CC BY
33
Влияние пептидов на фибринолиз
Таблица 2
Изучаемый показатель Без добавления пептидов Пептиды из органов животных до кровопотери Пептиды из органов животных после кровопотери
легкие плазма печень сердце легкие плазма печень сердце
Фибрино-лиз эуглобули-новый, мин pi p2 p3 190,0±14,13 157,7±12,04 91,0±11,92 <0,001 186,4±25,2 163,7±12,84 188,7±13,1 106,4±12,15 <0,01 190,7±17,66 157,3±12,27
Фибрино-лиз каолиновый, мин pi p2 p3 8,0±i,41 7,14±1,35 22,43±3,51 <0,01 14,43±1,51 <0,01 20,0±2,16 <0,01 6,05±1,14 £ ' LOLO +1 © © Г". о© ,5 < < тг 10,06±1,06 <0,01 6,74±1,49 <0,001
Условные обозначения:
р1 — значимость различий между исходными и контрольными данными; р2 — значимость различий между контрольными и опытными данными; р3 — значимость различий между исходными и опытными данными.
ЛИТЕРАТУРА
1. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков Н.Н. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. М.; Медицина, 1989. — 320 с.
2. Кузник Б.И., Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Цитомедины. 25-летний опыт экспериментальных и клинических исследований. СПб.; Наука, 1998. — 310 с.
3. Кузник Б.И., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы:
Применение в травматологии, хирургии, стоматологии и онкологии. — М.: Вузовская книга, 2004. — 400 с.
4. Кузник Б.И., Лиханов И.Д., Цепелев В.Л., Сизоненко В.А. Теоретические и клинические аспекты биорегулирующей терапии в хирургии и травматологии — Новосибирск: Наука, 2008. — 311 с.
Информация об авторе: 670047, республика Бурятия, г. Улан-Удэ ул. Пирогова 30а, Р еспубликанский госпиталь для ветеранов войн Кафедра медицинской реабилитации ИГИУВ.
Тел. 8-(3012) 43-07-88, е-шаИ: [email protected] Тарнуев Владимир Абогоевич — к.м.н., доцент кафедры медицинской реабилитации ИГИУВ
© ЕСАУЛОВА И.Н., ЦЫБИКОВ Н.Н., ТАРНУЕВ В.А. — 2010
ВЛИЯНИЕ ЦИТОМЕДИНОВ, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ СЕРДЦА И ПЕЧЕНИ ЖИВОТНЫХ, ПЕРЕНЕСШИХ КРОВОПОТЕРЮ, НА ЭКСПРЕССИЮ МАРКЕРОВ Т-, В-ЛИМФОЦИТОВ И М-КЛЕТОК
И.Н.Есаулова1, Н.Н.Цыбиков2, В.А.Тарнуев1 ('Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра медицинской реабилитации, зав. — д.м.н., проф. Д.Д. Молоков; 2Читинская государственная медицинская академия, ректор — д.м.н., проф. А.В.Говорин, кафедра патологической физиологии, зав. — д.м.н., проф. Н.Н. Цыбиков)
Резюме. Целью нашего исследования является углубленное изучение механизма действия метода дробного кровопускания в свете современной теории рефлексотерапии, раскрыть механизмы действия регуляторных пептидов, выделенных из тканей сердца и печени у животных, при кровопускании и влияние их на иммунодефицитные состояния. В результате проведенных исследований изучен и объективно доказан один из механизмов лечебного действия метода дозированного кровопускания, а именно установлено, что цитомедины, выделенные из внутренних органов (сердца и печени) экспериментальных животных усиливают экспрессию CD3-, CD4-, CDS-рецепторов и NK-клеток на лимфоцитах, полученных из крови больных с вторичным иммунодефицитом.
Ключевые слова: кровопускание, цитомедины, иммунодефицитные состояния, CD- рецепторы.
INFLUENCE OF CYTOMEDINES RESULTING FROM HEART AND LIVER OF ANIMALS, WHICH TRANSMITTED BLOODLETTING ON THE EXPRESSION MARKERS T-, B-LYMPHOCYTES AND NK-CELLS
I.N. Esaulova1, N.N Tsibikov2, V.A.Tarnuev1 ('Irkutsk State Institute of Postgraduate Medical Education, 2Chita Medical State Academy)
Summary. The purpose of our research is first of all to study an action mechanism of separate bloodletting techinque from the standpoint of contemporary theory of reflexotherapy, secondly to expose action mechanisms of regulatory peptides isolated from heart and liver tissues by animals and finally to analyse their influence on immunodeficiency states. As a consequence of conducted research, one of the mechanisms of therapeutic action of dosated bloodletting was studied and impartially proved, and namely it was ascertained that cytomedines selected from internal organs (heart and liver) of experimental animals increase expression of CD3-, CD4-, CDS- receptors and NK-cells on lymphocytes received from sick patients with secondary immunodeficiency.
Key words: bloodletting (phlebotomy), cytomedines, immunodeficiency states, CD-receptors.
Кровопускание — это один из наиболее распространенных методов лечения в тибетской медицине и относится к группе немедикаментозных методов лечения заболеваний, наряду с рефлексотерапией, прижиганием, массажем и другими способами лечения. В организме человека вырабатывается большое количество биологически активных соединений, способных влиять на течение физиологических и биохимических процессов в организме [2,4,8]. Наиболее важную роль в регуляции физиологических функций отводят комплексам щелочных полипептидов, получившим название ци-томедины [2,3,4]. Цитомедины входят в состав клеток различных органов и тканей организма. В норме цито-медины являются пептидами межклеточной регуляции и обеспечивают гомеостаз организма. Достаточно четко установлено, что при таких патологических состояниях как воспаление, сепсис, термотравма, интоксикации, хирургическая травма, тяжелые соматические заболевания увеличивается количество цитомединов, обладающих способностью стимулировать систему иммунитета [1,2,4,5,7]. Последнее проявляется в увеличении количества клеток, несущих рецепторы, свидетельствующие об активации различных клонов лимфоцитов, происходит увеличение количества иммуноглобулинов, актируется система комплемента и нарастает ферментативная активность системы кровотока [6,7,8].
Не исключено, что кровопускание может сопровождаться усилением синтеза цитомединов, повышающих резистентность организма.
Цель работы: изучить влияния цитомединов, полученных из сердца и печени животных, перенесших кровотечение, на динамику CD-рецепторов лимфоцитов выделенных из крови больных с вторичным иммунодефицитом. Для анализа были взяты показатели, характеризующие состояние специфического иммунитета: CD3-, CD4-, CD8-рецепторы, CD4/CD8 (ИРИ), CD22-рецепторы, а также NK-клетки.
Материалы и методы
На базе Республиканского клинического госпиталя для ветеранов войн в отделении восточных методов лечения, Бурятской государственной сельскохозяйственной академии, иммунологической лаборатории Республиканской клинической больницы им. Н.А.
Семашко была предпринята попытка доказать лечебный эффект дробного кровопускания с помощью анализа иммунного статуса больных до и после введения в кровь (in vitro) комплекса щелочных полипептидов (цитомединов), выделенных из внутренних органов (сердца и печени) животных, перенесших кровопускание.
Эксперименты проведены на 50 кроликах и 20 баран. Все животные были разделены на 2 группы: опытные (25 кроликов и 10 баран), которым пунктировали яремные вены и извлекали кровь в объеме равной 20% ОЦК за 5 дней до забоя и контрольные без предварительного кровопускания (25 кроликов и 10 баран). Животные содержались в стандартных условиях вивария Бурятской государственной сельскохозяйственной академии на обычном рационе, при температуре 21-22°С и естественном световом дне. Забой проводился в соответ-
ствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных». Для получения цитомединов были взяты внутренние органы кроликов и баран — печень и сердце.
Щелочные полипептиды из внутренних органов кроликов и баран выделяли методом уксусно-кислой экстракции по методу В.Г. Морозова и В.Х. Хавинсона с последующим осаждением комплекса полипептидов ацетоном и очисткой методом гель-фильтрации. Были взяты сердце и печень экспериментальных животных.
Наши исследования проведены на 30 больных (20 мужчин и 10 женщин) Республиканского клинического госпиталя для ветеранов войн, Республиканской клинической больницы г. Улан-Удэ в возрасте от 19 до 59 лет (средний возраст 40,4 лет). Клинические наблюдения проводились над больными с явлениями иммунодефицита: ХОБЛ, бронхиальная астма, послеоперационные состояния, сахарный диабет, неспецифический язвенный колит. Диагнозы выставлены на основании жалоб, данных анамнеза, объективного осмотра, а также лабораторных и инструментальных методов исследования согласно современным стандартам обследования.
В контрольную группу вошли 24 человека (20 женщин и 4 мужчин), в возрасте от 31 до 55 лет (средний возраст 39,6), не имеющих соматических, психических заболеваний.
Все участники исследования подписывали информированное согласие на участие в исследовании.
Пептиды из тканей сердца и печени животных вносили в кровь здоровых доноров и больных с иммунодефицитом и воспалением. Для тестирования бралась свежая гепаринизированная кровь пациентов. Лимфоциты доноров выделялись на градиенте Фиколл-400, дважды отмывались средой 199 или раствором Хенкса, доводились до концентрации 2 млн. клеток в 1,0 мл. Определение СD-рецепторов лимфоцитов проводилось с помощью моноклональных антител реакцией непрямой иммунофлюоресценции (РИФ). Пептиды, полученные из тканей сердца и печени животных, инкубировались с культурой лимфоцитов в течение 30 минут.
Статистическую значимость различий оценивали
Таблица 1
Влияние пептидов, полученных из сердца баран до и после кровопотери на экспрессию CD-рецепторов лимфоцитов здоровых и больных людей (М±т)
Изучаемые показатели (х109 кл/мкл) Лимфоциты здоровых (n=24) Лимфоциты больных (n=30)
Контроль До кровопотери После кровопотери Контроль До кровопотери После кровопотери
CD3 P1 P2 P3 0,51±0,09 0,6±0,05 0,63±0,07 0,63±0,21 0,S6±0,39 0,92±0,15 <0,05
CD4 P1 P2 P3 0,4S±0,04 0,51±0,06 0,53±0,05 0,4±0,12 0,74±0,02 <0,05 0,6S±0,09 <0,05
CDS P1 P2 P3 0,33±0,07 0,35±0,04 0,42±0,08 <0,05 0,24±0,06 0,39±0,0S <0,05 0,49±0,1 <0,05
CD22 P1 P2 P3 0,31±0,02 0,35±0,04 0,37±0,07 0,26±0,03 0,29±0,06 0,34±0,11
NK P1 P2 P3 0,4±0,07 0,23±0,04 <0,05 0,52±0,03 <0,05 <0,05 0,23±0,05 0,45±0,12 <0,05 0,39±0,06 <0 ,05
h/s P1 P2 P3 1,72±0,47 1,56±0,23 1,6±0,43 1,65±0,16 2,27±0,93 1,94±0,7
Примечание:
Р1 — достоверность различий между контролем и пептидами до кровопотери;
Р2 — достоверность различий между пептидами до кровопотери и после кровопотери; Р3 — достоверность различий между контролем и пептидами после кровопотери.
Таблица 2
Влияние пептидов, полученных из печени баран до и после кровопотери на экспрессию CD-рецепторов крови здоровых и больных (М±т)
Изучаемые показатели (х109 кл/ мкл) Лимфоциты здоровых n=24 Лимфоциты больных n=30
Контроль До кровопотери После кровопотери Контроль До кровопотери После кровопотери
CD3 P1 P2 P3 0,61±0,09 0,5S±0,1 0,53±0,12 0,63±0,21 1,01±0,18 < 0,05 1,06±0,12 <0,05
CD4 P1 P2 P3 0,4S±0,04 0,47±0,11 0,5±0,1 0,4±0,11 0,72±0,2 <0,05 0,76±0,21 <0,05
CDS P1 P2 P3 0,33±0,07 0,35±0,06 0,31±0,05 0,24±0,05 0,3S±0,03 <0,05 0,37±0,0S <0,05
CD22 P1 P2 P3 0,31±0,04 0,37±0,13 0,38±0,11 0,26±0,03 0,41±0,21 0,35±0,09
NK P1 P2 P3 0,4±0,11 0,27±0,1 <0,05 0,29±0,12 <0,05 0,23±0,05 0,51±0,0S <0,05 0,45±0,06 <0,05
h/s P1 P2 P3 1,72±0,47 1,48±0,3 1,63±0,1S 1,65±0,16 2,04±0,S2 1,97±0,22 <0,05
Примечание:
Р1 — значимость различий между контролем и пептидами до кровопотери;
Р2 — значимость различий между пептидами до кровопотери и после кровопотери; Р3 — значимость различий между контролем и пептидами после кровопотери.
по критерию Манн-Уитни при сравнении двухнезависимых выборок. Описание количественных признаков при нормальном распределении в группах сравнения представлено в виде М±т, где М — средняя арифметическая, т — стандартная ошибка средней. Изменения считались статистически значимыми при р < 0,05.
Результаты и обсуждение
Нами установлено, что пептиды, полученные из сердца и печени опытных животных в краткосрочной культуре усиливают экспрессию маркеров cDз-, CD4-, CD8-рецепторов и ЫК-клеток в большей степени на лимфоцитах больных значимо (р< 0,05). При этом определенной динамики CD22 не выявлено (табл. 1).
Пептиды, полученные из тканей интактных животных усиливают экспрессию маркеров CD-рецепторов в меньшей степени. Следует отметить, что пептиды, полученные из внутренних органов (сердца и печени) как ин-тактных, так и опытных животных в меньшей степени вызывали положительную динамику CD-рецепторов на лимфоцитах, полученных из крови практически здоровых (таб.2).
В результате проведенных исследований изучается и доказывается один из механизмов лечебного действия метода дозированного кровопускания. Установлено, что цитоме-дины, выделенные из внутренних органов (сердца и печени) экспериментальных животных усиливают экспрессию маркеров CD3-, CD4-, CD8-рецепторов и ЫК-клеток на лимфоцитах, полученных от больных с вторичным иммунодефицитом. Таким образом, клиническое и экспериментальное изучение дозированного кровопускания, а также опыт его применения по показаниям подтверждают выраженную эффективность этого метода как важного дополнительного метода лечения заболеваний.
ЛИТЕРАТУРА
1. Абаев Ю.К. Справочник хирурга. Раны и раневая инфекция // Ростов на Дону: Феникс, 2006. — 427 с.
2. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цыбиков Н.Н. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. — М. Медицина, 1989. — 320 с.
3. КузникБ.И., Витковский Ю.А. Иммунный ответ и система гемостаза // Проблемы физиологии и патологии системы гемостаза. Барнаул. 2000. — С. 119-127.
4. Кузник Б.И., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы // М. 2004. С. 11-86.
5. Произаев К.И., Ильницкий А.Н., Князькин И.В., Кветной И.М. Боль. Молекулярная нейроиммуноэндокринология и
клиническая патофизиология. — СПб: Издательство ДЕАН, 2006. — 304 с.
6. Сепиашвили Р.И. Функциональная система иммунного гомеостаза //Аллергология и иммунология. — 2003. — Т.4. — №2. — С.5-14.
7. Хавинсон В.Х., Витковский Ю.А., Кузник Б.И. и др. Влияние тималина на иммунитет и содержание провоспали-тельных и противовоспалительных цитокинов при переломах длинных трубчатых костей, осложненных остеомиелитом // Иммунология. — 2001. — №1. — С. 22-25.
8. Kuznik B.I., Tsibikov N.N. Cytokines, Immunoglobulins and Hemostasis // Hematol. Rev. — 1996. — V. 7, Part 2. — P. 43-70.
Информация об авторах: 670047, Республика Бурятия, г. Улан-Удэ ул. Пирогова 30а, тел/факс: (3012) 41-66-70, е-тай: [email protected] Есаулова Ирина Николаевна — ассистент;
Цыбиков Намжил Нанзатович — д.м.н., профессор, заведующий кафедрой; Тарнуев Владимир Абогоевич — к.м.н., доцент.
© МАНЬКОВ А.В., ГОРБАЧЕВ В.И. — 2010
ИЗМЕНЕНИЯ ВЕГЕТАТИВНОГО ГОМЕОСТАЗА И ГЕМОДИНАМИКИ В УСЛОВИЯХ СПИНАЛЬНОЙ АНЕСТЕЗИИ
А.В. Маньков, В.И. Горбачев (Иркутский государственный институт усовершенствования врачей, ректор — д.м.н., проф. В.В. Шпрах, кафедра анестезиологии и реаниматологии, зав. кафедрой — д.м.н., проф. В.И. Горбачев).
Резюме. В этой статье представлены данные динамики показателей вариабельности ритма сердца и гемодинамики, а также их коррекция в условиях спинномозговой анестезии. Регистрация кардиоинтервалов проводилась комплексом «ORTO Science» (n=113). Предоперационная оценка вариабельности сердечного ритма позволяет вы-
