CC BY
42
УДК: 616.006.007
А.И. Аутеншлюс, В.И. Коненков, И.Ю. Короткова, Г.Г. Иванова, С.В. Сидоров,
М.М. Черенкова, А.В. Проскура, А.В. Шевченко, Ю.В. Седова, А.Н. Шкунов
ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РЕАКЦИИ ЛИМФОЦИТОВ НА ОПУХОЛЕАССОЦИИРОВАННЫЕ АНТИГЕНЫ
У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ФИБРОАДЕНОМАТОЗОМ
ГУ НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН ГУ НИИ клинической иммунологии СО РАМН, Новосибирск
Изучали ассоциированность HLA с реакцией на фетальные протеины (ФП) мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови 67 женщин, больных раком молочной железы (РМЖ), и 23 женщин с фиб-роаденоматозом (ФАМ). Реакцию на ФП оценивали по изменению количества CD4(+)- и С08(+)-лимфо-цитов после их инкубации in vitro с фетальным протеином. Реакция на ФП характеризуется выраженным повышением количества С08(+)-лимфоцитов и повышением или понижением количества С04(+)-лимфо-цитов. Позитивный ответ МНК на ФП по С08-клеткам у больных РМЖ и некоторых больных ФАМ ассоциируется с HLA-A1, -A19, -B27, -B40, -DR1, -DR6. Позитивные реакции на ФП по С08-клеткам больных ФАМ, но не РМЖ, ассоциированы с фенотипами HLA-A1/B12, -B16/B35. Отсутствие реакции на ФП МНК больных РМЖ и ФАМ ассоциировалось с HLA-A2, -B12, -DR2, -DR7, а также с атипичными сочетаниями HLA, которые обычно не встречаются среди здоровых женщин.
Ключевые слова: иммуногенетика, фетальный протеин, субпопуляции Т-лимфоцитов
Образование злокачественной опухоли сопровождается целым рядом структурных и функциональных изменений, которые отличают ее от нормальной ткани. Одним из признаков, характеризующих опухоль, является экспрессия фе- тальных протеинов (ФП), относящихся к опухолеассоциированным антигенам, совместно с антигенами главного комплекса гистосовместимости I класса (ГКГ-I) [9, 10]. В то же время показано полное или частичное снижение поверхностной экспрессии опухолевыми клетками ГКГ-I, вследствие чего опухолевая клетка ускользает от иммунного надзора [8]. Хотя иммунный ответ контролируется на разном генетическом уровне, наибольшая роль отводится ГКГ [11]. Познание полиморфизма HLA (Human Leucocyte Antigens) имеет большое значение для понимания его биологической роли и является важным в изучении генетического контроля иммунных реакций у человека. Поскольку фетальные протеины - это дифференцировочные белки, с которыми иммунная система (хотя и незрелая) сталкивалась уже в процессе эмбриогенеза, степень их естественной иммуногенности остается не ясной.
В настоящее время все большее значение приобретают методы воздействия на организм, стимулирующие как общую резистентность, так и специфический противоопухолевый ответ. Способность мононуклеарных клеток (МНК) отвечать на фетальные протеины in vitro, на наш взгляд, заслуживает внимания. Недавно было получено прямое доказательство естественного процессинга и презентации р53-эпитопов 270-279 на HLA-B40, ^44-несущих клетках рака молочной железы (РМЖ) человека. Эпитоп, представляющий этот регион, может быть потенциально использован для иммунотерапии у пациентов, несущих супертипы HLA-A2 и -B44 [8].
Ранее нами было показано, что после инкубации мо-нонуклеарных клеток больных со злокачественными новообразованиями с ФП происходит изменение соотно-
шения основных субпопуляций лимфоцитов СБ4(+) / СБ8(+) [4-6], причем выраженность реакции в определенной мере зависит от степени дифференцировки опухоли. В литературе появились данные о том, что абсолютное число Т-клеток уменьшено у больных раком молочной железы (р<0,05), однако СБ4(+) / СБ8(+) соотношение было значительно ниже у больных овариальным раком (р<0,05), но не у больных РМЖ [11]. Следует обратить внимание, что стимуляции МНК обследованных больных авторами не проводилось. В этом отношении интерес представляют следующие данные: пептид Е75 из НЕЯ-2, который представляет иммунодоминант-ный эпитоп на овариальных и опухолях молочной железы - ассоциированных лимфоцитах способен активировать эффекторные функции свежевыделенных
СБ8(+)-лимфоцитов здоровых людей. Присутствие опухолевых антиген-реактивных активированных
СБ8(+)-клеток у здоровых людей может улучшать наше понимание механизмов выживаемости и стабилизации иммунных реакций [15].
Исходя из вышеизложенного, нами была поставлена задача изучить характер ассоциированности НЬЛ-анти-генов с реакцией Т-лимфоцитов на ФП при злокачественном и доброкачественном росте у больных раком молочной железы и фиброаденоматозом (ФАМ).
Методика. Обследованы 67 женщин, больных раком молочной железы, до начала лучевой и химиотерапии и 23 женщины с фиброаденоматозом молочной железы, находившихся на учете в городском онкологическом диспансере муници- пальной клинической больницы № 1 Новосибирска. В качестве иммунологического контроля была взята группа условно здоровых лиц -женщин (п=20), не имевших в анамнезе онкологической патологии. В качестве генетического контроля использовалась репрезентативная группа здоровых женщин (п=143) из регионального этнического контроля для Западной Сибири [1,2].
Определение относительного содержания популяций и субпопуляций лимфоцитов проводили методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител серии ИКО (НПЦ “Медбиоспектр”, Москва) в соответствии с прилагаемыми рекомендациями. В работе использованы моноклональные антитела ИКО86 - маркер Т-хелперов/индукторов - CD4(+)-клет-ки, ИКО31 - маркер Т-супрессоров/цитотоксических лимфоцитов - CD8(+)-клетки.
В качестве опухолеассоциированных антигенов применяли ФП в изотоническом растворе хлорида натрия, содержащие раковоэмбриональный антиген - 84 МЕ/мл, хорионический гонадотропин человека - 170 МЕ/мл, нейронспецифическую енолазу - 1,35 МЕ/мл, углеводные антигены - СА-19-9 - 144 МЕ/мл и СА-125 - 512 МЕ/мл, альфафетопротеин - 172 МЕ/мл и микроглобулин человека - 4 МЕ/мл. Оценку реакции на ФП проводили в соответствии с патентом № 2118819 по изменению относительного содержания CD4(+)- и CD8(+)-лимфоцитов после инкубации МНК с ФП (100 мкл, исходная концентрация белка - 2,5 мг/мл) in vitro в течение 1 часа по сравнению с контрольной пробой, содержащей вместо ФП 100 мкл раствора хлорида натрия.
Для подтверждения специфичности реакции параллельно инкубировали МНК с раствором бычьего сывороточного альбумина (БСА) по указанной выше технологии и в той же концентрации по белку.
Определение HLA-антигенов I класса осуществлялось в стандартном лимфоцитотоксическом тесте по методу Терасаки [12]. Использовалась панель типирую-щих сывороток НИИ гематологии и переливания крови “Гиссанс” (Санкт-Петербург). Специфичности гена DRB1 (HLA-антигенов класса II) определялись методом полимеразной цепной реакции ДНК [14]. Для типирова-ния использовались наборы НПО “ДНК-технология” (Москва).
Статистическая обработка данных проводилась с использованием методов параметрической статистики t-критерия Стьюдента, критерия Уилкоксона-Ман-на-Уитни и критерия Фишера. Математическая обработка результатов иммуногенетических исследований -частот распределения HLA-антигенов (АГ%) и расчет относительного риска (RR) проводились с помощью традиционного генетико-статистического анализа. Результаты типирования специфичностей гена DRB1 (HLA класса II) представлены как серологические субтипы HLA по Международной классификации Workshop - 91 [14], поскольку часть контрольной группы здоровых лиц была типирована серологическим методом.
Результаты. При изучении реакции на ФП нами было обнаружено [4], что изменения касаются в основном клеток, имеющих CD8-антиген, причем если судить по средним величинам (20,07±0,73), то происходит достоверное повышение относительного содержания этих клеток после инкубации с ФП (26,49±0,94) только в группе больных РМЖ (р<0,001). При этом снижается соотношение CD4(+) / CD8(+) - иммунорегуляторный индекс (ИРИ). Позитивная реакция определялась по повышению количества CD4(+)- и CD8(+)-лимфоцитов после инкубации МНК с ФП более чем на 15% по сравнению с соответствующими контрольными пробами. Пороговое значение достоверности реакции на ФП, равное 15%, превышает допустимый предел ошибки (ДПО) [3].
Для изучения ассоциированности НЬЛ-антигенов с выраженностью реакции лимфоцитов на ФП при злокачественном и доброкачественном росте нами предварительно был проведен иммуногенетический анализ характера распределения НЬЛ-антигенов в группах больных РМЖ (п=67) и ФАМ (п=23) в сравнении с контрольной группой здоровых женщин (п=143) (табл. 1 и 2). Установлено, что одновременно при РМЖ и ФАМ повышены частоты встречаемости антигенов НЬЛ-Л19, -БЯ2 и фенотипа НЬЛ-Л2/Л19 (р<0,01) относительно контроля. Перечисленные НЬЛ-антигены ассоциируются с предрасположенностью как к РМЖ, так и ФАМ, то есть являются общими иммуногенетическими признаками этих заболеваний. Остальные НЬЛ-ассоциации у больных РМЖ и ФАМ не совпадали. Частоты встречаемости антигенов НЬЛ-В27, -В40, -БЯ1 и -БЯ6 у больных РМЖ значительно превышали таковые в контроле (р<0,01). У больных ФАМ частота антигена НЬЛ-В14 была выше, чем в контроле и одновременно выше, чем при РМЖ. Фенотипы НЬЛ-Л2/Л19, -Л19/В5, -Л1/БЯ6, -Л3/ БЯ6, -В12/БЯ6, -В27/БЮ регистрировались при РМЖ достаточно часто, но отсутствовали в контроле. Такие комбинации НЬЛ-антигенов принято обозначать как атипичные. Важно, что частоты фенотипов НЬЛ-Л1/Л19, -Л1/В12, -В14/БЯ7 при РМЖ, в отличие от ФАМ, были даже ниже контрольных. Фенотипы НЬЛ -В12/В14 и -Л1/В14 также не встречались в контроле, но выявлено достоверное преобладание их частот у больных ФАМ (13,04%) по сравнению с РМЖ (1,49%). Указанные сочетания НЬЛ-антигенов, вероятно, могут быть ассоциированы с более высокодифференцированными или доброкачественными опухолями.
Отмечено достоверное снижение частот распределения антигенов НЬЛ-БЯ3, -БЯ4 и сочетаний НЬЛ-БЯ5/БЯ7, -В8/БЯ5 в обследованной группе женщин, больных РМЖ. Следовательно, эти комбинации НЬЛ-антигенов могут ассоциироваться с резистентностью к развитию РМЖ. Выявлены негативные ассоциации и при ФАМ. Так, частота антигена НЬЛ-БЯ5 значительно ниже при ФАМ (13,04%), чем в контроле (46,85%). Соответственно частоты фенотипов НЬЛ-БЯ1/БЯ5, -БЯ5/БЯ7, -Л1/БЯ5, -Л3/БЯ5 также понижены в сравнении с контролем. Высокая достоверность различий наблюдается в отношении НЬЛ-Л1/БЯ5, -Л3/БЯ5 (р<0,01). Таким образом, антиген НЬЛ-БЯ5 в различных сочетаниях с другими НЬЛ-антигенами в основном ассоциируется с резистентностью как к РМЖ, так и ФАМ.
Проведен иммуногенетический анализ в группах больных РМЖ (п=45) и ФАМ (п=8), МНК которых после инкубации с ФП продемонстрировали позитивную реакцию, характеризующуюся повышением относительного содержания СБ8(+)-лимфоцитов (табл. 1, 2). Сравнивались группы позитивного ответа МНК на ФП с ос- таль-ными больными РМЖ и ФАМ, поскольку, как было отмечено выше, некоторые сочетания НЬЛ-антигенов не встречались в контроле. Установлено, что позитивный ответ МНК на ФП у больных РМЖ (п=45) ассоциирован с антигеном НЬЛ-Л1. Отсутствие позитивной реакции на ФП у больных РМЖ (п=22) ассоциируется с фенотипами НЬЛ-Л2/В12, -Л2/В15, -В15/БЯ2, -В16/ БЯ5. У больных ФАМ позитивный ответ на ФП (п=8) ассоцииро-
ван с фенотипами НЬЛ-Л3/БЯ2 и -Л19/БЯ2 при сравнении с отсутствием позитивных реакций на ФП (п=15).
Значительный интерес представляют результаты сравнительного анализа однотипных реакций МНК на ФП по СБ8(+)-лимфоцитам у больных РМЖ и ФАМ. Позитивный ответ был ассоциирован у 50% больных ФАМ (п=8) с фенотипом НЬЛ-Л19/БЯ2 (21,74% - в общей группе ФАМ), а среди больных РМЖ (п=45) с позитивным ответом на ФП только 8,89% имели тот же фенотип НЬЛ-Л19/БЯ2 (8,86% - в общей группе РМЖ). Обладателями фенотипов НЬЛ-Л1/Л19, -В16/В35, -Л3/В16 были по 25% больных ФАМ с позитивным ответом МНК по СБ8(+)-лимфоцитам. В то же время в общей группе обследованных больных РМЖ отсутствовал фенотип НЬЛ-Л1/Л19 (0%), а частота встречаемости НЬЛ-В16/В35, -Л3/В16 была низкой (2,99%). Сравнительный анализ групп без позитивных реакций на ФП у больных РМЖ и ФАМ выявил преобладание при ФАМ антигенов НЬЛ-Л1 (46,67% против 9,09% - РМЖ), -В13 (26,67% против 0% - РМЖ) и фенотипа НЬЛ-Л1/БЯ7 (26,67% против 0% - РМЖ).
Таким образом, НЬЛ-антигены и фенотипы, ассоциированные с позитивными реакциями на ФП по СБ8(+)-клеткам у больных РМЖ и ФАМ, чаще встречаются среди больных ФАМ. Вероятно, МНК, реагирующие на ФП, у больных РМЖ имеют те же НЬЛ-феноти-пы, что и больные ФАМ, однако демонстрируют менее выраженную реакцию на ФП. С другой стороны, НЬЛ-фенотипы, ассоциированные с отсутствием позитивных реакций на ФП, почти не встречаются среди больных РМЖ, но преобладают среди больных ФАМ. Не исключено, что это может быть связано с доброкачественным или злокачественным характером онкологической патологии.
Реакции на ФП МНК больных РМЖ и ФАМ характеризовались не только повышением количества СБ8(+)-лимфоцитов. Определялись и негативные реакции МНК на ФП в семи случаях из 67 обследованных больных РМЖ (табл. 3). Относительное содержание СБ8(+)-лимфоцитов достоверно снижалось более чем на 15%, то есть показатель принимал отрицательные значения. Интересно, что ни один из фенотипов НЬЛ-Л2/Л19, -В7/В27, -В8/В21, -В12/В14, -В12/В35, -В15/В18, -Л9/В14, -Л11/В12, -В27/БЯ1, ассоциированных с негативной реакцией МНК больных РМЖ, не встречался в женском контроле. Негативная реакция наблюдалась у 6 больных ФАМ и ассоциировалась с антигеном НЬЛ-В5 в сочетаниях НЬЛ-В5/В16, -В5/В21, -В5/БЯ4, причем только последний фенотип присутствовал в контроле (3,5%).
Позитивная реакция МНК на ФП была выявлена по достоверному повышению средних значений СБ8(+)-лимфоцитов у больных РМЖ, а у больных ФАМ различия не были достоверными.
Реакция МНК на ФП по СБ4(+)-лимфоцитам по средним значениям достоверно не выявлялась, хотя определенные изменения происходили и в этой субпопуляции Т-клеток.
Иммуногенетический анализ распределения НЬЛ-антигенов (табл. 2) проводился в группе больных РМЖ (п=29) с выявленной позитивной реакцией МНК на ФП по СБ4(+)-лимфоцитам. Результаты сравнивали с группой больных РМЖ (п=38), МНК которых не проя-
вили позитивной реакции на ФП. Выявлены достоверные различия с двукратным преобладанием частоты антигена НЬА-БЯ6 при позитивных реакциях на ФП у больных РМЖ (34,48% против 15,79% - не позитивных).
Поскольку группа типированных по НЬА-антигенам больных ФАМ пока недостаточна для получения убедительных результатов, было проведено предварительное сравнение групп с позитивными (п=11) и негативными (п=12) изменениями количества СБ4(+)-лимфоцитов после инкубации МНК с ФП (табл. 3). Выявлено, что все обладатели (п=4) антигенов НЬА-А1, -В8, -БЯ3 оказались в группе позитивных реакций на ФП. Известно, что эти антигены являются классическими маркерами аутоиммунных заболеваний и положительно ассоциированы с активностью Т-хелперов, КК-клеток и фагоцитозом [13]. Полученные нами результаты согласуются с этими данными.
Ответ на фетальный протеин МНК больных РМЖ сопровождался в ряде случаев (п=18) негативной реакцией, то есть снижением количества СБ4(+)-лимфоци-тов после инкубации МНК с ФП более чем на 15% (табл. 3). Сравнительный анализ группы больных РМЖ с негативными реакциями на ФП с оставшимися больными выявил достоверные различия, связанные с преобладанием частот антигенов НЬА-В16, -БЯ2 и фенотипов НЬА-В16/БЯ2, -В27/БЯ2, -В40/БЯ2, а также снижением частоты встречаемости антигена НЬА-В35 при негативных реакциях на ФП, которые ассоциируются в основном с теми же НЬА-антигенами, что и позитивные реакции по СБ8(+)-клеткам. Сравнение этих групп больных РМЖ между собой не выявило достоверных различий.
Разнонаправленные изменения относительного содержания СБ8(+)- и СБ4(+)-лимфоцитов после инкубации МНК с ФП были отмечены у одного и того же больного РМЖ в 9 случаях. Результаты сравнения этой небольшой группы больных РМЖ с контролем оказались особенно интересными. Антигены НЬА-А1, -А2, -А10, -А19, -В16, -В7, -В27, -В40 встречались от 2 до 5 раз, а обладателями антигена НЬА-БЯ2 были 7 больных из девяти; дважды зарегистрированы фенотипы НЬА-БЯ0/БЯ1 и -БЯ2(15)/БЯ2(16). Неоднократно удавалось выявить лишь по одному антигену из пары НЬА класса I. Этот феномен может быть связан с описанными в литературе данными о том, что у 88,5% больных онкологическими заболеваниями при серологическом типи-ровании выявляются неполные НЬА-фенотипы вследствие низкой экспрессии отдельных поверхностных антигенов [11].
Одновременное повышение количества СБ8(+)- и СБ4(+)-лимфоцитов, после инкубации МНК с ФП у одного и того же больного РМЖ отмечалось у 24 больных. Иммуногенетический анализ этой группы при сравнении с контролем показал повышенные частоты НЬА-БЯ1 и -БЯ6 в сочетании с НЬА-А19, -В27, -В40. Антиген НЬА-В15 не выявлялся, то есть негативно ассоциировался с позитивной реакцией МНК на ФП по увеличению относительного содержания СБ4(+)- и СБ8(+)-лимфоцитов.
Одновременное снижение количества СБ8(+)- и СБ4(+)-лимфоцитов, или негативный ответ МНК на ФП, у одного и того же больного РМЖ отмечалось в 9 случаях. Сравнение с контролем выявило преобладание
НЬЛ-БЯ6 и сочетаний с ним НЬЛ-Л2/БЯ6 и -БЯ5/БЯ6, а также фенотипов НЬЛ-Л2/В12, -Л19/В16. Полученные данные позволяют заключить, что антигены НЬЛ-Л2, -БЯ6 ассоциируются с негативной реакцией МНК на ФП по обеим субпопуляциям у больных РМЖ. Не было выявлено ни одного случая реакции МНК на ФП, когда бы повышение количества СБ4(+)-лимфоцитов у одного и того же больного, сопровождалось достоверным снижением количества СБ8(+)-лимфоцитов после инкубации МНК с ФП.
В связи с тем, что НЬЛ-система чрезвычайно полиморфна, а на одной и той же иммунокомпетентной клетке присутствуют одновременно несколько антигенов НЬЛ всех классов, иммуногенетический анализ является достаточно сложной задачей. Часто сочетание одного и того же НЬЛ-антигена в различных комбинациях с другими НЬЛ-антигенами ассоциируется и с различным характером реакции на ФП, показатели которой также варьируют. В результате проведенных нами исследований выявлен ряд НЬЛ-ассоциаций, связанных не только с предрасположенностью или резистентностью к РМЖ и ФАМ, но также установлены некоторые ассоциации НЬЛ с характером реакции на ФП.
Наиболее результативными оказались сравнения различных типов реакции МНК на ФП по СБ8(+)- и СБ4(+)-лимфоцитам у одного и того же больного. Антиген НЬЛ-БЯ6 закономерно ассоциировался с достоверной реакцией одновременно двух субпопуляций Т-лим-фоцитов после инкубации МНК с ФП. Сочетания этого антигена с НЬЛ-Л19, -В27, -В40 ассоциировались с позитивным ответом на ФП. Сочетания антигенов НЬЛ-Л2, -В12 закономерно ассоциировались с отсутствием позитивного ответа МНК на ФП.
Установлены НЬЛ-ассоциации с наиболее распространенными типами реакций на ФП. Чаще других встречались позитивные реакции МНК на ФП по СБ8(+)-лимфоцитам и негативные реакции - по СБ4(+)-лимфоцитам. Антигены НЬЛ-Л1, -Л2, -Л10, -Л19, -В16, -В7, -В27, -В40 в сочетании с НЬЛ-БЯ2 ассоциировались с указанными типами реакций на ФП. Однако одновременно разнонаправленные реакции на ФП по СБ8(+)- и СБ4(+)-клеткам регистрировались только у трети больных РМЖ. Чаще более выраженный позитивный ответ МНК на ФП по СБ8(+)-лимфоцитам демонстрировали больные, у которых отмечалась ассоциация антигенов НЬЛ-Л1, -Л2, -Л19, -В16, -В35 в сочетании с -БЯ7. Негативный ответ по СБ4(+)-клеткам ассоциировался с антигенами НЬЛ-Л2, -В16, -В27, в сочета-ниис -БЯ2, -БЯ6. Отсутствие реакции на ФП, как при РМЖ, так и ФАМ, закономерно ассоциировалось с сочетанием антигенов НЬЛ-Л2, -В12 и -БЯ2.
У некоторых больных ФАМ была зарегистрирована реакция на ФП, ассоциированная с теми же НЬЛ-анти-генами, что и при РМЖ. Однако их частоты встречаемости при РМЖ были значительно ниже, чем при ФАМ. Позитивные реакции по СБ8(+)-лимфоцитам у больных ФАМ, кроме антигенов НЬЛ-Л1 и -Л19, ассоциировались также с антигенами НЬЛ-В5, -В16, -В21, -В35, что, скорее всего, имеет отношение к типу опухоли.
Таким образом, нами установлено, что выраженность реакции МНК на ФП у больных РМЖ и ФАМ устойчиво ассоциируется с определенными НЬЛ-анти-генами, то есть носит специфический характер.
Исследования генетической обусловленности иммунного ответа находятся еще на “феноменологическом” уровне и формируют новое направление в иммуногенетике, обозначенное как “качество” иммунного ответа [7]. Достижения последних лет в области генетики иммунного ответа получили отражение в практике, и небезуспешные попытки создания онковакцин являются ярким примером прогресса в этой сфере.
Выводы. Общим иммуногенетическим признаком предрасположенности к развитию опухолей молочной железы злокачественной и доброкачественной природы является HLA-антиген - A19, частота которого почти в 5 раз превышает контрольные значения в обеих группах больных женщин. Следовательно, в группу риска развития этой патологии попадает, с учетом популяционной частоты иммуногенетического признака, 8% всех женщин европеоидного населения Сибири. Выявление у женщины антигена HLA-A19 в сочетании с рядом других HLA-антигенов (-B5, -B7, -B35, -DR2 и др.) существенно повышает достоверность иммуногенетического прогноза развития заболевания молочной железы опухолевой природы на индивидуальном уровне.
Значимое возрастание численности Т-лимфоцитов, участвующих в клеточном противоопухолевом иммунитете с фенотипом CD8(+) при инкубации с фетальным протеином, наиболее часто выявлялось у женщин, больных раком молочной железы, с генотипом HLA-A1, тогда как низкая реактивность клеток в этом тесте характерна для больных женщин с генотипами HLA-A2, -B12, -B15. Наибольшая реактивность CD4(+) Т-клеток с усиливающими силу иммунного ответа функциями, более характерна для больных женщин, носителей HLA-DR6 антигена.
Среди женщин с фиброаденоматозом, CD8(+)-лим-фоциты которых высоко реагируют на инкубацию с фетальным протеином, наиболее часто выявляются антигены HLA-DR2 в сочетании с HLA-A3 и -A19. Наибольшая степень реактивности CD4(+) Т-лимфоцитов с хел-перными функциями характерна для больных женщин с генотипом HLA-A1, -B8, -DR3, с высокой частотой регистрируемого среди европеоидов, предрасположенных к развитию аутоиммунных процессов.
Выявленные различия в характере ассоциированности аллельных вариантов HLA-генов с реакциями на фетальный протеин лимфоидных клеток женщин с доброкачественным и злокачественным характером опухолевого роста тканей молочной железы, вероятно, свидетельствуют и о различиях в иммуногенетической детерминированности функций клеток иммунной системы, принимающих непосредственное участие в контроле над антигенным постоянством тканей и реализации функций противоопухолевого иммунитета.
THE IMMUNOGENETIC ANALYSIS OF LYMPHOCYTES REACTION TO ONCOASSOCIATED ANTI- GENS IN BREAST CANCER AND FIBROADENO- MATOSIS PATIENTS
A.I. Autenshlyus, V.I. Konenkov, I.Yu. Korotkova,
G.G. Ivanova, S.V. Sidorov, M.M. Cherenkova,
A.V. Proskura, A.V. Shevchenko, Yu.V. Sedova,
A.N. Shkunov
Association of HLA and reaction to fetal protein (FP) ofpe-ripheral blood mononuclear cells (MNC) in 67 breast cancer
Частоты встречаемости АГ (%)
HLA Контроль n=143 РМЖ n=67 Повышение количества МНК RR 2-1 Р (ТМФ)
CD4(+) -клетки CD8(+) -клетки Р 4-3 P 6-5
<15% n=38 >15% n=29 <15% n=22 >15% n=45
1 2 3 4 5 6
A1 21,68 22,39 23,68 20,69 9,09 28,89 1,04 0,22 0,05*
A2 49,65 64,18 65,79 62,07 72,73 60,00 1,82* 0,19 0,13
A19 8,39 25,37 18,42 34,48 18,18 28,89 3,71** 0,07 0,16
B27 5,59 16,42 13,16 20,69 9,09 20,00 3,31** 0,19 0,16
B40 10,49 20,90 23,68 17,24 18,18 22,22 2,25* 0,20 0,24
DR1 23,08 38,81 39,47 37,93 27,27 44,44 2,11** 0,20 0,09
DR3 23,08 10,45 7,89 13,79 9,09 11,11 -2,57* 0,23 0,32
DR4 25,17 11,94 13,16 10,34 13,64 11,11 -2,48* 0,28 0,29
DR6 4,90 23,88 15,79 34,48 22,73 24,44 6,10** 0,05* 0,24
A2, A19 0,00 14,93 7,89 24,14 13,64 15,56 17,44** 0,05 0,28
B12, B35 0,00 5,97 5,26 6,90 4,55 6,67 63,49** 0,37 0,41
A1/B40 2,10 10,45 13,16 6,90 4,55 13,33 5,44** 0,23 0,21
A19/B5 0,00 4,48 2,63 6,90 4,55 4,44 46,88* 0,32 0,45
A19/B7 2,10 11,94 10,53 13,79 9,09 13,33 6,33** 0,27 0,29
A2/B12 6,99 10,45 13,16 6,90 22,73 4,44 1,55 0,23 0,03*
A2/B15 8,39 4,48 7,89 0,00 13,64 0,00 -1,95 0,18 0,03*
A2/DR6 1,40 20,90 15,79 27,59 22,73 20,00 18,62** 0,12 0,24
A9/DR4 9,09 1,49 2,63 0,00 4,55 0,00 -6,60* 0,57 0,33
B12/DR6 0,00 4,48 2,63 6,90 4,55 4,44 46,88* 0,32 0,45
B15/DR2 5,59 7,46 13,16 0,00 18,18 2,22 1,36 0,05 0,03*
B16/DR5 6,29 8,96 5,26 13,79 22,73 2,22 1,46 0,17 0,01*
B27/DR1 0,00 5,97 5,26 6,90 4,55 6,67 63,49** 0,37 0,41
B40/DR6 0,70 8,96 5,26 13,79 9,09 8,89 13,97** 0,17 0,34
Достоверность различий
Примечание. * - достоверность различий р<0,05; ** - достоверность различий р<0,01 (здесь и в табл. 2 и 3 выборочно приведены наиболее значимые данные).
(BC) and 23 fibroadenomatosis (FAM) female patients was investigated. Reaction to FP was estimated by change of CD4(+)-and CD8(+)-lymphocytes amount after incubation them in vitro with FP or with physiological solution (control). Reaction to FP was characterized by the increase of CD8(+)-lymphocytes and increase or downturn of CD4(+)-lymphocytes amount. The positive reaction to FP of CD8(+)-lymphocytes in BC and FAM patients was associated with HLA-A1, -A19, -B27, -B40, -DR1, -DR6. Positive reactions to FP of CD8 (+)-lymphocytes in FAM patients, but not BC patients, were associated with HLA-A1/B12, -B16/B35 phenotypes. Absence of reaction to FP in BC and FAM patients was associated with HLA-A2, -B12, -DR2, -DR7, and also with atypical combinations of HLA which do not meet usually among healthy women.
ЛИТЕРАТУРА
1. Коненков В.И. Развитие клинической иммуногенетики в Сибири / В.И. Коненков // Бюл. СО РАМН. 1998. № 2. С. 80-84.
2. Коненков В.И. Медицинская и экологическая иммуногенетика / В.И. Коненков. Новосибирск, 1999. 250 с.
3. Леонова Т.Я. Контроль качества лабораторных исследований (методические рекомендации для врачей-лабо-рантов) / Т.Я. Леонова, Е.Г. Степанова. Новосибирск, 1993. 23 с.
4. Ответ лимфоцитов больных фиброаденоматозом и раком молочной железы на опухолеассоциированные антигены in vitro / А.И. Аутеншлюс, Г.Г. Иванова, С.В. Сидоров и др. // Иммунология. 2003. № 1. С. 26-28.
Частоты встречаемости АГ (%) Достоверность различий
Повышение количества МНК RR 2-1 P (ТМФ)
HLA Контроль ФАМ CD4(+) -клетки CD8(+) -клетки P 4-3 P 6-5
n=143 n=23 <0% n=12 >0% n=11 <15% n=15 >15% n=8
1 2 3 4 5 6
A1 21,68 43,48 33,33 54,55 46,67 37,50 2,78* 0,20 0,31
A19 8,39 34,78 25,00 45,45 20,00 62,50 5,82** 0,21 0,05
B8 17,48 17,39 0,00 36,36 20,00 12,50 -1,01 0,04* 0,41
B14 4,20 21,74 25,00 18,18 20,00 25,00 6,34** 0,36 0,38
DR2 27,97 47,83 58,33 36,36 33,33 75,00 2,36* 0,19 0,06
DR3 23,08 21,74 0,00 45,45 26,67 12,50 -1,08 0,01* 0,32
DR5 46,85 13,04 16,67 9,09 20,00 0,00 5,88** 0,41 0,26
A1, A19 0,70 13,04 8,33 18,18 6,67 25,00 21,30** 0,37 0,24
A2, A19 0,00 13,04 8,33 18,18 13,33 12,50 15,00** 0,37 0,47
A1/B8 11,19 17,39 0,00 36,36 20,00 12,50 1,67 0,04* 0,41
A1/B12 2,10 21,74 25,00 18,18 20,00 25,00 12,96** 0,36 0,38
A1/DR3 8,39 17,39 0,00 36,36 20,00 12,50 2,30 0,04* 0,41
A1/DR7 4,90 21,74 25,00 18,18 26,67 12,50 5,40* 0,36 0,32
A19/B12 1,40 13,04 8,33 18,18 13,33 12,50 10,58* 0,37 0,47
A19/B14 0,70 8,70 8,33 9,09 6,67 12,50 13,52* 0,52 0,47
A19/B35 1,40 17,39 16,67 18,18 13,33 25,00 14,84** 0,41 0,33
A19/DR2 3,50 21,74 16,67 27,27 6,67 50,00 7,67** 0,32 0,03*
A19/DR3 0,70 8,70 0,00 18,18 6,67 12,50 13,52* 0,22 0,47
A3/DR2 6,99 13,04 25,00 0,00 0,00 37,50 2,00 0,12 0,03*
B12/DR7 5,59 21,74 33,33 9,09 26,67 12,50 4,69* 0,16 0,32
B14/DR1 0,70 8,70 8,33 9,09 6,67 12,50 13,52* 0,52 0,47
B14/DR7 2,10 17,39 25,00 9,09 20,00 12,50 9,82** 0,27 0,41
B35/DR2 3,50 17,39 16,67 18,18 6,67 37,50 5,81* 0,41 0,09
- достоверность различий p<0,01.
Примечание. * - достоверность различий p<0,05; ** -
5. Реакция лимфоцитов и гуморальный иммунный ответ на опухолеассоциированные антигены у онкологических больных / А.И. Аутеншлюс, Г.Г. Иванова, В.М. Столярова и др. // Бюл. СО РАМН. 1999. № 3-4. С. 60-63.
6. Реакция лимфоцитов на фетальные протеины у больных раком молочной железы / А.И. Аутеншлюс, Г.Г. Иванова, С.В. Сидоров и др. // Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии. 4-й конгресс РААКИ: Тез. докл. М., 2001. Т. 2. С. 44.
7. ХаитовР.М.Генетикаиммунного ответа/Р.М. Хаитов. Л.П. Алексеев // Бюл. СО РАМН. 1998. № 2. С. 27-33.
8. Histocompatibility Testing: A Practical Approach / Edited by P. Dyer and D. Middleton // Oxford University Press. 1993. 303 P.
9. Human breast carcinoma patients develop clonable oncofetal antigen-specific effector and regulatory T- lymphocytes / J.W. Rohrer, A.L. Barsoum, D.L. Dyess et al. // J. Immunol. 1999. Vol. 162. № 11. P. 6880-6892.
10. Identification of activated tumor antigen-reactive CD8+ cells in healthy individuals / T.V. Lee, B.W. Anderson, G.E. Peoples et al. // Oncol. Rep. 2000. Vol. 7. № 3. P. 455-466.
11. Lymphocyte subsets in patients with ovarian and breast cancer / W. Schroder, A. Vering, M. Stegmuller, R. Strohmeier //Eur. J.Gynaecol. Oncol. 1997. Vol. 18.№6.P.474-477.
12. Nomenclature for factors of the HLA system 1998 / J.G. Bodmer, S.G. Marsh, E.D. Albert et al. // Eur. J. Of Immu-nogenetics. 1999. Vol. 26. № 2/3. P. 81-116.
Частоты встречаемости АГ (%)
HLA Контроль n=143 РМЖ n=67 МНК RR 2-1 Р (ТМФ)
CD4(+)-лимфоциты CD(+)-лимфоциты Р 4-3 P 6-5
<15% n=49 >15% n=18 <15% n=60 >15% n=7
1 2 3 4 5 6
A19 8,39 25,37** 26,53 22,22 26,67 14,29 3,71** 0,24 0,31
B16 14,69 17,91 12,24 33,33 16,67 28,57 1,27 0,04* 0,26
B27 5,59 16,42** 14,29 22,22 16,67 14,29 3,31** 0,20 0,41
B35 18,88 20,90 26,53 5,56 20,00 28,57 1,13 0,05* 0,30
DR1 23,08 38,81** 44,90 22,22 38,33 42,86 2,11** 0,06 0,30
DR2 27,97 38,81* 30,61 61,11 38,33 42,86 1,63* 0,02* 0,30
DR6 4,90 23,88** 24,49 22,22 25,00 14,29 6,10** 0,25 0,33
A2,A19 0,00 14,93** 16,33 11,11 15,00 14,29 17,44** 0,14 0,42
B12, B35 0,00 5,97** 6,12 5,56 5,00 14,29 63,49** 0,43 0,31
DR2, DR 2 0,00 5,97** 2,04 16,67 5,00 14,29 63,49** 0,05 0,31
A19/B7 2,10 11,94** 10,20 16,67 11,67 14,29 6,33** 0,24 0,41
A2/DR6 1,40 20,90** 20,41 22,22 21,67 14,29 18,62** 0,26 0,37
A9/DR4 9,09 1,49* 2,04 0,00 1,67 0,00 -6,60** 0,73 0,90
B12/DR7 5,59 5,97 4,08 11,11 3,33 28,57 1,07 0,23 0,05*
B16/DR2 4,90 10,45 4,08 27,78 10,00 14,29 2,27 0,01* 0,40
B18/DR2 4,90 2,99 4,08 0,00 0,00 28,57 -1,67 0,53 0,01**
B27/DR1 0,00 5,97** 6,12 5,56 5,00 14,29 63,49** 0,43 0,31
B27/DR2 3,50 10,45* 4,08 27,78 11,67 0,00 3,22* 0,01* 0,44
B40/DR2 3,50 10,45* 4,08 27,78 11,67 0,00 3,22* 0,01* 0,44
B40/DR6 0,70 8,96** 10,20 5,56 10,00 0,00 13,97** 0,34 0,50
Достоверность различий
Примечание. * - достоверность различий p<0,05; ** - достоверность различий p<0,01.
13. Salerno C. Expression of HLA class I antigens in human tumors and their involvement in tumor growth / C. Salerno, T. Crepaldi, P. Savoia. //Ric. Clin. Lab. 1990. № 2. P. 85-93.
14. The Data Book Addendum Antropological Analysis// Central Data Analysis Committee 11-th International Histocompatibility Workshop. 1991.280 P.
15. Wild-typep53 epitope naturally processed and presented by an HLA-B haplotype on human breast carcinoma cells / K.P. Papadopoulos, C.S. Hesdorffer, N. Suciu-Foca et al. // Clin. Cancer Res. 1999. Vol. 5. № 8. P. 2089-2093.
