CC BY
10
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ» 57
составляющих МПД и ЛД50 соответственно. Период наблю- ные клетки, участвующие в ангиогенезе. Было показано, дения — 30 сут после прекращения введений препарата. Па- что опухольассоциированные Т-регуляторные лимфоциты раметры исследования: изменение массы тела, массовые (Treg) экспрессируют белки CCR4, CCR10, Neuropilin-1 коэффициенты внутренних органов, ЭКГ, клинический и би- (CD304) и VEGFR-2 и могут привлекаться опухолевыми охимический анализ крови, суточный диурез и клинический клетками с помощью лигандов CCL22, VEGF-A и CCL28 анализ мочи, патоморфологическое исследование органов на их поверхности, что способствует образованию имму-и тканей. нотолерантного микроокружения и развитию внутриопу- результаты. Препарат, введенный в обеих изученных холевого ангиогенеза. дозах, гибели животных не вызывал и не оказывал влияния Цель исследования. Изучение субпопуляции опухоль-на их состояние и поведение. Динамика прироста массы ассоциированных Treg, циркулирующих в периферической тела подопытных животных практически не отличалась крови, и механизмов их мобилизации опухолью у больных от контроля. При гематологическом исследовании у жи- саркомами мягких тканей (СМТ). вотных всех подопытных групп на всех сроках наблюдения материалы и методы. В исследование было включено отличий от контроля не выявлено. На 1-е сутки после 35 больных III—IV стадии СМТ, получавших лечение окончания курса введений препарата в высокой дозе у всех в ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» Минздра-животных выявлено повышение активности аланиновой ва России с 2013 по 2017 г. Критерии включения: 1) возраст трансаминазы (АЛТ) и щелочной фосфатазы, уровня об- старше 18 лет; 2) гистологически верифицированный ди-щего билирубина, креатинина (К) и мочевины (М). При- агноз СМТ; 3) отсутствие острых инфекционных заболева-менение препарата в низкой дозе приводило к повышению ний, аутоиммунных заболеваний в период обострения; активности АЛТ, содержания М и К. У животных, получав- 4) свободный период от приема глюкокортикоидов или ших препарат в ЛД50, повышенный уровень АЛТ и М со- других иммунодепрессантов не менее 10 дней. Гистологи-хранялся до 30 сут после курса. У животных, получавших ческая верификация позволила распределить пациентов препарат в МПД, все биохимические показатели к концу следующим образом: синовиальная саркома — 11 больных, наблюдения не отличались от контроля. При исследовании липосаркома — 11, лейомиосаркома — 5, миксофибросар-мочи у самцов и самок, получавших препарат в высокой кома — 1, внескелетная хондросаркома — 2, светлоклеточ-дозе, выявлено повышение уровня уробилиногена, белка ная саркома — 2, веретеноклеточная саркома — 2 и фи-и удельного веса, появление кетоновых тел. В группах бросаркома — 1. Больные были разделены на 2 группы. крыс, получавших препарат в низкой дозе, отмечено по- В 1-й группе забор образцов периферической крови про-вышение уровня белка и удельного веса мочи. На 30-е сут- изводился во время прогрессирования опухолевого процес-ки поле окончания курса введений препарата различий са (n = 29), во 2-й группе — при стабилизации заболевания между подопытными и контрольными группами не выяв- (n = 16). У 19 больных проведен анализ субпопуляционно-лено. Патоморфологическое исследование показало, го состава лимфоцитов и экспрессии хемокиновых рецеп-что оливамид оказывает повреждающее действие на струк- торов на поверхности ^eg: CCR4, CCR10, VEGFR-2 туру печени и почек крыс, которое выражается как в ди- и Neuropilin-1 (CD304) при прогрессировании заболева-строфических, так и в деструктивных изменениях клеток ния, у 10 больных в обоих случаях и у 6 пациентов только паренхимы органов. Характер морфологических измене- в период стабилизации (проточный цитофлуориметр BD ний не зависит от пола животных. FACSCanto™ II, моноклональные антитела BD Biosciences Заключение. Проведенные исследования показали, и BioLegend, США). Сравнительный анализ показателей что лимитирующими видами токсичности препарата явля- этих 2 групп проводился с помощью непараметрического ются гепато- и нефротоксичность, признаки которых были критерия Манна—Уитни. Различия считались статистиче-выявлены как клинико-лабораторными, так и патоморфо- ски значимыми при значенииp <0,05. Статистическая об-логическими методами. Зависимость глубины поврежде- работка данных проводилась с использованием IBM SPSS ний от величины примененной дозы и обратимость токси- Statistics 19.0 и Microsoft Excel 2010. Кроме того, в работе ческого действия позволяют рекомендовать препарат для использовали супернатанты клеточных культур СМТ (n = 21), дальнейших этапов доклинического изучения. в которых методом непрямого иммуноферментного анализа в «сэндвич»-варианте (тест-системы Bender MedSystems, Н.П. Пипиа Австрия, и R&D, США) определяли иммуносупрессирую-иЗУчЕниЕ иммУБоСУПрЕССивноГо щий белок CCL2 из семейства класса СС-хемокинов и со-ПотЕнЦиАлА Т-РЕГУЛЯТОРБЫХ судистый эндотелиальный фактор роста VEGF-A. Конт-ЛиМФОЦиТОВ В ПРоЦЕССЕ оПУХоЛЕВой ролем служили супернатанты культуры нормальных ПРоГРЕССии У БоЛЬБЫХ САРКоМАМи фибробластов кожи человека. Связь между хемокиновыми МЯГКиХ ТКАБЕй рецепторами и их лигандами (CCR4 и CCL2, VEGFR-2 ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Петрова» и Neuropilin-1 и VEGF-A) изучали с помощью корреляци-Минздрава России, Санкт-Петербург, Россия онного анализа по Спирмену. Введение. Хемокины представляют собой группу не- Результаты. У больных СМТ при прогрессировании больших структурно связанных белков, которые играют заболевания в периферической крови выявлено стати-фундаментальную роль в развитии, гомеостазе и функцио- стически значимое увеличение содержания CCR4+Treg нировании иммунной системы, а также оказывают влияние (p <0,001), CCR10+Treg (p <0,001), CD304+Treg (p = 0,021) на клетки центральной нервной системы и эндотелиаль- на фоне повышения относительного числа ^eg 8,90 ± 0,92 %
Спецвыпуск / том 17 / 2018 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
58
МАТЕРИАЛЫ КОНФЕРЕНЦИИ «ОТЕЧЕСТВЕННЫЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ ПРЕПАРАТЫ»
(p <0,075) и снижения абсолютного числа NK-клеток (p <0,031). Также обнаружена прямая корреляция высокой силы между продукцией опухолевыми клетками прогрессирующих СМТ уровня VEGF-А, CCL2 и экспрессией на Treg CD304+ (r = 0,93, p = 0,001), VEGFR-2+ (r = 0,88, p = 0,007), CCR4+ (r = 0,81, р = 0,024), что косвенно свидетельствует об уклонении опухоли от иммунного контроля на этапе клинически регистрируемого прогрессирования заболевания.
Заключение. Определение экспрессии хемокиновых рецепторов на Treg методом проточной цитометрии у больных СМТ можно рассматривать как лабораторный тест для выявления лиц с высоким риском про-грессирования заболевания и для мониторинга эффективности лечения.
Е.А. Плотникова1, Н.Б. Морозова1, В. О. Страмова1, А.А. Панкратов1, П.В. Островерхов2, М.А. Грин2, Р.И. Якубовская1
разработка мицеллярной лекарственной формы фотосенсибилизатора бактериохлоринового ряда и изучение ее свойств
ФГБУ «НМИЦ радиологии» Минздрава России, Москва, Россия; 2МИТХТ, Москва, Россия
введение. Наиболее перспективными из разрабатываемых в настоящее время фотосенсибилизаторов (ФС) являются производные бактериохлоринов, обладающие интенсивным поглощением в дальнем красном и ближнем инфракрасном диапазонах (740—850 нм). Одним из главных недостатков данных ФС является их ограниченная растворимость в водных растворах, что актуализирует поиск систем солюбилизации красителей с целью получения лекарственных форм, предназначенных для внутривенного введения.
Цель исследования. Разработка лекарственной формы, изучение биораспределения, фотоиндуцированной противоопухолевой активности и потенциального токсического действия метилового эфира О-пропилоксим-#-пропокси-бактериопурпуринимида.
материалы и методы. Для солюбилизации метилового эфира О-пропилоксим-#-пропоксибактериопурпурини-мида в качестве сорастворителей использовали Kolliphor ELP, Эмуксол 268, Poloxamer 407, Pluronic 188 и оценивали растворимость, стабильность при хранении и облучении, размер полученных частиц. Изучение распределения ФС в органах и тканях, а также оценку эффективности фотодинамического действия красителя проводили на мышах F1 с подкожно привитой саркомой S37. Биораспределение метилового эфира О-пропилоксим-#-про-поксибактериопурпуринимида оценивали ex vivo методом локальной флуоресцентной спектроскопии по нормированной флуоресценции. Сеанс фотодинамической терапии (ФДТ) проводили на 6-7-й день роста опухоли S37, облучая ее светодиодным источником (X = 810 ± 21 нм, плотность энергии 150 Дж/см2) при варьировании дозы ФС (2,5; 5; 7,5 мг/кг) и интервала между введением и облучением (15 и 30 мин). Противоопухолевый эффект оценивали по объему опухоли, торможению роста опухоли
(ТРО) и критерию излеченности (КИ). Острую токсичность ФС изучали на мышах по общепринятой методике.
результаты. Сравнительный анализ показал, что субстанция в составе мицеллярной эмульсии на основе Kolliphor ELP имеет преимущество перед остальными: обладает интенсивной полосой поглощения при 800 ± 2 нм, характеризуется малым размером частиц и остается стабильной при хранении и облучении. ФС в составе мицел-лярной эмульсии быстро накапливается (в течение 15 мин) в опухолевой ткани саркомы S37, сохраняется на достаточно высоком уровне в течение 2 ч (6,8—7,3 усл. ед.), а затем выводится, и через 24 ч регистрируются только фоновые значения. Из кожи краситель полностью элиминирует в течение суток. Максимальная величина флуоресцентной контрастности между опухолью и кожей составила 2,4 ± 0,1 усл. ед. Метиловый эфир О-пропилоксим-#-пропок-сибактериопурпуринимида выводится из печени, почек, селезенки на 82—90 % в течение 24 ч, а остаточные количества в этих органах регистрируются до 6 сут. ФДТ с использованием мицеллярной формы ФС (доза 5 мг/кг, интервал между введением и облучением 15 мин) у мышей с саркомой S37 приводила к полной регрессии первичного опухолевого узла у 100 % животных при отсутствии рецидива опухоли в течение 90 сут после лечения. При изучении общетоксических свойств установлено, что краситель не оказывал токсического действия на животных при его использовании в дозах, превышающих расчетную терапевтическую дозу для человека в 62 раза.
Заключение. Таким образом, разработанная мицелляр-ная форма метилового эфира 0-пропилоксим-#-пропок-сибактериопурпуринимида на основе Kolliphor ELP является перспективной водорастворимой формой ФС, характеризуется стабильностью, высокой противоопухолевой эффективностью и низким токсическим потенциалом.
Д.А. Понкратова1, А.А. Лушникова1, А.А. Рудакова1, Л.Ф. Морозова1, О.С. Бурова1, С.М. Андреев2, М.А. Барышникова2
механизм гибели опухолевых клеток в различных культурах, индуцированный катионными пептидами
ФГБУ«НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва, Россия; ФГБУ«ГНЦИнститут иммунологии» ФМБА России, Москва, Россия
введение. Молекулярно-направленная терапия злокачественных опухолей препаратами с избирательной токсичностью — актуальная проблема онкологии. В качестве противоопухолевых агентов перспективны низкомолекулярные катионные пептиды (КП), возможными мишенями которых служат шаперонные белки С23 и В23, регулирующие ключевые клеточные процессы. Дифференциальная экспрессия С23/В23, особенно рецепторных молекул С23, в опухолевых и нормальных клетках создает предпосылки для избирательной цитотоксичности КП, а также для их клинического применения.
Цель исследования. Изучение гибели опухолевых клеток, индуцированной КП с разной структурой и зарядом молекул, на модельных клеточных линиях (КЛ).
Спецвыпуск / том 17 / 2018
РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
