CC BY
9
исходит активация фермента, наиболее выраженная в пуч--> новой и сетчатой зонах коры надпочечников (рисунок, А).
^ От 3-х суток к месячному сроку эксперимента активность 5-нуклеотидазы угнетается во всех зонах, особенно в сетчатой зоне коры надпочечников, где активность фермента к этому времени ниже контроля. К концу затравки активность 5-нуклеотидазы во всех зонах колеблется в пределах контроля.
Полученные результаты позволяют констатировать, с одной стороны, раннюю чувствительность микрососудов внутренних зон коры надпочечников к действию стирола, с другой — угнетение активности мембранно-транспортных процессов к 1-му месяцу опыта, особенно в сетчатой зоне, что подтверждается четким накоплением в ней ли-пидов (рисунок, Б).
При исследовании неспецифнческого метаболического показателя, отражающего состояние энергообеспечения клетки (активность НАД-Н-ДГ), на 3-й сутки опыта выявлено угнетение активности фермента в клубочковой и сетчатой зонах коры надпочечников, однако в ранний срок эксперимента оно было незначительно по амплитуде и отсутствовало в пучковой зоне. Через месяц от начала опыта активность НАД-Н-ДГ во внутренних отделах коры надпочечников повышалась, а в клубочковой зоне сохранялась на уровне предыдущего срока. К концу экспери-—X мента во всех зонах органа активность НАД-Н-ДГ ока-^Е" залась выше, чем в контроле.
При исследовании активности фермента специфического синтеза 11-ОКС 11 {5-гидроксилазы четкие изменения этого показателя обнаруживались лишь спустя месяц от начала затравки стиролом и характеризовались угнетением активности фермента во всех зонах коры надпочечников. К концу опыта в клубочковой и пучковой зонах активность 11Р-гидроксилазы оставалась ниже контрольного уровня и только в сетчатой зоне приближалась к нему.
Таким образом, количественный гистохимический анализ коры надпочечников при хроническом воздействии стиролом позволил получить конкретные данные о динамике метаболических показателей кортикоцитов, которые могут оказаться полезными при выяснении механизмов действия стирола на кору надпочечников. В условиях хронического действия стирола на первый план выступают ранние из-
менения проницаемости мембран микрососудов внутренних отделов коры надпочечников, которые, сопровождаясь параллельными изменениями неспецифических метаболических процессов клетки, приводят в дальнейшем к угнетению активности 110-гидроксилазы. Это в свою очередь, по-видимому, и является непосредственным морфологическим субстратом снижения функции органа к концу опыта в виде уменьшения содержания 11-ОКС в крови экспериментальных животных.
На основании проведенных исследований можно сделать следующие выводы. Микрососуды внутренних отделов коры надпочечников проявляют высокую и раннюю чувствительность к действию стирола. Изменения состояния мембранно-транспортных процессов сопровождаются изменениями неспецифнческих метаболических процессов в клетке, что приводит к угнетению активности фермента специфического синтеза 11-ОКС 1 ip-гидроксилазы в коре надпочечников и объясняет снижение функции органа к концу хронической затравки.
Литература
1. Агроскин JI. С., Папаян Г. В. Цитофотометрня (Аппаратура и методы анализа клеток по светопоглощению). М., 1977.
2. Берстон М. Гистохимия ферментов. М., 1965.
3. Бурлака-Вовк 3. И., Г внес В. С., Марченко О. А. — В кн.: Эндокринная система организма и токсические факторы внешней среды. Л., 1980, с. 19—24.
4. Журавлева Т. Б., Прочуханов Р. А. Введение в количественную гистохимию ферментов. М„ 1978.
5. Павлихина JI. В., Усватова И.Я-, Бунятян А. Ф. — В кн.: Методы исследования некоторых систем гуморальной регуляции. М., 1967, с. 50—59.
6. Равкин И. А.—Труды Ленинград, науч. о-ва патологоанатомов, 1976, вып. 17, с. 283—285.
7. Фаустов С. А., Панковец О. А. — В кн.: Эндокринная система организма и токсические факторы внешней среды. Л., 1980, с. 371—375.
8. Baillie А. Н„ Ferguson М. М„ Calman К. С. et al.— J. Endocr., 1965, vol. 33, p. 119—125.
Поступила 24.12.81
УДК 615.282.099:616.36-091 «5»
Т. В. Пастушенко, К. С. Волков, JI. Б. Маруший. Ю. А. Полипенко
ИЗМЕНЕНИЕ ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ МЕТИЛ-1\1-2-(БЕНЗИМИДОЗОЛИЛ) КАРБАМАТА
Тернопольский медицинский институт
Целью настоящей работы являлось изучение ультраструктурной организации гепатоцнтов при воздействии отечественного фунгицида метил-Ы-2-(бензимидозолил) кар-бамата (БМК).
Опыты выполнены на половозрелых беспородных белых крысах-самцах массой 200—220 г, которым в течение 2, 4, 8 и 15 дней внутрижелудочно вводили БМК в дозе 510 мг/кг (1/20 Ь05с)- Животных забивали с соблюдением правила «одного часа». Ультраструктуру гепатоцитов исследовали у 15 крыс: 3 были контрольными, каждая подопытная группа состояла также из 3 животных. Исследования проводили на 2, 4, 8 и 15-е сутки от начала интоксикации БМК. Для электронно-микроскопических исследований маленькие кусочки печени сразу после дека-пнтацнн животных фиксировали в 2,5 % растворе глута-ральдегида, постфнксировали в 1 % растворе четырехоки-си осмия, дегидратировали в спиртах и ацетоне, окрашивали уранилацетатом и заливали в эпоксидные смолы. Ультратонкие срезы контрастировали цитратом свинца по Рейнольдсу и изучали в электронном микроскопе ЭВМ-100ЛМ при ускоряющем напряжении 75 кВ.
При электронно-микроскопическом исследовании гепа-
$
тоцитов на 2-е сутки воздействия БМК наблюдалось значительное расширение цистерн эндоплазматическон сети, канальцев и пузырьков комплекса Гольджи. В ядрах заметно увеличены перинуклеарные пространства, ядрышки небольшие, компактные. Митохондрии уменьшены в размерах, деформированы, их наружная мембрана становится извитой. Умеренно плотный матрикс митохондрий содержит небольшое число крист. В различных участках цитоплазмы и особенно в области спавшихся желчных капилляров повышено число первичных и вторичных лизо-сом. Гранулы гликогена почти не выявляются (рис. 1).
На 4-е сутки воздействия БМК степень выраженности деструктивных изменений в гепатоцитах нарастает. Цистерны эндоплазматичсской сети резко расширены, элементы комплекса Гольджи образуют большие полости неправильной формы. Отдельные митохондрии значительно сморщены и подвергаются разрушению. Цитолемма гепатоцитов на многих участках выглядит нечеткой, размытой (рис. 2).
Для 8-х суток воздействия БМК характерно повышение осмиофильности цитоплазмы большинства гепатоцитов. Эндоплазматическая сеть и комплекс Гольджи под-
Рис. 1. Субмнкроскопнческая организация гепатоцнта на 2-е сутки опыта. Увеличенное перннуклеарное пространство, расширенные цистерны эндоплазматической сети, повышенное содержание лизосом, измененные митохондрии. Ув. 17 000. Здесь н на рис. 2—4: Я—ядро; ЯД — ядрышко; М — митохондрия; Л — лнзосома; ЭС — эндоплаз-матическая сеть; КГ — комплекс Гольджн; ЖК — желчный капилляр; СГ — светлый гепатоцнт;
ТГ — темный гепатоцнт.
Рис. 2. Резкое расширение цистерн эндоплазматической сети и элементов комплекса Гольджи, деструкция многих митохондрии, уменьшение ядрышек в гепатоцитах печени на 4-е сутки эксперимента. Ув. 20 000
Рис. 3. Повышенная электронная плотность гиалоплазмы и матрикса митохондрий, расширенный желчный капилляр в темных гепатоцитах, нормализация ультраструктуры в светлых гепатоцитах (8-е сутки интоксикации БМК). Ув. 10 000.
Рис. 4. Гипертрофия ядрышка, множественные ядерные поры, гипертрофия и гиперплазия митохондрий, эндоплазматической сети, большое число первичных лизосом вблизи желчного капилляра (15-е сутки эксперимента). Ув. 20 000.
вергаются гиперплазии. Митохондрии гипертрофированы, содержат множественные кристы. В цитоплазме много полисом, вблизи умеренно расширенных желчных капилляров повышенное количество лизосом. В печени встречаются более светлые гепатоциты, в которых хорошо контури-руется ядерная оболочка, гипертрофированы ядрышки. В цитоплазме таких клеток содержание цистерн эндоплазматической сети значительно ниже, чем в темных гепатоцитах. Встречаются многочисленные свободные рибосомы и полнеомы, глыбкн гликогена, которые отсутствовали в ранние сроки интоксикации. Митохондрии в светлых гепатоцитах крупные, с присущей им удлиненно-вытянутой, овальной и округлой формой, хорошо выраженными кри-стами. Количество лизосом меньше, чем в темных клетках (рис. 3).
На 15-е сутки воздействия БМК большинство гепато-цитов характеризуется умеренной электронной плотно-
стью, реже встречаются темные клетки. Значительно выражены гипертрофические и гнперпластические преобразования со стороны ядерного аппарата и органелл. В цитоплазме множественные митохондрии расположены среди большого числа умеренно расширенных цистерн эндоплазматической сети и гипертрофированного комплекса Гольджи. Количество лизосом вблизи увеличенных желчных капилляров остается повышенным (рис. 4).
Полученные экспериментальные данные свидетельствуют о развитии деструктивных изменений мембранных систем гепатоцитов в первые дни интоксикации БМК. Выявленная морфологическая картина пониженной функциональной активности гепатоцитов при интоксикации БМК выявляет три этапа структурно-функциональных изменений гепатоцитов: первый — дистрофия структур со снижением функциональной активности (2 — 4-е сутки), второй — ре-
паративная регенерация с некоторым восстановлением уравновешивания (15-е сутки), восстановление ультраст-функций первоначального повреждения гепатоцитов (8— руктуры и адаптации клеток печени.
15-е сутки), третий этап — структурно-функционального Поступила 25.12.84
УДК 6l6-00S.939.22-02:648.1Sl-092.9 + 6l4.7:G48.IS|-07:6l6-00S.939.22
Е. А. Можаев, О. И. Юрасова, О. Г. Чарыев, М. Л. Курхули, Н. Г. Митрофанова, В. И. Перминов
ВЛИЯНИЕ ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ НА МЕТАБОЛИЗМ ЛИПИДОВ У БЕЛЫХ КРЫС
НИИ общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысина АМН СССР, Москва
Ранее выполненные нами исследования показали, что поверхностно-активные вещества (ПАВ) при длительном поступлении в организм с питьевой водой в концентрации 100—700 мг/л повышают уровень холестерина в сыворотке крови лабораторных животных до 48 °/о, вызывают атс-роматозные изменения в стенке аорты (в области ее дуги), способствуют накоплению гликогена в печени и развитию морфологических изменений гепатоцитов и цитоплазмы [1—3]. Причиной этих изменений являются не только поступление холестерина в кровь из пищи, но и сложные биохимические процессы, возникающие в организме под влиянием Г1АВ.
При гигиенической оценке нового анионоактивного биологически «мягкого» ПАВ — олефинсульфояата — нами поставлена задача определить с помощью холестерина-14С возможность накопления последнего в стенках сосудов и интенсификации синтеза его в печени под влиянием ПАВ. В параллельных исследованиях изучены изменения синтеза лнпидов под влиянием неонола (неионогенного ПАВ), используя меченый предшественник липндов — ацетат-11 С. Опыты проведены на самцах беспородных белых крыс массой 250 г. Животные одной группы в течение месяца получали олефинсульфонат с питьевой водой в концентрации 1000 мг/л, другие — ежедневно внутрижелудочно нео-нол в концентрациях 0,1 и 100 мг/л, контрольные — водопроводную воду. Концентрации веществ были выбраны на уровне действующих (1000 и 100 мг/л) для получения выраженного эффекта, а также с учетом порога действия (0,1 мг/л). В конце эксперимента животным опытных и контрольных групп вводили внутрижелудочно "С-холе-стерин и внутрибрюшинно аиетат-г,С в количестве соответственно 67 и 50 мкКи на 100 г массы тела. По истечении суток в случае введения холестернна-кС к через 1 и 24 ч после введения ацетата-'4С животных декапитиро-валн и определяли содержание радиоактивной метки в липидах сыворотки крови, печени, аорте. В опыте с холе-стерином-^С метку в аорте определяли без экстракции липндов. Последние экстрагировали смесью хлороформ — метанол, очищали от нелипидных примесей [4]. Разделение липндов проводили с помощью тонкослойной хроматографии [5|. Количество |4С в биологическом материале и экстрактах липндов оценивали на жидкостном сцинтнлля-ционном счетчике. Содержание |4С в липидах определяли в распадах в минуту на 1 г органа или 1 мл сыворотки
Количество ,4С в биологическом материале (в рапс/мин) на 1 г органа или 1 мл сыворотки крови (Л4±а)
Концентрация олефнн-сул ьфоната, мг/л Сыворотка крови Печень Аорта
0 (контроль) 1000 58 500±18 000 83 100±26 500 (142 о/0) 97 100±29 000 180 200±53 000 (186%) 50 590± 16 800 84 520±26 100 (167%)
крови, а также в процентах по отношению к контролю.
Радиохроматографическнм методом установлено, что 14С в печени после введения холестерина-,4С содержится в основном во фракции стеринов, т. е. принадлежит холестерину. В сыворотке крови определен холестерин и холестериновые эфчры; 60—70 % холестерина плазмы крови оказалось связано в виде эфиров. Результаты исследований представлены в таблице.
Как видно нз таблицы, большее содержание 14С в аорте опытных животных по сравнению с контролем указывает, что поступление ПАВ в организм в течение лишь одного месяца вызывает в стенках аорты атероматозные изменения. Данные радиохроматографнческого анализа и содержания метки в сыворотке крови в печени свидетельствуют о том, что при действии ПАВ в испытуемой концентрации происходит интенсификация синтеза липндов в печени и синтеза холестерина.
При изучении динамики синтеза липндов с помощью ацетата-|4С установлено, что ПАВ усиливает синтез липидов в печени и отложение их в аорте в кенце месячной затравки. Так, неонол в концентрации 0,1 мг/л (ацетат-14С находился в организме в течение 1 ч) вызывает тенденцию к увеличению синтеза липидов в печени; ПАВ в концентрации 100 мг/л увеличивает отложение липидов в аорте на 21 % но сравнению с контролем. Та же концентрация на 36 % повышает отложение липидов в аорте при наличии ацетата-|4С в организме в течение суток. Полученные данные об интенсификации синтеза лнпидов к печени под действием ПАВ с использованием ацетата-|4С дополняют ранее установленные [3]. Если изменения функции печени и отложение липидов в стенке аорты наблюдались лишь через 3—4 мес и более, то настоящими исследованиями показана возможность возникновения аналогичных изменений даже через месяц от начала введения ПАВ. Повышенное содержание ПАВ и их метаболитов в организме подопытных животных нарушает обмен липидов.
Таким образом, при действии ПАВ в концентрации 100—1000 мг/л на протяжении месяца происходит усиление синтеза лнпидов в печени и отложение липидов в аорте. Изменения обмена лнпидов под влиянием ПАВ установлены с помощью меченого холестерина и ацетата-|4С.
Литература
1. Можаев Е. А., Соловьева Л. Н., Капырина Л. М., Кря-тов И. А. — Фармакол. и токсикол., 1967. № 4, с. 477— 479.
2. Можаев Е. А., Осинцева В. П., Капырина Л. /VI. и др. — Фармакол. и токсикол.,. 1973, № 4, с. 455—456.
3. Можаев Е. А. Загрязнение водоемов поверхностно-ак-тнвными веществами. М., 1976.
4. Медди Э. Биохимическое исследование мембран. М., 1979, с. 227—230.
5. Шталь Э. Хроматография в тонких слоях. М.. 1965.
Поступила 23.01.85
