CC BY
25
XXI РОССИЙСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ КОНГРЕСС
ТЕЗИСЫ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОНКОЛОГИЯ
которая образовывалась после трансплантации реципиентам 7x106 клеток на мышь.
Анфен в физиологическом растворе смешивали с суспензией опухолевых клеток в среде 199, содержащей 5x108 кл/мл. Клетки выделяли из изолированной опухоли на 14 день развития карциномы. Для исследования готовился образец объемом 8 мл, в котором содержалось 3,2x108 опухолевых клеток и 8 мг анфена. Соответствующим образом готовился контрольный образец, где вместо раствора анфена использовался физиологический раствор. Суспензию опухолевых клеток с анфеном инкубировали при 370 в течение 0,5—3 часов. Клетки разрушали путем перемораживания и гомогенизирования, затем центрифугировали, и в супернатанте определяли уровень белка Bcl-2 (в опыте с анфеном и в контроле). Содержание белка Bcl-2 определяли методом иммуноблотинга с помощью моноклональных антител «Monoclonal Anti-BCL-2 clone10C4», и второго антитела — меченого пероксидазой хрена иммуноглобулина anti-rabbit IgG («Sigma»). Результаты. В результате эксперимента было показано, что при многократном введении препарата после трансплантации асцитной опухоли — саркомы 37, анфен обнаруживает высокую противоопухолевую активность. Следует отметить, что антиоксидант приводил к 97—98%-ному торможению развития этой опухоли вплоть до 12 суток. Наблюдали за животными в течении 3х месяцев, в то время как животные с опухолью Льюис погибают на 21—24 сутки. Высокая противоопухолевая активность препарата была обнаружена как в дозе 100 мг/кг, так и в дозе 10 мг/кг. На модельной системе, анфен вводили непосредственно в суспензию опухолевых клеток карциномы Льюис и инкубировали в течении нескольких часов. Было обнаружено, что анфен оказывает негативное воздействие на трансформированные клетки. Показано, что сразу после введения анфена уровень антиапоптозного белка Bcl-2 в клетках резко снижается на 40—50 % по отношению к контролю, держится на низом уровне в течении 1—1,5 часа и затем восстанавливается через 3 часа. Такие изменения могут быть связаны с воздействием анфена на клеточные мишени пути апоптоза. При этом в контрольных опухолевых клетках уровень антиапоптозного белка оставался стабильным в течении 3-х часов.
Заключение. Таким образом, наше исследование показало, что при контакте анфена с трансформированными клетками происходит воздействие препарата на внутриклеточные сигнальные системы, что может привести к запуску программированной гибели клеток — апоптозу. Возможно, механизм противоопухолевого действия анфена в используемой концентрации, особенно при непосредственном контакте с опухолевыми клетками, в частности при ведении после трансплантации клеток асцитной саркомы 37, может быть связан с усилением апоптоза опухолевых клеток.
Этапное изучение хемосинтетических реакций у злокачественной клетки
ВА. Мельников', О.В. Тюмина', И.В. Тюмин'
Место работы: 'Самарский государственный медицинский
университет
e-mail: [email protected]
Нами выдвинута и опубликована рабочая гипотеза об «энергетической метаплазии раковых клеток», т. е. смена гетеротрофного пути получения энергии на автотрофный (хемосинтез). Успешное доказательство этой гипотезы открывает перспективы объяснения некоторых вопросов онкогенеза и нового
подхода к профилактике и лечению раковых заболеваний — применение эффективных ингибиторов хемосинтеза. Цель. Доказать in vitro существование хемосинтетического способа получения энергии раковой клеткой на основе этапного исследования различных блокаторов хемосинтетических реакций.
Проведенный аналитический обзор научных работ по эволюции способа получения энергии растительными и животными клетками выявил возможную хемосинтетическую реакцию у раковых клеток — окисление ионов железа (Fe+2 Fe+3 + E). Изучение хемосинтетических реакций у раковых клеток in vitro проведено в IV этапа:
I — связывание Fe в культуральной среде,
II — насыщение культуральной среды ионами Fe3 в нетоксич-
ных дозах,
III — насыщение культуральной среды наночастицами Fe3,
IV — введение в культуральную среду диметилбигуанида
(метформин).
Изучение хемосинтеза по пути окисления ионов Fe2 у злокачественных клеток было проведено в 117 опытах с блокадой ионов Fe2 в культуральной среде.
В эксперименте использовалась суспензионная культура базальных эпителиальных клеток альвеолярной аденокарци-номы человека A549 и в качестве контроля культура мезенхи-мальных стромальных стволовых клеток (МСК), полученная из ткани пуповины донора. При проведении экспериментов проводилась стратификация пробирок со средой: опытная среда с добавлением блокатора хемосинтеза, контрольная среда № 1 с добавлением эквивалентного количества физиологического раствора, контрольная среда № 2 бездобавок и контрольная среда № 3 с культурой МСК Клетки вносились в чистую стандартную среду. На 3 сутки культивирования в среды вносились соответствующие блокаторы хемосинтеза (опытная среда), с физиологический раствор (контрольная среда № 1). Культивирование проводилось в 24-луночных планшетах при 37°С, CO25% в течение 8 суток. Культивирование проводили с использованием стандартных питательных сред: DMEM high glucose without L-glutamine (LONZA, Швейцария), 2mM L-глютамина (ПанЭко, Россия), 10% сыворотки плодов коровы (MSC FBS, Gibko, Австралия). В процессе культивирования проводился подсчет количества клеток в поле зрения, оценка общей морфологии культуры и жизнеспособности клеток, по завершении культивирования — автоматический подсчет абсолютного количества клеток. Фотодокументирование проводилось с помощью микроскопа CarlZeiss AxioObserver A1. Подсчет количества клеток в поле зрения проводился в течение 4 суток культивирования (с 5 по 8 сутки) на программном обеспечении AxioVision 2011. Подсчет общего количества клеток, оценка жизнеспособности проводилось на автоматическом клеточном анализаторе Countess II FL (Life Technologies, США) по завершении культивирования.
Обработка данных с помощью программного обеспечения Excel (пакета Microsoft Office 2007, Microsoft, США). Анализ результатов проведенных экспериментальных исследований с культурой мезенхималных стромальных стволовых клеток показал, что введение в культуральную среду ионов Са++, Fe3, наночастиц трехвалентного железа и диметилбигуанида не влияет на рост МСК в процессе культивирования, так как не получено статистически значимых различий по изучаемым показателям с контрольным экспериментом. Так, в контрольной среде № 2 (без добавок) количество клеток в поле зрения прогрессивно увеличивалось со 110,5±6,2 до 357,5±8,2 в конце культивирования. В среде с добавле-
Злокачественные опухоли
www.malignanttumours.org
Том / Vol. 7 № 3 S 1 /2017
Malignant Tumours
www.malignanttumours.org
