CC BY
42
ИММУНОЛОГИЯ
УДК 619: 615.371-619:616.98:579.873.21
Изучение иммунобиологических свойств противотуберкулезного препарата
А.М. Коваленко , Г.В. Сноз2, В.М. Сапегин1, В.Ю. Жабина1, Л.В. Коваленко3.
1 ФГБОУ ВПО «Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина».
2 ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».
3 Институт экспериментальной и клинической ветеринарной медицины УААН (Харьков).
Ключевые слова: антиоксидантные свойства, иммунобиологические свойства, микобактерии, перекис-ное окисление липидов, противотуберкулезный препарат, специфическая профилактика, туберкулез Сокращения: АлАТ — аланинаминотрансфераза, АсАТ — аспартатаминотрансфераза, АОЗ — антиоксидантная защита, АМ — альвеолярные макрофаги, АФК — активированные формы кислорода, ДК — диеновые конъюгаты, МДА — малоновый диальдегид, МБТ — микобактерии туберкулеза, НФКО — нефракционированный клеточный осадок, ПКП — противотуберкулезный комплексный препарат, ПОЛ — пероксидация липидов, ПРЭ —перекисная резистентность эритроцитов, См —серомукоиды, СОД — супероксиддисмутаза, ФАТ — фактор активации тромбоцитов, ЦИК — циркулирующие иммунные комплексы
Введение
Общеизвестно, что при хронических инфекциях решающую роль играют реакции клеточного иммунитета [1, 2, 5, 10, 19]. Макрофаги млекопитающих служат связующим звеном между различными защитными механизмами иммунной системы и влияют на пролиферацию иммунокомпетентных клеток [4]. Их роль сводится к подготовке антигена. Установлено, что существует группа монокинов, влияющих на дифферен-цировку и пролиферацию В-клеток.
Результат взаимодействия макроорганизма с МБТ в значительной мере определяется функциональным статусом фагоцитирующих и иммунокомпетентных клеток, реализующих реакции защиты [15]. Основным защитным звеном организма при внедрении в него МБТ является фагоцитоз. Поглотившая микроб клетка реализует свой бактерицидный эффект в первую очередь посредством кислородного взрыва, в процессе которого образуются АФК, инициирующие в мембранных структурах возбудителя ПОЛ с последующим разрушением мембран. Избыток АФК способен обусловить повреждение не только микроба, но и самого фагоцита, поэтому фагоцитирующие клетки обладают собственной ферментативной системой АОЗ.
Первый продукт кислородного взрыва — высокотоксичный супероксиданион, который под влиянием СОД трансформируется в менее агрессивный пероксид водорода (Н2О2). Однако в присутствии ионов железа и хлора из Н2О2 под действием пероксидаз генерируются наиболее токсичные АФК — гидроксил-радикал и гипохлорный анион. Поэтому активность
каталазы, разлагающей Н2О2 на воду и молекулярный кислород, представляется ключевым фактором в системе внутриклеточной АОЗ. Соотношение между способностью клетки развивать кислородный взрыв при встрече с возбудителем и характером ответа со стороны АОЗ на гиперпродукцию АФК определяет как бактерицидный эффект, так и степень повреждения самого фагоцита в ходе конфликта.
По мере утяжеления процесса способность клеток развивать кислородный взрыв при встрече с МБТ снижается. При введении МБТ в организм животных в течение первых суток в АМ возникает окислительный стресс в виде резкого роста базального окислительного метаболизма при почти полной утрате клетками способности развивать кислородный взрыв в ответ на дополнительную стимуляцию. К моменту появления первых специфических изменений АМ становятся полностью ареактивными. В терминальный период инфекции в них нарастает концентрация конечного продукта ПОЛ—МДА и многократно увеличивается активность СОД и каталазы, способных выступать в роли биологических синергистов МБТ. В НФКО бронхоальвеолярного смыва после заражения мобилизуется бактерицидный потенциал клеток при устойчивом балансе в системе ПОЛ—АОЗ, однако к моменту появления специфических изменений в органах показатели функционального статуса АМ и НФКО становятся идентичными. Быстрой функциональной декомпенсации изолированных АМ сопутствует инертный уровень ФАТ, тогда как в НФКО и циркулирующих лейкоцитах он значительно нарастает.
Вакцинация людей и животных остается одним из наиболее эффективных методов специфической профилактики туберкулеза. Впервые вакцина БЦЖ была использована для противотуберкулезной иммунизации людей в 1921 г. С тех пор она завоевала признание во многих странах и с начала 90-х гг. вакцинация людей против туберкулеза является обязательной в 64 странах и официально рекомендована в 118 странах и территориях.
Как и в случае с другими убитыми или живыми аттенуированными вакцинами, при введении БЦЖ иммунная система организма сталкивается с исключительно сложным набором антигенов. Цельноклеточные вакцины и сложные по составу смеси (фракции клеточных стенок или цитоплазматическая фракция) иммуноген-ны и содержат собственные, встроенные в мембраны иммуностимулирующие молекулы. Большое количество презентируемых эпитопов обеспечивает эффективность
РВЖ • СХЖ • № 1/2012
препарата при вакцинации генетически гетерогенной популяции. Многочисленные антигены таких вакцин конкурируют за презентирующие клетки, а иммунодоминирующие антигены не всегда индуцируют максимальную протекцию или их экспрессия транзиторна.
Количество антигенов в вакцине можно свести к ограниченному набору молекул, важных для индукции протективного иммунитета, и постоянно экспрессируемых антигенов. Простота строения белковых субъединиц нередко приводит к снижению их иммуноген-ности, что обусловливает применение в составе вакцин мощных иммуностимуляторов или адъювантов. Подсчитано, что создание новой вакцины даже с эффективностью 50 % к 2050 г. предотвратит 30 млн случаев заболевания, а с эффективностью 80 % — 130 млн.
Ведущие ученые Н.П. Овдиенко и А.С. Донченко [18, 25] видят решение проблемы профилактики туберкулеза крупного рогатого скота в разработке нового поколения средств и схем специфической защиты, создании принципиально новых экологически безопасных молекулярных вакцин (протективных антигенов).
Поиск иммуногенных и протективных антигенов микобактерий с целью конструирования на их основе противотуберкулезных вакцин ведется беспрерывно во многих направлениях. На сегодняшний день к решению этой проблемы ближе всего стоят работы по усилению иммуногенных свойств вакцины БЦЖ различными иммуномодуляторами [3, 22, 23], а также по конструированию противотуберкулезных вакцин, созданных на основе фильтратных протеинов, внутриклеточных протеиновых антигенов [11, 12, 13, 17]. Наиболее перспективным с точки зрения конструирования новых противотуберкулезных субъединичных вакцин представляются секретируемые белки микобактерий (так называемые белки культурального фильтрата), что хорошо увязывается с большей эффективностью живых вакцинных препаратов по сравнению с убитыми [14].
Противники вакцинопрофилактики крупного рогатого скота с помощью БЦЖ единственным и основным недостатком считают отсутствие тестов, позволяющих дифференцировать поствакцинальную и инфекционную аллергии.
Вакцинация БЦЖ препятствует появлению значительных туберкулезных поражений и распространению возбудителя инфекции, но в недостаточной степени предупреждает развитие туберкулезного процесса. По данным некоторых авторов, она защищает от 33 до 50 % восприимчивых животных от спонтанного заражения [20, 21].
Нет7 Gulle е! а1. [27] получили фракции лизатов разбитых культур микобактерий туберкулеза и культуральных фильтратов для изучения Т-клеточного иммунного ответа у вакцинированных и инфицированных животных. Указанные фракции лизатов оказались не только пригодными для дифференциации поствак-цинальных реакций, но и проявили высокие протек-тивные свойства в опытах на морских свинках. Авторы считают, что большинство фракций лизатов пригодны для использования в качестве кандидатов в вакцинные антигены.
Необходимость использовать различные антигены микобактерий для профилактики туберкулеза, а также совершенствование применения вакцины БЦЖ — важнейшее направление в стратегии по искоренению туберкулеза в Европейском Союзе. Новая вакцина должна значительно превосходить по своим иммуногенным и протективным свойствам БЦЖ, быть доступной по цене и простой в применении.
В качестве альтернативного способа противотуберкулезной иммунизации была предложена иммунизация неживыми вакцинами. Было показано, что для сохранения иммунологической памяти при туберкулезе не обязательна персистенция живых микобактерий. Поэтому при дальнейшем поиске протективных противотуберкулезных препаратов мы направили свои усилия на конструирование неживых высокоиммуноген-ных субстанций, характеризующихся более высокими протективными свойствами.
Цель исследования
Изучить иммунобиологические свойства противотуберкулезного препарата ПКП-3.
Материалы и методы
Чтобы наработать компоненты опытных образцов ПКП-3, использовали жидкую синтетическую питательную среду для выращивания микобактерий туберкулеза, среду Павловского, Сотона и культуры микобактерий БЦЖ и Valle.
Суспензии культуральных фильтратов и ультразвуковых дезинтегратов фракционировали с помощью колоночной гельхроматографии на колонках с сефа-дексом G-200 (колонки 21x2 и 22x2 см), границы фракционирования 800±5 кД. На колонку наносили по 3 мл образцов.
Концентрацию белка, мг/мл, определяли путем спект-рофотометрии на двулучевом спектрофотометре «Pye Unicam SP-8000» (Англия) и рассчитывали по формуле:
С = 1,55 + А280 - 0,76 x А260,
где А280 и А260 — оптическая плотность (поглощение) при длине волны 280 и 260 нм, по методике D.A. Marris [29].
Концентрацию нуклеотидов, мкг/мл, в фильтратах и суспензиях дезинтегратов рассчитывали по методике Спирина [6], осаждая белки хлорной кислотой:
Снк = (А270 - А290)/0,19 x 10,1,
где: А270 и А290 — оптическая плотность при 270 и 290 нм.
Спектры поглощения записывали на спектрофотометре «Pye Unicam SP-8000» (Англия).
Надосадочную жидкость суспензии ультразвуковых дезинтегратов, полученных в результате ультрацентрифугирования при 100000 g, фракционировали, используя гель TSK HW-40 Fine на хроматографе фирмы
<ТКВ» (Швеция). Детектирование проводили при помощи ультрафиолетового оптического монитора «иу1-соЫ - S II» при длине волны 254 нм.
ПКП-3 готовили по собственной оригинальной методике.
Опыты проводили в благополучном по туберкулезу хозяйстве на 36 бычках 2...6-месячного возраста, не реагирующих на ППД-туберкулин. Бычков распределили на 2 группы: в опытную включили 26 животных, в контрольную 10.
Животным опытной группы вводили препарат ПКП-3 двукратно с интервалом 14 суток, подкожно, компонент № 1 в дозе 5,0 мл с правой, а компонент № 2 — 1,0 мл с левой стороны ниже средней линии шеи.
Животным контрольной группы инъецировали стерильный физиологический раствор в дозе 5,0 мл подкожно в область нижней трети шеи.
На протяжении опыта наблюдали за клиническим состоянием опытных животных.
Кровь (для клинического и биохимического анализов) отбирали от опытных и контрольных животных до введения препарата и через 7, 19, 30, 45 и 60 суток после начала опыта.
Неспецифическую резистентность организма оценивали путем определения содержания ЦИК и См в плазме крови [9, 16].
В периферической крови определяли количество эритроцитов (колориметрический метод) с инкубацией клеток в 2,8%-м растворе МаС1, концентрацию гемоглобина (гемиглобинцианидный метод) и ПРЭ по проценту гемолизированных клеток [28].
В плазме крови определяли содержание альбумина [26], активность гепатоспецифических ферментов АлАТ и АсАТ [30], концентрацию мочевины [25].
Аллергические исследования проводили с помощью ППД-туберкулина Курской биологической фабрики через 15, 30, 45, 60, 90 суток после применения препарата.
Результаты и обсуждение
Наработанные по собственной оригинальной технологии образцы препарата ПКП-3 с использованием отдельных фракций белков (по молекулярной массе) и суспензий ультразвуковых дезинтегратов, полученных в результате ультрацентрифугирования, не содержащие патогенных составляющих, были испытаны на крупном рогатом скоте.
При наблюдении за животными установлено, что через 24 ч после введения препарата в местах инъекций образовались припухлости размером с куриное яйцо, плотной консистенции, теплые. Температура тела у всех опытных животных повышалась до 40,0±0,2°С и держалась в течение 48 ч, у 5 животных — 72 ч, у 4—96 ч и еще у 4—120 ч, а затем приходила в норму. Температурная реакция характерна для всех препаратов, содержащих в своем составе продукты жизнедеятельности микроорганизмов, а развитием припухлости сопровождается введение всех гидроокисьалюминие-вых вакцин [7, 8]. В дальнейшем опухоли постепенно рассасывались и через 1 мес после повторного введе-
ния препарата оставались лишь твердые припухлости размером с горошину.
При аллергических исследованиях установлено, что реакции на ППД-туберкулин появились через 15 суток после инокуляции препарата у всех животных и сохранялись в течение 1 мес. В дальнейшем реакций на туберкулин не выявляли. Контрольные животные не реагировали на туберкулин и имели температуру тела в пределах физиологической нормы на протяжении опыта. Кратковременное аллергическое воздействие препарата объясняется наличием в его составе корпускулярных микобактериальных частиц [11].
Исследования крови выявили незначительные анти-оксидантные свойства ПКП-3, на что указывает изменения концентрации ДК и МДА. Так, через 7 суток после введения препарата концентрация ДК — промежуточных продуктов ПОЛ, снижалась на 37 %, а МДА — на 66 %, (р<0,05) (табл. 1 и 2). На 19-е сутки опыта отмечено незначительное возрастание интенсивности ПОЛ, хотя разница с контрольными показателями статистически достоверна. Снижение интенсивности ПОЛ в сыворотке крови наблюдали до 45-х суток опыта, когда уровень МДА был ниже контрольных показателей на 37,5 %.
1. Динамика изменения содержания ДК, ммоль/л, в крови подопытных бычков
Группа До После введения препарата, сутки
животных препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 6,5±0,04 4,1±0,01* 4,4±0,03* 5,8±0,06 5,9±0,07 5,4±0,08
Контрольная 5,6±0,02 6,5±0,8 6,2±0,08 5,9±0,07 5,6±0,09 5,3±0,06
* — р<0,05, разница достоверна по отношению к контролю.
2. Динамика изменения содержания МДА, мкмоль/л, в крови подопытных бычков
Группа До После введения препарата, сутки
животных препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 1,1±0,01 0,45±0,01* 0,52±0,05* 0,56±0,06* 0,9±0,04* 1,0±0,08
Контрольная 1,4±0,08 1,3±0,08 1,2±0,07 1,0±0,07 1,4±0,03 1,1±0,05
Наблюдаемое торможение процессов перекисного окисления липидов служит по-видимому одной из причин повышения ПРЭ — интегрального показателя потенциальной устойчивости мембран клеток к действию перекисей (табл. 3) [28].
3. Динамика изменения ПРЭ в крови подопытных бычков
Группа До Гемолиз, %
животных препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 22,5±0,7 15,2±0,4* 19,2±0,5* 26,8±0,6 38,9±1,4 36,3±1,7
Контрольная 24,2±1,1 23,0±0,8 26,8±0,9 24,6±0,7 34,7±1,1 38,1±1,3
На 7-е и 19-е сутки эксперимента гемолиз у животных опытной группы был достоверно ниже на 33 и 28 % соответственно.
Биологическое действие препарата ПКП-3 проявилось также в статистически достоверном повышении
РВЖ • СХЖ • № 1/2012
содержания общего белка в сыворотке крови опытных животных, которое продолжалось около 30 суток, с максимальным повышением на 21 % на 7-е сутки по отношению к контролю (табл. 4). Исходя из литературных данных [7], можно сделать вывод, что это связано с наработкой специфических антител к антигенам микобактерий, содержащихся в препарате.
4. Динамика изменения содержания общего белка, г/л, в крови подопытных бычков
С динамикой изменения общего белка коррелируют данные о концентрации ЦИК средних размеров. Известно, что ЦИК принимают участие в регуляции как хемотаксической способности, так и метаболической активации нейтрофилов. Статистически достоверное повышение содержание ЦИК у опытных животных проявилось на 7-е сутки опыта на 47 % по сравнению с контролем, а максимальных значений показатель достиг на 30-е сутки, когда повышение составило 89 % (табл. 5).
За период исследования незначительно увеличивалось содержание лейкоцитов к 30.45-м суткам опыта у бычков по сравнению с таковыми показателями у контрольных животных (табл. 6). Отмечено уменьшение на 11 % концентрации эритроцитов в крови подопытных животных к 19-м суткам после введения препарата (табл. 7). Концентрации гемоглобина в крови у опытных и контрольных бычков достоверно не различались (табл. 8).
Согласно данным литературы, снижение ПРЭ указывает на уменьшение стойкости мембран этих клеток к действию пероксидов. Одной из причин этого может быть компенсаторное расходование пула структурных антиоксидантов, которое развивается в ответ на нарушение гомеостаза в организме при введении препарата [28].
Повышение концентрации См на 44 % к 7-м суткам опыта свидетельствует о первоначальном иммуносуп-ресивном действии препарата, а дальнейшее уменьшение этого показателя до исходных значений и уменьшение в 2,5 раза его концентрации — о стабилизации иммунной системы и значительном иммуностимулирующем действии со стороны изучаемого препарата (табл. 9).
5. Динамика изменения содержания ЦИК, мг/мл, в крови подопытных бычков
6. Динамика изменения содержания лейкоцитов, тыс./мкл, в крови подопытных бычков
Группа До После введения препарата, сутки
животных препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 4,6±0,01 4,8±0,02* 5,2±0,02* 5,8±0,06* 5,9±0,04* 5,3±0,08*
Контрольная 5,2±0,02 5,0±0,08 4,8±0,06 4,6±0,07 4,7±0,02 5,1±0,01
7. Динамика изменения количества эритроцитов, млн/мкл, в крови подопытных бычков
Группа До После введения препарата, сутки
животных препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 8,7±0,09 8,2±0,08 7,4±0,06 7,6±0,03* 8,4±0,02 8,3±0,09
Контрольная 8,3±0,06 7,9±0,18 7,7±0,12 8,1±0,14 8,2±0,06 8,4±0,15
8. Динамика изменения количества гемоглобина, г/л, в крови подопытных бычков
Группа До После введения препарата, сутки
животных препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 92,5±1,1 94,8±0,7* 96,2±1,2* 98,8±1,6* 81,9±1,9* 84,2±1,4
Контрольная 87,2±1,8 86,0±1,2 89,8±2,1 90,6±2,3 88,3±1,6 86,1±1,8
9. Динамика изменения содержания См, мг/мл, в крови подопытных бычков
Группа До После введения препарата, сутки
животных препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 0,8±0,03 1,2±0,07* 0,9±0,01 0,8±0,02 0,9±0,04* 0,7±0,06
Контрольная 0,7±0,02 0,6±0,04 0,8±0,06 0,7±0,04 0,7±0,08 0,8±0,03
Выводы
На основании полученных данных можно сделать следующие выводы:
* через 24 ч после введения препарата в местах инъекций образуются припухлости размером с куриное яйцо, плотной консистенции, теплые. Температура тела у животных повышается до 40,0±0,2°С и держится 48.120 ч. Припухлости, образующиеся в местах введения препарата, рассасываются в течение 1 мес до размера горошины;
* аллергические реакции на ППД-туберкулин появляются через 15 суток после введения препарата у всех животных и сохраняются в течение 1 мес.;
* препарат обладает незначительными антиоксида-нтными свойствами, на что указывает изменение концентрации ДК и МДА;
* торможение процессов перекисного окисления липидов служит причиной повышения ПРЭ — интегрального показателя потенциальной устойчивости мембран клеток к действию пероксидов;
* препарат индуцирует повышение содержание общего белка, ЦИК (комплексов Аг-Ат), лейкоцитов и уменьшение в 2,5 раза концентрации См, что свидетельствует о значительном иммуностимулирующем действии со стороны изучаемого препарата.
До После введения препарата, сутки
животных введения препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 0,19±0,008 0,28±0,009* 0,31±0,005* 0,36±0,006* 0,32±0,008* 0,29±0,007
Контрольная 0,18±0,008 0,19±0,008 0,17±0,009 0,19±0,004 0,18±0,008 0,21±0,006
Группа До После введения препарата, сутки
животных препарата 7-е 19-е 30-е 45-е 60-е
Опытная 78,2±0,7 95,4±0,6* 93,2±0,5* 87,6±0,9* 78,9±0,8 77,1±0,7*
Контрольная 76,6±0,5 78,3±0,7 84,5±0,9 74,2±3,9 82,4±2,7 80,1±0,9
Библиография
1. Авербах М.М. Литвинов В.И. Иммунология и иммуногенетика туберкулеза. — М.: Медицина, 1988.
2. Александров И.Д., Шередекин Ю.Н., Хабузов И.П., Танеева Г.М. Корректирующая роль Т- и В-активинов и иммунологический статус телок, иммунизированных вакциной БЦЖ // Проблемы туберкулеза, 1995; 4: 63—64.
3. Алпитова, Г.П., Тихенко Г.А. К вопросу об иммунопрофилактике крупного рогатого скота вакциной БЦЖ // Ветеринарная патология, 2004; 2:30—32.
4. Анфалова Т.В., Галактионов В.Г. Макрофаг в системе взаимодействующих Т- и В-клеток / Общие вопросы патологии. Итоги науки и техники. — М.: ВИНИТИ АН СССР, 1977.
5. Бажин М.А., Новиков А.Н., Шкурин В.А. Клеточные реакции у телят неблагополучных по туберкулезу хозяйств на введение противотуберкулезных // Сборник научных трудов ВНИИБТ. — Москва, 2001.
6. Виноградова Р.П., Кучеренко Н.Е., Литвиненко А.Р. Біологічна хімія. — К.: Вища школа, 1977.
7. Воробьев А.А. Микробиология и иммунология. — М.: Медицина, 1999.
8. Воробьев А.А., Медуницын Н.В. Клеточная теория иммунитета И. И. Мечникова и концепция антиинфекционной резисте-
нтности // Микробиология, иммунология и эпидемиология, 1995; 3: 36—42.
9. Гриневич Ю.А., Алферов Н.И. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных // Лаб.дело, 1981; 8: 493—495.
10. Донченко A.C., Донченко В.Н. Туберкулез крупного рогатого скота, верблюдов, яков, овец и пантовых оленей. — Новосибирск: Изд-во РАСХН. Сиб. отд., 1994.
11. Донченко А.С., Шкиль Н.А. Совершенствование методики оценки эпизоотической ситуации туберкулеза крупного рогатого скота // Тез.докл.науч.практ.конф. — Новосибирск, 1995.
12. Евглевский А.А., Евглевский Ал.А. Изготовление и испытание противотуберкулезного анатоксина на крупном рогатом скоте // Курский ЦНТИ, 1991; 1:19—21.
13. Евглевский Ал.А. Оценка эпизоотической эффективности полевых испытаний туберкулезного анатоксина в стационарно неблагополучных по туберкулезу стадах // Тез.док.науч.про-из.конф. — Курск, 1996.
14. Еремеев В. В. Новая противотуберкулезная вакцина: мечта или реальность // Проблеммы туберкулеза, 2001; 1: 53—55.
15. Еремеев В.В., Майоров К.Б. Взаимодействие макрофаг-микобактерии в процессе реакции микроорганизма на туберкулезную инфекцию // Проблемы туберкулеза, 2002; 3: 54—58.
16. Меньшиков В.В. Руководство по клинической лабораторной диагностике. — М.: Медицина, 1987.
17. Овдиенко Н.П., Горбатов В.А., Гуткин В.С. и соав. Противотуберкулезная резистентность, индуцированная микобактериями БЦЖ и фракций их оболочек // Труды ВИЭВ, 1984.
18. Овдиенко Н.П., Донченко А.С. и соавт. Основные направления и достижения в изучении туберкулеза животных // Сборник материалов научной сесии РАСХН (к 100 летию ВИЭВ). — Москва, 1999.
19. Ракова Т.Н. Эффективность и перспективы применения в животноводстве препаратов иммуностимулирующего действия // Матер. 12-й междунар. межвуз. науч.-пр. конф. «Новые фармакологические средства в ветеринарии». — Москва, 2000.
20. Хабузов И.П. Иммунокоррекция Т- и В-систем иммунитета у крупного рогатого скота, иммунизированного вакциной БЦЖ // Итоги науч.-исл. работы ДонГАУ. — Персиановский, 2001.
21. Хабузов И.П. Роль природных и синтетическихиммуномо-дуляторов у телок, иммунизированных вакциной БЦЖ // Состояние, проблемы и перспективы развития вет. науки России, 1999; 6: 191—192.
22. Хамзин P.A., Сафин М.А. Результаты экспериментального изучения вакцины БЦЖ на крупном рогатом скоте // Научно-технический бюллетень ВАСХНИЛ Сиб. отделения, 1985; 32:43—45.
23. Хамзин P.A. Сафин М.А. Результаты экспериментального изучения вакцины БЦЖ на молодняке крупного рогатого скота // Научно-технический бюллетень института экспер. ветеринарии Сибири и Дальнего Востока, 1985; 32:30—32.
24. Andersen P. Effective vaccination of mice against Mycobacterium tuberculosis infection with a soluble mixture of secreted mycobacterial proteins // Infect. Immun., 1994; 62: 2536—2544.
25. Crocker C.L. Rapid determination of urea nitrogen in serum or plasma without deproteinzation // Amer. J. Med. Technol., 1967; 33: 361—365.
26. Doumas B.T., Watson W.A., Beiggs H.G. Determination of serum albumin by the manual bromcresol-green method // Clin. Chim. Acta., 1971; 31: 87—96.
27. Gulle H., Fray L.M., Gormley E.P., Murray A. and Moriarty K.M. Responses of bovine T-cell to fractionated lysate and culture filtrate proteins of Mycobacterium bovis BCG // J.Vet.Immun.and Immunopathol-ogy, 1995; 48: 183—190.
28. Jager F.G. Determination of vitamin E requirement in rats by means of spontancous haemolisis in vitro // Nutr. Dieta, 1969; 10: 215—223.
29. Marris D.A. Spectrophotometric assaes in: Spectrjphotometry and spectrofluometry. — Washington: IRL Press, 1987.
30. Reitman S., Frenkel S. // Am. J. Clin. Pathol., 1957; 27: 56.
Summary
A.M. Kovalenko, G.V. Snoz, V.M. Sapegin, V.J. Zhabina, L.V. Kovalenko. Studying immunobiological properties of an antitubercular preparation. Results of research immunobiological properties of an antitubercular preparation are described in review. Considerable immunomodulate action of a studied preparation is showed.
РВЖ • СХЖ • № 1/2012
