CC BY
187
Лекарственные растения
© БОТОЕВА Е.А., ЛОМБОЕВА С.С., БУРАЕВА Л.Б., ЧУКАЕВ С,А, -УДК 615,322:633,88,03(001,5)
ХИМИЧЕСКОЕ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОРТИЛИИ ОДНОБОКОЙ ORTHILIA SECUNDA (L.) HOUSE
Е.А. Ботоева. С.С. Аомбоева. А.Б. Бураева, С.А. Чутев.
(Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН, директор - чл.-корр. РАН, проф. В.М. Кор-сунов, отдел биологически активных веществ, зав, - д.м.н., проф. С.М. Николаев)
Резюме. Изучены химический состав и фармакологические свойства сухого экстракта ортилии однобокой. Установлены антиоксидантная, мембраностабилизирующая, противовоспалительная, обезболивающая, спазмолитическая, антимикробная активности данного средства.
В последние годы значительно возрос удельный вес средств растительного происхождения, применяемых для лечения и профилактики воспалительных процессов. Фитопрепараты обладают более широким спектром фармакологического действия и оказывают влияние на течение воспалительной реакции. Перечень официнальных растительных противовоспалительных препаратов невелик, В связи с этим поиск перспективных растений и разработка на их основе эффективных лекарственных средств для профилактики и лечения воспалительных заболеваний являются актуальными,
Ортилия однобокая - растение, издавна используемое в народной медицине Восточной Сибири и Дальнего Востока в качестве противовоспалительного ранозаживляюшего, гемостатиче-ского, диуретического средства, широко применяется при гинекологических заболеваниях, главным образом воспалительного характера. Особенно часто растение использует население Иркутской области и Бурятии применяя при бесплодии, при нарушениях менструального цикла, эндометритах и сальпингоофоритах [11],
На территории Бурятии ортилия однобокая произрастает в различных ассоциациях хвойных лесов - зеленомошны.х, разнотравно-зеленомош-ных, а также в сметанных и лиственных лесах, на субальпийских луговинах; образует местами значительные скопления. Обширный ареал и наличие достаточных запасов сырья, а также широкое применение данного растения в народной медицине при указанных заболеваниях позволяют рассматривать его в качестве перспективного объекта для исследований.
Целью данной работы являлось определение химического состава и фармакологических свойств сухого экстракта ортилии однобокой, произрастающей на территории Бурятии, Материалы п методы
Химический состав надземной части растения и сухого экстракта, полученного из него, изучали при помощи общепринятых методик качественного фитохимического анализа [12], методик ГФ XI издания [3],
Для получения сухого экстракта использовали сырье - надземную часть ортилии однобокой, собранное в Прибайкальском районе республики Бурятия, При разработке технологии получения сухого экстракта учитывалось содержание экстрактивных веществ и флавоноидных соединений в зависимости от различных параметров: состава и природы экстрагента и его соотношения с сырьем, температурного режима, степени измельчения сырья, продолжительности и кратности экстракций, Количественная оценка велась по выходу суммы экстрактивных веществ [3] и содержанию суммы флавоноидов в пересчете на рутин-стандарт по разработанной нами спектрофотометрической методике [6],
Были исследованы фармакологические свойства сухого экстракта ортилии однобокой. Эксперименты выполнены на белых крысах линии с исходной массой 170-180 г. Оценку противовоспалительной активности испытуемого фитоэкстракта осуществляли согласно "Методическим рекомендациям,,, , 1983" [7], Острую токсичность испытуемого фитоэкстракта оценивали по методу Кербера [15], Класс токсичности определяли по классификации К,К, Сидорова (1973), Сухой экстракт ортилии однобокой вводили перорально в экспериментально-терапевтических дозах 50-200 мг/кг массы белых крыс. Животные контрольной группы получали дистиллированную воду в эквиобъемном количестве. Изучение влияния экстракта на реактивность вегетативной нервной системы проводили на изолированном отрезке тонкой кишки [14], а влияние на центральную нервную систему изучали с использованием индикаторов [2], Аналгезируюшую активность экстракта оценивали по изменению порога болевой чувствительности у белых крыс при контактно-тепловом раздражении [7], Оценку антибактериальной активности испытуемого средства осуществляли методом двукратных серийных разведений в жидкой среде [9], Гемостатические свойства испытуемого средства определяли по параметрам аутокоагуляционного теста (АКТ) [8], Мембраностабилизируюшую активность препарата определяли по степени гемолиза эритроцитов.
Таблица 1.
Влияние сухого экстракта ОгШШа *есипс1а на экссудат и вную фазу воспалительной реакции
у белых крыс
Группы животных Доза, мг/кг Разность объема лапок с отеком и без отека, мл Степень угнетения отека, %
Контрольная (дистиллированная вода), /г=8 - 1,22±0,072 -
Опытная (сухой экстракт ортилии однобокой), п-10 50 1,02±0,093 18,0
«=10 100 0,85±0,054* 33,6
и= 10 200 0,84±0,064* 31,1
Примечание: * - здесь и далее различия достоверны по отношению к контролю при р<0,05.
вызываемого реактивом Фентона (перекисный гемолиз) и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз) [5]. Для оценки антиок-сидантны.х свойств экстракта определяли кинетику Ре2”-индуцированной хемилюминесценции с использованием "Хемилюминометра РХЬ - 01" (Россия) [4]. Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием общепринятых методов вариационной статистики. Достоверность данных оценивали с помощью Ь критерия Стьюдента [1].
Результаты н обсуждение
Разработан способ получения сухого экстракта ортилии однобокой, позволяющий получить конечный продукт, представляющий собой аморфный порошок коричневого цвета с горьковатым вяжущим вкусом, с потерей массы при высушивании 1,81%. Разработанный способ достаточно прост и позволяет получить продукт постоянного состава. Технология может быть внедрена на предприятиях по выпуску лекарственных препаратов и оздоровительных средств.
Методами фитохимического анализа в сухом экстракте ортилии однобокой установлено наличие основных групп биологически активных веществ, содержащихся в исходном сырье - надземной части ортилии однобокой: флавоноидов, ири-доидов, производных кумарина, фенологликози-дов, тритерпеновых сапонинов, аминокислот, гидролизуемых и конденсированных дубильных веществ. Согласно хроматографическому анализу извлечений из ортилии однобокой, флавоноидные агликоны представлены кемпферолом и кверцетином (идентифицированы в сравнении с достоверными образцами). Определено содержание суммы флавоноидов в надземной части и сухом экстракте исследуемого растения в пересчете на
рутин-стандарт, соответственно равное 2,62± ±0,10% и 6,5±0,12%.
При исследовании острой токсичности установлено, что сухой экстракт ортилии однобокой относится к группе практически нетоксических веществ по соответствующей классификации.
На модели острого асептического воспаления установлена эффективная доза, снижающая экссудацию (табл. 1).
Из данных, представленных в таблице 1 видно, что выраженное антиэкссудативное действие сухой экстракт ортилии однобокой проявляет в дозе 100 мг/кг массы животных и в этой же дозе предупреждает развитие альтеративных процессов, ускоряет заживление поврежденной ткани, уменьшая площадь некроза в 1,5 раза (табл.2).
При исследовании возможной антипролифера-тивной активности можно заметить, что испытуемый фитоэкстракт в дозе 100 мг/кг массы животных способствует инволюции грануляционнофиброзных образований.
Установлено также, что экстракт обладает выраженной аналитической активностью, более чем в 3 раза снижая степень ноцицептивной чувствительности лабораторных животных при контактно-болевом воздействии.
В другой серии экспериментов обнаружено, что сухой экстракт ортилии однобокой обладает выраженной антибактериальной активностью по отношению к условно- патогенным бактериям Staphylococcus aureus, Esherichici coli, Proteus vulgaris, Streptococcus faeccilis, Pseudomonas aeruginosa, которым принадлежит значительная роль в развитии воспалительных заболеваний женских половых органов [10]. Полученные нами данные аргументируют целесообразность применения су хого экстракта ортилии однобокой в клинической
Таблица 2.
Влияние сухого экстракта ОгіЬіІіа 5есипсІа на альтеративную фазу воспалительной реакции
і’ белых крыс
Группы Доза, Площадь некроза, см"
животных мг/кг 7 СУ ГКИ 14 сутки 2 1 СУТКИ
Контрольная (дистиллированная вода) - 1,8±0,29 п= 10 3,86±0,25 п=8 2,20±0,23 п=6
Опытная (сухой экстракт ортилии однобокой) 100 1,21+0,13 п= 10 2,45±0,21 п=9 1,50±0,09* п=9
с
70
практике в качестве противовоспалительного средства при гинекологических заболеваниях.
В специальных сериях опытов показано, что экстракт ортилии в дозе 100 мг/кг ингибирует хо-линергическую реакцию, что свидетельствует о наличии у испытуемого средства выраженной спазмолитической активности.
Кроме того, испытуемое средство в дозе 100 мг/ кг при введении в желудок потенцирует снотворное действие гексенала у крыс, увеличивая продолжительность сна на 38%, что может свидетельствовать о возможном седативном компоненте в действии данного экстракта. При оценке влияния экстракта ортилии на систему гемокоагуляции установлено, что через 30 минут после введения в желудок экстракта в дозе 100 мг/кг массы животных проявляет антикоагулянтные свойства и повышает активность фибринолитической системы, а через 60 минут после введения испытуемого средства наблюдается увеличение свертывания крови до состояния у интактных животных с активированием механизмов антикоагулянтной системы.
Указанный поливалентный спектр влияния сухого экстракта ортилии однобокой связан, очевидно, с его влиянием на базисные реакции и состояние мембранных образований клеток. Исследования, проведенные по определению возможных антиоксидантных свойств данного средства показали, что ортилия однобокая относится к группе растений с выраженными антиоксидант-ными свойствами. Величина рассчитанной анти-окислительной активности полученного экстракта составила 47,6 (г/л)"1.
В дополнительной серии опытов по изучению влияния испытуемого средства на перекисный и осмотический гемолиз эритроцитов установлено, что сухой экстракт ортилии однобокой в концентрациях 0,1-1 мг/мл оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие, уменьшая степень осмотического гемолиза эритроцитов на 5060%, перекисного - в 2 раза по отношению к контролю. Известно, что при воспалении альтерация сопровождается тканевым распадом и усиленным обменом веществ ("окислительный взрыв"), которые приводят к ряду физико-химических изменений в воспалительной ткани (ацидоз, гипсросмия, гиперонкия), где ведущую роль играют активные формы кислорода и гидроперекиси липидов с активацией процессов свободнорадикального окисления [13]. Вероятно, базисным механизмом в противовоспалительном действии сухого экстракта ортилии однобокой является ингибирование свободнорадикальных процессов с выраженными мембраностабилизирующим действием испытуемого экстракта. Этим обстоятельством объясняется выраженное противовоспалительное действие сухого экстракта ортилии однобокой. Широкий спектр фармакологического действия данного экстракта обусловлен наличием в нем комплекса биологически активных веществ - флавоноидов, кумаринов, тритерпеновых сапонинов, иридоидов. дубильных веществ, фенологликозидов, для которых характерны антиоксидантные и мембраностабилизирующие свойства [13]. Полученные данные позволяют рекомендовать применение сухого экстракта в качестве средства, предназначенного для лечения и профилактики заболеваний с выраженной воспалительной реакцией.
CHEMICAL AND PHARMACOLOGICAL INVESTIGATION OF ORTHILIA SECUNDA (L.) HOUSE E.A. Botoeva, S.S. Lomboeva, L.B. Buraeva, S.A. Chukaev (Institute of General and Experimental Biology SD RAMS)
The chemical composition and pharmacological properties of extract from Orthilia secunda have been investigated. Under experimental conditions the dry extract from Orthilia secunda showed anti-inflammatory, antioxidantive, anesthetic properties; this extract is not toxic. According to the results of the pharmacological research it can be used as an anti-inflammatory preparation for therapeutic purposes.
Литература
1. Беленький М.А. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.А. Беленький. -Л.: Медицина, 1963. - 163 с.
2. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ / В.В. Гацура. - М.: Медицина, 1974. - 144 с.
3. Государственная фармакопея СССР 11-е изд. - М.: Медицина, 1987. - Т. 1. - 336 с.
4. Клебанов Г.И. Оценка антиоксидантной активности плазмы крови с применением желточных ли-попротеидов / Г.И. Клебанов, М.В. Бабенкова, Ю.О. Теселкин и др. // Лабораторное дело. - 1988. -№5. - С.59-62.
5. Ковалев И.Е. Влияние эномеланина на гемолиз эритроцитов, вызываемый свободнорадикальными реакциями и другими факторами / И.Е. Ковалев, Н.П. Данилова, С.Л. Андропати и др. // Фармакология и токсикология. - 1986. - №4. - С.89-91.
6. Ломбоева С.С. Количественное определение суммы флавоноидов в надземной части Orthilia secunda (L.) House /С.С. Ломбоева. Л.М. Танхаева, Т.А. Асеева// Биологически активные добавки и здоровое питание: Материалы Всероссийской науч. конф. - Улан-Удэ, 2001. - С.27-28.
7. Методические рекомендации по экспериментальному (доклиническому) изучению нестероидных противовоспалительных фармакологических веществ. - М„ 1983, - 15 с.
8. Методы исследования гемостаза: Методические рекомендации М3 РФ. - М., 1993. - 46 с.
9. Першин Г.Н. Методы экспериментштьной химиотерапии / Г.Н. Першин. - М.: Медицина, 1971. -376 с.
10. Савельева Г.М. Острые воспалительные заболевания внутренних половых органов женщин / Г.М. Савельева, Л.В. Антонова. - М.: Медицина, 1987. -156 с.
1 1. Телятьев В.В. Полезные растения Центральной Сибири / В.В. Телятьев. - Иркутск: Вост.-Сиб. кн. изд-во, 1985. -417 с.
12. Химический анализ лекарственных растений. /Под ред. Н.И. Гринкевич. - М.: Высшая школа, 1983. -
176 с.
13. Catapano A.L. Antioxidant effect of flavonoids / A.L. Catapano // Angiology. - 1997. - Jan.48(1). -P.39-44.
14. Furchgott K.F. The pharmacological differentiation of adrenergic receptors / K.F Furchgott // Ann. N.-Y. Acad. Sci. - 1967. - Vol. 139. - P.553-570.
15. Karber G. Beitrasur kollektiven Behandlung pharmakologischer Reihenversuche / G. Karber // Arch. Exp. Path. - 1931. - Bd.162. - S.480-483.
© ГУНБИЛИГ Д., МЯГМАР Л., НАРАНТУЯА С. -УДК 615.322:633.88.03+6 15.276](519.3)
АНТИФЛОГИСТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СУММЫ СЕСКВИТЕРПЕНОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ИЗ Achillea asiatica (L.) SERG, ПРОИЗРАСТАЮЩЕГО НА ТЕРРИТОРИИ МОНГОЛИЯ
Д. Гунбилиг, А. Мягмар, С. Нарантуяа.
(Институт химии и химической технологии АН Монголии, директор - д.х.н., проф. Б. Пурэвсурэн; Монгольский государственный медицинский университет, ректор - д.м.н., проф. Ц. Лхагвасурэн, кафедра фармакологии, зав. - проф. Л. Мягмар)
Резюме. Продолжая фитохимическое изучение представителей рода Achillea, мы изучили се-сквитерлены, выделенные из тысячелистника азиатского, включающих три новых высоко-гидроксилированных гуайанолидов без экзоциклических метиленовых групп и несколько других сесквитерпенов с потенциальной биологической активностью. Была изучена их антифлогисти-ческое влияние на развитие пролиферативного воспаления. Установлено, что сумма сесквитерпенов тысячелистника азиатского оказывает противовоспалительное действие на модели воспаления и изменяет выраженность воспалительной реакции. Также установлено, что сумма сесквитерпенов при оральным введении обладают выраженной противовоспалительной активностью. Однако препарат достоверно уменьшал воспалительную реакцию через 30 и 120 минут после индукции воспаления и эффект был непродолжителен и уменьшался в конце эксперимента.
В последние годы все большее признание получает лечение воспалительных заболеваний с помощью средств базисной терапии. Препараты этой группы в отличие от других противовоспалительных средств, влияют на молекулярном уровне на воспалительные энзимы iNOS, СОХ-2, 5-LOX, фосфолипаза А2 и транскрипционный фактор NF-KB [3,4], который регулирует транскрипцию воспалительных медиаторов как цитокины и хе-мокины.
Некоторые сесквитерпены и сесквитерпеновые лактоны выделены из разных видов произрастающих в Европейских территории Achillea, которые не могут ингибировать транскрипционный фактор NF-кВ. Чтобы ингибировать их эти соединения должны иметь а-метилен-у-лактоновый или а,Р-ненасыщенные карбонильные группы [8]. Выделение и характеристика этих сильнополярных проазуленов и непроазуленов, структурно знакомых нам [10] и трех новых сесквитерпенов из Achillea asiatica (L.) Serg. выполнялись и излагались впервые авторами в ряде предыдущих публикаций [5,6].
В Монгольской традиционной медицине A.asiatica (L.) Serg. часто использовалась при воспалениях, геморроидальных кровотечениях, патологиях менструаций и опухолей внутренних органов, при лечении ран и укусов змей. Монгольскими синонимами являются Бампо, Найтаалж и Язху.
Обладая горьким вкусом, острым и холодными свойствами, она используется при лечении комплексов симптомов, определяемых в монгольской и тибетской традиционной медицине как Чих-хаа [2]. До сегодняшнего дня не сообщалось о позитивных или негативных эффектах при взаимодействиях между традиционным лекарственным препаратом из A.asiatica (L.) Serg. и другими препаратами. Кроме того, не имеется никаких исследований о том, как Монгольская A.asiatica (L.) Serg. влияет на воспалительный процесс. Таким образом, представляло интерес изучить влияние природных сесквитерпенов на развитие воспаления в эксперименте. В связи с литературными данными [7,8] появляется необходимость определения их биологической активности.
Тысячелистник очень широко применялся в традиционной медицине Тибета и Монголии, из чего можно сделать вывод о наличии у него широкого спектра действия и возможно противовоспалительном влиянии. Растения рода Achillea, являющиеся природными источниками сесквитерпенов, издавна применялись в терапевтических целях намного шире, чем в декоративных и кулинарных целях. В связи с широким спектром действия, такими как антифлогистическое, кровоостанавливающее, вяжущее, антисептическое, ветрогонное, ранозаживляющее и возможно анестетическое, они использовались в медицине многих
