. О новом оригинальном фитопрепарате с иммуномодулирующей активностью. Фундаментальные проблемы фармакологии /И. З. Исмаилов, А. З. Зурдинов. - М., 2003. -С. 216.
2. Кагарлицкий А. Д. Сесквитерпеновые лак-тоны Центрального Казахстана /А. Д. Кагарлицкий, С. М. Адекенов, А. Н. Куприянов. - Алматы: Наука, 1987. - 237 с.
3. Конопля Е. Н. Иммуномодулирующее, ан-тиоксидантное и гепатопротекторное действие фитопрепарата «Лохеин» /Е. Н. Конопля, Л. Г. Прокопенко //Антибиотики и химиотерапия. -1997. - №7. - С. 12 - 16.
4. Манько В. М. Иммуномодуляция: история, тенденции развития, современное состояние и
перспективы /В. М. Манько, Р. В. Петров, Р. М. Хаитов //Иммунология. - 2002. - Т. 23, №3. - С. 132 - 137.
5. Насонов Ю. К. Иммунодепрессоры, применяемые при патологии иммунной системы: циклоспорин, циклофосфан, азатиоприн, меркаптопу-рин /Ю. К. Насонов, К. Б. Борисов //Фармакология и токсикология. - 1991. - Т. 54, №4. -С. 80 - 87.
6. Нурмухаметова К. А. Исследование некоторых видов соссюреи как противопаразитарного средства: Автореф. дис. ...канд. фарм. наук. -Пермь, 2000. - 26 с.
7. Петров Р. В. Иммунодепрессоры (Справочник) /Р. В. Петров, В. М. Манько. - М., 1971. -300 с.
8. Противоописторхозная активность экстракта соссюреи солончаковой /А. И. Драб, Р. Н. Пак, К. А. Нурмухаметова, С. М. Адекенов //Химико-фармацевтич. журн. - 2005. - №8. - С. 30 - 32.
9. Хасенбекова Ж. Р. Влияние настойки Saussurea amara на клеточное звено иммунной системы //Медицина и экология. - 2006. - №2. -С. 106 - 110.
10. Фримель Г. Иммунологические методы. М.: Медицина. - 1987. - 472 с.
Поступила 12.03.07
Zh. R. Khasenbekova, S. S. Burkitbaeva, D. D. Mukhambetov, K. Kh. Almagambetov CORRECTION OF SECONDARY IMMUNODEFICIENCY APPLYING BY INFUSION OF SAUSSUREA AMARA
Applying the infusion of Saussurea amara under the secondary immunodeficiency caused by ciclophosphan lead to stimulation of T- and B-lymphocyte of cell component of immune system. Increase of T-lymphocyte quantity in all doses is due to teophillinresistans subpopulation.
Ж. Р. Хасенбекова, С. С. Бурмтбаева, Д. Д. Мухамбетов, К. X^MaFaM6eTOB
ЕК1НШ1 РЕТТ1К ИММУНДЫ ЖЕТ1СПЕУШ1Л1К ЖАFДАЙЫН SAUSSUREA AMARA Т¥НДЫРМАСЫ-
МЕН ТУЗЕТУ
Циклофосфан туFызFан иммунды жетюпеуштк жаFдайын Saussurea amara тундырмасымен тYзету кез^де, иммунды жYЙенiн жасушалык бвлiмшеdнiн Т жэне В-лимфоциттер^е белсендiрушi эсерi кврсетедг Барлык мвлшерлерде Т-лимфоциттердщ санынын квбеюi теофиллинтуракты жасушалар субпопуляциясы-нын аркасында журедк
Д. Ч. Уразбаева
ИССЛЕДОВАНИЕ ХЕМОТАКСИСА УРОПАТОГЕННЫХ МИКРООРГАНИЗМОВ
Кафедра микробиологии Казахского национального медицинского университета (Алматы)
Хемотаксис впервые был открыт немецким биологом Пфаффером, наблюдавшим скопление бактерий у конца капилляра, наполненного сахаром. Он является, как и адгезия, одним из первых этапов взаимодействия микроба и ткани, к которой он имеет тропность. Это активное направленное движение микроорганизмов под влиянием стимулирующих факторов различной природы, относящееся к одному из биологиче-
ских свойств микроорганизмов - нетоксигенным факторам патогенности. Хемотаксис служит бактериям для поиска оптимальных условий среды обитания, помогает им попасть в экологические ниши, найти как партнера по симбиозу, так и объект паразитирования [4].
Пиелонефрит относится к часто встречающимся заболеваниям человека, уступая по распространенности только респираторным инфекциям. Серьезные медико-социальные последствия данного заболевания и отсутствие заметных позитивных сдвигов в его предотвращении определяют необходимость углубления представлений о патогенезе острого и хронического пиелонефрита, в том числе путем уточнения роли фенотипических свойств урофлоры [1, 2]. С этих позиций представляет интерес исследование
