CC BY
0
При л о ж ен и е 1
исследования и/или FISH, методом ПЦР в режиме реального времени, методом секвенирования кДНК гена BCR::ABL типа р210. Все пациенты получали иматиниб (ИМ.) в дозах, соответствующих клиническим рекомендациям.
Результаты и обсуждение. Зарегистрированная заболеваемость ХМЛ в РБ в 2020 г. составляла 0,80 и за последние 20 лет выросла практически в 2 раза (^<0,05). Двадцатилетний анализ распространенности ХМЛ по РБ указывает на значимое увеличение этого показателя (в 5 раз) с 2008 г., а именно, с момента внедрения таргетного лечения ИТК и выявления РЬ хромосомы. Показатель смертности ХМЛ по годам колебался от 0,17 до 0,39 на 100 000 населения, однако среднепятилетний показатель смертности достоверно не менялся (^>0,05). Коэффициент ранговой корреляции Спирмена междууровнем экспрессии BCR-ABL и процентным содержанием РЬ-позитивных клеток составил 0,8 (^<0,0001). Изучение профиля мутаций киназно-го домена в гене BCR::ABL в нашем исследовании показало, что у 32% пациентов, резистентных к терапии ИТК встречались 4 миссенс-му-тации: T315I, М351Т, M244V и ffiPÖÄ, из них две ТЛЯ и Ж257Г в виде
компаунд-мутации. Сравнительный анализ различных мутаций в киназном домене и уровня ВСК::АВЬ показал, что наиболее высокий средний уровень экспрессии химерного гена регистрировался при наличии компаунд-мутации (Т3151+М351Т), а также мутации М351Т (медиана экспрессии ВСК::АВЬ 442% и 95% соответственно). Так, в 100% случаев при БК и в ФА выявлялись неблагоприятные мутации: Т3151 в монорежиме или в сочетании с М351Т. В ХФ мутации встречались только у 17% больных и только в виде мономутаций, а мутация Т3151 не была обнаружены.
Заключение. Таким образом, заболеваемость ХМЛ в РБ соответствует показателям по России. С момента внедрения специфической диагностики и ИТК достоверно вырос показатель заболеваемости и распространенности. Относительно стабильные показатели смертности указывают на существование группы пациентов резистентных к терапии ИМ. Анализ данных 32% резистентных к лечению пациентов ХМЛ показал, что у них встречаются 4 наиболее прогностически неблагоприятные миссенс-мутации и компаунд-мутации, что следует учитывать при мониторинге и подборе персонифицированного лечения.
Свидельская Г. С.1, Брускова Е. Н.1, Игнатова А. А.1, Полетаев А. В.1, Серегина Е. А.1, Жарков П. А.1, Миндукшев И. В.2,
Гамбарян С. П.2, Пантелеев М. А.1
ИССЛЕДОВАНИЕ КОЛЛАГЕН-ИНДУЦИРОВАННОЙ АГРЕГАЦИИ ТРОМБОЦИТОВ МЕТОДОМ МАЛОУГЛОВОГО СВЕТОРАССЕЯНИЯ
1ФГБУ«НМИЦДГОИ им. Дмитрия Рогачева» Минздрава России, 2Институтзволюционной физиологии и биохимии им. И. М. Сеченова, Санкт-Петербург, Россия
Введение. Метод малоуглового светорассеяния (Low angle Scattering, LaSca) позволяет оценить агрегацию и изменение формы тромбоцитов при их активации. Принцип метода: луч лазера падает на кювету с разбавленной до 10000/мкл суспензией тромбоцитов, рассеянный под углами от 0,5 до 12 градусов свет регистрируется фотодетекторами, в результате получают профиль интенсивности рассеянного света, который зависит от угла рассеяния и коррелирует с размером и формой наблюдаемых частиц (Mindukshev et al. ClinCbemLabMed, 2012). По сравнению с классической агрегомет-рией по Борну метод LaSca обладает рядом преимуществ: требует меньшего объема крови, что критически важно для педиатрических пациентов, может использоваться при тромбоцитопении, а также вместо цитратной плазмы используется буфер с физиологической концентрацией ионов кальция.
Цель работы. Апробация метода LaSca для измерения агрегации тромбоцитову здоровых взрослых, а также пациентов с кровоточивостью при активации тромбоцитов коллагеном.
Материалы и методы. В исследование включены здоровые взрослые добровольцы (я=18, 18—40 лет), педиатрические пациенты с геморрагическим синдромом (л=10), а также брат и сестра с синдромом Германского — Пудлака (ГП). Исследования агрегации методом LaSca проводились на анализаторе LaSca (Biomedical systems, Санкт-Петербург) при температуре в кювете 230С и перемешивании 1200 об/мин. Тромбоциты, разбавленные в модифицированном HEPES буфере, активировали 0,4 мг/мл коллагена. Для изучения влияния секретиру-емого аденозиндифосфата (АДФ) на коллаген-индуци-рованную агрегацию тромбоцитов, тромбоциты инкубировали с апиразой (100 ед.акт./мл) или тикагрелором (300 мМ). Оценивали максимальную скорость агрегации Vmax, амплитуду агрегации А(1), а также лаг-фазу tlag и время свертывания tclot.
Результаты и обсуждение. Параметры агрегации (Vmax, А(1) и tlag), измеренные методом LaSca умеренно коррелировали с параметрами агрегации по Борну среди здоровых доноров и пациентов с кровоточивостью (коэффициент корреляции Пирсона 0,7—0,8, ^<0,05).
В коллаген-индуцированной агрегации, измеряемой LaSca, уже через 30 с после добавления активатора наблюдали активацию тромбоцитов, а образование агрегатов начиналось через 90 с. Ингибирование рецепторов АДФ (апиразой и тикагрелором) привело к снижению А(1) и Утах, а также увеличению 1с1о1 и tlag, что указывает на чувствительность метода 1^а8са к секреции АДФ из плотных гранул тромбоцитов при используемом разведении суспензии тромбоцитов 10000/мкл. У пациентов с синдромом ГП (дефицит плотных гранул тромбоцитов) агрегация по Борну с 2 мг/мл коллагена была в референсном диапазоне [58%у мальчика и 67%у девочки, норма 50—80%], в то время как в агрегации, измеренной методом LaSca, были достоверно снижены скорость агрегации Утах, удлинены 1с1о1 и tlag по сравнению со здоровыми добровольцами (рисунок).
Заключение. Метод LaSca демонстрирует хорошую корреляцию с классической агрегометрией по Борну, работает при физиологической концентрации ионов кальция, использует меньшую концентрацию агониста (коллагена) и обладает улучшенной чувствительностью к дефициту плотных гранул тромбоцитов.
Исследование поддержано грантом РИФ 23-15-00142.
