CC BY
50
УДК 611.127:615.212.7] - 018 - 019
1МУНОГ1СТОХ1М1ЧНЕ ДОСЛ1ДЖЕННЯ ПЕРЕДСЕРДЬ Б1ЛОГО ЩУРА П1Д Д1€Ю
ОПЮ1ДШ
В робот! представлено результати iMyHoricTOxiMi4Horo дослiдження передсердь бших щурiв на paHHix термшах експериментально! 6 тижнево! моделi ото!дно! штоксикаци на 60 статевозрiлих щурах-самцях вжом 4,5-5 мюящв, яким протягом 6 тижшв вводили ото!дний анальгетик "Налбуфш" з розрахунку 8 мг/кг маси тша на 1 тижнi експерименту, 15 мг/кг на 2 тижш експерименту 3i збiльшенням дози на 6 тижш експерименту до 35 мг/кг. Iмунoгiстoхiмiчне дoслiдження зразюв проводилося в Jeff Wrana's laboratory, Samuel Lunenfeld Research Institute, Mount Sinai Hospital, 600 University Ave Toronto з використанням антитш, до ^-ошо!дного рецептора, Caspase-3 (апоптоз) та Phospho-Histone H3 (прoлiферативнi процеси). При дослщженш встановлено, що ^-опю!дний рецептор лoкалiзуeться на саркoлемi кардioмioцитiв. Збiльшення його юлькосп спoстерiгаeться починаючи з 7 доби експерименту. Опю!дний анальгетик "Налбуфш" вже на 7 добу експерименту викликае явища апоптозу, якi на бшьш в^алених термiнах експерименту продовжують наростати. Прoлiферативнi процеси спoстерiгаються в дшянщ епiкарду передсердя щура спершу в стiнках судин, а згодом !хшх периваскулярних просторах. Данi процеси наростають до 14 доби та продовжують наростати на бшьш шзшх термшах oпioiднoi iнтoксикацii.
Ключов! слова: ¡мунопстсшм1я, серце щура, опю!дний анальгетик, апоптоз, ¡х -ошсидний рецептор.
Робота е фрагментом НДР « Структура оргатв та ix кровоносного русла в онтогенезi nid дieю лазерного оnромiнення та фармацевтичних засобiв при порушены кровопостачання, реконструктивних операщях та цукровому дiабетi». Номер державногреестраци: 0110U001854.
Невпинне зростання в Укра!ш та у свт наркозалежних ooi6 набуло характеру ешдемп, що зумовило низку нових сощальних, економ1чних, медичних та юридичних проблем [5, 7]. Особливу увагу привертае факт значного омолодження наркозалежних ос1б. За даними UNODC при ООН число наркозалежних оаб у 2012 рощ склало вщ 182 до 324 млн. ос1б, у вщ1 вщ 16 до 64 роюв [1, 3, 6]. Важливим е питання щодо використання ошо!д1в в ктшчнш практищ, зокрема при лшуванш хрошчного болю в онкохворих, постоперацшного болю та використання ошо!д1в в комбшованих препаратах, оскшьки в сит знеболювально! дп з ошо!дами можуть позмагатись небагато препараив i перспектившсть ix використання неможливо недоощнювати. Морфолопчш змши оргашв наркоспоживач1в описаш [2, 4], як на мшро-, так i на ультраструктурному р1вш, однак залишаються незрозумшими питання, як змши в органах викликають саме ошо!ди, оскшьки багато дослщниюв пов'язують змши у внутршшх органах наркомашв з1 способом життя та супутшми токсичними речовинами, як часто утворюються внаслщок кустарного виготовлення наркоречовини. Експериментальш ж дослщження в цьому напрямку фактично не проводились.
Метою роботи було дослщження передсердь бших щур1в на св1тлооптичному р1вш з використанням 1мунопстох1м1чних зразюв, з вщтворенням експериментально! 6 тижнево! модел1 ошо!дно! iнтoксикацi!.
Матерiал та методи дослщження. Для експериментального дослщження використано 60 статевозрших бших щур1в самщв масою 180-200г, вшом 4,5-5 мюящв, що були розподшеш на 3 групи. Перша група - експериментальна (по 5 тварин на 1 та 2 тижнях експерименту та наступних тижнях експерименту), разом 30 тварин. Тваринам вводили домязово ото!дний анальгетик "Налбуфш" з розрахунку 8мг/кг маси тша на 1 тижш експерименту, та 15 мг/кг на 2 тижш, з поступовим зростанням дози на 6 тижш до 35мг/кг маси тша. Друга група - контрольна: 18 тварин (по 3 тварини на кожен тиждень експерименту). Тваринам вводили дом'язово стерильний 0,9% розчин NaCl в об'ем1 1мл. Третя група - 12 штактних тварини вщповщно! стат1, вшу та маси.
Ошо!дний анальгетик "Налбуфш" за х1м1чною структурою (-)-17-(cyclobutylmethyl)-4,5a-epoxymorphinan-3,6a,14-triol hydrochloride близький до морф1ну. Кр1м фармаколопчно! д1! пов'язано! з тим, що вш е агошстом-антагошстом ошатних рецептор1в i вщповщно мае анальгезуючу д1ю, яка мае зв'язок з агонютичним впливом на к-рецептори, але й разом з тим сполука е антагошстом ц-рецептор1в, тому в не! вщсутня виражена ейфорична д1я.
Вс тварини мютились в умовах в1вар1ю на звичайному харчовому ращош Робота проводилась зпдно "Правил проведення робгг з використанням експериментальних тварин"(1977р.), Конвенщею Ради Свропи "Про охорону хребетних тварин, що використовуються в експериментах та шших наукових цшях "(1986р.), Директиви СЕС 3609(1986р.) та наказу МОЗ Укра!ни №281 вщ 01.11.2000 р. "Про м1ри по подальшому вдосконаленню оргашзацшних норм роботи з використанням експериментальних тварин", "Загальними етичними правилами
експерименпв на тваринах", ухваленими I Нацюнальним конгресом з бiоетики вiд 20 вересня 2001 року, м. Ки1'в, Закону Укра1'ни "Про захист тварин вщ жорстокого поводження" №3446 - IV вщ 21.02.2006 р. При виконанш роботи проводилися заходи по дотриманню принципiв етики для проведення бiомедичних дослiджень. Протокол комюп по бюетищ Львiвського нацiонального медичного ушверситету iменi Данила Галицького №2 вщ 20 лютого 2012 року. Забiр матерiалу для iмуногiстохiмiчного дослiдження здшснювали пiсля евтаназп щурiв шляхом внутршньо-очеревинного введення тiопенталу натрiю з розрахунку 25 мг на 1кг маси тша. У якост матерiалу для iмуногiстохiмiчних дослiджень використовували стшку правого передсердя.
Результати дослiдження та Тх обговорення. Iмуногiстохiмiчне дослщження зразюв проводилося в Jeff Wrana's laboratory, Samuel Lunenfeld Research Institute, Mount Sinai Hospital, 600 University Ave Toronto, за рахунок li повного фiнансового та матерiально-технiчного забезпечення, з використанням 3 видiв антитiл, зокрема до ц-ото!дного рецептора, Caspase-3 (апоптоз) та Phospho-Histone H3 (пролiферативнi процеси).
На препаратах, що були пофарбоваш з використанням антитiл до ц-ото!дного рецептора згiдно отриманих результатiв дослщження можна зробити висновок про локалiзацiю на сарколемi кардiомiоцитiв ц-опю1дного рецептора в нормi (рис. 1 в) та контролi (рис. 1 а). На 7-му добу експерименту спостерпаеться його збшьшення на сарколемi вдвiчi у порiвняннi з контролем та нормою та незначна його кшьюсть у просвт кардiомiоцитiв (рис. 1c). На 14 добу - кшьюсть ц-отощного рецептора збшыпуеться в 3-4 рази в пор1внянш з нормою та контролем (рис. Id).
wSwL
• Hfeg
'Ф^Г-Чх
■ " ч Л " -- • ■, * 1
Рис. 1. 1мунопстсш]шя серця щура з використанням антитш до ц-ошо!дного рецептора. а -доба експерименту. Збшьшення: х 400.
контроль, b - норма, c - 7доба, d -
На препаратах з Caspase-3 в штактних та в контрольних тварин спостерiгаються поодинокi кардiомiоцити з ознаками апоптозу (рис. 2 а, b). Явища апоптозу наростають починаючи з 7-доби експерименту в д^нщ епiкарду та периваскулярних просторiв. З 14 доби експерименту спостер^аються апоптичт змiни в кардiомiоцитах мiокарду передсердь, що досягають свого максимуму на 21-добу експерименту. На 7-му добу експерименту спостертаеться бiльш вираженi змiни в дiлянцi епiкарду, що сввдчить про апоптичнi процеси в епiкардi у порiвняннi з контрольними зразками (рис. 2c). На 14-ту добу експерименту наростае штенсившсть забарвлення в периваскулярних донках. На 14-ту добу експерименту спостертаеться зростання iнтенсивностi фарбування у мiокардi, що може свщчити про прискорення апоптичних змш кардюмющтв (рис. 1 d).
Рис. 2. 1мунопстсшм1я серця з використанням активовано! Caspase-3. а - контроль, в - норма, c - 7 доба експерименту, d - 14 доба експерименту. Збшьшення: х 400.
'■г? М V
jp:
Рис. 3. 1мунопстох1м1я серця з використанням Phospho-Histone H3 а - контроль, в - норма, c - 7доба експерименту, d - 14 доба експерименту. Збшьшення: х 400.
d
d
На препаратах з Phospho-Histone H3 спостерпаеться незначна пролiферацiя в групах контрольних ( рис. 3 а) та штактних тварин (рис. 3 в) в периваскулярних дшянках та в ешкардг На препаратах отриманих на 7-му (рис. 3 с) та 14 добу (рис. 3 d) експерименту спостернаеться тдвищення пролiферацil в периваскулярних дшянках, стшках судин та незначна пролiферацiя в дiлянцi епiкарду. Ознак пролiферацil мiокарду та ендокарду нами не виявлено.
1. Згiдно отриманих результат дослiдження ц-опю1дний рецептор локалiзуеться на сарколемi кардiомiоцитiв, та починаючи з 7 доби експерименту зростае його кшьюсть.
2. Опю1дний анальгетик "Налбуфш" на 7 добу експерименту викликае явища апоптозу, якi на бшьш вiддалених термiнах експерименту прискорюються.
3. Пролiферативнi процеси спостерiгаються в передсердi щура спершу в стшках судин, а згодом в 1хшх периваскулярних просторах в д^нщ еткарду. Данi процеси наростають до 14 доби та продовжуються на бшьш шзшх термiнах отощно! штоксикацн.
Перспективи подальших дослгджень передбачають проведення туногктохжчного дотдження на бтьш тзтх термшах onioidHoi штоксикаци з метою поглибленого вивчення динамжи морфологiчних змш у передсердях бтого щура.
1. Вiевський А. М. Нацюнальний зв^ щодо наркотично! ситуацп (даш 2010 року) для Свропейського мошторингового центру з наркотиюв та наркотично! залежнoстi. Укра!на. Тенденцi! розвитку, поглиблений огляд з обраних тем" / А. М. Вiевський, М. П. Жданова, С. В. Сидяк [та ш.] //- Ки!в, - 2011, 96 с.
2. Маянский Н. А. Состояние каспазы-3 при подавлении апоптоза нейтрофилов гранулоцитарно - макрофагальным колониестимулиру-ющим фактором / Н. А. Маянский // Иммунология. - 2001. - №2 . - С.22-25.
3. Шаповалов В. В. Судова фармащя: режим контролю наркотичних засoбiв для фармакокорекцй наркопащен™ з девiантнoю пoведiнкoю / В.В.Шаповалов //Укра!нський вiсник психоневролог!!. - 2011.-Том 19, №2(67). - С. 97-101.
4. Abbasi A. Opioid receptors blockade modulates apoptosis in a rat model of cirrhotic cardiomyopathy / A. Abbasi, A. Joharimoqaddam, N. Faramarzi [et al.] // - Ann Med Health Sci Res - 2014, Vol.4, P. 404-409.
5. Jonathan C. "The global recession's effect on drug demand - diluted by inertia" / C. Jonathan // - International Journal of Drug Policy, vol. 22, No. 5, September - 2011, P. 374-375.
6. United Nations Office on Drugs and Crime, World Drug Report - 2014, / United Nations publication, Sales No. E.14.XI.7.
7. Zuccato E. "Changes in illicit drug consumption patterns in 2009 detected by wastewater analysis" / E. Zuccato // - Drug Alcohol Depend, vol. 118, Nos. 2 and 3, November - 2011, P. 464-469.
ИММУНОГИСТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРЕДСЕРДИЙ БЕЛОЙ КРЫСЫ ПОД ВОЗДЕЙСТВИЕМ ОПИОИДОВ Покотило П. Б.
В работе представлены результаты иммуногистохими-ческого исследования предсердий белых крыс на ранних сроках экспериментальной 6 недельной модели опиоидной интоксикации на 60 половозрелых крысах-самцах в возрасте 4,5-5 месяцев, которым на протяжении 6 недель внутримышечно вводили опиоидный аналгетик" Налбуфин" из рассчета 8 мг/кг массы тела на 1 неделе эксперимента, 15 мг/кг на 2 неделе эксперимента с увеличением дозы на 6 неделе эксперимента до 35 мг/кг. Иммуногистохимическое исследование производилось в Jeff Wrana's laboratory, Samuel Lunenfeld Research Institute, Mount Sinai Hospital, 600 University Ave Toronto, с использованием антител к опиоидному рецептору, активированой Caspase-3(апоптоз) и Phospho-Histone Н3(пролиферативные процессы). При исследовании установлено, что ^-опиоидный рецептор размещается на сарколеме кардиомиоцитов. Увеличение его количества наблюдается начиная с 7 суток эксперимента. Опиоидный аналгетик" Налбуфин" уже на 7 сутки эксперимента вызывает апоптоз, который на более поздних сроках эксперимента продолжает увеличиваться. Пролиферативные процессы сначало наблюдаются в стенках сосудов, позже в их периваскулярных пространствах в области епикарда. Данные процессы продолжают наростать на болем поздних сроках эксперимента.
Ключевые слова: иммуногистохимия, сердце крысы, опиоидный аналгетик, апоптоз, ^ -опиоидный рецептор.
Стаття надшшла 3.10.2014 р.
IMMUNOHISTOCHEMICAL STUDY OF WHITE RAT ATRIUM AFTER THE EFFECT OF OPIOID INTOXICATION Pokotylo P. B.
The results of immunohistochemical study of atrial white rats in the early stages of the experimental 6-week model of opioid intoxication on 60 sexually mature male rats at the age of 4.5-5 months, which for 6 weeks intramuscularly administered opioid analgetik" Nalbufin" calculation of 8 mg / kg body once a week experiment 15 mg / kg at week 2 of the experiment with increasing dose at week 6 of the experiment to 35 mg / kg. Immunohistochemical examination was carried out in Jeff Wrana's laboratory, Samuel Lunenfeld Research Institute, Mount Sinai Hospital, 600 University Ave Toronto, using antibodies to ^-opioid receptor activation Caspase-3 (apoptosis) and Phospho-Histone H3 (proliferative processes). In the study found that the opioid receptor located on sarkoleme cardiomyocytes. Increasing the amount thereof is observed starting from 7 days of the experiment. Opioid analgetik" Nalbufin" already on the 7th day of the experiment causes apoptosis, which in the later stages of the experiment continues to increase. Proliferative processes were first observed in the vessel walls, and later in their perivascular spaces in epikarda. These processes continues to increase at Bol later stages of the experiment.
Key words: immunohistochemistry, rat heart, opioid analgetics, apoptosis, ^-opioid receptors.
Рецензент Срошенко Г.А.
