CC BY
39
ситуации затяжные депрессивные состояния // Журн. неврол. и психиатр. им. С.С. Корсакова. — 1996. — №6. — С. 23-27.
6. Иванова Л.А. Депрессия с патологическими телесными сенсациями // Журн. неврол. и психиатр. им. С.С. Корсакова. — 2006. — Вып.8. — С.26-30.
7. Корнетов Н.А. Психогенные депрессии (клиника, патогенез). — Томск, 1993. — 239 с.
8. Международная классификация болезней (10 пересмотр). Классификация психических и поведенческих расстройств. — СПб., 1994. — 300 с.
9. Нуллер Ю.Л., Михаленко И.А. Аффективные психозы. — Л., 1988. — 264 с.
10. Пападопулос Т.Ф. Острые эндогенные психозы (психопатология и систематика). — М., 1975. — 192 с.
11. Петрунько О.В. Депрессия и тревога в клинике сомати-зированного расстройства // Социальная и клиническая психиатрия. — 2004. — №2. — С. 21-26.
12. Семке В.Я., Епанчинцева Е.М. Душевные кризисы и их преодоление. — Томск, 2005.
13. Смулевич А.Б., Дубницкая Э.Б., Тхостов А.Ш., и др. Психопатология депрессий (к построению типологической модели) // Депрессия и коморбидные расстройства. / Под ред.
А.Б.Смулевича. — М., 1997. — С. 28-53.
14. Смулевич А.Б., Ротштейн В.Г Психогенные заболевания. — М., 2001.
15. Alsen V. Das kernsyndrom der endogenen depression. // Der Nervenarzt. — 1961. — 32 (10). — Р.470-473.
Адрес для переписки: Бобров Александр Сергеевич, заведующий кафедрой психиатрии ГОУ ДПО Иркутского государственного института усовершенствования врачей, доктор медицинских наук, проф.; Магонова Елена Геннадьевна, врач-психотерапевт ОГУЗ «Психотерапевтический центр г. Иркутска», заочный аспирант кафедры психиатрии ГОУ ДПО Иркутского государственного института усовершенствования врачей.
Тел./факс: (3952) 46-45-68, e-mail: [email protected]
© ЕСАУЛОВА И.Н. — 2009
ИССЛЕДОВАНИЕ СУПЕРНАТАНТА, ПОЛУЧЕННОГО ПРИ ДОБАВЛЕНИИ ПЕПТИДОВ ИЗ ТКАНЕЙ ПЕЧЕНИ И СЕРДЦА БАРАН К КУЛЬТУРЕ ФИБРОБЛАСТОВ
И.Н. Есаулова
(Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах; кафедра терапии и традиционной медицины, зав. — )
Резюме. Цитомедины — это биологически активные соединения, продуцируемые органами и тканями, способные влиять на течение физиологических и биохимических процессов в организме для поддержания гомеостаза. Экспериментально выявлено, что пептиды, выделенные из тканей печени и сердца баран, стимулируют культивированные фибробласты, что сопровождается выделением тканевого фактора и активатора плазминогена. Цитомедины, полученные из печени и сердца животных влияют на коагулогические и фибринолитические свойства культивируемых фибробластов.
Ключевые слова: пептиды, супернатант, фибробласты, цитомедины.
THE STUDY OF SUPERNATANT, OBTAINED IN ADDITION OF PEPTIDES FROM TISSUES OF LIVER AND HEART OF SHEEP TO THE CULTURE OF FIBROBLASTS
L.N. Esaulova
(Irkutsk State Institute for Postgraguate Medical Education)
Summary. Cytomedines are biologically active compounds, producing by organs and tissues, they are able to influence on the course of physiological and biochemical processes in an organism to suport homeostasis. It was revealed experimentally that peptides, isolated from tissues of sheep liver and heart, stimulate cultured fibroblasts, that is accompanied with selection of tissue factor and activator of plasminogene. Cytomedines, obtained from liver and heart of animals, influence upon coagulologic and fibrinologic properties of cultivated fibroblasts.
Key words: peptides, sypernatant, fibroblasts, cytomedines.
Одним из основных элементов, участвующих в репарации тканей и органов, в том числе при воспалении, являются фибробласты. Путем контактов с коллагеном и другими клетками, а также секреции факторов роста и кейлонов, они осуществляют ауторегуляцию роста собственной популяции, контролируют состав, структуру, продукцию и катаболизм основных компонентов межклеточного матрикса (коллагена, эластина, про-теогликанов и структурных гликопротеинов). Одним из специфических свойств фибробластов является клеточная пролиферация в процессе воспалительной реакции [1,2,4,5].
Основной функцией фибробластов является синтез компонентов межклеточного вещества. Фибробласты синтезируют тропоколлагены, предшественники коллагена нескольких типов, межклеточный матрикс (ла-минин, нидоген, тинасцин, хондроитин-4-сульфат, про-теогликан, фибронектин) и основное вещество соединительной ткани, заполняющее пространство между клетками и волокнами. Кроме того, фибробластами синтезируются также некоторые факторы роста (основной фактор роста фибробластов (bFGF), трансформирующий ростовой фактор (TGF-P), трансформирую-
щий ростовой фактор (TGF-a), эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста кератиноцитов (KGF), трансформирующий ростовой фактор (а-NGF) и ферменты, с помощью которых они разрушают коллаген и гиалуро-новую кислоту, а также синтезируют эти молекулы заново. Этот процесс происходит непрерывно, и благодаря, ему межклеточное вещество постоянно обновляется. Выделяемые фибробластами факторы роста и компоненты экстрацеллюлярного матрикса играют важную роль как для регулирования пролиферации и диффе-ренцировки самих фибробластов, так и многих других клеток. Синтез фибробластами гликозинаминоглика-нов приводит к накоплению последних в основном веществе соединительной ткани, которые расходуются на построение волокнистых структур. По мере превращения фибробластов в фиброциты количество коллагеновых волокон увеличивается, они группируются в пучки. Воспаление, развивающееся в грануляционной ткани, приводит к задержке ее созревания, а чрезмерная синтетическая активность фибробластов — к избыточному образованию коллагеновых волокон.
Одним из факторов, играющим ведущую роль в процессах адгезии и стимуляции пролиферативных про-
Таблица 1
Исследование супернатанта, полученного при добавлении пептидов из печени баран к культуре фибробластов (N=7)
Изучаемый показатель Контроль С добавлением контрольных полипептидов С добавлением опытных полипептидов
АЧТВ, сек Р1 Р2 Р3 89,43±3,4 82,26±2,3 <0,05 72,0±1,7 <0,05 <0,05
Коалиновое время, сек Р1 Р2 Р3 41,2±0,54 37,0±0,51 <0,05 36,1±0,48 <0,05 <0,05
Протромбиновое время, сек Р1 Р2 Р3 21,0±0,47 19,0±0,46 20,4±0,38
Тромбиновое время, сек Р1 Р2 Р3 15,0±0,51 13,8±0,52 <0,05 14,3±0,24
Фибринолиз каолиновый, мин Р1 Р2 Р3 8,0±1,41 42,43±4,39 <0,001 57,86±4,87 <0,001
Фибринолиз эуглобулиновый, мин Р1 Р2 Р3 190,0±14,13 133,4±6,87 <0,001 143,6±16,82 <0,001
Примечание:
Р1 — значимость различий между исходными и контрольными данными;
Р2 — значимость различий между контрольными и опытными данными;
Р3 — значимость различий между исходными и опытными данными.
цессов в ране, является фибронектин — высокомолекулярный гликопротеин, синтезируемый фибробластами.
Таким образом, фибробласты являются основной единицей соединительной ткани, которые одними из первых реагируют на повреждение (ранение) [1,2,3,6].
На кафедре патфизиологии Читинской медицинской академии были проведены исследования, по результатам которых выяснено, что добавление цитомединов в культуру фибробластов вызывает изменения интенсивности их деления. Имеется обширная литература, посвященная факторам, которые усиливают или тормозят пролиферацию, дифференцировку, хемотаксис, адгезию, биосинтетическую и десмолитическую активность фибробластов. Поэтому нами была предпринята попытка определить характер влияния цитомединов, полученных до и после кровопускания на некоторые свойства культивируемых фибробластов.
Материалы и методы
Целью нашего исследования явилось изучение биологических свойств пептидов, выделенных из печени и сердца животных, перенесших кровопотерю.
Исследования проводились на базе Бурятской государственной сельскохозяйственной академии, Республиканского клинического госпиталя для ветеранов войн г.Улан-Удэ, кафедре патфизиологии Читинской государственной медицинской академии, областной клинической больницы г.Чита.
Эксперименты проведены на 20 баранах. Все животные были разделены на 2 группы: опытные (10 баран), которым пунктировали яремные вены и извлекали кровь в объеме равной 20% ОЦК за 5 дней до забоя и контрольные без предварительного кровопускания (10 баран). Животные содержались в стандартных услови-
ях вивария БСХА на обычном рационе, при температуре 21-22°С и естественном световом дне. Забой проводился в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». Для получения цитомединов были взяты внутренние органы баран — печень и сердце.
Получение цитомединов проводилось методом уксусно-кислой экстракции с последующим осаждением комплекса полипептидов ацетоном и очисткой методом гель-фильтрации.
Влияние цитомединов на активность фибро-бластов исследовали в 7 параллельных культурах. Фибробласты выделяли по стандартной методике. С этой целью в стерильные пластиковые пробирки вносили по 1,0 мл стабилизированной гепарином крови, добавляли 5 мл среды БРМ1-1640, 1 мл эмбриональной телячьей сыворотки, 0,1 мл 10% гентамицина и ФГА в стандартной концентрации. В культуру фибробластов через 2 суток вносили пептиды в концентрации 700 мкг/мл. Клетки культивировали в течение 3 часов при 1=37°С. Через 3 часа после посева флаконы извлекали из термостата, суспензию фибробластов центрифугировали 10 минут при 1500 об/мин. Полученный супернатант исследовали в двух направлениях — определяли характер его влияния на процессы свертывания крови и фибринолиз.
При определении АЧТВ к 0,1 мл супернатанта и каолин-кефалиновой смеси добавляли 0,1 мл плазмы доноров, инкубировали, затем добавляли хлористый кальций.
Для определения фибринолиза к плазме добавляли по 0,1 мл супернатанта. Далее исследования проводились по обычной методике.
Результаты и обсуждение
В результате проведенных исследований было установлено, что:
Внесение в культуру фибробластов пептидов ин-тактных животных сопровождалось сокращением АЧТВ (р1<0,05). Вместе с тем внесение в культуру фи-бробластов пептидов, полученных из органов опытных животных сопровождалось большим сокращением АЧТВ (р2<0,05, р3<0,05).
Как известно в тесте АЧТВ максимально активируются внешний и внутренний пути коагуляции. Культивируемые фибробласты в присутствии интакт-ных и особенно опытных пептидов, вероятно, секрети-руют тканевой фактор.
После добавления пептидов из печени и сердца, особенно «опытных пептидов» ингибируется коалиновый фибринолиз (р1<0,001, р2<0,001).
Известно, что при добавлении коалинов в плазму происходит активация фактора Хагемана, выступающего а качестве активатора плазминогена. Вероятно, вследствии антипротеазных свойств пептидов тормозится контактная активация, следовательно, удлиняется время коалинового фибринолиза (табл. 1, 2).
В исследованиях с пептидами из печени и сердца баран до и после кровопотери мы наблюдали ускорение эуглобулинового фибринолиза (р1<0,001; р2<0,001).
Известно, что в кислой среде и при низкой температуре происходит осаждение криопреципитата, в котором в основном находятся активаторы и отсутствуют ингибиторы фибринолиза. Поэтому супернатант культуры фибробластов сокращал время эуглобулинового фибринолиза (табл. 1, 2).
Так супернатант фибробластов в присутствии ин-тактных пептидов из печени и сердца животных сокращает коалиновое время (р1<0,05, р3<0,05) и еще в большей степени при внесении «опытных» пептидов (р1<0,05, р3<0,05). Этот факт еще раз подчеркивает о продукции фибробластами тканевого фактора (табл. 1, 2).
Таблица 2
Исследование супернатанта, полученного при добавлении пептидов из сердца баран к культуре фибробластов (N=7)
Изучаемый показатель Контроль С добавлением контрольных пептидов С добавлением опытных пептидов
АЧТВ, сек Р1 Р2 Р3 89,43±3,4 82,27±2,5 <0,05 75,4±1,6 <0,05 <0,05
Коалиновое в ремя, сек Р1 Р2 Р3 41,2±0,54 38,4±0,52 <0,05 37,2±0,34 <0,05 <0,05
Протромбиновое время, сек Р1 Р2 Р3 21,0±0,47 20,4±0,28 19,5±0,35 <0,05 <0,05
Тромбиновое время, сек Р1 Р2 Р3 15,0±0,51 14,4±0,38 13,8±0,47 <0,05
Фибринолиз каолиновый, мин Р1 Р2 Р3 8,0±1,41 15,29±2,81 <0,001 10,14±1,34 <0,01 <0,05
Фибринолиз эуглобулиновый, мин Р1 Р2 Р3 190,0±14,13 165,7±9,33 <0,01 177,7±7,93 <0,05
Примечание:
Р1 — значимость различий между исходными и контрольными данными;
Р2 — значимость различий между контрольными и опытными данными;
Р3 — значимость различий между исходными и опытными данными.
Таким образом, полученные данные свидетельствуют в пользу того, что интактные и особенно «опытные» пептиды стимулируют культивированные фибробласты, что сопровождается выделением тканевого фактора и активаторов плазминоге-на. В процессе репарации тканей после травмы с кровопотерей образуются полипептиды, стимулируя миграцию фибробластов к месту повреждения. Фибробласты способствуют более быстрому образованию фибрина и параллельно реканализируют сосуды. Безусловно, это обстоятельство является положительным фактом, так как способствует ускоренной репарации ран. Экспериментальное изучение дробного кровопускания, а также вековой опыт применения в традиционной медицине по показаниям подтверждают эффективность этого метода лечения.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков Н.Н. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. — М.: Медицина, 1989. — 320 с.
2. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Цитомедины. 25-летний опыт экспериментальных и клинических исследований. — СПб., Наука, 1998. — 310 с.
3. Кузник Б.И., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы: Применение в травматологии, хирургии, стоматологии и онкологии. — М.: Вузовская книга, 2004. — 400 с.: ил.
4. Кузник Б.И., Лиханов И.Д., Цепелев В.Л., Сизоненко
В.А. Теоретические и клинические аспекты биорегулирующей терапии в хирургии и травматологии. — Новосибирск: Наука, 2008. — 311 с.
5. Саркисов Д.С., Алексеев А.А., Глущенко Е.В. и др. Теоретические и практические аспекты использования культивированных фибробластов при восстановлении целостности кожных покровов//Вестник Российской академии медицинских наук. — 1996, №6. — С. 6-11.
6. Туманов В.П., Глущенко Е.В., Морозов С.С., Саркизов Д.С. Использование культивированных фибробластов при лечении ожоговых ран//Бюлл. экспер. биол. и мед. — 1990, №4. — С.400-402.
Адрес для переписки: 670047, Республика Бурятия, г. Улан-Удэ, ул. Пирогова, 30 «А» Республиканский клинический госпиталь для ветеранов войн, кафедра терапии и традиционной медицины.
Есаулова Ирина Николаевна, тел/факс: 8 (301-2) 41-66-70, моб/тел: 8 (9021) 66-18-18, е-шай^аи1оуа^@шай.ш
© ФЕДЧИШИН О.В., ТРОФИМОВ В.В., КЛИМЕНОВ В.А. — 2009
ФОРМИРОВАНИЕ И СВОЙСТВА ОКСИДНЫХ ПОКРЫТИЙ, НАНЕСЕННЫХ ХИМИЧЕСКИМ СПОСОБОМ НА ТИТАН ВТ 1-0, ОБРАБОТАННЫЙ УЛЬТРАЗВУКОМ
О.В. Федчишин1, В.В. Трофимов1, В.А. Клименов2 ('Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра ортопедической стоматологии, зав. — д.м.н., проф. В.В. Трофимов;
2Томский политехнический университет, ректор — д.т.н., проф. П.С. Чубик, Научно-исследовательский институт интроскопии, директор — д.т.н. В.А. Клименов)
Резюме. В этой части работы решалась задача получения биоинертных покрытий на образцах титана ВТ1-0, обработанного ультразвуком. Ультразвуковое воздействие обеспечивает улучшенные прочностные свойства покрытий на имплантатах.
Ключевые слова: имплантат, ультразвук, титан.
FORMATION AND PROPERTIES THE OXIDE COVERINGS PUT IN THE CHEMICAL WAY ON TITAN ВТ 1-0, PROCESSED BY ULTRASOUND
O.V. Fedchishin, V.V. Trofimov, V.A. Klimenov (Irkutsk State Institute of Continuing Medical Education Tomsk Polytechnical University)
Summary. In this part of work the task of elaboration of bioinert coverings on samples of titan ВТ1-0 processed with ultrasound was considered. Ultrasonic influence provides improved properties of coverings on implant.
Key words: implant, ultrasound, the titan.
