CC BY
0
При л о ж ен и е 1
Т3151 (7—15%), при которой иматиниб и ИТК 2 поколения не эффективны, и целесообразно назначение ИТК третьего поколения (пона-тиниба или асциминиба). В качестве метода для чувствительного, специфичного и быстрого определения клинически значимых мутаций мы предлагаем использовать полимеразную цепную реакцию в реальном времени с аллель-специфичными праймерами (АС-ПЦР).
Цель работы. Подобрать и синтезировать аллель-специфичные праймеры и флюоресцентные зонды для выявления мутаций Т3151, Е255К, ¥359У, М244У гена ВСК::АВЬ1 методом АС-ПЦР. Результаты сравнить с данными, полученными методом высокопроизводительного секвенирования (ВПС)
Материалы и методы. Аллель-специфичные праймеры и флюоресцентные зонды для поиска мутаций Т3151г Е255КГ Р359УГ М244У были подобраны авторами и синтезированы в компании «Синтол» (Россия). В исследование включены 15 образцов ДНК больных ХМЛ на разных этапах терапии ИТК, проходивших обследование и лечение на базе ФГБУ «НМИЦ гематологии« МЗ РФ 2020 по 2023 г. Мониторинг химерного транскрипта ВСК::АВЫ у больных ХМЛ про -водили с помощью набора «АмплиСенс Лейкоз Квант М-Бсг-ЕИТ» (Интерлабсервис, Россия).
Результаты и обсуждение. 15 образцов ДНК, выделенной из образцов периферической крови пациентов с резистентностью к ИТК,
были проанализированы методом АС-ПЦР на вышеназванные мутации. Уровень транскрипта ВСК::АВЫ на момент анализа составлял от 2,18% до 87,70%. Мутация Т3151 была выявлена в 8 образцах из 15, Е255К в 1 образце, Р359У в 2 образцах, М244У в 1 образце. В 5 образцах мутаций выявлено не было. При этом у двух пациентов были выявлены сочетанные мутации: у одного и а у второго
Т3151, Р359Уи Е255К. Все 15 образцов ДНК были исследованы методом ВПС для выявления мутаций в тирозинкиназном домене химерного гена ВСК::АВЫ. Мутация Т3151 была выявлена в тех же 8 образцах, что и при анализе с помощью АС-ПЦР, мутация Р255К в 2 образцах, РЗЗУУ в 2 из 15 образцах, М244Ув 1. Сравнение результатов, полученных двумя методами, показывает их полную идентичность, за исключением того, что в одном образце ДНК больного, в котором методом ВПС была выявлена мутация Е255К, методом АС-ПЦР она не была обнаружена. Это разногласие требует дополнительной проверки.
Заключение. Сравнение результатов, полученных методами АС-ПЦР с разработанными нами праймерами и ВПС для выявления мутаций Т3151г Е255КГ Р359УГ М244УГ показало их практически полную идентичность. Однако, метод АС-ПЦР для ДНК быстрее, проще в постановке и дешевле, чем ВПС. Также его можно использовать при анализе архивных материалов, оценки ответа на терапию и раннего прогнозирования резистентности к ИТК.
Каххарова Н. X.
ИЗУЧЕНИЕ ПОЛИМОРФИЗМА His 166Arg В ГЕНЕ FCG&A ПРИ МИЕЛОМНОЙ НЕЙРОПАТИИ
РСНПМЦ гематологии, Ташкент, Узбекистан
Введение. FCGR2A (CD32) входит в группу рецепторов для Fc-конца иммуноглобулинов класса G. Данный рецептор локализован на моноцитах, гранулоцитах, эозинофилах, макрофагах и В-лимфоцитах. CD32 обладает невысокой аффинностью и способен связывать только агрегированные IgG. Как правило, взаимодействие иммуноглобулинов с соответствующими рецепторами приводит к перераспределению последних на поверхности клетки и поглощению комплекса клеткой.
Цель работы. Изучение полиморфизм His 166Arg в гене FCGR2A при миеломном нейропатии.
Материалы и методы. Работа выполнена при РСНПМЦ гематологии в клинических отделениях. Ообследованы 94 пациента с достоверно установленным диагнозом множественная миелома в возрасте от 24 до 79 лет, из них 47 женщины (50%) и 47 мужчины (50%). Наибольшее количество больных составляли женщины в возрасте свыше 60 лет (39,4%). Полимофризм генов определяли по стандартной методике, выделение ДНК из ядер лимфоцитов, концентрация и чистота ДНК оценивалась при измерении оптической плотности при длине волны 260 и 280 нм против ТЕ, Амплификацию проводили на программируемом термоциклере фирмы "AppliedBiosystems",
при следующих условиях: предварительная денатурация — 940 °С (4 мин), 33 циклов амплификации: 940 °С (45 сек) — денатурация, 580 °С (45 сек) — отжиг праймеров, 720 °С (45 сек) — элонгация, и заключительный синтез 720 °С (3 мин). Статистическая обработка полученных данных по генотипированию полиморфныхучастков цито-кинов проводили с помощью пакет прикладных программ «OpenEpi 2009, Version 2.3» и компьютерной программы для анализа генетических данных "GenePop". Оценка отклонения распределений генотипов изученных полиморфизмов ДНК от канонического распределения Харди — Вайнберга проводилась с помощью компьютерной программы для анализа генетических данных "GenePop".
Результаты и обсуждение. Аллели и генотипы в основной и в контрольной группе распределялись относительно одинаковы, Н аллель в основной группе 61,2% а в контрольной группе 77,2%, А аллель 38,8% в основной и в контрольной группе 22,8% случаев. Статистические данные показали отношение шансов было равно 2,2, а доверительный интервал был равен 1,37—3,38, ^=0,01, эти результаты говорят, что А аллельувеличили шансы развития нейропатии в 2 раза.
Заключение. Данная мутация имеет высокие шансы развития миеломной нейропатии.
Каюмов А. А., Ачилова О. У.
АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ МОБИЛИЗАЦИИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ У ПАЦИЕНТОВ С МИЕЛОМНОЙ
БОЛЕЗНЬЮ И ЛИМФОМОЙ В УЗБЕКИСТАНЕ
РСНПМЦ гематологии, Ташкент, Узбекистан
Введение. В Узбекистане, как и во многих странах мира, развивается трансплантация костного мозга. Эта процедура дает возможность достичь длительной ремиссии пациентам в потенциально неизлечимых случаях, таких как миеломная болезнь и злокачественные лимфомы. Однако нередко неудачи в мобилизации стволовых клеток костного мозга могут ограничить применение данного метода терапии.
Цель работы. Определить частоту неудач, хороший результатов и предрасполагающих к неудаче факторов в мобилизации стволовых клеток (СБ34+) при миеломной болезни и лимфомах в Узбекистане.
Материалы и методы. Проанализированы результаты анализов 45 взрослых пациентов (11 с лимфомой и 34 с ММ) ретроспективно. Все пациенты получали О-СЭЕ, как традиционный режим мобилизации. Подсчет СБ34+ проводился методом цитофлуометрии.
Результаты и обсуждение. В исследовании у 10 пациентов с ММ и бти с лимфомой была отмечена плохая мобилизация. СБ34+ се11/рЬ составляла не более 8, позднее 5-го дня мобилизации. А к 7-му дня вовсе составляли не более 6 се11/рЬ. Исследование показало, что недостаточное количество С034 + менне 20се11/рЬ на 6-й день является предиктором плохой мобилизации стволовых клеток и требует применения Плериксофора. При этому 2 пациентов несмотря на низкий уровень С034+ проведены сеансы афе-реза. В первом случае СИ34+ составили 12 сеП/рЬ и за 2 сеанса собрано 2,99х10б СИ34+ клеток/кг. Во втором случае СИ34+ составили 11 се11/рЬ и за 2 сеанса не было собрано целевых 2,0х10б СБ34 +клеток/кг. У остальных 29 пациентов (24 с ММ и 5 с лимфомой) мобилизация и сбор были удачными. В среднем С034+ на 5-й день составил более 35±5се11/рЬ, а количество собранных С034+
