CC BY
38
kcat (с1) = 5,193; kcat/Km (М-1 с-1) = 10713.
Таким образом, в настоящей работе подобраны оптимальные условия очитки препарата L-фенилаланин-аммоний-лиазы. Схема очистки включает дробное осаждение сульфатом аммония и две хроматографические ста -дии: металлохелатную и гидрофобную. Выход фермента в результате очистки по разработанной схеме составляет около 60 %. Исследованы биохимические свойства рекомбинантной L-фенилаланин-аммоний-лиазы. Фермент наиболее активен при рН 8,5. При этом он стабилен в широком диапазоне значений рН от 7,0 до 11,0. Температурный оптимум активности PAL составляет 50 °С. При 30 °С фермент сохраняет более 90 % активности после трех суток инкубации. Время полуинактивации фермента при 50 и 60 °С составляет 4,5 часа и 15 мин., соответственно. Определены кинетические константы для фермента: Vmax = 3,97 мкмоль мин-1 мг-1 и Km = 0.49 мМ.
Список литературы:
1. Cochrane F.C. The Arabidopsis phenylalanine ammonia lyase gene family: kinetic characterization of the four PAL isoforms / F.C. Cochrane, L.B. Davin, N.G. Lewis // Phytochemistry. - 2004. - P. 1557-1564.
2. A different approach to treatment of phenylketonuria: Phenylalanine degradation with recombinant phenylalanine ammonia lyase / C.N. Sarkissian, Z. Shao, F. Blain, et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. - USA 96. - 1999. - P. 2339-2344.
3. Hanley W.B. Hypotyrosinemia in phenylketonuria / W.B. Hanley, A.W. Lee, A.J. Hanley // Molec. Genet. Metab. - 2000. - P. 286-294.
4. Crystal structure of phenylalanine ammonia lyase: multiple helix dipoles implicated in catalysis / J.C. Calabrese, D.B. Jordan, A. Boodhoo, et al. // Biochemistry. - 2004. - 43. - P. 11403-11416.
ИЗУЧЕНИЕ УСТОЙЧИВОСТИ ЦВЕТА ЭКСТРАКТОВ ФЕНОЛЬНЫХ СОЕДИНЕНИЙ
© Икрами М.Б., Мирзорахимов К.К.*, Шарипова М.Б., Гулбекова Н.Б.
Технологический университет Таджикистана, Республика Таджикистан, г. Душанбе
Нами выделены фенольные соединения, обладающие красящими свойствами, из цветов, семян, листьев и стеблей зверобоя, древесины молодых
* Доцент кафедры Химии, кандидат химических наук.
ветвей айвы и скорлупы грецкого ореха с целью применения их в пищевой промышленности в качестве пищевых красителей. Указанные растения выбраны в качестве сырья для получения красящих веществ в связи с тем, что помимо фенольных соединений они содержат также другие биологически активные вещества - витамины, дубильные вещества пирокатехино-вой группы, сапонины, органические кислоты, и применяются как лечебные средства [1, 2]. Из литературы известно также, что экстракты лекарственных и пряных трав добавляются в пищевые продукты как биодобавки при производстве продуктов функционального назначения, а также как консерванты при производстве некоторых мясопродуктов, а также для улучшения реологических свойств некоторых кондитерских изделий [3-5]. В работе представлены результаты изучения устойчивости цвета изучаемых растительных экстрактов, а также влияния на него различных факторов - температуры, продолжительности воздействия температуры рН среды.
Одной из важнейших характеристик красителей является устойчивость их цвета. Изучение устойчивости цвета выделенных красителей проводилось фотоколориметрическим методом. В качестве критерия устойчивости использовалась оптическая плотность растворов, приготовленных из исследуемых образцов. Так как оптическая плотность растворов прямо пропорциональна концентрации растворенного вещества, то по изменению оптической плотности можно судить об изменении концентрации, и, следовательно, о разрушении красящих пигментов. Оптическая плотность растворов красителей измерялась через определенные промежутки времени в течение нескольких месяцев на фотоколориметре КФК-77 с зеленым светофильтром (к 540 нм) для растворов красного цвета и с синим светофильтром (к 490 нм) для желтых растворов в кювете с I = 10 мм.
Установлено, что оптическая плотность растворов красителей изменяется незначительно в течение 2-4 дней, затем остается постоянной в течение 8-12-ти месяцев.
Исследовано также влияние различных факторов - температуры и длительности ее воздействия, кислотности среды на устойчивость цвета полученных красителей.
При определении влияния температуры и длительности ее воздействия на устойчивость цвета выделенных природных красителей измерялась оптическая плотность раствора, приготовленного из образца испытуемого красителя при комнатной температуре и после кипячения раствора. Последующие определения оптической плотности проводили после кипячения этого раствора в течение 10, 20, 30, 50 и 60 мин. Зависимость концентрации фенольных соединений в экстрактах от времени кипячения пред-ставленав табл. 1.
На рис. 1 представлена зависимость концентрации фенольных соединений в экстрактах из зверобоя от времени кипячения. Для других исследованных экстрактов эта зависимость аналогична.
Таблица 1
Зависимость концентрации фенольных соединений в экстрактах от времени кипячения
Краситель Время кипячения, мин.
До кипячения 10 20 30 40 60 90
Из водного экстракта древесины айвы Оптическая плотность 0,90 0,69 0,61 0,61 0,60 0,60 0,60
Конц. г\л 26,7 20,5 18,1 17,8 17,8 17,8 17,8
Из содового экстракта древесины айвы Оптическая плотность 1,34 1,30 0,20 1,15 1,10 1,10 1,10
Конц. г\л 39,8 38,6 35,9 34,1 32,7 32,7 32,7
Из водного экстракта скорлупы ореха Оптическая плотность 0,42 0,70 0,76 0,90 0,96 0,99 1.01
Конц. г\л 12,4 20,8 22,5 28,5 28,5 29,4 30,0
Из содового экстракта скорлупы ореха Оптическая плотность 0,95 0,95 0,85 0,80 0,75 0,70 0,70
Конц. г\л 28,2 28,2 25,2 23,7 22,2 20,8 20,8
Из водного экстракта зверобоя Оптическая плотность 0,53 0,65 0,75 0,82 0,89 1,0 1,1
Конц. г\л 15,7 19,3 22,2 24,3 26,4 29,7 32,7
Из водно-спиртового экстракта зверобоя Оптическая плотность 0,65 0,70 0,72 0,75 0,78 0,70 0,70
Конц. г\л 19,3 20,8 21,4 22,2 23,1 20,8 20,8
Из спиртового экстракта зверобоя Оптическая плотность 0,58 0,60 0,60 0,68 0,68 0,70 0,70
Конц. г\л 17,2 17,8 17,8 20,2 20,2 20,8 20,8
Из водного экстракта цветков одуванчика Оптическая плотность 0,98 0,90 0,90 0,89 0,90 0,89 0,89
Конц. г\л 29,1 28,5 28,5 26,4 28,5 26,4 26,4
С, г\л
50 40 35 30 25 20 15 10 5
10 20 40 60 80 100 нреыяыин
Условные обозначения: 1 - водный экстракт; 2 - водно-спиртовой экстракт; 3 - спиртовой экстракт.
Рис. 1. Зависимость концентрация фенольных соединений в экстрактах из зверобоя от продолжительности кипячения
Как видно из данных таблицы и рисунка, при непродолжительном кипячении растворов полученных красителей их оптическая плотность незначительно меняется. При увеличении времени кипячения до 20 мин. оптическая плотность растворов несколько увеличивается, затем остается постоянной. При дальнейшем увеличении времени воздействия температуры оптическая плотность остается неизменной.
С целью определения стабильности цвета исследуемых в различных средах нами измерялась оптическая плотность растворов красителей при рН от 1 до 12. Полученные данные представлены в табл. 2.
Таблица 2
Зависимость концентрации фенольных соединений от рН среды
Краситель рН
1 2 3 4 5 6 7 8 10 11
Из водного экстракта древесины айвы Оптческая плотность 1,4 0,95 0,98 0,95 0,90 0,92 0,99 0,85 0,90 0,90
Конц. г\л 41,6 28,2 29,1 28,2 26,7 27,3 29,4 25,2 26,7 26,7
Из содового экстракта древесины айвы Оптческая плотность 1,34 1,30 1,35 1,25 1,30 1,20 1,20 1,20 1,20 1,20
Конц. г\л 39,8 38,6 40,1 37,1 38,6 35,6 35,6 35,6 35,6 35,6
Из водного экстракта скорлупы ореха Оптческая плотность 0,62 0,7 0,82 0,37 0,68 0,44 0,36 0,42 0,44 0,44
Конц. г\л 18,4 20,8 24,3 11,0 20,2 13,0 10,7 12,4 13,0 13,0
Из содового экстракта скорлупы ореха Оптческая плотность 1,05 1,15 0,92 0,86 0,86 0,89 0,89 0,87 0,85 0,86
Конц. г\л 31,2 34,1 27,3 25,5 25,5 26,4 26,4 25,8 25,2 25,5
Из водного экстракта зверобоя Оптческая плотность 0,68 0,65 0,60 0,58 0,63 0,62 0,64 0,58 0,63 0,62
Конц. г\л 20,2 19,3 17,8 17,2 18,7 18,4 19,0 17,2 18,7 18,4
Графическая зависимость концентрации фенольных соединений при от значения рН среды для экстракта из древесины айвы представлена на рис. 2.
С. г\л
50 40
10 ' 5 ■
1 2 34 55 7 89 10 11 рн Условные обозначения:
1 - содовый экстракт из древесины айвы;
2 - водный экстракт из древесины айвы;
3 - водный экстракт скорлупа ореха.
Рис. 2. Изменение концентрации фенольных соединений в экстрактах в зависимости от активной кислотности
Измерение оптической плотности растворов красителей показало, что в кислой среде происходит смещение максимума поглощения растворов в сторону более коротких длин волн, в щелочной же среде максимум поглощения почти не меняется. При значения pH 2 и 1 цвет растворов становится желтым. При увеличении значений pH (от 4 до 12) цвет - красный.
Таким образом, выделенные нами красители устойчивы в течение достаточного времени, цвет их стабилен в течение продолжительного кипячения, они устойчивы нейтральной и щелочной средах.
Список литературы:
1. Ходжиматов М. Дикорастущие лекарственные растения Таджикистана. - Душанбе, 1989. - С. 137-144.
2. Харламова O.A., Кафка Б.В. Натуральные пищевые красители. - М. Пищевая промышленность, 1979. - 120 с.
3. Спиричев В.Б., Шатнюк Л.Н. Обогащение пищевых продуктов мик-ронутриентами: современные медико-биологические аспекты // Пищевая промышленность. - 2002. - № 7. - С. 98-101.
4. Касьянов Г.И., Кизим И.Е., Холодцов М.А. Применение пряно-ароматических и лекарственных растений в пищевой промышленности // Пищевая промышленность. - 2000. - № 5. - С. 33-35.
5. Толкунова H.H., Чуева E.H., Бидюк А.Я. Влияние экстрактов лекарственных растений на развитие микроорганизмов // Пищевая промышленность. - 2002. - № 8. - С. 70-71.
МИКРОБНЫЕ ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА КАК АНТИМИКРОБНЫЕ И АНТИАДГЕЗИВНЫЕ АГЕНТЫ
© Конон А.Д.*, Скочко А.Б.*, Пирог Т.П.*
Национальный университет пищевых технологий, Украина, г. Киев
Установлено, что препараты поверхностно-активных веществ (ПАВ) Rhodococcus erythropolis ЭК-1 (0,92-1,44 мг/мл) и Acinetobacter calcoa-ceticus K-4 (0,15-0,22 мг/мл) в виде супернатанта куньтуральной жидкости проявляют антимикробное действие по отношению к ряду микроорганизмов (Bacillus subtilis БТ-2, Escherichia coli ИЭМ-1, Candida tropicalis ПБТ-5, Candida albicans Д-6, Candida utilis БВС-65). Не выяв-
* Ассистент кафедры Биотехнологии микробного синтеза, аспирант.
* Магистрант кафедры Биотехнологии микробного синтеза.
" Заведующий кафедрой Биотехнологии микробного синтеза, доктор биологических наук, профессор.
