CC BY
85
УДК 616.36:615.9:615.37+615.244
ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ И ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ ЭФФЕКТЫ РАЗЛИЧНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ "ФОСФОГЛИВА" В УСЛОВИЯХ ИНДОМЕТАЦИНОВОГО
ТОКСИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ
© Кедровская Н.А., Белоконова О.В.
Кафедра биологической химии Курского государственного медицинского университета, Курск
E-mail: [email protected]
В условиях токсического индометацинового поражения печени, сопровождающегося снижением иммунной реактивности, фагоцитоза и повышением кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, введение "Фосфоглива" или инъекций "Фосфоглива" в течение 14 суток полностью нормализует процессы фагоцитоза, частично формирование гуморального и клеточного иммунного ответа и кисло-родзависимую активность полиморфноядерных лейкоцитов; инъекции препарата нормализуют развитие гиперчувствительности замедленного типа, кислородзависимую активность гранулоцитов, стимулируют гуморальный иммунный ответ и фагоцитоз. "Фосфоглив" или "Фосфоглив" для инъекций частично, а "Фосфоглив Форте" полностью нормализует повышенные токсикантом содержание диеновых конъюгатов жирных кислот и малонового диальдегида. "Фосфоглив", "Фосфоглив" для инъекций, в большей степени "Фосфоглив Форте" корригируют показатели цитолитического, холестатического и гепатодепрессивного биохимических синдромов поражения печени и стимулируют процессы репаративной регенерации гепато-цитов.
Ключевые слова: гепатопатия, индометацин, фосфоглив, иммунитет, гепатопротекторы.
IMMUNOMODULATING AND HEPATOPROTECTIVE EFFECTS OF "PHOSPHOGLIV" VARIOUS DRUG FORMS IN CASE OF LIVER INDOMETACIN TOXIC LESION
Kedrovskaya N.A., Belokonova O.V.
Biochemistry Department of the Kursk State Medical University, Kursk
The application of "Phosphogliv" or "Phosphogliv" injections during 14 days normalizes the processes of phagocytosis, partially the formation of humoral and cellular immune response and oxygen dependent activity of polymorphonuclear leucocytes in case of toxicoses, caused by suppression of immune reactivity, phagocytosis and increased oxygen dependent activity of peripheral blood neutrophils. The injection form of drug normalizes the development of delayed type hypersensitivity, oxygen development activity of granulocytes and stimulates humoral immune response and phagocytosis. "Phosphogliv"or "Phosphogliv" for injections (partially) and "Phosphogliv Forte" (completely) normalize the increased toxic level of fatty acid dien conjugates and malonic dialdehyde. "Phosphogliv", "Phosphogliv" for injections correct the values of cytolytic, cholestatic and hepatodeppresive biochemical syndromes of liver lesion and stimulate the processes of hepatocyte reparative regeneration.
Keywords: hepatopathy, indometacin, Phosphogliv, immunity, hepatoprotectors.
Ежегодно возрастает количество больных с патологией печени, причем значительное место занимает ее токсическое повреждение. Причиной для такого роста служит бурное развитие различных отраслей промышленности, в том числе пищевой, химической и фармацевтической, современный образ жизни [4, 16, 17].
Попадая в организм различными путями гепатотоксические агенты нарушают структуру и функцию клеточных мембран гепато-цитов, усиливают процессы перекисного окисления липидов, изменяют процессы ре-
генерации и функции гепатоцитов, что сопровождается, прямо и косвенно, нарушениями иммунной реактивности [1, 12]. Применение гепатопротекторов позволяет восстанавливать поврежденные клеточные структуры и ускорять процессы репаративной регенерации в гепатоцитах, а использование иммуномодуляторов - корригировать нарушения иммунитета и улучшать восстановительные процессы в печени. Исходя из этого, наиболее предпочтительным при патологии печени является применение лекарственных
средств с одновременной гепатопротекторной и иммуномодулирующей активностью.
Особый интерес в этом отношении представляет препарат "Фосфоглив", так как в его состав входит два действующих начала: эс-сенциальные фосфолипиды (ЭФЛ, в основном лецитин) и тринатриевая соль глицирри-зиновой кислоты. Наличие первого компонента позволяет восстанавливать фосфоли-пидный каркас мембраны гепатоцитов, снижать интенсивность процессов перекисного окисления липидов, генерацию активных метаболитов кислорода, устранять нарушения энергообеспечения клеток [7, 13, 14]. Второй компонент - глицирризиновая кислота стимулирует образование Т-лимфоцитов, естественных киллеров, выделение клетками ци-токинов, в первую очередь интерферона-гамма, что обусловливает, в первую очередь, противовирусную активность препарата [5]. Кроме этого, это единственный из препаратов, имеющих в составе ЭФЛ, производится не только в капсулярной ("Фосфоглив", "Фосфоглив Форте" ), но и инъекционной форме ("Фосфоглив" для инъекций). Исследований по сравнению иммуномодулирующих и гепатопротекторных свойств различных препаратов "Фосфоглива" в норме и, что особенно важно, при токсическом поражении печени не проводилось.
Цель - сравнить иммуномодулирующие и гепатопротекторные эффекты различных лекарственных форм "Фосфоглива" в условиях токсического поражения печени, вызванного введением индометацина.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты проводили на 377 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 150-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986) и согласно правилам
лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.).
Расчет дозировок препаратов для введения экспериментальным животным проводили при помощи коэффициентов пересчета доз (мг/кг на мг/м ) для крысы и человека в зависимости от массы тела. Препараты "Фосфог-лива" стандартизовали по ЭФЛ, при этом, их вводимая доза была стандартной (1500 мг/кг), а содержание глицирризиновой кислоты варьировало: в составе "Фосфоглива" -
800 мг/кг, "Фосфоглива Форте" - 240 мг/кг и в "Фосфогливе" для инъекций - 600 мг/кг. "Фосфоглив" и "Фосфоглив Форте" вводили внутрижелудочно в 1% крахмальном киселе в виде суспензии, инъекционную форму - вну-трибрюшинно, все препараты через 24 часа, № 14.
Токсическое поражение печени моделировали внутрижелудочным введением индо-метацина в дозе 5 мг/кг, внутрижелудочно, трехкратно, через 24 часа, в последние 3 дня введения препаратов [14]. Забой животных осуществляли через 24 часа после последнего введения токсиканта и препарата.
Выраженность гуморального иммунного ответа (ГИО) оценивали на пятые сутки после иммунизации эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 2х109 клеток на 1 кг массы тела путем определения в селезенке числа антителообразующих клеток (АОК) [19]. Гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ) индуцировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ (сенсибилизирующая доза). Через 4 суток в подушечку стопы правой лапки вводили 106 ЭБ в 0,1 мл физраствора (разрешающая доза). О выраженности ГЗТ через 24 часа судили по разнице масс (РМ) регионарного и контрлатерального лимфатических узлов и по разнице количества в них кариоцитов (РК) [18]. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови оценивалась по фагоцитарному показателю (ФП), фагоцитарному числу (ФЧ) и индексу активности фагоцитоза (ИАФ) [10]. Кислородзависимую активность оценивали по НСТ-тестам спонтанному (НСТ-сп.) и стимулированному опсонизиро-ванным и неопсонизированным зимозаном (НСТ-ст. н/з, НСТ-ст. о/з), коэффициентам активации на опсонизированный и неопсони-зированный зимозан, коэффициент опсониза-ции (Кан, КАо, КО) [3].
Для оценки функционального состояния гепатоцитов в сыворотке крови стандартными наборами реактивов определяли активность аспартат- и аланинаминотрансфераз (АСТ, АЛТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), ставили тимоловую пробу (ТП). Концентрацию фибриногена (ФГ) в сыворотке исследовали методом Рутберг [9].
Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию в плазме крови диеновых конъюгатов (ДК) жирных кислот и малонового диальдегида (МДА) [15]. Кроме этого, определяли активность каталазы (Кат) [8].
Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя непараметрические методы: критерии Вилкоксона-Манна и Уитни, а также коэффициент ранговой корреляции Спирмена [2]. Статистически значимыми считали различия с р<0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Введение интактным животным всех изученных форм препарата "Фосфоглив" вызывает сходные эффекты на иммунные, окси-дантные и биохимические показатели, но каждая из лекарственных форм имеет определенные особенности. "Фосфоглив", "Фосфоглив Форте", в большей степени "Фосфоглив" для инъекций, стимулируют развитие гуморального иммунного ответа на эритроциты барана. Инъекции "Фосфоглива" стимулируют формирование гиперчувствительности замедленного типа. Все изученные формы "Фосфоглива" повышают активность каталазы и щелочной фосфатазы в сыворотке крови.
У крыс с острой токсической гепатопати-ей, вызванной введением индометацина, развивалось вторичное иммунодефицитное состояние, о чем свидетельствовало снижение показателей ГИО и ГЗТ на ЭБ. Внутрижелу-дочное введение "Фосфоглива" повышало показатели ГИО, но не до уровня здоровых животных. "Фосфоглив Форте" нормализовал количество иммунных АОК в селезенке, а инъекционная форма дополнительно стимулировала формирование ГИО даже по сравнению со здоровыми животными. "Фосфо-глив" или "Фосфоглив Форте" повышали, но
не до уровня нормы, а инъекции этого препарата нормализовали показатели ГЗТ (табл.).
При острой токсической гепатопатии, вызванной введением индометацина, снижалась фагоцитарная и повышалась кислородзави-симая активность гранулоцитов периферической крови. Введение "Фосфоглива" нормализует показатели фагоцитарной активности, НСТ-сп., и корригирует, но не до уровня нормы, показатели НСТ-ст. опсонизирован-ным и неопсонизированным зимозаном. При этом КАо и КО остаются высокими, а КАн повышается еще сильнее по сравнению с крысами, получавшими токсикант. "Фосфо-глив Форте" нормализовал все изученные показатели функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов, а инъекции "Фосфоглива" стимулировали фагоцитарную и нормализовали кислородзависимую активность нейтрофилов периферической крови (табл.).
На повышенные показатели ПОЛ "Фосфо-глив" и инъекционная форма этого препарата оказывали корригирующее влияние, а при введении "Фосфоглива Форте" отмечалась их нормализация. Активность каталазы снижалась, но не до уровня здоровых животных, при использовании "Фосфоглива Форте" и инъекционной формы препарата (табл.).
При введении экспериментальным животным индометацина развивались биохимические синдромы поражения печени: цитолити-ческий (повышение АЛТ), холестатический (повышение ЩФ) и гепатодепрессивный (снижение концентрации ФГ). Введение "Фосфоглива" частично нормализовало, но не до уровня нормы, активность АЛТ, ЩФ и содержание ФГ. "Фосфоглив Форте" полностью нормализовал активность АЛТ, ЩФ и частично концентрацию ФГ. Инъекции препарата нормализовали активность АЛТ и корригировали, но не до показателей контрольной группы, ЩФ и уровень ФГ (табл.).
При гистологическом исследовании образцов печени крыс, отравленных индомета-цином, обнаруживалась картина гиалиновокапельной и гидропической дистрофии гепа-тоцитов, некроз отдельных клеток, нарушение балочной структуры печеночной ткани. У животных с острой индометациновой интоксикацией, получавших "Фосфоглив", равно как и "Фосфоглив Форте", в печени морфоло-
гически развивалась в основном гиалиновокапельная дистрофия гепатоцитов, преимущественно мелкоочагового характера без
нарушения общей гистоархитектоники долек (рис.).
Таблица
Изменение иммунных и биохимических показателей при экспериментальном токсическом гепатите, вызванном индометацином, на фоне применения различных лекарственных форм "Фосфоглив"
Показатели 1 2 3 4 5
Здоровые животные Поражение печени индометацином
Крахмал "Фосфо- глив" "Фосфоглив Форте" "Фосфоглив" инъекционный
АОК 11,3±1,0 6,1±0,12*1 7,9±0,11*1,2 10,5±1,4*2,3 14,7±1,2*1-4
РМ 3,7±0,3 1,9±0,5*1 2,6±0,4*1,2 2,7±0,2*1,2 3,6±0,5*2-4
РК 1,9±0,2 0,5±0,1*1 0,8±0,3*1,2 0,9±0,4*1,2 1,8±0,4*2-4
ФП 80,3±2,2 70,1±2,1*1 79,3±3,2*2 83,1±2,3*2 89,3±2,2*1-4
ФЧ 1,7±0,03 0,6±0,06*1 1,6±0,07*2 1,6±0,07*2 2,8±0,07*1-4
ИАФ 1,4±0,02 0,4±0,06*1 1,3±0,06*2 1,3±0,08*2 2,5±0,08*1-4
НСТ-сп. 0,6±0,20 1,1±0,15*1 0,7±0,16*2 0,5±0,18*2 0,6±0,16*2
НСТ-ст. н/з 0,7±0,20 1,9±0,27*1 1,2±0,16*1,2 0,6±0,13*2,3 0,8±0,10*2,3
НСТ-ст. о/з 0,8±0,18 2,3±0,12*1 1,6±0,20*1,2 0,7±0,18*2,3 0,9±0,18*2,3
КАн 1,2±0,11 1,4±0,07*1 1,7±0,11*1,2 1,2±0,02*2,3 1,3±0,01*2,3
КАо 1,3±0,18 2,0±0,24*1 2,2±0,17*1 1,4±0,08*2,3 1,5±0,04*2,3
КО 1,1±0,02 1,5±0,09*1 1,3±0,09*1 1,2±0,13*2 1,1±0,12*2
ДК 1,4±0,06 2,3±0,10*1 1,9±0,12*1,2 1,34±0,2*2,3 1,8±0,13*1,2,4
МДА 11,8±0,2 27,3±2,06*1 20,8±0,48*1,2 12,2±0,62*2,3 18,9±2,03*1,2,4
Кат. 250,3±41,2 944,4±83,5*1 913,7±58,4*1 737,3±115,7*1-3 639,9±105,6*1-3
АСТ 1,2±0,1 1,4±0,11 1,2±0,07 1,3±0,12 1,3±0,08
АЛТ 1,1±0,06 1,95±0,1*1 1,4±0,05*1,2 1,0±0,16*2,3 1,1±0,16*2,3
ЩФ 450,4±41,3 794,1±45,6*1 630,8±55,4*1,2 430,1±33,8*2,3 552,2±69,0*1,2,4
ТП 4,1±0,3 4,2±0,01 4,2±0,01 4,2±0,11 4,2±0,02
ФГ 5,0±0,2 2,7±0,89*1 3,9±0,15*1,2 4,2±0,12*1,2 4,0±0,13*1,2
МИ 0,22±0,01 0,51±0,02*1 0,5±0,03*1 0,53±0,02*1 0,62±0,02*1-4
ДЯГ 3,93±0,21 5,23±0,22*1 5,33±0,24*1 5,41±0,3*1 6,22±0,27*1-4
____* ‘« ' . #*’•’ • ■ • ? . , a * .
> '• ,/■ • . ‘ • • ї•
А
.
----- . • .
*
- ' • ' іУгїСлВИ
і йй*ії S£K|
Б
та
I*
•v - vaV %
e „ - ,.e * "i.o 4
*
. j Л fVT% •. ■•» * .*
# r j/ J • 9 " R 2 • і I , e 1 * _* e
-.■'•• • • " . ’
А. Морфологические изменения в печени у крысы с острой индометациновой интоксикацией, получавшей "Фосфоглив" внутрижелудочно. Микрофото. Окр. гематоксилином и эозином, х150
Б. Печень крысы с острым токсическим поражением индометацином, получавшей внутрибрю-шинно "Фосфоглив" для инъекций. Микрофото. Окр. гематоксилином и эозином, х150
Рис. Морфологические изменения в печени у крыс с токсической индометациновой гепатопа-тией, получавших различные лекарственные формы "Фосфоглива".
При острой индометациновой интоксикации на фоне инъекций "Фосфоглива" морфологически гистоархитектоника ткани печени сохранялась, отмечалась гипертрофия гепа-тоцитов, увеличение размеров ядер, в части клеток имела место эозинофильная зернистость цитоплазмы (рис.).
У крыс с токсической индометациновой гепатопатией параллельно с деструкцией идут процессы репаративной регенерации, о чем свидетельствовало увеличение МИ и ДЯГ в гепатоцитах по сравнению со здоровыми животными. Введение "Фосфоглива" не влияет на этот процесс, "Фосфоглив Форте" или инъекционная форма этого препарата дополнительно стимулирует репаративную регенерацию в печени, о чем свидетельствуют более высокие значении МИ и ДЯГ в гепато-цитах данных животных по сравнению с крысами, получавшими только токсикант (табл.).
При моделировании токсического поражения печении индометацином наблюдается угнетение гуморальной и клеточной форм иммунного ответа, повышение кислородзави-симой и снижение фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови, активация процессов ПОЛ, развитие холестатиче-ского, цитолитического и гепатодепрессивно-го биохимических синдромов поражения печени. Полученные данные согласуются с известными научными фактами о том, что инфекционные и токсические поражения печени характеризуются значительным нарушением иммунологической реактивности организма [1]. Воздействие различных экзогенных (в том числе индометацин) и эндогенных гепа-тотоксических агентов приводит к сдвигу баланса про- и антиоксидантов в сторону ослабления последних, то есть к усилению перекисного окисления липидов клеточных мембран, что в конечном итоге их дестабилизирует. Помимо этого, токсиканты оказывают непосредственное отрицательное влияние на мембраны гепатоцитов. Все это приводит к повышенному выходу в кровь или даже появление соединений, обладающих иммуномодулирующей активностью. Ряд из них стимулирует развитие иммунного ответа (гликоза-миногликаны, протеолитические фермента), большинство, напротив, его угнетают (а1-антипротеазы, а2-макроглобулин, гаптогло-бин, билирубин, липопротеиды очень низкой
и низкой плотности, желчные кислоты, С-реактивный белок и др.) [6, 12, 13, 20]. От баланса соотношения сывороточных соединений и суммации воздействия на иммуноком-петентные клетки зависит формирование клеточного ответа в сторону повышения реактивности или развития метаболической иммуносупрессии. Вероятно, острое отравление индометацином, вызывает выход в кровеносное русло в большей степени иммуносупрес-сирующих соединений.
Течение патологического процесса существенно осложняется как при повышении реакции организма на тканевые и экзогенные антигены (активация киллерного действия, усиление аутоиммунного компонента заболевания), так и при снижении реактивности (повышение чувствительности к возбудителям инфекционных заболеваний, нарушение иммунной регуляции процессов физиологической и репаративной регенерации тканей) [11, 12]. Таким образом, для предотвращения хронизации патологического процесса (в том числе и в печени) показана иммунокорригирующая терапия, а с учетом повреждения фосфолипидного каркаса мембран необходим строительный материал в виде эссенциаль-ных фосфолипидов.
При токсическом индометациновом гепатите наиболее эффективными оказались две лекарственные формы препарата: "Фосфо-глив Форте" и "Фосфоглив" для инъекций, по сравнению с "Фосфогливом". Учитывая, что все подопытные животные получали по 1500 мг/кг эссенциальных фосфолипидов (в основном лецитина) в составе "Фосфоглива", "Фосфоглива Форте" или "Фосфоглива" для инъекций, а тринатриевой соли глицирризи-новой кислоты соответственно по 800, 240 и 600 мг/кг, можно предположить основную роль ЭФЛ в гепатопротекторной активности и отсутствие дозозависимой и ведущей роли глициризиновой кислоты в иммуномодулирующих эффектах исследованных препаратов в условиях наших экспериментов. При этом, по-видимому, на первый план выступают раздельно или совместно три механизма: синергический эффект эссенциальных фосфолипидов и глицирризиновой кислоты, биодоступность препаратов и наличие в "Фосфо-гливе" и "Фосфогливе Форте" дополнительных составных компонентов. Не исключена
роль наличия в препаратах различных по
процентному количеству и качеству эссенци-
альных фосфолипидов.
ЛИТЕРАТУРА
1. Алексеева И.Н., Брызгина Т.М. Печень и иммунологическая реактивность. - Киев, 1991. -168 с.
2. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медикобиологических исследованиях. - Л.: Медицина, 1973. - 141 с.
3. Зинкин В.Ю., Годков В.Г. Способ оценки кис-лородзависимого метаболизма нейтрофиль-ных гранулоцитов человека // Клиническая и лабораторная диагностика. - 2004. - № 2. -С. 27-31.
4. Ильченко Л.Ю., Царегородцева Т.М., Федотова Т.Ф. и др. Изучение цитокинового профиля при поражениях печени у больных с алкоголизмом и наркоманией // Гепатология. -2004. - № 2. - С. 21-24.
5. Ипатова О.М. Фосфоглив: Механизм действия и применение в клинике. - М., 2005. -45 с.
6. Конопля А.И., Прибылов С.А. Системная продукция цитокинов при развитии дисфункции миокарда у больных с циррозом печени // Вестник новых медицинских технологий. -200б. - Т. 13, № 3. - С. 72-74.
7. Конопля А.И. Взаимосвязь структуры и функции эритроцитов с иммунным гомеостазом. -Курск, 2008. - 40 с.
S. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г. и др. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. - 19SS. - № 1. - С. 1б-19.
9. Люблина А.Я., Ильичева Л.П., Катасоно-ва Т.В., Петросова С.А. Клинические лабораторные исследования. - М.: Медицина. -19S4. - 288 с.
10. Медведев А.Н. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза // Лабораторное дело. - 1991. - № 2. - С. 19-20.
11. Подымова С.Д. Болезни печени. - М.: Медицина, 1993. - 544 с.
12. Прокопенко Л.Г., Конопля А.И. Метаболическая иммуномодуляция. - Курск, 2000. -308 с.
13. Прокопенко Л.Г., Конопля Н.А., Утешев Б.С. Влияние эссенциале и рибоксина на иммуно-супрессирующие свойства тромбоцитов и эритроцитов при токсическом поражении печени // Эксперим. и клинич. фармакология: Двухмесячный научно-теоретический журнал. - 2001. - Т. 64, № 4. - С. 37-41.
14. Саратиков А.С., Венгеровский А.И. Эффективность гепатозащитных средств при экспериментальном хроническом гепатите // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1995. -Т. 59, № 1. - С. 24-26.
15. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии / Под ред. В.Н. Ореховича. -М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.
16. Сухарева Г.В. Алкогольная болезнь печени // Consilium medicum. Приложение - 2003. -Вып. 1. - С. 26-28.
17. Топорков А.С. Алгоритм диагностики и лечения токсических и алкогольных поражений печени // Русский медицинский журнал. -2004. - № 7. - С. 47-53.
18. Федосеева Т.В., Порядин Г.В., Ковальчук Л.В. и др. Руководство по иммунологическим и аллергологическим методам в гигиенических исследованиях. - М., 1993. - 319 с.
19. Фримель Г. Иммунологические методы: Пер. с нем. - М.: Мир, 1987. - 320 с.
20. Smith N.F., Acharya M.R., Desai N. et al. Identification of OATP1B3 as a high-affinity hepatocellular transporter of paclitaxel // Cancer Biol. Ther. - 2005. - Vol. 4, N 8. - P. 815-818.
