CC BY
18
XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС
ТЕЗИСЫ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ
поражением легких. У некоторых животных отмечено наличие метастазирования в селезенку.
В группе мышей, получавших Ронколейкин+Ингарон, наблюдалось наиболее активное состояние тимуса. Морфологическое исследование тимуса выявило развитое корковое вещество с плотным расположением тимоцитов, что свидетельствует об активном состоянии Т-клеточного звена иммунитета. По результатам субпопуляционного анализа спленоцитов содержание Т-клеток у мышей данной группы было выше, чем в контроле (60,33±1,42% против 46,1±2,06%), за счет Th, уровень которых был максимальным среди всех групп (47,9±1,5%), тогда как в других группах он колебался от 15 до 35%. В селезенке этих же мышей отмечалась развитая белая пульпа с крупными фолликулами. Заключение. Проведенные исследования свидетельствуют об антиметастатическом и иммуномодулирующем эффекте паратуморального применения комбинации Ронколей-кин+Ингарон в эксперименте, а также о целесообразности ее использования в лечении онкологических больных. Дальнейший поиск может выявить и другие эффективные сочетания иммунопрепаратов, что позволит оптимизировать цитоки-нотерапию и уточнить ее роль и место в комплексном лечении злокачественных опухолей, в том числе, в комбинации с химиотерапией.
Оценка противоопухолевой активности фармацевтической субстанции эноксифол на модели экспериментальной опухоли легкого
Е. Ф. Комарова', Е. П. Коробейникова', Л. В. Ванжа, М. И. Бра-гина', А. А. Спасов2, А. С. Морковник3, О.Н. Жуковская3, В. А. Анисимова3
Место работы: 'ФГБУ «РНИОИ» Минздрава России, г. Ростов-на-Дону; 2ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России, г. Волгоград; 3НИИ ФОХ ФГАОУ ВО «ЮФУ», г. Ростов-на-Дону
e-mail: [email protected]
Цель. Исследовать динамику роста перевиваемой опухоли легкого Льюис (LLC) мышей при внутрижелудочном применении фармацевтической субстанции эноксифол (дигидробромид-2- (3,4-дигидроксифенил) — 9-диэтилами-но-этилимидазо- [1,2-a] бензимидазол). Материалы и методы. Изучение противоопухолевой активности вещества проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ. Опухолевый штамм эпидермоидной карциномы легкого Льюис (LLC) прививали 80 мышам-самцам C57/Bl6 весом 18—20 грамм подкожно. Введение эноксифола внутри-желудочно (0,5 мл в сутки) начинали через 48 часов после перевивки опухоли ежедневно до достижения суммарных доз для каждой из опытных групп (500 мг/кг — 1 группа, 2 200 мг/кг — 2 группа и 5 000 мг/кг — 3 группа). Мышам контрольной группы (n=20) внутрижелудочно вводили физиологический раствор в тех же объемах, что и эноксифол. Результаты. При анализе результатов эксперимента было показано, что средняя продолжительность жизни животных опытных групп была различной. Так, средний срок жизни животных 1 группы составил — 18,2±2,9 дней, 2-й группы — 28,1±2,3 дней, в 3 группе — 21,8±2,2 дня. Продолжительность жизни контрольной группы составила 19,3±3,1 день. Сроки выхода опухоли в 1 группе были аналогичны контролю
и составили 6,4±0,5 против 6,8±0,4, а во 2-й и 3-й группе превышали контрольные показатели (8,8±0,7 и 7,2±0,6 дней соответственно).
При исследовании динамики роста первичной опухоли уже на 11-е сутки после перевивки опухоли (на 9 сутки после начала воздействия) объемы первичного очага различались в группах. При применении эноксифола в большой дозе (3 группа) объем опухоли был аналогичен показателям контрольной группы. При этом, в 1 группе размеры опухоли в 1,5 раза были больше, а во 2-й группе — в 3,8 раза меньше по сравнению с контролем. Изучение опухолевых объемов на 21 сутки от момента перевивки показали сходную с предыдущим сроком исследования динамику. Также в 3-й группе размеры опухоли были подобны контролю, в 1-й группе — в 1,4 раза больше, а во 2-й группе — в 3 раза меньше по сравнению с контрольной группой.
Заключение. Выявлено увеличение средней продолжительности жизни животных, увеличение срока выхода опухолей после перевивки, а также наименьшие размеры опухоли и ее регресс у животных с LLC при внутрижелудочном применении эноксифола в суммарной дозе 2 200 мг/кг.
Изучение противоопухолевых свойств и механизма действия препарата анфен
Е. М. Миль', В.Н. Ерохин', В. И. Бинюков', В. А. Семенов', А. А. Албантова'
Место работы: 'Институт биохимической физики РАН e-mail: е[email protected]
Ранее нами было показано, что синтетические антиоксиданты из класса пространственно затрудненных фенолов, такие как фенозан и анфен синтезированные в ИБХФ РАН, обладают противоопухолевой активностью. Одним из методов контроля за развитием опухоли может служить изменение содержания антиапоптозных белков (Bcl-2 и р53). Известно, что высокий уровень белка Bcl-2 препятствует апоптозу и отвечает за контроль и выживаемость клеток. Уменьшение уровня белка может свидетельствовать о снижении репарационных и усилении процессов апоптоза. Показано, что при ряде онкологических процессов происходит изменение уровня этого белка, что может иметь прогностическое значение, например, в случае операбельного немелкоклеточ-ного рака легких. Поэтому эти методы могут иметь определенное значение при оценке противоопухолевой активности различных физико-химических агентов. Цель. Изучение действия антиоксиданта анфен (1-(Кар-бокси)-1-^-метиламид)-2-(3',5'-ди-трет-бутил-4'-гидрок-сифенил)-пропанат натрия) на развитие перевиваемой опухоли саркома 37 у мышей и на трансформированные клетки мышей с опухолью Льюис. Для изучения противоопухолевых свойств и механизма действия анфена животным или в суспензию опухолевых клеток вводили водные растворы препарата в различных концентрациях. Материалы и методы. При изучении противоопухолевых свойств препарата, анфен в концентрации 10 мг/кг и 100 мг/кг в 0,2 мл физиологического раствора вводили животным вну-трибрюшинно ежедневно 11 раз после трансплантации клеток саркомы 37. Противоопухолевая активность оценивалась по проценту торможения опухолевого процесса на 12-е сутки его развития (определяли суммарный объем опухолевых клеток в асцитной жидкости).
В работе были использованы мыши — гибриды C57Bl х DBA (возраст 3—4 месяца, масса 25 г). Клетки выделяли из изолированной опухоли на 14 день развития карциномы Льюис,
Злокачественные опухоли
www.malignanttumours.org
Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017
Malignant Tumours
www.malignanttumours.org
XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС
ТЕЗИСЫ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ
которая образовывалась после трансплантации реципиентам 7x106 клеток на мышь.
Анфен в физиологическом растворе смешивали с суспензией опухолевых клеток в среде 199, содержащей 5x108 кл/мл. Клетки выделяли из изолированной опухоли на 14 день развития карциномы. Для исследования готовился образец объемом 8 мл, в котором содержалось 3,2x108 опухолевых клеток и 8 мг анфена. Соответствующим образом готовился контрольный образец, где вместо раствора анфена использовался физиологический раствор. Суспензию опухолевых клеток с анфеном инкубировали при 370 в течение 0,5—3 часов. Клетки разрушали путем перемораживания и гомогенизирования, затем центрифугировали, и в супернатанте определяли уровень белка Bcl-2 (в опыте с анфеном и в контроле). Содержание белка Bcl-2 определяли методом иммуноблотинга с помощью моноклональных антител «Monoclonal Anti-BCL-2 clone10C4», и второго антитела — меченого пероксидазой хрена иммуноглобулина anti-rabbit IgG («Sigma»). Результаты. В результате эксперимента было показано, что при многократном введении препарата после трансплантации асцитной опухоли — саркомы 37, анфен обнаруживает высокую противоопухолевую активность. Следует отметить, что антиоксидант приводил к 97—98%-ному торможению развития этой опухоли вплоть до 12 суток. Наблюдали за животными в течении 3х месяцев, в то время как животные с опухолью Льюис погибают на 21—24 сутки. Высокая противоопухолевая активность препарата была обнаружена как в дозе 100 мг/кг, так и в дозе 10 мг/кг. На модельной системе, анфен вводили непосредственно в суспензию опухолевых клеток карциномы Льюис и инкубировали в течении нескольких часов. Было обнаружено, что анфен оказывает негативное воздействие на трансформированные клетки. Показано, что сразу после введения анфена уровень антиапоптозного белка Bcl-2 в клетках резко снижается на 40—50 % по отношению к контролю, держится на низом уровне в течении 1—1,5 часа и затем восстанавливается через 3 часа. Такие изменения могут быть связаны с воздействием анфена на клеточные мишени пути апоптоза. При этом в контрольных опухолевых клетках уровень антиапоптозного белка оставался стабильным в течении 3-х часов.
Заключение. Таким образом, наше исследование показало, что при контакте анфена с трансформированными клетками происходит воздействие препарата на внутриклеточные сигнальные системы, что может привести к запуску программированной гибели клеток — апоптозу. Возможно, механизм противоопухолевого действия анфена в используемой концентрации, особенно при непосредственном контакте с опухолевыми клетками, в частности при ведении после трансплантации клеток асцитной саркомы 37, может быть связан с усилением апоптоза опухолевых клеток.
Этапное изучение хемосинтетических реакций у злокачественной клетки
ВА. Мельников', О.В. Тюмина', И.В. Тюмин'
Место работы: 'Самарский государственный медицинский
университет
e-mail: [email protected]
Нами выдвинута и опубликована рабочая гипотеза об «энергетической метаплазии раковых клеток», т. е. смена гетеротрофного пути получения энергии на автотрофный (хемосинтез). Успешное доказательство этой гипотезы открывает перспективы объяснения некоторых вопросов онкогенеза и нового
подхода к профилактике и лечению раковых заболеваний — применение эффективных ингибиторов хемосинтеза. Цель. Доказать in vitro существование хемосинтетического способа получения энергии раковой клеткой на основе этапного исследования различных блокаторов хемосинтетических реакций.
Проведенный аналитический обзор научных работ по эволюции способа получения энергии растительными и животными клетками выявил возможную хемосинтетическую реакцию у раковых клеток — окисление ионов железа (Fe+2 Fe+3 + E). Изучение хемосинтетических реакций у раковых клеток in vitro проведено в IV этапа:
I — связывание Fe в культуральной среде,
II — насыщение культуральной среды ионами Fe3 в нетоксич-
ных дозах,
III — насыщение культуральной среды наночастицами Fe3,
IV — введение в культуральную среду диметилбигуанида
(метформин).
Изучение хемосинтеза по пути окисления ионов Fe2 у злокачественных клеток было проведено в 117 опытах с блокадой ионов Fe2 в культуральной среде.
В эксперименте использовалась суспензионная культура базальных эпителиальных клеток альвеолярной аденокарци-номы человека A549 и в качестве контроля культура мезенхи-мальных стромальных стволовых клеток (МСК), полученная из ткани пуповины донора. При проведении экспериментов проводилась стратификация пробирок со средой: опытная среда с добавлением блокатора хемосинтеза, контрольная среда № 1 с добавлением эквивалентного количества физиологического раствора, контрольная среда № 2 бездобавок и контрольная среда № 3 с культурой МСК Клетки вносились в чистую стандартную среду. На 3 сутки культивирования в среды вносились соответствующие блокаторы хемосинтеза (опытная среда), с физиологический раствор (контрольная среда № 1). Культивирование проводилось в 24-луночных планшетах при 37°С, CO25% в течение 8 суток. Культивирование проводили с использованием стандартных питательных сред: DMEM high glucose without L-glutamine (LONZA, Швейцария), 2mM L-глютамина (ПанЭко, Россия), 10% сыворотки плодов коровы (MSC FBS, Gibko, Австралия). В процессе культивирования проводился подсчет количества клеток в поле зрения, оценка общей морфологии культуры и жизнеспособности клеток, по завершении культивирования — автоматический подсчет абсолютного количества клеток. Фотодокументирование проводилось с помощью микроскопа CarlZeiss AxioObserver A1. Подсчет количества клеток в поле зрения проводился в течение 4 суток культивирования (с 5 по 8 сутки) на программном обеспечении AxioVision 2011. Подсчет общего количества клеток, оценка жизнеспособности проводилось на автоматическом клеточном анализаторе Countess II FL (Life Technologies, США) по завершении культивирования.
Обработка данных с помощью программного обеспечения Excel (пакета Microsoft Office 2007, Microsoft, США). Анализ результатов проведенных экспериментальных исследований с культурой мезенхималных стромальных стволовых клеток показал, что введение в культуральную среду ионов Са++, Fe3, наночастиц трехвалентного железа и диметилбигуанида не влияет на рост МСК в процессе культивирования, так как не получено статистически значимых различий по изучаемым показателям с контрольным экспериментом. Так, в контрольной среде № 2 (без добавок) количество клеток в поле зрения прогрессивно увеличивалось со 110,5±6,2 до 357,5±8,2 в конце культивирования. В среде с добавле-
Злокачественные опухоли
www.malignanttumours.org
Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017
Malignant Tumours
www.malignanttumours.org
