CC BY
47
КЛЕТОЧНАЯ БИОЛОГИЯ, ЦИТОЛОГИЯ, ГИСТОЛОГИЯ. ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ ФИЗИОЛОГИЯ
УДК 612.826: 616-092.9
КОЛИЧЕСТВО И ЛОКАЛИЗАЦИЯ РЕЦЕПТОРОВ К АНДРОГЕНАМ КАК МАРКЁР МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СТАТУСА НЕЙРОНОВ АРКУАТНОГО ЯДРА ГИПОТАЛАМУСА
А.В.Дробленков, М.В.Монид*, П.С.Бобков*, З.П.Асауленко*
THE QUANTITY AND LOCALIZATION OF ANDROGEN RECEPTORS AS A MARKER OF THE MORPHOFUNCTIONAL STATE OF NEURONS IN THE HYPOTHALAMIC ARCUATE NUCLEUS
A.V.Droblenkov, M.V.Monid*, P.S.Bobkov*, Z.P.Asaulenko*
Институт экспериментальной медицины, Санкт-Петербург, [email protected]
*Институт медицинского образования НовГУ
Работа посвящена установлению реактивных изменений, количества рецепторов к андрогенам, особенностей их распределения в нейронах медиального аркуатного ядра гипоталамуса при экспериментальном гипогонадизме, а также обратимости этих изменений после заместительной терапии. Установлено, что заместительная терапия частично компенсирует изменения нервных клеток, восстанавливает интенсивность экспрессии рецепторов к андрогенам, но не влияет на процесс гибели нейронов.
Ключевые слова: медиальное аркуатное ядро, гипогонадизм, рецепторы к андрогенам, нейроны, реактивные изменения
This article is devoted to the research of reactive changes, the quantity of androgen receptors, and the features of their distribution in the neurons of the medial arcuate nucleus of the hypothalamus in experimental hypogonadism; there also studied the reversibility of these changes after testosterone restorative therapy. It is established that substitution therapy partially compensates for degenerative changes in neurons and restores the intensity of androgen receptors expression but does not affect the process of nerve cell death.
Keywords: medial arcuate nucleus, hypogonadism, androgen receptors, neurons, reactive changes
Изучение закономерностей половой диффе-ренцировки, особенно выраженной в пубертатном периоде [1], ее гормональной регуляции в условиях нормы и патологии является предметом активного исследовательского интереса [2,3]. В последние годы стало известно, что выработка гипоталамического гонадотропин-рилизинг гормона (ГнРГ), определяющего половую дифференцировку в пубертатном периоде, ее задержка или патологические нарушения в течение жизни опосредована двумя механизмами воздействий на ГнРГ-нейроны. Один из них заключается в пре- и постсинаптических эффектах белков семейства кисспептинов, некоторых других протеинов и глютамата, которые синтезируют нейроны пре-оптического и медиобазального комплексов гипота-ламических ядер [4,5]. Кисспептины усиливают электрическое возбуждение ГнРГ-нейронов, потенцируют влияние ГАМК на G-белки их мембран [6,7], тем самым увеличивая экспрессию мРНК и секреторную активность этих клеток [8]. Другой механизм связан с влиянием клеток макроглии, вырабатывающих факторы роста и малые молекулы, необходимые для поддержания электрического потенциала, высокого уровня пластичности и синтеза ГнРГ-нейронов [9,10].
Тела ГнРГ-нейронов в небольшом количестве распределены по всему гипоталамусу [11], содержатся они и в комплексе аркуатных ядер [12], тогда как их аксоны образуют густую сеть в области срединного возвышения [13]. Основным типом нейронов среди объемного и плотного скопления клеток аркуатных ядер являются ассоциативные (по отношению к ГнРГ-нейронам), синтезирующие кисспептины и другие регуляторы синтеза ГнРГ. Доля последних от общего числа нейронов аркуатных ядер мозга у грызунов составляет не менее 86% [14], причем они образуют синапсы на телах и отростках ГнРГ-нейронов самих аркуатных ядер [12].
Эти оба типа нейронов аркуатных ядер, в конечном счете, ответственные за развитие морфо-функциональных половых признаков организма, содержат рецепторы к андрогенам (АР) [14]. Уменьшение их числа в условиях дефицита тестостерона обусловливает дегенеративные изменения дендритов, снижение постсинаптического потенциала и площади синаптических контактов у пирамидных нейронов гиппокампа, сочетаемые с ослаблением его мнестических функций [15-17], определяет сокращение количества спариваний самцов крыс
[18]. Влияние тестостерона на нейроны головного мозга, реализуемые через связывание АР, является системным, поскольку оно обусловлено способностью андрогенов стимулировать синтез и высвобождение медиаторов [19]. В связи с этими данными можно полагать, что уровень тестостерона в крови и число связанных АР в комплексе аркуатных ядер определяют дифференцировку не только данной формации мозга, но и половых признаков всего организма.
Данные о количестве АР в аркуатном комплексе гипоталамических ядер в печати не отражены. Попытка дать количественную оценку АР была сделана лишь в единичных работах [20]. Подсчет клеток в них был основан на различии ядра нейронов по выраженной и слабой экспрессии АР. Дефицит данных об интенсивности экспрессии АР нейронами может быть обусловлен отсутствием целенаправленного изучения распределения данных рецепторов не только в ядре, но и в других компонентах клетки. Основанием к этому являются данные о регулируемой диффузии андрогенов в цитоплазму, в ходе которой они вступают в комплекс с АР, мембранными и цитоплазматическими протеинами [21,22]. В цитоплазме происходит липофиль-ная активация АР после объединения с андрогена-ми [23]. Затем активированный комплекс АР переносится в ядро [21,24], после чего он вступает в связь с андроген-чувствительными участками ДНК
[17].
В материалах публикаций, касающихся результатов моделирования уровня экспрессии АР в структурах мозга, отсутствуют данные о реактивных изменениях клеток. Между тем знание комплекса изменений нейронов аркуатных ядер и числа их АР при гипогонадизме и последующем восстановлении концентрации тестостерона в крови поможет глубже понять степень участия этого гормона в механизме развития половых признаков.
Цель данного исследования — установление реактивных изменений числа рецепторов к андроге-нам, площади тел нейронов и доли погибших клеток в медиальном аркуатном ядре при экспериментальном гипогонадизме, а также обратимости этих изменений после заместительной терапии.
Материал и методы
Для моделирования мужского гипогонадизма у 16 новорожденных самцов крыс Вистар в возрасте 2-3 дней (масса 6-7 г) под кратковременным эфирным наркозом удаляли одну гонаду согласно общепринятой методике [25]. У животных первой экспериментальной группы (8 крыс), таким образом, было индуцировано устойчивое снижение выработки тестостерона (гипогонадизм), тормозящее постнатальную дифференцировку нейронов ЦНС [26]. Животным другой группы (8 крыс) после этой же операции в возрасте 4 месяцев (половой зрелости) ежедневно, курсом 10 дней, внутримышечно вводили раствор тестостерона пропионата из расчета 3-5 мг/кг (гипогонадные самцы с лечением). Контролем служили интактные животные (8 крыс).
В возрасте 4 месяцев и 10 дней всех крыс умерщвляли путем декапитации. Эксперимент был осуществлен в весенне-летний период, когда возрастает экспрессия АР у клеток различных тканей [27]. В ходе опыта были соблюдены принципы гуманного отношения к лабораторным крысам в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ от 2003 г. №267).
Объектом исследования была каудальная часть медиального аркуатного ядра (МАЯ) — подотдел аркуатного ядерного комплекса, три составные части которого обладают наибольшими размерами, численной плотностью нейронов [28] и, следовательно, большим числом синаптических связей с нейронами, вырабатывающими ГнРГ. Искомую часть МАЯ на уровне bregma -3,6 мм устанавливали при микроскопии неокрашенных парафиновых фронтальных срезов согласно стереотаксическому атласу [29].
Для выявления рецепторов к андрогенам использовали мышиные антитела, клон F3 (Cloud-Clone Corp., Китай) в концентрации 500 мг/мл. Вторичные биотинилированные антитела применяли из набора VECTASTAIN ABC, США. После проявления связанных антигенов диаминобензидином ядра клеток докрашивали гематоксилином Карацци. В площади 0,01 мм2 левосторонней части МАЯ у каждой особи (общее количество подсчетов =8) определяли реактивные изменения клеток и площадь тел малоизме-ненных нейронов (после окрашивания срезов методом Ниссля), а также число и долю тел нейронов, различавшихся по степени экспрессии рецепторов к тестостерону.
Различали следующие параметры степени экспрессии: выраженную, умеренную, слабую и очень низкую. Выраженной (В) считали экспрессию рецепторов, при которой внутренняя часть ядра содержала многочисленные мелкодисперсные частицы АР, причем оболочка ядра являлась областью их наибольшей концентрации (рис.1). Экспрессию рецепторов расценивали как умеренную (У) при их разреженности в значительной части площади ядра и (или) цитоплазмы, что в условиях эксперимента часто сочеталось с концентрацией АР в области плазмолеммы. Слабой (С) экспрессию АР считали при обнаружении частиц в составе тонкой и прерывистой (у части клеток) оболочки ядра, наличии отдельных конгломератов АР во внутренней части ядра, при разреженности частиц рецепторов или их отсутствии в цитоплазме. Очень низкой (О) считали экспрессию АР при обнаружении скоплений его частиц в области прерывистых и деформированных контуров оболочки ядра.
Срезы МАЯ изучали при помощи микроскопа Leica DME (Германия), фотографировали и осуществляли морфометрическое исследование, используя сканер Pannoramic-250 Flash III (Венгрия) и программу 3DHISTECH (Венгрия). Различия средней и ее ошибки считали значимыми при р < 0,05.
Результаты исследования
МАЯ гипоталамуса у взрослых интактных крыс, в сравнении с остальными ядрами аркуатного комплекса, было наиболее крупным; размеры тел нейронов и их компактность расположения визуально между ядрами этого комплекса не различались (рис.2). Большинство тел нейронов МАЯ содержала большое количество мелких глыбок вещества Нисс-ля в хорошо развитой цитоплазме, хроматин, конденсированный на периферии ядра, и крупное ядрышко. Определялись также единичные клетки-«тени», представленные сморщенными контурами
оболочки ядра или ее фрагментами (рис.За). Долевое соотношение этих типов нейронов в МАЯ интакт-ных крыс представлено в табл.1. АР экспрессирова-ли тела всех нейронов МАЯ; ядрышко нейронов, а также клетки нейроглии АР не содержали. Уровень экспрессии РА у большинства нейронов был выраженным (В1 — В4), у некоторых клеток — выраженным умеренно (У1 — У3), у единичных — выраженным слабо (С1 — С4) или очень низким в составе фрагментов оболочки ядра клеток-«теней» (О1; см. рис.1). Соотношения количества и доли нейронов, различающихся по степени экспрессии АР, представлены в табл.2.
Рис.2. Каудальная часть аркуатного ядерного комплекса на уровне bregma -3,6 мм. Ado — аркуатное дорсальное ядро, Ala — аркуатное латеральное ядро, AMe — аркуатное медиальное ядро, ME — срединное возвышение, TC — область серого бугра, 3v — полость желудочка. Окраска методом Ниссля, ок. х10, об. *10
Рис.3. Реактивные изменения нейронов аркуатного медиального ядра у взрослых крыс при моделировании гипогонадизма (б), его терапии тестостероном (в) в сравнении с нормой (а). Т — клетки-«тени». Окраска методом Ниссля, ок. *10, об. х 100
Таблица 1
Количество и долевое соотношение субпопуляций нейронов МАЯ на площади 0,01 мм2 (X ± 8х)
Воздействие Кол-во и доля нейронов (количество исследованных площадей = 8) Суммарное количество нейронов
Малоизме-нённых Теневидных
Нет (контроль) 30,3±1,8 96,0±0,8% 1,3±0,3 4,0±0,8% 100%
Гипогонадизм 32,8±0,7 86,6±1,1%* 5,1±0,5 13,4±1,1%* 100%
Терапия тестостероном 30,0±1,3 82,3±3,8%* 6,0±1,1 17,7±3,8%* 100%
Примечание.* различия с параметрами клеток в контроле значимы (р < 0,05)
В результате снижения выработки тестостерона в неонатальном периоде среди нейронов МАЯ взрослых крыс были выявлены значительные патологические нарушения (рис.Зб). Нейроны, измененные в наименьшей степени (малоизмененные), содержали цитоплазму визуально меньшего размера (более узкую), чем у интактных крыс. Доля клеток-«теней» возросла в 3,4 раза (см. табл.1). Площадь тел малоиз-мененных нейронов уменьшилась в 1,7 раза (р < 0,05;
рис.4). Число клеток-сателлитов увеличилось: большинство тел олигодендроцитов и астроцитов прилежали к поверхности тел нейронов.
мкм2
Рис.4. Изменения площади тел нейронов при гипогонадизме (2) и заместительной терапии (3) в сравнении с параметрами у интактных крыс (1). Вертикальные отрезки — значения стандартной ошибки. Различия между параметрами клеток значимы (р < 0,05)
Признаки выраженной экспрессии АР в нейронах МАЯ гипогонадных крыс отсутствовали. Степень экспрессии у большинства тел малоизмененных нейронов соответствовала умеренной. АР у нейронов
Таблица 2
Количественные и долевые различия субпопуляций нейронов МАЯ, отличающихся степенью экспрессии рецепторов к тестостерону на площади 0,01 мм2 (X + Sx)
Воздействие Степень экспрессии (количество исследованных площадей = 8) Суммарное количество нейронов
Выражена Умеренно выражена Слабо выражена Очень низкая
Нет (контроль) 20,0±1,1 62,4±3,3% 9,5±1,4 29,6±4,4% 1,8±0,5 5,3±1,6% 0,9±0,3 2,7±1,6% 100%
Гипогонадизм 0 0%* 9,0±1,3 28,2±3,4% 14,4±1,2 45,8±4,1%* 8,3±1,1 26,0±3,3%* 100%
Терапия тестостероном 2,5±0,8 8,5±3,1%** 16,1±2,0 53,3±5,2%** 7,9±0,9 26,4±2,8%** 3,5±0,8 11,8±2,3%** 100%
Примечание. * различия с параметрами клеток в контроле значимы (р < 0,05); ** различия с параметрами клеток при гипогонадизме значимы (р < 0,05)
данного фенотипа концентрировались в области оболочки ядра и плазмолеммы, которые выглядели утолщенными на всем протяжении (У4 - У7 и У9 -У10; см. рис. 1). Во внутренней части ядра и цитоплазме АР образовывали конгломераты, различающиеся в разных клетках по количеству и размерам. Значительная часть площади цитоплазмы рецепторов не содержала (У6 - У7 и У9 - У10). У отдельных клеток АР в части цитоплазмы и плазмолеммы отсутствовали (У8). Нейроны со слабо выраженным уровнем экспрессии АР (С5 - С6) составили самую многочисленную популяцию клеток (см. табл.2). Локализация рецепторов в цитоплазме клеток данного фенотипа, в отличие от контроля, была не характерна. Значительно возросла доля теневидных нейронов, содержащих очень малое число АР (О2 - 07).
В результате терапии гипогонадных крыс тестостероном происходило частичное восстановление площади тел малоизмененных нейронов, в сравнении с площадью нейронов у гипогонадных крыс (р < 0,05; см. рис.4), которое визуально было обусловлено увеличением размеров цитоплазмы (рис.Зв). Доля кле-ток-«теней» у животных этой группы значительно не различалась с данным параметром у гипогонадных крыс без лечения (см. табл.1). Число клеток-сателлитов визуально было больше, чем в контроле.
Частицы АР в телах некоторых нейронов МАЯ у крыс гипогонадной группы с лечением были сконцентрированы в наибольшей части площади ядра и цитоплазмы, образовывали тонкую непрерывную полосу сгущения в области оболочки ядра. У большинства нейронов концентрация АР в области кариолем-мы сочеталась с экспрессией небольшого числа частиц и мелких конгломератов рецепторов в ядре и цитоплазме. У небольшой части нейронов АР в цитоплазме не обнаруживались.
Доля нейронов с выраженной и умеренной экспрессией АР в группе гипогонадных крыс с лечением была значительно больше, чем в экспериментальной группе без заместительной терапии (р<0,05), тогда как доля клеток со слабой и очень низкой экспрессией была значительно ниже (см. табл.2).
Обсуждение результатов
Наличие в МАЯ интактных крыс наряду с нез-мененными нейронами небольшого числа измененных клеток может свидетельствовать о незавершенности процесса программированной гибели нейронов у молодых взрослых крыс. Эти данные согласуются с результатами исследований различных отделов мезо-кортиколимбической дофаминергичес-кой системы здоровых людей и крыс молодого возраста [30].
Такие дегенеративные изменения нейронов МАЯ, как уменьшение площади их тел (главным образом, за счет цитоплазмы) в сочетании с гибелью части клеток, происходят вследствие устойчивого дефицита тестостерона. Ключевым фактором в механизме данных изменений нейронов является выявленное снижение ими экспрессии (сокращение числа) АР. Об этом свидетельствуют данные тестостерон-зависимого снижения скорости синтеза ДНК и рибо-сомальной РНК [31], электрических потенциалов [32], редукции площади синаптических контактов [15-17] в нейронах ряда формаций мозга, сочетающиеся с ослаблением либидо. Выявленные в нашем исследовании дегенеративные изменения нейронов МАЯ у гипогонадных крыс, которые являются нейро-секреторными клетками, вырабатывающими ГнРГ или пептиды, влияющие на его выработку [4,5,12,14], могут обусловить уменьшение выработки гонадоли-берина, вторичное снижение синтеза андрогенов и реализацию морфофункциональных проявлений его дефицита.
Особым предметом научного интереса, который раскрывается в настоящем исследовании, являются новые данные о локализации и плотности расположения АР в телах нервных клеток, а также о перераспределении рецепторов в модели недостаточности андрогенов. АР, классифицируемые как рецепторы ядерного типа, в конечном счете, связываясь с определенными локусами хромосом, изменяют работу генома [17]. Поэтому в тех редких работах, которые посвящены изучению изменений плотности расположения АР, в качестве критерия была использована
степень их экспрессии во внутренней части ядра [20]. Авторами были использованы кроличьи поликло-нальные антитела к аминокислотам 1-21 АР крыс. Между тем в авторской иллюстрации была различима и цитоплазматическая локализация АР. Вероятной причиной установления участков клеток с нетипичной экспрессией АР является использование в настоящем исследовании антител (клон F3, Cloud-Clone Corp., Китай), связывающих не только комплекс АР с мембранными и цитоплазматическими протеинами, но и фрагменты этого комплекса, подвергшиеся ли-пофильной деградации в цитоплазме [21,22]. Поскольку данные об изменениях комплекса АР с этими типами протеинов в условиях дефицита андрогенов отсутствуют, обоснование перегруппировки рецепторов между частями нейрона при гипогонадизме представляется сложным.
Выводы
Тела нейронов каудальной части МАЯ гипоталамуса содержат огромное количество АР, которые образуют скопления в ядре, цитоплазме, оболочке ядра и в плазмолемме. При гипогонадизме происходит как перераспределение АР, так и снижение степени их экспрессии (количества). АР концентрируются в оболочке ядра и плазмолемме некоторых нейронов, образуют конгломераты в ядре и цитоплазме; многие клетки утрачивают локализацию рецепторов в цитоплазме и плазмолемме. Снижение числа АР при гипогонадизме сопряжено с дегенеративными изменениями и гибелью части нервных клеток. Заместительная терапия частично компенсирует дегенеративные изменения нейронов и восстанавливает интенсивность экспрессии АР.
1. Sumiyoshi A., Nonaka H., Kawashima R. Sexual differentiation of the adolescent rat brain: A longitudinal voxel-based morphometry study // Neurosci. Lett. 2017. V.642. P.168-173.
2. Никитина И.Л., Байрамов А.А. Формирование пола и репродуктивной системы человека: прошлое, настоящее, будущее // Лечение и профилактика. 2014. Т.2. С.76-85.
3. Ходулева Ю.Н., Асауленко З.П., Байрамов А.А. и др. Дегенеративные изменения нейронов медиального аркуат-ного гипоталамического ядра в модели мужского гипого-надизма // Педиатр. 2015. Т.6. №3. С.62-68.
4. Ojeda S.R., Terasawa E. Neuroendocrine regulation of puberty // Hormones, Brain and Behavior. 2002. V.4. P.589-659.
5. Ojeda S.R., Dubay C., Lomniczi A. et al. Gene Networks and the Neuroendocrine Regulation of Puberty // Mol. Cell. Endocrinol. 2010. V.324. №1. Р.3-11.
6. Messager S., Chatzidaki E.E., Ma D. et al. Kisspeptin directly stimulates gonadotropin-releasing hormone release via G protein-coupled receptor 54 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. V.102. №5. Р.1761-1766.
7. Ronnekleiv O.K., Kelly M.J. Kisspeptin Excitation of GnRH Neurons // Adv. Exp. Med. Biol. 2013. V.784. Р.113-131.
8. Novaira H.J., Ng Y., Wolfe A., Radovick S. Kisspeptin increases GnRH mRNA expression and secretion in GnRH secreting neuronal cell lines // Molec. Cel. Endocrinol. 2009. V.311. Р.126-134.
9. Ojeda S.R., Prevot V., Heger S. et al. Glia-to-neuron signaling and the neuroendocrine control of female puberty // Ann. Med. 2003. V.35. №4. Р. 244-255.
10. Wilkins A., Majed H., Layfield R. et al. Oligodendrocytes promote neuronal survival and axonal length by distinct in-
tracellular mechanisms: a novel role for oligodendrocyte-derived glial cell line-derived neurotrophic factor // J. Neurosci. 2003. V.23. №12. Р.4967-4974.
11. Conn P.M., Hsueh A.J.W., Crowley W.F.J. Gonadotropin-releasing hormone: Molecular and cell biology, physiology, and clinical applications // Fed. Proc. 1984. V.43. Р.2351-2361.
12. Kallo I., Vida B., Deli L. et al. Co-Localisation of Kisspeptin with Galanin or Neurokinin B in Afferents to Mouse GnRH Neurones // J. Neuroendocrinol. 2011. V.24. Р.464-476.
13. Wray S. Gonadotropin-Releasing Hormone: GnRH-1 System. Encyclopedia of Neuroscience. 2009. V.4. Р.967-973.
14. Lehman M.N., Merkley C.M., Coolen L.M., Goodman R.L. Anatomy of the kisspeptin neural network in mammals // Brain Res. 2010. V.1364. Р.90-102.
15. Leranth C., Petnehazy O., MacLusky N.J. Gonadal hormones affect spine synaptic density in the CA1 hippocampal sub-field of male rats // J. Neurosci. 2003. V.23. №5. Р.1588-1592.
16. Moghadami S., Jahanshahi M., Sepehri H., Amini H. Go-nadectomy reduces the density of androgen receptor-immunoreactive neurons in male rat's hippocampus: testosterone replacement compensates it // Behav. Brain Funct. 2015. V.12. №1. Published online 2016, Jan., 28. Doi: 10.1186/s12993-016-0089-9.
17. Smith M.D., Jones L.S., Wilson M.A. Sex differences in hip-pocampal slice excitability: role of testosterone // Neurosci. 2002. V.109. №3. Р.517-530.
18. Wu D., Gore A.C. Changes in Androgen Receptor, Estrogen Receptor alpha, and Sexual Behavior with Aging and Testosterone in Male Rats // Horm. Behav. 2010. V.58. №2. Р.306-316.
19. Mitsushima D., Takase K., Funabashi T., Kimura F. Gonadal steroids maintain 24 h acetylcholine release in the hippocampus: organizational and activational effects in behaving rats // J. Neurosci. 2009. V.29. №12. Р.3808-3815.
20. Wu D., Lin G., Gore A.C. Age-related Changes in Hypothalamic Androgen Receptor and Estrogen Receptor a in Male Rats // J. Comp. Neurol. 2009. V.512. №5. Р.688-701.
21. Griffith K., Morton M.S., Nicholson R.I. Androgens, androgen receptors, antiandrogens and the treatment of prostate cancer // Eur. Urology. 1997. V.32. Suppl. 3. Р.24-40.
22. Roy A.K., Tyagi R.K., Song C.S. et al. Androgen receptor: structural domains and function; dynamics after ligand-receptor interaction // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2001. V.949. Р.44-57.
23. Mora G.R., Tindall D.J. Activation of androgen receptor // Prostate Cancer. Biology, Genetics, and the New Therapeutics (Eds.: L.W.K. Chung et al.). Totowa (N.J.): Humana Press, 2001. Р.219-239.
24. Farnsworth W.E. Roles of estrogen and SHBG in prostate physiology // The Prostate.1996. V.28. Р.17-23.
25. Киршенблат Я.Д. Практикум по эндокринологии. М.: Высшая школа. 1969.
26. Gorski R.A. Hypothalamic imprinting by gonadal steroid hormones // Adv. Exp. Med. Biol. 2002. V.511. Р.57-70.
27. Kerver H.N., Wade J. Relationships among Sex, Season and Testosterone in the Expression of Androgen Receptor mRNA and Protein in the Green Anole Forebrain // Brain Behav. Evol. 2014. V.84. №4. Р.303-314.
28. Tetel M.J., Ungar T.C., Hassan B., Bittman E.L. Photoperi-odic regulation of androgen receptor and steroid receptor coactivator-1 in Siberian hamster brain // Brain Res. 2004. V.131. №1-2. Р.79-87.
29. Paxinos G., Watson C. The rat brain atlas in stereotaxic coordinates. Fourth Edition. Elsevier Acad. Press, 1998. Copyright, CD-Rom design by Halasz P. Fig.32.
30. Дробленков А.В. Патологические изменения нейронов мезокортико-лимбической дофаминергической системы у здоровых людей и крыс // Морфология. 2010. Т.149. Вып.3. С.11-17.
31. Keil K.P., Abler L.L., Laporta J. et al. Androgen receptor DNA methylation regulates the timing and androgen sensitivity of mouse prostate ductal development // Dev. Biol. 2014. V.396. №2. Р.237-245.
32. Asuthkar S., Demirkhanyan L., Sun X., Elustondo P.A., Krishnan V. et al. The TRPM8 Protein Is a Testosterone Receptor // J. Biol. Chem. 2015. V.290. №5. Р.2670-2688.
References
1. Sumiyoshi A., Nonaka H., Kawashima R. Sexual differentiation of the adolescent rat brain: a longitudinal voxel-based morphometry study. Neuroscience Letters, 2017, vol. 642, pp.168-173.
2. Nikitina I.L., Bairamov A.A. Formirovanie pola i reproduk-tivnoi sistemy cheloveka: proshloe, nastoiashchee, budushchee [The formation of gender and human reproductive system: past, present and future]. Lechenie i profilaktika - Disease Treatment and Prevention, 2014, vol. 2(10), pp. 7685.
3. Khoduleva Iu.N., Asaulenko Z.P., Bairamov A.A. et al. De-generativnye izmeneniia neironov medial'nogo arkuatnogo gipotalamicheskogo iadra v modeli muzhskogo gipo-gonadizma [Degenerative changes of the medial arcuate hy-pothalamic nucleus neurons in the male hypogonadism model]. Pediatr, 2015, vol. 6, no. 3, pp. 62-68.
4. Ojeda S.R., Terasawa E. Neuroendocrine regulation of puberty. Hormones, Brain and Behavior, 2002, vol. 4, pp. 589659.
5. Ojeda S.R., Dubay C., Lomniczi A. et al. Gene networks and the neuroendocrine regulation of puberty. Molecular and Cellular Endocrinology, 2010, vol. 324, no. 1, pp. 3-11.
6. Messager S., Chatzidaki E.E., Ma D. et al. Kisspeptin directly stimulates gonadotropin-releasing hormone release via G protein-coupled receptor 54. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2005, vol. 102, no. 5, pp. 1761-1766.
7. Ronnekleiv O.K., Kelly M.J. Kisspeptin excitation of GnRH eeurons. Advances in Experimental Medicine and Biology, 2013, vol. 784, pp. 113-131.
8. Novaira H.J., Ng Y., Wolfe A., Radovick S. Kisspeptin increases GnRH mRNA expression and secretion in GnRH secreting neuronal cell lines. Molecular and Cellular Endocrinology, 2009, vol. 311, pp. 126-134.
9. Ojeda S.R., Prevot V., Heger S. et al. Glia-to-neuron signaling and the neuroendocrine control of female puberty. Annals of Medicine, 2003, vol. 35, no. 4, pp. 244-255.
10. Wilkins A., Majed H., Layfield R. et al. Oligodendrocytes promote neuronal survival and axonal length by distinct in-tracellular mechanisms: a novel role for oligodendrocyte-derived glial cell line-derived neurotrophic factor. Journal of Neuroscience, 2003, vol. 23, no. 12, pp. 4967-4974.
11. Conn P.M., Hsueh A.J.W., Crowley W.F.J. Gonadotropin-releasing hormone: molecular and cell biology, physiology, and clinical applications. Federation proceedings, 1984, vol. 43, pp. 2351-2361.
12. Kallo I., Vida B., Deli L. et al. Co-localisation of kisspeptin with galanin or neurokinin B in afferents to mouse GnRH neurons. Journal of Neuroendocrinology, 2011, vol. 24, pp. 464-476.
13. Wray S. Gonadotropin-releasing hormone: GnRH-1 system. Encyclopedia of Neuroscience, 2009, vol. 4, pp. 967-973.
14. Lehman M.N., Merkley C.M., Coolen L.M., Goodman R.L. Anatomy of the kisspeptin neural network in mammals. Brain Research, 2010, vol. 1364, pp. 90-102.
15. Leranth C., Petnehazy O., MacLusky N.J. Gonadal hormones affect spine synaptic density in the CA1 hippocampal sub-field of male rats. Journal of Neuroscience, 2003, vol. 23, no. 5, pp. 1588-1592.
16. Moghadami S., Jahanshahi M., Sepehri H., Amini H. Go-nadectomy reduces the density of androgen receptor-
immunoreactive neurons in male rat's hippocampus: testosterone replacement compensates it. Behavioral and Brain Functions, 2015, vol. 12, no. 1. Published online January 28, 2016. doi: 10.1186/s12993-016-0089-9.
17. Smith M.D., Jones L.S., Wilson M.A. Sex differences in hip-pocampal slice excitability: role of testosterone. Neuroscience, 2002, vol. 109, no. 3, pp. 517-530.
18. Wu D., Gore A.C. Changes in androgen receptor, estrogen receptor alpha, and sexual behavior with aging and testosterone in male rats. Hormones and Behavior, 2010, vol. 58, no. 2, pp. 306-316.
19. Mitsushima D., Takase K., Funabashi T., Kimura F. Gonadal steroids maintain 24 h acetylcholine release in the hippocampus: organizational and activational effects in behaving rats. J Journal of Neuroscience, 2009, vol. 29, no. 12, pp. 38083815.
20. Wu D., Lin G., Gore A.C. Age-related changes in hypothalamic androgen receptor and estrogen receptor a in male rats. Journal of Comparative Neurology, 2009, vol. 512, no. 5, pp. 688-701.
21. Griffith K., Morton M.S., Nicholson R.I. Androgens, androgen receptors, antiandrogens and the treatment of prostate cancer. European Urology, 1997, vol. 32(Suppl. 3), pp.24-40.
22. Roy A.K., Tyagi R.K., Song C.S. et al. Androgen receptor: structural domains and function; dynamics after ligand-receptor interaction. Annals of the New York Academy of Sciences, 2001, vol. 949, pp. 44-57.
23. Mora G.R., Tindall D.J.; Chung L.W.K. et al., eds. Activation of androgen receptor. Prostate Cancer. Biology, Genetics, and the New Therapeutics. Totowa, NJ, Humana Press, 2001, pp. 219-239.
24. Farnsworth W.E. Roles of estrogen and SHBG in prostate physiology. The Prostate, 1996, vol. 28, pp. 17-23.
25. Kirshenblat Ia.D. Praktikum po endokrinologii [A Practical Course in Endocrinology]. Moscow, "Vysshaia shkola" Publ., 1969. 256 p.
26. Gorski R.A. Hypothalamic imprinting by gonadal steroid hormones. Advances in Experimental Medicine and Biology, 2002, vol. 511, pp. 57-70.
27. Kerver H.N., Wade J. Relationships among sex, season and testosterone in the expression of androgen receptor mRNA and protein in the green anole forebrain. Brain, Behavior and Evolution, 2014, vol. 84, no. 4, pp. 303-314.
28. Tetel M.J., Ungar T.C., Hassan B., Bittman E.L. Photoperi-odic regulation of androgen receptor and steroid receptor coactivator-1 in Siberian hamster brain. Brain Research, 2004, vol. 131, no. 1-2, pp. 79-87.
29. Paxinos G., Watson C. The rat brain atlas in stereotaxic coordinates. 4th ed. Elsevier Academic Press, 1998. Copyright, CD-Rom design by Halasz P. Fig. 32.
30. Droblenkov A.V. Patologicheskie izmeneniia neironov me-zokortiko-limbicheskoi dofaminergicheskoi sistemy u zdorovykh liudei i krys [Pathologic changes of neurons of mesocorticolimbic dopaminergic system in healthy humans and rats]. Morfologiia - Morphology, 2010, vol. 137, no. 3, pp. 11-17.
31. Keil K.P., Abler L.L., Laporta J. et al. Androgen receptor DNA methylation regulates the timing and androgen sensitivity of mouse prostate ductal development. Developmental Biology, 2014, vol. 396, no. 2, pp. 237-245.
32. Asuthkar S., Demirkhanyan L., Sun X. et al. The TRPM8 protein is a testosterone receptor. Journal of Biological Chemistry, 2015, vol. 290, no. 5, pp. 2670-2688.
