5Uchinchi renessans yosh olimlari: zamonaviy vazifalar,
innovatsiya va istiqbol Young Scientists of the Third Renaissance: Current Challenges, Innovations and Prospects
ИССЛЕДОВАНИЯ ПО ВЫЯВЛЕНИЮ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЕСТНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ CATHARANTHUS ROSEUS В РАЗРАБОТКЕ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ
ПРЕПАРАТОВ
Г.М.Дусчанова -
д.биол.н., профессор Ташкентский Педагогический университет им. Низамий; Н.Р.Джалилова - стажер-исследователь, Я.К Назирова - к.фарм.н., доцент, с.н.с. УзКФИТИ при Агентстве по развитию фармацевтической отрасли МЗ
РУз.
А.Т.Шарипов
д.фарм.н., профессор Ташкентского фармацевтического института,
С.Арипова- гл.н.с., профессор, Ш.М.Адизов - д.ф.х., с.н.с. Институт химии растительных веществ АН РУз им. акад.С.Юнусова.
Узбекистан.
Введение. Онкозаболевания по-прежнему занимают первое место, как по распространённости, так и по угрозе для жизни. Лечебные свойства катарантуса розового вызваны, в первую очередь, обуславливаются наличием в растении винкаалкалоидов- цитостатиков растительного происхождения (винбластина и винкристина) действующие на клетки, находящиеся в М-фазе клеточного цикла, митозе, нарушающие клеточную полимеризацию. При этом происходит денатурация белка, составляющего основу микротрубочек, образующих «скелет» клетки и участвующих в организации митотического веретена -тубулина. Винкаалкалоиды могут также изменять метаболизм аминокислот, цАМФ, глютатиона, активность кальмодулинзависимой Са2+транспортной АТФазы, клеточное дыхание, биосинтез нуклеиновых кислот и липидов. Также к винкаалкалоидам, встречающиеся в растительном сырье, относятся и полусинтетические производные винбластина - виндезин и винорелбин. Исследователи считают, что в механизме действия природных и полусинтетических алкалоидов катарантуса розового имеются некоторые отличия, обусловленные различиями в их химической структуре[4.244-249с.]. Отличаются они взаимодействием с разными участками молекулы тубулина и различным взаимодействием с белками, ассоциированными с микротрубочками, что в результате определяет некоторые нюансы в действии
May 15, 2024
331
Uchinchi renessansyosh olimlari: zamonaviy vazifalar,
innovatsiya va istiqbol Young Scientists of the Third Renaissance: Current _Challenges, Innovations and Prospects
алкалоидов катарантуса розового. Природные винкаалкалоиды на основе Catharanthus roseus применяют для лечения быстро пролиферирующих новообразований в комбинированной химиотерапии острого лейкоза, лимфогранулематоза, а также других опухолевых заболеваний. В литературных источниках отсутствует подробное анатомическое описание строения вегетативных органов C. roseus. Анатомическое строение органов данного вида, культивируемого на территории Узбекистана, не изучено. Это и определяет актуальность и новизну наших исследований. По полученным результатам анатомо-морфологических исследований есть возможность разработке технологии получения извлечений в виде жидкого и сухого экстракта растительного объекта.
Цель исследований -согласно полученных анатомо-морфологических данных растения C. roseus оптимизация таких факторов, как влажность и степени измельчения сырья, выбор экстрагента, способа и времени экстракции, температурного режима экстракции при получении суммы алкалоидов. Работа выполнена в рамках государственного гранта № ФЗ-202007215-«Разработка технологии производства противоопухолевых препаратов, полученных на основе растительного сырья Catharantus roseus».
Материалы и методы. Объектом исследования служили листья и стебли растения, заготовленные в августе-сентябре 2023 года. Одновременно с морфологическим описанием вегетативные органы (лист и стебель) были зафиксированы в 70° этаноле для анатомического изучения. Исследование анатомо-диагностических признаков проводили в соответствии с методиками Государственной фармакопеи XIV издания [2.2355-2361с.]. Поперечные срезы листа, стебля и корня приготовлены ручным способом с помощью безопасной бритвы. Поперечные срезы листа сделаны через середину, а стебля - через основание. Срезы окрашивали метиленовой синью и сафранином с последующим заклеиванием в глицерин-желатин. Описания основных тканей и клеток приведены по К. Эсау, Р.Ф. Эверт, Н. С. Киселевой, эпидерма - по С.Ф. Захаревич. Микрофотографии сделаны компьютерной микрофотонасадкой с цифровым фотоаппаратом марки A123 фирмы Canon под микроскопом Motic B1-220A-3. При изучении морфолого-анатомического строения листа и стебля C. roseus определены диагностические признаки и локализация биологически активных веществ в органах и тканях. Содержание влажности, золы, экстрактивных веществ, извлекаемых разно полярными экстрагентами, определяли фармакопейными методами. Для определения числовых
May 15, 2024
332
Uchinchi renessans yosh olimlari: zamonaviy vazifalar,
innovatsiya va istiqbol Young Scientists of the Third Renaissance: Current Challenges, Innovations and Prospects
показателей и технологических характеристик было использовано высушенное сырье. Выборку и отбор проб из серий фасованного «ангро» лекарственного растительного сырья цроводили, как указано для лекарственного растительного сырья «ангро» (партия), определение допустимых отклонений на промышленное фасование в соответствии с ОСТом 64-492-85. Для этого собранное сырье сушили сразу же после сбора. Сушку сырья произвели методом искусственной сушки, используя сушилки чтобы избежать разрушение (окисляться или подвергаться другим изменениям) индольных алкалоидов. Оптимальная температура сушки для сырья 50-60°С. Для этого были использовании образцы с исходной степенью измельчения, которых соответствовала требованиям НД в среднем 4 мм. Хранили готовое сырье в сухих, хорошо вентилируемых помещениях. Экстракцию проводили в соответствии с фармакопейными методами с использованием различных режимов. Предварительное изучение качества полученных экстрактов осуществляли согласно НТД для экстрактов.
Результаты и их обсуждение. Изучение анатомического строения вегетативных органов растения С. тоявт показало и следующие диагностические признаки: в листе - дорсивентральный тип мезофилла листа; толстостенные наружные стенки эпидермы; амфистоматичные листья; не погруженные устьица; хлорофиллоносная палисадная и губчатая паренхима; закрытый коллатеральный тип проводящих пучков; наличие многочисленных идиобластов; в стебле - более одревесневший, не пучковый тип строения; либриформ обширный; радиальные лучи удлиненные и короткие; флоэма обширная, расположена между коровой паренхимой и либриформом; сердцевина не широкая, представлена крупными и мелкими округло-овальными, тонкостенными паренхимными клетками, содержащими гидроцитные клетки и многочисленные млечники. При обработке раствором метиленовой синью в палисадных и губчатых клетках встречаются капли эфирного масла жёлто-оранжевого цвета. Полученные результаты позволили определить ряд морфолого-анатомо-гистологических и характерных диагностических признаков для данного вида. Изучали числовые показатели доброкачественности надземной части барвинка розового. (табл. 1).
Таблица 1. Результаты исследования числовых показателей надземной части С. Roseus
333
May 15, 2024
Uchinchi renessansyosh olimlari: zamonaviy vazifalar,
innovatsiya va istiqbol Young Scientists of the Third Renaissance: Current Challenges, Innovations and Prospects
Партия Влажность Зола Зола не Экстрактивные вещества,
общая, % растворимая %
в HCl, % 45% спирт Ступенчатый градиент вода: метанол с 5% уксусной кислотой
№ 1 5,33±0,37 7,83±0,22 0,3±0,02 48,2±2,31 49,1±1,87
№ 2 6,12±0,24 6,94±0,29 0,4±0,01 47,9±1,94 48,8±2,60
№ 3 4,84±0,39 7,26±0,34 0,2±0,04 48,4±2,31 49,1±1,99
При определении содержания экстрактивных веществ использовали водно-спиртовые смеси с различными концентрациями (45, 70 и 96 %), обладающие различной полярностью и, соответственно, различной экстрагирующей способностью в отношении алкалоидов. Было выявлено, что спирт крепостью 45 % способствуют наибольшему выходу суммы алкалоидов. Наибольший выход был зафиксирован при использовании ступенчатого градиента: вода-метанол с 5 %-ной уксусной кислотой[4. 1010-1011р.].
Таблица 2. Влияние температуры на экстракцию алкалоидов из травы СаШагпШдо гоэеш L.
№ Температ Количест Интерва Объем Выход Примечание
ура, 0С во сливов л каждого виндолин
между слива, л ина, в %
сливами,
час
1 20 8 3 4 0,81 Содержание виндолини на 0,9%
2 40 7 3 4 0,88
3 70 6 2 4 0,70
4 80 6 2 4 0,66
5 95 5 1 4 0,45
Согласно литературным источникам были использованы смесь растворителей в различных соотношениях с использованием воды с сернафракционирование перегородкой с бензолом. Пропускали извлечения
334
May 15, 2024
Uchinchi renessans yosh olimlari: zamonaviy vazifalar,
innovatsiya va istiqbol Young Scientists of the Third Renaissance: Current Challenges, Innovations and Prospects
через два хроматографических колонок, а кристаллизацию проводили в смеси этанола и серной кислоты.
Выводы. Анатомо-морфологические исследования выявили возможность применения надземной части растения С. Яо8вш для получения в дальнейшем эффективных зарубежных аналогов известных противоопухолевых препаратов. Изучение качества сырья, таких как потеря в массе при высушивании растительного объекта, содержание золы в анализируемых образцах сырья колебалось в пределах нормы. Подобран экстрагент с учетом химического состава растения, а также режим экстрагирования (рН, температура, время продолжительности и т.д.) Многосерийная экстракция фармакопейными методами показало, что оптимальным способом является метод реперколяции.
REFERENCES
1. Барыкина Р.П., Веселова Т.Д., Девятов А.Г. и др. Справочник по ботанической микротехнике (основы и методы). - Москва: Изд. МГУ. - 2004. - С. 6-68.
2. Государственная фармакопея Российской Федерации, XIV издание, 2018 г.
3. Чиссов В.И., Онкология: Национальное руководство. Краткое издание / под ред. В.И. Чиссова, М.И. Давыдова - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2017. - 576 с.
4. Chun-Hua Wang, Yu Zhang, Miao-Miao Jiang. Indole alkaloids from the roots of Catharanthus roseus // Chem. Nat. Comp. № 6 (2013) pp. 1010-1011.
335
May 15, 2024
