CC BY
42
УДК: 616.006.007
И.Ю. Короткова, А.М. Аутеншлюс, Г.Г. Иванова, А.В. Проскура,
С.В. Сидоров, М.М. Черенкова, Ю.В. Седова, А.В. Шевченко,
В.И. Коненков
ИММУНОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ОТНОСИТЕЛЬНОГО СОДЕРЖАНИЯ СУБПОПУЛЯЦИЙ Т-КЛЕТОК В ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ФИБРОАДЕНОМАТОЗОМ
ГУ НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН,
ГУ НИИ молекулярной биологии и биофизики СО РАМН,
МУЗ Городская клиническая больница №1, Новосибирск
Изучали ассоциированность антигенов HLA с содержанием субпопуляций Т-клеток в периферической крови 67 женщин, больных раком молочной железы (РМЖ) и 23 женщин с фиб-роаденоматозом (ФАМ). Низкое содержание как CD4+, так и CD8+ клеток у больных РМЖ и/или ФАМ ассоциировалось с HLA-A2, -АЗ, -А19, -В7, -В35 в сочетаниях с -DR1, -DR6. Низкое содержание CD8+, но высокое содержание CD4+ мононуклеарных клеток (МНК) ассоциировалось с HLA-A2, -АЗ, -А19, -В5, -В12 в сочетаниях с -DR1, -DR2, -DR6. Низкое содержание CD4+, но высокое содержание CD8+ клеток ассоциировалось с HLA-A2, -А9, -В27, -В40 в сочетаниях с -DR1, -DR2, -DR6. Высокое содержание как CD4+, так и CD8+ клеток у больных РМЖ и у больных ФАМ ассоциировалось с HLA-A1, -А2, -А9, -А10, -В40, в сочетаниях с -DR2, -DR6. Фенотипы HLA-A1/B14, -A1/DR7 ассоциированы со средним содержанием CD8+ МНК у больных ФАМ, но не у больных РМЖ. Фенотипы HLA-A1/A19, -А1 /В12 ассоциировались со средним содержанием CD4+ клеток у больных ФАМ и встречались чаще, чем в контроле, но не встречались при РМЖ. Заключили, что при РМЖ отмечаются достоверные отклонения в ассоциациях HLA с содержанием CD4+ и CD8+ Т-клеток.
Ключевые слова: иммуногенетика, HLA, онкология, субпопуляции Т-клеток
Антигены HLA (Human Leucocyte Antigens), направленной на индукцию противоопухолевых
экспрессированные на поверхностной мембране цитотоксических лимфоцитов у больных лиц [4].
иммунокомпетентныхклеток, определяют их фун- OFA-реактивные активированные CD8+ клетки
кциональную активность, что является важным обнаружены и у здоровых людей, что может улуч-
для генетического контроля иммунных реакций шать наше понимание механизмов иммуновы-
человека 11]. При раке молочной железы (РМЖ) живаемости и стабилизации иммунных реакций
взаимодействие с потенциальными эффектор- опухолями [5].
ными клетками часто дефектно из-за сниженной Показано также, что HER-2/NEU эпитопы,
экспрессии молекул HLA класса I [2]. Некоторые ограниченные HLA-A2 класса I, могут индуци-
аллели HLA класса I низко экспрессируются ровать пептидспецифические CD8+ Т-клетки.
конституционально, что может играть важную Однако величина ответов была как низкой, так
роль в механизмах защиты опухоли. Экспрессия и недолгой, подтверждая, что CD4+ Т-клеточная
HLA-B44( 12) утрачивается чаще других аллелей помощь необходима для длительного иммунитета
HLA класса I, и различия не связаны с изменени- [6]. Уже получено несколько НLA-DК.7-рестрик-
ями в частотах встречаемости HLA-B44 между тированных кандидатов эпитопов, представля-
пациентами и контролем [3]. емых HLA классом II в Т-клеточных ответах на
Онкофетальный антиген (OFA) обнаружен на синтетические пептиды. [7].
всех известных типах опухолевых клеток чело- В исследованных нами группах больных РМЖ
века, но не выявляется на нормальных клетках. и фиброаденоматозом (ФАМ) было установлено
При развитии рака вырабатываются OFA-специ- пониженное содержание основных субпопуляций
фические эффекторные Т-клетки. Поэтому OFA- Т-клеток [8]. Однако далеко не все аллели HLA,
производные пептиды (белок Р53) являются по- ассоциированные с низким количеством CD8+
тенциальными кандидатами для иммунизации, Т-лимфоцитов, оказываются малоэффективными
для распознавания трансформированных опухолью клеток. Так, нами было показано, что Т-клет-ки большинства больных РМЖ (68%) способны развивать специфический ответ на фетальный протеин in vitro. Реакция была связана с достоверным увеличением количества цитотоксических CD8+ клеток. Также были установлены антигены HLA, ассоциированные с отсутствием реакции на фетальный протеин [9].
Целью настоящего исследования является проведение анализа ассоциированности антигенов HLA с содержанием субпопуляций CD4+ и CD8+ Т-клеток в периферической крови больных РМЖ и ФАМ, а также сравнение частот встречаемости антигенов HLA среди больных женщин. Это позволит установить сочетания антигенов HLA, ассоциированных с определенным содержанием субпопуляций Т-клеток в периферической крови пациентов и прогнозировать способность их Т-лимфоцитов развивать OFA-специфичес-кий ответ.
Методы
Обследовано 90 женщин, находившихся на учете в онкологическом диспансерном отделении Новосибирской городской клинической больницы №1. Из них 67 женщин, больных РМЖ до начала лучевой и химиотерапии, и 23 женщины с ФАМ до оперативного лечения. В качестве генетического контроля использовалась репрезентативная группа здоровых женщин (п=143) из регионального этнического контроля для Западной Сибири [10]. В качестве иммунологического контроля была взята группа условно здоровых женщин (п=112), не имевших в анамнезе онкологической патологии.
Определение относительного содержания субпопуляций Т-лимфоцитов проводили методом непрямой иммунофлюоресценции с помощью моноклональных антител серии ИКО (НПЦ «Медбиоспектр», г. Москва) в соответствии с прилагаемыми рекомендациями. В работе использованы моноклональные антитела: ИК086
— маркер CD4+ клеток, ИК031 — маркер CD8+ клеток.
Определение антигенов HLA класса I осуществлялось в стандартном лимфоцитотоксическом тесте с помощью типирующих сывороток НИИ гематологии и переливания крови «Гиссанс» (Санкт-Петербург). Специфичности гена DRB1
— HLA класса II устанавливались методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) ДНК, полученной из мононуклеарных клеток (МНК) периферической крови, с использованием наборов реактивов НПО «ДНК-технология» (Москва). Результаты представлены по классификации серологических субтипов HLA, поскольку анти-
гены НЬА класса I тестировали серологическим методом [!]• Статистическая обработка проводилась традиционными методами параметрической (достоверность различий (Р) оценивалась точным методом Фишера и по критерию Стьюдента) и непараметрической статистики (квартальный анализ). Для оценки иммуногенетических параметров рассчитывались частоты встречаемости антигенов НЬА (АГ%) и достоверность различий с контролем общепринятыми методами построения «сетки 2x2» и оценки результатов по критерию «хи-квадрат».
Результаты
Нами проведен иммуногенетический анализ частот встречаемости антигенов НЬА в связи с различным уровнем содержания субпопуляций Т-клеток в периферической крови больных РМЖ и ФАМ. Для анализа использовали метод квартилей, где каждый из четырех выделенных диапазонов содержит в сумме по 25% от всего ранжированного ряда. Любой показатель ниже 25-й и выше 75-й перцентили уже достоверно отличается от среднего арифметического значения суммы показателей всего ряда [И]. Диапазоны обозначили как относительно низкий, пониженный, повышенный и высокий уровни содержания СБ4+ или С08+ клеток. Пониженный и повышенный уровни содержания Т-клеток объединили в один, обозначив его как средний уровень. Средние значения и средние отклонения показателей, соответствующих каждому уровню содержания С08+ и СВ4+ клеток, представлены в таблице 1. !
В каждом уровне ранжированного ряда почти \ все средние значения содержания С08+ и СБ4+ [ МНК у больных РМЖ и ФАМ были достоверно | ниже средних величин этого же параметра в кон- | троле. Только высокие показатели содержания г С08+ клеток у больных РМЖ и низкие показатели содержания СБ4+ МНК у больных ФАМ относительно этих же показателей в контроле были снижены недостоверно.
У больных РМЖ и ФАМ в основном при высоких показателях содержания С08+ клеток соответствующие им значения содержания СБ4+МНК часто были ниже, чем С08+ клеток, то есть наблюдалось инвертированное соотношение С04/С08, что видно и по соотношению их средних показателей. У здоровых лиц с высоким уровнем содержания СБ8+ клеток также встречается инвертированное соотношение С04/СБ8 (Таблица 1).
Таким образом, распределение показателей содержания С08+ и С04+ клеток в периферической крови больных РМЖ и ФАМ по уровням в основном соответствовало таковому в контрольной группе здоровых женщин. Однако средние
Таблица 1
Относительное содержание СИ4+ и С08+ клеток в периферической крови больных женщин раком молочной железы (РМЖ) и фиброаденоматозом (ФАМ)
Группы обследованных лиц Уровень содержания CD8+ клеток
Общая группа Низкий Средний Высокий
1. Доноры: п=112 (100%) п=31 (28%) п=56 (50%) п=25 (22%)
Диапазон CD8: (10-48) (10-19) (20-29) (30-48)
CD8 (М±ш) (24,94±6,10) (15,84±2,65)** (25,20±2,38) (35,64±4,11)*
CD4 (М±ш) (38,96±6,82) (38,94+7,11) (39,05±6,27)* (38,76+7,63)
CD4/CD8 (М±т) (1,76±0,60) (2,61 ±0,79) (1,57+0,31)** (1,14+0,32)**
2. Больные РМЖ п=67(100%) п=16 (24%) п=36 (54%) п=15 (22%)
Диапазон CD8: (12-38) (12-17) (18-24) (25-38)
CD8 (М±т) (21,30+4,86)** (14,56± 1,26)**## (18,75±0,94)**## (31,20±3,95)*
CD4 (М±т) (30,22±5,69)* (31,25+5,88) ^ (28,81 ±6,41) (33,40±4,19)
CD4/CD8 (М±т) (1,52+0,41)* (2,18±0,49)* (1,41±0,22)* (1,09±0,21)*
3. Больные ФАМ п=23(100%) п=6 (26%) п=13(57%) п=4(17%)
Диапазон CD8: (10-31) (10-14) (15-20) (21-31)
CD8 (М±т) (17,35+3,73)**# (12,33±1,33)* (17,15+1,73)**# (25,50±3,50)
CD4 (М±т) (28,22+5,23)** (25,67±5,11) (29,54±2,97)* (27,75±3,88)
CD4/CD8 (М±т) (1,71±0,32) (2,08±0,48)* (1,73±0,14)* (1,27±0,37)*
Группы обследованных лиц Уровень содержания CD4+ клеток
Общая группа Низкий Средни/i Высокий
1. Доноры: п=112 (100%) п=30 (27%) п=57(51%) п-25 (22%)
Диапазон CD4: (13-60) (13-33) (34-44) (45-60)
CD4 (М+ш) (38,96±6,82) (28,53±3,79)# (39,16±2,67) (50,54±3,93)#
CD8 (М±т) (24,94±6,10) (25,57±6,54) (25.04+5,89) (24,00+6,08)
CD4/CD8 (М±т) (1,76+0,60) (1,23±0,36) (1.73±0,49)## (2,42±0,83)##
2. Больные РМЖ п=67 (100%) п=20 (30%) п=32 (48%) п=15(22%)
Диапазон CD4: (20-48) (20-24) (25-34) (35-48)
CD4 (М±ш) (30,22+5,69)* (22,95+1.27)**## (30,00+2,57)**## (40,40±3,28)#
CD8 (М±ш) (21,30±4,86)** (19,20±2,32)*# (22,69±5,90) (21,13±5,34)
CD4/CD8 (М±т) (1,52+0,41)* (1,22±0,14)* (1,44±0,29)* (2,09±0,59)*
3. Больные ФАМ п=23 (100%) п=6 (26%) П п-12 (52%) п=5 (22%)
Диапазон CD4: (13-38) (13-26) (27-30) (31-38)
CD4 (М±т) (28,22+5,23)** (22,00+3,67) (28,58+1,01)**## (34,80±1,36)*
CD8 (М+ш) (17,35+3,73)** (16,00+3.33) (17,42+4,13) (18,80+2,32)
CD4/CD8 (М±т) (1,71+0,32)* (1,42±0,23)*# (1,78±0,32)# (1,91 ±0,28)#
Примечание: в ранжированных рядах показателей содержания СВ8+ ичи С04+ клеток приведены соответствующие им значения парного параметра «*» (р<0,01); «**<> (р<0,001) — достоверные различия со средними значениями в общей контрольной группе; «#» (р<0,01); «##» (р<0,001) — достоверные различия со средними значениями в общей группе больных и между группами РМЖ и ФАМ (по Фишеру).
значения этих параметров были ниже, чем контрольные, преимущественно за счет достоверного снижения показателей низкого и среднего уровней содержания С08+ клеток у больных РМЖ и за счет достоверного снижения показателей высокого и среднего уровней содержания С04+ клеток у больных ФАМ.
Среднее количество С04+ МНК не зависело от содержания СБ8+ клеток как у здоровых лиц, так и у больных РМЖ или ФАМ, о чем свидетельствовало отсутствие достоверной корреляции между их содержанием (г=0,2049 при РМЖ, г=0,2825 при ФАМ, г= -0,0921 — контроль). Вероятно, уровень содержания основных субпопуляций Т-клеток зависит от ряда других
признаков, например таких, как аллельные варианты НЬА.
Изучение ассоциированности относительного содержания субпопуляций Т-клеток с их НЬА-фенотипом начинали с определения характера распределения антигенов НЬА в общих группах обследованных нами женщин, больных РМЖ (п=67) или ФАМ (п=23) в сравнении с контролем (п=143) (Таблицы 2 и 3). Отмечалось высоко достоверное повышение относительно контроля частот встречаемости антигенов НЬА-А19, -В27, -ОШ и 0116 и их фенотипов -А2ДШ6, -А2/А19, -А19/В7, -В40ДЖ6, -В27ДЖ1 и -В12/ В35 (р<0,01) у больных РМЖ, и недостоверное у больных ФАМ. Остальные НЬА-ассоциации,
122 БЮЛЛЕТЕНЬ СО РАМН, №2 (124), 2007 г.
Таблица 2
Распределение HLA-антигенов в зависимости от относительного содержания CD8 (+) клеток в периферической крови больных женщин раком молочной
железы (РМЖ) и фиброаденоматозом (ФАМ)
HLA Частоты встречаемости HLA антигенов АГ(%) Достоверность различий
Контроль п=143 РМЖ п=67 ФАМ п=23 Относительное содержание CD8 ( +)клеток Р 3-2 Р 4-6 Р 4-5 Р 6-5 Р 8-5
РМЖ ФАМ
Низкое Среднее Высокое Низкое Среднее Высокое
П“ 16 п=36 п=15 п=6 п=13 п=4
1 2 3 4 5 6 7 8 9
А 1 21,68 12,50 ЯШИШЯШя 40,00 33,33* 25,00 0,03* 0,08 0,27 0,09 0,01*
А 2 49,65 64,18* 47,83 62,50 69,44* 53,33 33,33 53,85 50,00 0,08 0,25 0,22 0,14 0,22
А19 8,39 25,37** 34,78** 25.00* W 13,33 50,00 0,00 0,14 0,26 0,24 0,13 0,01**
В 5 9,79 16,42 13,04 31,25* 11,11 13,33 16,67 15,38 0,00 0,25 0,17 0,07 0,34 0,26
В12 15,38 16,42 30,43 37,50* 6,67 33,33 0,00 0,08 0,05* 0,03* 0,38 0,04*
В14 4,20 7,46 21,74** 6,25 11,11 0,00 33,33 15,38* 25,00 0,06 0,52 0,36 0,24 0,11
В27 5,59 16,42** 4,35 6,25 25,00** 6,67 0,00 0,00 25,00 0,11 0,52 0,10 0,11 0,49
В40 10,49 20,90* 13,04 12,50 19,44 40,00** 0,00 15,38 25,00 0,19 0,08 0,27 0,09 0,27
DR1 23,08 38,81** 21,74 56,25** 41,67* 20,00 16,67 23,08 25,00 0,07 0,04* 0,15 0,09 0,27
DR2 27,97 38,81* 47,83* 25,00 53,33* 16,67 VKMK 75,00 0,14 0,08 0,16 0,16 0,04*
DR4 25,17 11,94* 21,74 0,00* 19,44 13,33 16,67 30,77 0,00 0,13 0,23 0,06 0,29 0,22
DR5 46,85 43,75 &*№:■ 46,67 0,00 50,00 0,02* 0,28 0,16 0,14 0,00**
DR6 4,90 23,88** 13,04 18,75 25,00** 26,67* 33,33 7,69* 0,00 0,14 0,29 0,26 0,27 0,37
А1,А 9 4,20 4,48 4,35 0,00 0,00 20,00* 16,67 0,00 0,00 0,43 0,10 0,02* 0,59
А1.А19 0,70 0,00 0,00 0,00* 0,00 0,02* 0,00**
А2.А19 0,00 14,93** 13,04** 12,50** 19,44** 6,67 33,33 7,69** 0,00 0,27 0,40 0,27 0,20 0,08
АЗ.А19 0,70 7,46* 4,35 12,50* 5,56 6,67 0,00 7,69 0,00 0,36 0,40 0,28 0,45 0,15
B12JB14 0,00 1Л9 - 6,25 0,00 16,67 ■%$£&* 0,00 0,05* 0,52 0,31 0,01**
В12.В35 0,00 5,97 4,35 18,75** 2,78 0,00 16,67 0,00* 0,00 0,40 0,12 0,07 0,71
DR1.DR5 6,99 ... 31,25** 8,33 13,33 0,00 0,00 0,00 0,04* 0,17 0,04* 0,32 0,41
DR1.DR6 1,40 7,46* 0,00 6,25 11,11* 0,00 0,00 0,00 0,00 0,22 0,52 0,36 0,24 0,84
DR2,DR 6 1,40 7,46* 0,00 12,50* 5,56 6,67 0,00 0,00 0,00 0,22 0,40 0,28 0,45 0,84
А1/В12 2,10 4** 6,25 0,00 16,67** 0,00 0,00** 0,52 0,31 0,00**
А1/В14 0,00 0,00 0,00 16,67 0,00 0,05* 0,69 0,71 0,01**
А1/В40 2,10 10,45* 4,35 6,25 8,33 26,67** 0,00 7,69 0,00 0,26 0,13 0,42 0,08 0,26
А2/В5 3,50 10,45* 8,70 18,75* 8,33 6,67 16,67 7,69 0,00 0,31 0,27 0,20 0,43 0,33
А2/В17 2,80 7,46 0,00 0,00 11,11* 6,67 0,00 0,00 0,00 0,22 0,48 0,22 0,38 0,70
А2/В27 4,20 10,45 0,00 6,25 16,67* 0,00 0,00 0,00 0,00 0,12 0,52 0,23 0,11 0,59
А2/В35 6,29 11,94 13,04 12,50 16,67* 6,67 33,33 7,69 0,00 0,28 0,40 0,31 0,25 0,40
А10/В27 0,00 4,48* 0,00 0,00 5,56* 6,67 0,00 0,00 0,00 0,41 0,48 0,48 0,45
Короткова И.Ю. Иммуногенетический анализ относительного содержания субпопуляций Т-клеток в периферической крови больных раком молочной железы и фиброаденоматозом/с. 119-129
кроме аллелей НЬА-А19, -0112 и фенотипа -А2/А19, у больных РМЖ и ФАМ не всегда совпадали.
У больных ФАМ антиген НЬА-В14 и фенотипы -А19/В35, -А19/ОК2 встречались чаще, чем в контроле с высокой степенью достоверности, а при РМЖ различия были недостоверны. Сравнение групп больных РМЖ и ФАМ показало достоверное преобладание при ФАМ аллеля НЬА-А1 и сочетаний -А1 с -В12, -В14 и их же с -0117. Указанные антигены и фенотипы, вероятно, могут ассоциироваться с предрасположенностью скорее к доброкачественным, чем злокачественным опухолям молочной железы.
Среди больных РМЖ достоверно реже, чем в контроле, встречались антигены НЬЛ-ОИЗ и -0114, а при ФАМ различия были недостоверны. Частота антигена НЬА-ГЖ5 была недостоверно ниже контроля при РМЖ и достоверно ниже при ФАМ. Хотя аллель НЬА-0115 и фенотипы -0111/0115, -А2ДЖ6 достоверно преобладали при РМЖ относительно ФАМ, антиген НЬА-ОИ5 может связываться с относительной резистентностью как к РМЖ, так и к ФАМ.
Изучение ассоциированности антигенов НЬА с различным уровнем относительного содержания субпопуляций Т-клеток в периферической крови больных РМЖ и ФАМ начинали с определения частот встречаемости аллелей НЬА и их сочетаний при низком, среднем или высоком уровне содержания С08+ клеток в сравнении с контролем (Таблица 2). Следует заметить, что хотя степень достоверности была определена во всех уровнях содержания Т-клеток в периферической крови больных ФАМ относительно контроля, эти результаты могут использоваться только как предварительные, поскольку выборка пока
124 БЮЛЛЕТЕНЬ СО РАМН, №2 (124), 2007 г.
Таблица 3
Распределение Н1Л-антигеиов в зависимости от относительного содержания С04(+) клеток в периферической крови больных женщин раком молочной
железы (РМЖ) и фиброаденоматозом (ФАМ)
Частоты встречаемости НЬА антигенов Л ГС’..) Достоверность разл ичнй
Относительное содержание С 1)1 ( +) клеток
11 ь\ Контроль РМЖ ФАМ РМЖ ФАМ
п-из п=67 п-23 Низкое Среднее Высокое Низкое Среднее Высокое РЗ-2 Р 4-5 Р 6-5 Р 8-5
п-20 м-32 п-15 и-6 п-12 п-5
1 2 3 4 5 6 7 8 9
л 1 21.68 22.39 43.48* 5,00 28.13 33,33 16.67 66,67* 20.00 0.03* 0.01* 0.25 0.02*
А 2 49,65 61.18* 47,83 75.00* 59.38 60.00 33.33 50.00 60.00 0,08 0.13 0.25 0.23
А19 8,39 25,37* * 34.78** 35.00** 18,75 26,67* 50.00* 41.67* 0,00 0.14 0.11 0.24 0.09
В14 4.20 7.46 21.74** 5.00 6.25 13,33 16.67 16.67 40.00* 0,06 0,45 0.29 0.24
В27 5.59 16.42** 4,35 20.00* 18.75* 6,67 0.00 8.33 0,00 0.11 0.28 0.22 0,28
1Ж I 23.08 38,81** 21.74 45.00* 31.25 53.33* 33.33 25.00 0.00 0,07 0.14 0.09 0,27
1Ж2 27.97 38.81* 47.83* 25,00 37,50 60,00* 33.33 50.00 60.00 0.14 0,16 0,09 0.20
ГЖЗ 23.08 10.45* 21.74 20.00 6,25* 6,67 16.67 25.00 20.00 0.11 0.12 0,46 0,10
ГЖ 4 25,17 11,94* 21.74 20.00 15,63 0.00* 16.67 25.00 20.00 0.13 0,27 0,13 0,25
[Ж 5 46,85 37,31 13.04** 45,00 34,38 33,33 16.67 8,33* 20,00 0.02* 0.17 0,26 0,07
[Ж 6 4.90 23.88** 13.04 25.00** 28,1,4** 13,33 16.67 16.67 0.00 0,14 0.25 0.17 0,24
А1.А19 0,70 0.00 13,04** 0.00 0.00 0,00 0,00 25.00* 0,00 0.02* 0.02*
А2.А 9 6.29 13,43* 13,04 20.00* 12.50 6.67 0,00 8.33 40.00* 0,28 0,23 0.35 0,40
А2.А19 0.00 14.93“ 13,04** 20,00* * 15.63** 6.67 16.67* 16.67* 0.00 0,27 0,27 0.28 0.35
АЗ.А19 0,70 7.46* 4.35 10.00* ().()() 20,00* * 16,67 0.00 0,00 0,36 0.14 0.03*
В7.В 8 0,70 5,97* 0.00 10,00* 3,13 6.67 0.00 0.00 0.00 0,30 0,28 0.44 0.73
DR2.DK И 1,40 7.46* 0.00 10.00 9.38* 0.00 0.00 0.00 0.00 0.22 0.36 0.31 0,37
А1 / В12 2.10 1.49 21.74** 0.00 0,00 6.67 0.00 33.33* 20,00 0.00“ 0.32 0,00“
А1/В40 2.10 10,45* 4.35 5,00 12,50* 20,00* 0.00 8.33 0,00 0.26 0.28 0,26 0,40
А2/В 5 3,50 10.45* 8,70 10,00 6,25 20,00* 16,67 0.00 20,00 0,31 0,35 0,15 0.52
А2/В27 4.20 10.45 0.00 10.00 15.63* 0.00 0.00 0.00 0,00 0,12 0.29 0,13 0.19
А10/В40 0,70 5.97* 0,00 0,00 6.25 13,33* 0,00 0.00 0.00 0.30 0,37 0.29 0.52
А 19/В 7 2.10 11,94** 4,35 15,00* 9,38 13.33 0.00 8.33 0,00 0.21 0,28 0.34 0.44
А 19/В 12 1.40 4,48 13,04* 5,00 3.13 6,67 0,00 25.00* 0,00 0,14 0.18 0.14 0.05
А19/В35 1.10 4,48 17.39** 5.00 6,25 6.67 33,33* ■* 16,67* 0.00 0.06 0.45 0.46 0.24
А1/1Ж 1 3.50 11.94* 13,04 0,00 15.63* 20,00* 0,00 25.00* 0.00 0.28 0,08 0.29 0,25
А1/ОК7 4,90 1.49 21.74* 0.00 3,13 0.00 16,67 25.00* 20.00 0.00“ 0,62 0.68 0,05
А2/ОК 1 11.89 23.88* 8.70 30,00* 12.50 40.00** 16,67 8.33 0.00 0.08 0,09 0,03* 0.40
А2ДЖ (> 1.40 20.90* * 4.35 25.00** 21,88** 13,33* 16.67 0,00 0.00 0,05* 0,25 0.26 0,09
лз/ик 1 4,20 11.94* 4.35 20,00* 6.25 13,33 16.67 0,00 0,00 0.21 0,12 0,29 0,52
Короткова И.Ю. Нммуно/енепшческий анализ относительного содержания субпопуляций Г-клеток и периферической крови больных раком молочной железы и фиброаденоматозом / с. 119-129
I
сч >.о о 0.27 0,15 0.07 0,15 910 о 'ХТ 0.24 0,37 С^1 1П
# еч О - СЧ о Г-1 го сч со ю го чг о Г-1 'с— # N о о
<.о © # Г-1 С сч сч о СЧ Г4! см сс сч 1.0 '«Г о щ сс о С^1
0.17 го го ОС о ОС сч о • • о се Г'! © со щ
20,00 о о о о о * о *• о о о о 5
0.00 ОС * 1.0 гч # се * ••О сч * го об о со об
0.00 г- о се го щ с с с: © 1 го со I" се § ©
« » ГО со го го го' • о о сч 1-» СО* о р р» СО* се # ГО
6.25 о о СС го с5 о о щ СО с 1.0 гч 1.0 С'! со' * X © го го' ЬО с4!
00 01 « к 8 о СЧ о о о • 2 о о о ••О 2 »о" • с о о •о # * гч
1-0 го Г"» об # « *<г 1 - Г'! * о г* ОС * О! * * го г- 1.0 го • © го 1-' •о ю го о о
* го* 1-' се ОС X V* ["> о но' СП чр « 1<0 *«? г' 1- © •о * г- к ю V— о • • се сс
гч г'! Го о О • о «о* о сч «о го’ 3 10 с о 10
А10ДЖ2 А19ЛЖ 1 СЧ ос £ г. А19, ПКЗ 1^ 04 сч Г" ос Е гч ос <*“> 1 -Г'! 22 С4» »о 3 С' о п & ОС
недостаточна для полноценного иммуногенетического анализа.
Низкое содержание С 08+ клеток в периферической крови больных РМЖ было достоверно ассоциировано относительно контроля с антигенами НЬА-А19. -В5, - В 12, -01*1 и с их различными сочетаниями: аллеля НЬА-А19 с -А2. -АЗ, -В7, -01*1; антигена НЬА-В5 с -Л2, -0К1; аллеля НЬА-В12 с -В35; аллеля НЬА-01*1 с -АЗ. -А19, -01*5. Также низкое содержание С 08+ клеток при РМЖ было достоверно ассоциировано и с фенотипами -А2/01*6. -01*2/ 01*6. Низкое содержание С 1)8+ клеток в периферической крови больных ФАМ было связано с аллелем Н1.А-А1 и фенотипами -А 1/В 12, -В12ДЖ7.
Среднее содержание С 1)8+ МНК у больных РМЖ было достоверно ассоциировано относительно контроля с аллелями НЬА-А2, -А19. -В27, -DR1, -ЕЖ6 и с их различными комбинациями: Аллеля НЬА-А2 с -А19, -В17, -В27, -В35; аллеля НЬА-А19 с -В5, -В27; аллеля Н1.А-В27 с -ЛЮ. -В35, -1Ж1; аллеля НЬА-01*1 с -А2. -В40. -01*6; аллеля НЬА-ОЯб с -А1, -А2, -АЗ и -В40. Среднее содержание С08+ МНК у больных ФАМ было достоверно ассоциировано с антигенами НЬА-Л19, -В14, -1Ж6 также в различных сочетаниях: аллеля НЬА-А19 с -А2, -В35; аллеля НЬА-В14 с - А 1, -В 12 и с фенотипом -Л 1/0 1*7 относительно контроля.
Высокое содержание С08+ клеток у больных РМЖ достоверно ассоциировалось с аллелями НЬА-В40, -01*2. -01*6 в различных сочетаниях: аллеля НЬА-В40 с -А1, -01*2, -01*6; антигена Н1^А-01*2 с -Л 1. -А10. Фенотипы -А1/А9 и -А2/ОК6 при РМЖ и -В27/ 01*1 при ФАМ достоверно ассоциировались с высоким содержанием С08+ МНК относительно контроля.
Обращает внимание, что некоторые антигены Н ЬА были достоверно ассоциированы одновременно с несколькими уровнями содержания С08+ МНК у больных РМЖ. Например, аллели НЬА-А19, -01*1 и фенотипы -А2/А19, -А2/1Ж6 встречались достоверно чаще, чем в контроле, при низком и среднем уровне содержания С08+ клеток. А сравнение этих уровней показало достоверное преобладание других сочетаний: аллеля НЬА-В12 и фенотипов -01*1/01*5, -ВБ/ОЮ, -В5ДЖ5 при низком уровне содержания С08+ МНК у больных РМЖ. Сравнение крайних отклонений уровня содержания С08+ клеток подтвердило достоверное преобладание аллелей 111.Л-В12 и-0К1 при низком уровне, а фенотипов -А1/01*2 и -В40/01*2 — при высоком уровне содержания С08+ М11К у больных РМЖ.
Как при среднем, так и высоком уровне содержания С 08+ клеток у больных РМЖ достоверно часто относительно контроля встречались антиген 11ЬЛ-01*6 и его фенотипы: -А2/01*6 и -В40/ О Кб, а сравнение этих уровней показало достоверное преобладание других фенотипов -А1/А9 и -А1/0К2 при высоком уровне содержания С08+ МНК.
Сравнение групп больных РМЖ и ФАМ со средним уровнем содержания С08+ МНК между собой позволило выявить, что антигены НЬА-Л1, -А19, -В12, -01*2 и их сочетания встречались достоверно чаще среди больных ФАМ. чем РМЖ: Аллеля НЬА-А1 с -Л 19, -В 12, -В14, -01*7: аллеля ИЬЛ-А19 с -В12, -В35, -01*2: аллеля НЬА-В12 с - В14, -01*7: и антигена НЬА-01*2 с -В16, -В35.
Характер распределения антигенов НЬА в связи с различным уровнем содержания С04+ клеток в периферической крови больных РМЖ и ФАМ несколько отличался от такового посубиопуля-цип С08+ МНК (Таблица 3). Низкий уровень содержания С04+
клеток при РМЖ достоверно ассоциировался относительно контроля с антигенами НЬА-А2, -А19, -В27, -ОШ, -БИб в различных сочетаниях: Аллель НЬА-А2 с -А9, -А19, -Б116; аллель НЬА-А19 с -АЗ, -В7, -0113; антиген НЬА-ВШ с -А2, -АЗ, -А19, -В40 и фенотипы -В7/В8, -В40ДЖ6. При ФАМ с низким содержанием СБ4+ МНК достоверно чаще относительно контроля встречался антиген НЬА-А19 в сочетаниях с -А2, -В35, -0112 и фенотип -В35ДЖ2.
Среднее содержание С04+ клеток при РМЖ достоверно ассоциировалось относительно контроля с антигенами НЬА-В27, -ОКЗ, -ОКб в различных сочетаниях: аллелей НЬА-В27 и -0И6 в сочетаниях с -А2, -ОК2, и фенотипами -А2/А19, -А1ДЖ1, -А1/В40, -В40ДЖ1. При ФАМ среднее содержание С04+ клеток по сравнению с контролем достоверно ассоциировалось с антигенами НЬА-А1 и -А19 в сочетании между собой и с другими аллелями: антиген НЬА-А1 с -В12, -ОШ, -0К7; аллель НЬА-А19 с -А2, -В12, -В35, -ОК2, -ОКЗ и сочетания антигена НЬА-ОК7 с -В 12, -В14. Сравнение групп больных РМЖ и ФАМ со средним уровнем содержания С04+ МНК выявило достоверное преобладание только антигена НЬА-А1 среди больных ФАМ.
Высокое содержание С04+ клеток при РМЖ ассоциировалось относительно контроля с антигенами НЬА-А19, -ОШ, -ОК2 в различных сочетаниях: аллель НЬА-А19 с -АЗ, -0К2; аллель НЬА-ОШ с -А1, -А2; аллель НЬА-ОК2 с -А10, -А19, -В40; и фенотипами -А1/В40, -А10/В40, -А2/В5, -А2/ОК6. При ФАМ с высоким содержанием С04+ клеток преобладал в сравнении с контролем антиген НЬА-В14 в сочетании с -ОК7 и фенотипы -В12/ОК7, -А2/А9.
Так же, как при анализе уровней содержания С08+ клеток, заметно, что некоторые антигены НЬА были достоверно ассоциированы одновременно с несколькими уровнями содержания С04+ МНК у больных РМЖ. Так, аллели НЬА-В27, -ОК6 и фенотипы -А2/А19, -А2ДШ6 встречались достоверно чаще контроля при низком и среднем уровне содержания С 04+ клеток. Сравнение этих уровней показало достоверное преобладание других сочетаний: аллеля НЬА-А1 при среднем, и фенотипа -А19/ОК1 при низком уровне содержания С04+ МНК у больных РМЖ. А сравнение крайних отклонений уровня содержания С04+ клеток показало достоверное преобладание аллеля НЬА-А1 при высоком содержании С04+ МНК у больных РМЖ.
Действительно, как при среднем, так и высоком уровне содержания С04+ клеток у больных РМЖ достоверно чаще относительно контроля встречались фенотипы -А1/В40 и -А1/ОК1,
а сравнение этих уровней показало достоверное преобладание других фенотипов -АЗ/А19, -A2/DR1, -A10/DR2, и особенно -B40/DR2 при высоком уровне содержания CD4+ МНК.
Сравнение групп больных РМЖ и ФАМ со средним уровнем содержания CD4+ МНК между собой позволило выявить, что антиген HLA-A1 и его сочетания с -А19, -В12 встречались достоверно чаще при ФАМ, чем при РМЖ.
Таким образом, нами установлено, что различные комбинации антигенов: HLA-A2, -АЗ, -А19, -В5, -В7, -В12, -В35 чаще с -DR1, -DR5, -DR6 (CD8+ клетки), и различные комбинации антигенов: HLA-A2, -АЗ, -А9, -А19, -В7, -В27, -В35, -В40 чаще с -DR1, -DR2, -DR3, -DR6 (CD4+ клетки) встречались при низком содержании Т-клеток в периферической крови больных РМЖ и/или ФАМ. То есть сочетания аллелей HLA-A2, -АЗ, -А19, -В7, -В35 с -DR1 и -DR6 ассоциировались с низким содержанием обеих субнопуляций Т-клеток и при РМЖ и при ФАМ.
Различные сочетания антигенов HLA-A2, -АЗ, -А19, -В17, -В27, -В35, -В40, чаще с -DR1, -DR6 (CD8+ клетки), и HLA-A1, -А2, -А19, -В12, -В14, -В35, -В40, чаще с -DR1, -DR2, -DR3, -DR6 (CD4+ клетки), встречались у больных РМЖ и/или ФАМ при средних уровнях содержания двух субпопуляций Т-клеток. То есть сочетания аллелей HLA-A2, -А19, -В35, -В40 с -DR1 и -DR6 ассоциировались со средним содержанием субпопуляций Т-клеток и при РМЖ и при ФАМ. Причем при ФАМ относительно РМЖ преобладали сочетания аллелей HLA-A3, -В12, -В14, -В16, чаще с -DR2, -DR3, -DR7.
Сочетания аллелей HLA-A1, -А2, -А9, -А10, -В27, -В40, чаще с -DR1, -DR2, -DR6 (GD8+ клетки) и сочетания аллелей HLA-A1, -А2, -АЗ, -А9, -А10, -А19, -В5, -В12, -В14, -В40 чаще с -DR2, -DR6, -DR7 (CD4+ МНК) встречались при высоких показателях содержания Т-клеток. То есть сочетания аллелей HLA-A1, -А2, -А9, -А10, -В40, чаще с -DR2, -DR6 ассоциировались с высоким содержанием обеих субпопуляций Т-клеток и при РМЖ и при ФАМ.
Комбинации антигенов HLA-A2, -АЗ, -А19, -В5, -В7, -В12, -В35 чаще с -DR1 -DR5, -DR6 ассоциировались с низким уровнем содержания CD8+ клеток. И в то же время комбинации аллелей HLA-A1, -А2, -АЗ, -А9, -А10, -А19, -В5, -В12, -В14, -В40 чаще с -DR1, -DR2, -DR6, -DR7 ассоциировались с высоким содержанием CD4+ клеток при РМЖ и/или ФАМ. Следовательно, сочетания аллелей HLA-A2, -АЗ, -А19, -В5, -В12 с -DR1, -DR2, -DR6 ассоциировались с низким содержанием CD8+, но с высоким содержанием CD4+ МНК, что соответствует нормальному со-
CD%
А1.А9 A1/DR2 B40/DR 2
HLA больные РМЖ (п=67)
Щ высокое содержание Т-клеток (п=11)
[J низкое содержание Т-клеток (п=39)
Рис. Распределение HLA в зависимости от показателей относительного содержания
одновременно двух субпопуляций С1)4+ и CD8+ клеток в периферической крови одного и того же больного РМЖ
отношению CD4/CD8.
Также некоторые комбинации антигенов HLA-A1, -А2, -А9, -А10, -В27, -В40, чаще с -DR1, -DR2, -DR6 преобладали при высоких уровнях содержания CD8+ клеток. А комбинации аллелей HLA-A2,-АЗ, -А9, -А19, -В7.-В27, -В35.-В40 чаще с -DR1, -DR2, -DR3, -DR6 преобладали при низких уровнях содержания CD4+ клеток при РМЖ. Следовательно, сочетания аллелей HLA-A2, -А9, -В27, -В40 с -DR1, -DR2, -DR6 с большей вероятностью могут присутствовать при инвертированном соотношении CD4/CD8.
Нами также был проведен анализ распределения HLA-антигенов при одновременно высоком содержании CD4+ и CD8+ клеток при РМЖ или ФАМ. Так как только высокие уровни достигали средних нормативных показателей содержания Т-клеток I» контроле (Рис.).
Оказалось, что нормальное содержание Т-клегок двух субпопуляций у одной и той же пациентки встречалось только при РМЖ (16%). Высокими показателями считались значения выше 34 для СГ)4+ клеток и выше 22 — для CD8+ МП К, то есть выше среднего уровня в норме. Низкими считались параметры двух субпопуляций Т-клеток ниже указанных значений. Установлена высокая степень ассоциированности аллелей HLA-A1, -А9, -В40, -DR2 и фенотипа I1LA-A1/A9 с высоким уровнем Т-клеток.
Заключение
В связи с тем, что на одной и той же иммуно-компетентной клетке присутствуют одновременно несколько вариантов антигенов HLA классов lull, их нм м у и о ге н ет и чески i i анализ является достаточно сложной задачей.
Полученные нами данные позволяют заключить, что содержание С 08+ клеток в периферической крови больных РМЖ и ФАМ не корре-лировано с содержанием С 1)1+ клеток, но тесно ассоциировано с определенными аллелями Ш.А. В популяции С 04+ клеток не установлено некоторых НЬА-ассоциаций, например, с фенотипами -АЗ/А19, -В12/В35, характерных для С08+ МНК и ассоциированных только с одним, низким уровнем содержания С08+ клеток у больных РМЖ. Вероятно, отсутствие некоторых, характерных для С08+ МНК Н1^А-ассоциаций может указывать на возможность более широкого варьирования уровня содержания С04+ МНК.
Представляется важным, что некоторые фенотипы НЬА, например -А1/А9, -А1/ХЖ2, демонстрируют ассоциированность только с одним, высоким уровнем содержания С08+ Т-клеток у больных РМЖ. Вероятно, это может отражать неспособность клеток с таким фенотипом НЬА варьировать уровень их содержания в широком диапазоне, и эти клетки нуждаются в Т-хелпер-ной помощи.
Нами выявлены различия в НЬА-ассоциациях с уровнем содержания субпопуляций Т-клеток между РМЖ и ФАМ. Так, фенотипы -А1/В14 и -A1/0R7 были ассоциированы со средним содержанием С08+ МНК у больных ФАМ, а при РМЖ они не были достоверно связаны с содержанием С08+ МНК и встречались реже при РМЖ, чем при ФАМ. Фенотипы НЬА-А1/А19 и -А19/В12 были не характерны для РМЖ, но ассоциировались со средним содержанием С04+ МНК при ФАМ и встречались чаще, чем в контроле.
Известно, что молекулы IIЬА класса 1 (локусы А и В) взаимодействуют с Т-клеточным рецептором С08 в процессе распознавания. А гликопротеиды НЬА класса II (локус ГЖ) представляют вирусные пептиды С04+ 'Г-клеткам и влияют на иммунные реакции. Полученные нами данные об ассоциированности содержания С04+, С08+ МНК в периферической крови больных РМЖ и ФАМ с антигенами комплекса НЬА указывают на более сложный характер этих взаимоотношений.
Очевидно, что более значительную роль в ассоциациях НЬА с уровнем содержания С08+ клеток должны играть аллели НЬА класса I, тогда как антигены I IЬА класса 11 в этих ассоциациях могут следовать пассивно, например, из-за неравновесного сцепления в фенотипах. I I наоборот, аллели НЬА класса II могут быть ведущими в ассоциациях НЬА с уровнем содержания С04+ МНК, а ассоциации с антигенами НЬА класса I будут второстепенными. Нами установлено, что низко экспрессированные на клетке аллели НЬА (-А1. -АЗ, -В12, -В35) чаще ассоциировались с низким уров-
нем содержания CD8+ МНК. Соответственно, высоко экспрессированные аллели HLA (-А9, -А10, -В5, -В40) часто были ассоциированы с высоким уровнем содержания CD4+ клеток.
На характер этих ассоциаций могут оказывать влияние структурно-функциональные особенности самих молекул HLA. Сообщалось, что эффективность сборки молекул HLA класса I была аллельзависимой и управлялась связывающей аффинностью альфа-цепей с бета2-микроглобу-лином. Определена иерархия аллелей в связывании альфа-цепи HLA-В с бета2-м: В7, В18 > В35, В62(15) > В27, В51(5). Известно, что HLA-B51
— медленно собирающаяся молекула, в то время как HLA-B35 собирается быстро. Результаты подразумевают, что медленная сборка молекул HLA-B51 зависит от их низкой аффинности [13]. Белки ТАР используют гидролиз АТФ для усиления транспорта молекул HLA класса I. Аллель HLA-A2 представляет частично ТАР-зависимые аллели, a HLA-A3 представляет полностью ТАР-зависимые аллели HLA [14]. Недавно установили, что производные от вирусного капсидного белка
— более высокоаффинные лиганды для молекул класса II — HLA-DR1/7, но не для HLA-DR13(2) [15].
Известно, что аллели HLA-B12 и -В35 ассоциированы с физиологически низкой экспрессией на клетке или высоким уровнем синтеза молекул соответственно. Ранее нами было установлено, что при РМЖ или ФАМ обладатели HLA-B12 и -В35 не демонстрируют достоверного увеличения количества CD8+ МНК при стимуляции их клеток фетальным протеином (ФП). В настоящем исследовании эти аллели были ассоциированы с более высокими показателями содержания CD4+ Т-клеток при РМЖ и ФАМ. Позитивный ответ на ФП in vitro были способны развивать МНК больных с фенотипом HLA-A2, -В40 в сочетаниях с -DR7 [9]. В настоящем исследовании эти аллели были ассоциированы с более низкими показателями содержания CD8+ Т-клеток при РМЖ и ФАМ.
Ранее нами также был выявлен и негативный ответ на ФП, ассоциированный с антигеном HLA-DR6 и фенотипами HLA-A2/B12 и -А19/ В16 и проявлявшийся достоверным снижением количества CD8+ и/или CD4+ МНК [9]. В настоящем исследовании некоторые сочетания этих же антигенов, например, -A2/DR6 (CD4+ клетки), -B40/DR6 (CD8+ МНК) были ассоциированы с высокими показателями содержания субпопуляций Т-клеток и с инвертированным соотношением CD4/CD8 при РМЖ и ФАМ.
Согласованность полученных нами данных указывает на то, что показатели иммуни-
тета высоко генетически детерминированы. Ассоциированность антигенов НЬА с целым рядом параметров иммунного статуса здорового человека сохраняется и при развитии патологических процессов с различными патогенетическими механизмами.
Снижение содержания Т-клеток при злокачественных новообразованиях (РМЖ) определяется накоплением среди больных лиц антигенов НЬА, конституционально ассоциированных с низким уровнем содержания СБ8+ МНК, тогда как среди больных с доброкачественными опухолями (ФАМ) достоверно чаще встречаются антигены НЬА, ассоциированные с низкими показателями содержания С1УА+ клеток. Различия указывают на то, что СБ4+ Т-клетки, вероятно, могут в большей степени влиять на эффективность противоопухолевого иммунитета.
Выводы
1. Уровень относительного содержания СБ4+ и С08+ МНК в периферической крови больных РМЖ и ФАМ ассоциирован с определенными аллелями НЬА. Подавляющее большинство больных РМЖ (78%) и ФАМ (83%) являются носителями НЬА-антигенов, ассоциированных с низким содержанием СБ8+ клеток. У больных ФАМ (78%) и РМЖ (78%) антигены НЬА ассоциированы и с низкими показателями содержания СП4+ МНК.
2. Сочетания аллелей НЬА-А2, -АЗ, -А19, -В7, -В35 чаще с -DR1, -DR6 ассоциировались с низким содержанием обеих субпопуляций Т-клеток как при РМЖ, гак и ФАМ. Сочетания аллелей НЬА-А2, -АЗ, -А19, -В5, -В12 чаще с -БН1, ^2, -DR6 были ассоциированы с низким содержанием СБ8+, но с высоким содержанием СБ4+ МНК, что соответствовало нормальному соотношению С[)4/СГ)8 (>1,0). А сочетания аллелей НЬА-А2, -А9, -В27, -В40 чаще с -DR1, -DR2, -DR6 соответствовало инвертированному соотношению СБ4/С08 (<1,0). Сочетания аллелей НЬА-А1, -А2, -А9, -А10, -В40 чаще с -ОН2, -DR6 ассоциировались с высоким содержанием обеих субпопуляций Т-клеток при РМЖ и ФАМ.
3. Антигены НЬА-А19, -В35, -В40 могут быть ассоциированы с различным уровнем содержания СБ4+, С08+ клеток в зависимости от комбинаций с другими аллелями. Антиген НЬА-БН5 не ассоциирован непосредственно с содержанием Т-клеток и достоверно редко встречается среди больных РМЖ и еще реже среди больных ФАМ, ассоциируясь с резистентностью к этим заболеваниям.
4. Установлены различия в НЬА-ассоциаци-ях с содержанием субпопуляций Т-клеток между РМЖ и ФАМ. Фенотипы НЬА-А1/В14 и -А1/
DR7 были ассоциированы со средним содержанием CD8+ МНК при ФАМ и не были ассоциированы с их содержанием при РМЖ. Фенотипы HLA-А1/А19, -А1/В12 ассоциировались со средним содержанием CD4+ МНК при ФАМ, но были не характерны для РМЖ.
На основании полученных нами данных показана возможность прогностического определения вероятного уровня содержания Т-клеток в периферической крови пациента. Показана возможность дифференцировать причины низкого содержания Т-клеток у пациентов, что может определяться генетическими факторами и/или иммуносупрессивной активностью злокачественной опухоли. Кроме того, наши результаты могут быть полезны для прогноза эффективности применения иммунотерапии.
THE IMMUNOGENETIC ANALYSIS OF ABUNDANCE OF A PERIPHERAL BLOOD T - CELLS SUBPOPULATIONS IN BREAST CANCER AND FIBROADENOMATOSIS PATIENTS
I.Yu. Korotkova, A.I. Autenshlus, G.G. Ivanova,
A.V. Proskura, S.V. Sidorov, M.M. Cherenkova, Yu.V. Sedova, A.V. Shevchenko, V.I. Konenkov
Associations of HLA antigens and the T-cells subpopulations contents in peripheral blood of 67 breast cancer (BC) and 23 fibroadenomatosis (FAM) female patients were investigated. The low content of both CD4+ and CD8+ cells in BC and/or FAM patients was associated with HLA-A2, -A3, -A19, -B7, -B35 in combinations w ith -DR1, -DR6. The low content of CD8+, but high content of CD4+ mononuclear cells (MNC) was associated with HLA-A2, -A3, -A19, -B5, -B12 in combinations with -DR1, -DR2, -DR6. The low7 content of CD4+, but high content of CD8+ cells was associated with HLA-A2, -A9, -B27, -B40 in combinations with -DR1, -DR2, -DR6. The high content of both CD4+ and CD8+ cells in BC and FAM patients was associated w'ith HLA-A1, -A2, -A9, -A10, -B40 in combinations with -DR2, -DR6. The HLA-A1/B14, -A1/DR7 phenotypes were associated with the average CD8+ MNC content in FAM patients, but were not associated in BC patients. The HLA-A1/A19, -A1/B12 phenotypes were associated with the average CD4+ cells content in FAM patients and were found more often, than in the control, but were not found in BC patients. It was concluded, that in BC patients the significant deviations of HLA-associations with CD4+ and CD8+ T-cells content are found.
Литература
1. Nomenclature for factors of the HLA system 1998 / J.G. Bodmer, S.G. Marsh, E.D. Albert et al. // Eur. J. of Im-
munogenetics. — 1999. — Vol. 26. — №2/3. — P. 81-116.
2. Ogmundsdottir HM. Immune reaction to breast cancer: for better or for worse? / H. M. Ogmundsdottir // Arch Immunol Ther Exp (Warsz) — 2001. — Vol.49. — № 2.
- P. 75-81.
3. High frequency of HLA-B44 allelic losses in human solid tumors / T. Cabrera, I. Maleno, M.A. Lopez-Nevot, et al. // Hum. Immunol. — 2003. — Vol. 64. — №10. — P. 941-950.
4. Induction of human cytotoxic T lymphocytes that preferentially recognise tumour cells bearing a conformational p53 mutant./ SE McArdle, RC Rees, KA Mulcahy, et al. // Cancer Immunol. Immunother. — 2000. — Vol. 49.
- №8.-P. 417-425.
5. Identification of activated tumor antigen-reactive CD8+ cells in healthy individuals / T.V. Lee, B.W. Anderson, G.E. Peoples, et al. // Oncol. Rep. — 2000. — Vol. 7.
- №. 3. - P. 455-466.
6. Immunization of cancer patients with a HER-2/neu, HLA-A2 peptide, p369-377, results in short-lived peptide-specific immunity / K.L. Knutson, K. Schiffman, M.A. Cheever, M.L. Disis // Clin. Cancer. Res. — 2002. — Vol. 8.-№.5.-P. 1014-1018.
7. Identification of HLA DR7-restricted epitopes from human telomerase reverse transcriptase recognized by CD4+ T-helper cells / R. Schroers, X.F. Huang, J. Hammer, J. Zhang, et al. // Cancer Res. — 2002. — Vol. 62.
- №9. - P. 2600-2605.
8. Ответ лимфоцитов больных фиброаденоматозом и раком молочной железы на опухолеассоциированные антигены in vitro / А.И. Аутеншлюс, Г.Г. Иванова, С. В. Сидоров и др. // Иммунология. — 2003. — №1. —
C. 26-28.
9. Иммуногенетический анализ реакции лимфоцитов на опухолеассоциированные антигены у больных раком молочной железы и фиброаденоматозом / А.И. Аутеншлюс, В.И. Коненков, И.Ю. Короткова и др. // Бюл. СО РАМН. - 2004. - № 4. - С. 66-73.
10. Коненков В.И. Развитие клинической иммуногенетики в Сибири / В.И. Коненков // Бюл. СО РАМН.
- 1998. - № 2. - С. 80-84.
11. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов / Е.В Гублер. — Л., 1978. — 296 с.
12. Allele- and temperature-dependency of in vitro HLA class I assembly / A. Chersi, C. Garzillo, R.H. Butler, N. Tanigaki. // Hum. Immunol. — 2001. — Vol. 62. — №8.
- P. 858-868.
13. Binding of 8-mer to 11-mer peptides carrying the anchor residues to slow assembling HLA class I molecules (HLA-B*5101) / T. Sakaguchi, M. Ibe, K. Miwa, et al. // Immunogenetics. — 1997. — Vol. 45. — №4. — P. 259-265.
14. Doytchinova I. Transporter associated with antigen processing preselection of peptides binding to the MHC: a bioinformatic evaluation / I. Doytchinova, S. Hemsley,
D.R. Flower //J. Immunol. — 2004. — Vol. 173. — №11.
- P. 6813-6819.
15. Godkin A. Molecular analysis of HLA class II associations with hepatitis В virus clearance and vaccine nonresponsiveness / A. Godkin, M. Davenport, A.V. Hill // Hepatology. - 2005. - Vol. 41. - №6. - P. 1383-1390.
