CC BY
29
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МНОЖЕСТВЕННОЙ...
УДК 616-006.81:57.085.23:615.2/.3.015.46:577.126:577.218 ДА. Афанасьева, М.А. Барышникова, Т.Н. Заботина, А А. Борунова, О.С. Бурова, Е.Ю. Рыбалкина, А А. Николина, М.В. Оборотова, Н.В. Грищенко, З.Г. Кадагидзе, А.Ю.Барышников ХАРАКТЕРИСТИКА МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ В КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЯХ МЕТАСТАТИЧЕСКОЙ МЕЛАНОМЫ КОЖИ ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина», Москва Контактная информация Афанасьева Дарья Андреевна, младший научный сотрудник лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей НИИ ЭДиТО адрес: 115478 Москва, Каширское ш., 24; тел. +7(499)324-10-65 e-mail: [email protected] Статья поступила 26.10.2015, принята к печати 27.11.2015. Резюме МЛУ является основным препятствием эффективности химиотерапии. В опухолевых клетках МЛУ может развиваться в ответ на действие даже одного цитостатического агента. Целью настоящей работы была характеристика МЛУ в клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека, полученных в ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России. Экспрессию гликопротеина pgp170 определяли в реакции иммунофлуоресценции, мРНК генов МЛУ определяли методом ОТ-ПЦР, выброс родамина 123 оценивали на проточном цитофлуориметре, цитотоксиче-скую активность определяли в МТТ-тесте. Определение чувствительности клеток к цитотоксическому действию аранозы показало, что клетки ме-ланомы человека mel Kor чувствительны к действию препарата, а клетки mel Ibr и mel MtpX -устойчивы. В реакции иммунофлуоресценции было обнаружено, что от 35 до 50 % клеток линии mel Ibr экспрессировали pgp170. Клетки mel Kor и mel MtpX не экспрессировали Р-гликопротеин. В ПЦР определяли мРНК генов, ответственных за множественную лекарственную устойчивость - MDR1, BCRP, MRP1 и LRP (MVP). Во всех образцах линий клеток мРНК генов BCRP и MRP1 экспрессируются слабо, а экспрессию мРНК гена LRP (MVP) не удалось увидеть. мРНК гена YB1 экспрессируется хорошо, что характерно для опухолевых клеток, мРНК этого гена обнаружили в клетках mel MtpX и субклонах линии mel Ibr. Клетки линии mel Kor не содержат мРНК гена MDR1. Исследование выброса родамина 123 (Rh123) из клеток показало, что контрольные клетки mel Kor накапливали Rh123 и не выбрасывали его. Клетки линии mel Ibr накапливали Rh123 и половину выбрасывали. Клетки линии mel MtpX накапливали мало родамина 123 и почти весь выбрасывали. Таким образом, исследование показало, что чувствительные к аранозе клетки линии mel Kor не экспрес-сируют pgp170, не содержат мРНК генов МЛУ и не выбрасывают Rh123. Резистентные к цитотоксическому действию аранозы клетки mel Ibr экспрессируют pgp170, содержат мРНК гена MDR1, выбрасывают Rh123. Однако устойчивые к аранозе клетки линии mel MtpX не экспрессируют pgp170, но содержат мРНК гена MDR1 и активно выбрасывают Rh123. Ключевые слова: клеточные линии меланомы человека, множественная лекарственная устойчивость, липосомы, гликопротеин pgp 170, ген MDR1.
D.A. Afanasieva, M.A. Baryshnikova, T.N. Zabotina, A.A. Borunova, O.S. Burova, E.Yu. Rybalkina, A.A. Nikolina, M.V. Oborotova, N. V. Grischenko, Z.G. Kadagidze, A.Yu. Baryshnikov CHARACTERISTICS OF MULTIDRUG RESISTANCE IN HUMAN SKIN MELANOMA CELL LINES FSBI "N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center", Moscow Abstract MDR is the main obstacle to chemotherapy efficiency. MDR can grow in cancer cells even if only the one cytostatic agent will act. The aim of the nowadays work is to characterize MDR in metastatic human skin melanoma cell lines prepared in "N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center". pgp170 expression was detected by immunofluorescence methods. mRNA of MDR gene was identified by Reverse Transcriptase- PCR( RT-PCR) method. Rhodamine 123 (Rh123) emission has been evaluated by flow cyto-fluorimetry, cytotoxic activity was estimated by MTT-tests. The cells sensitivity to Aranoza cytostatic effects has showed that mel Kor cells were sensitive to Aranoza acting, but mel Ibr and mel Mtp X were not. Mel Ibr cells had expressed pgp170 from 35 to 50 per cent, it was detected by
№ 4/том 14/2015 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ
40
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МНОЖЕСТВЕННОЙ..
immunofluorescence reaction. Mel Kor and mel Mtp-X cells were not expressed P-glycoprotein. mRNA of genes responsible for multi-drug resistance - MDR1, BCRP, MRP1 and LRP (MVP) - were detected by PCR. mRNA of BCRP and MRP1 genes has low expression, barely visible stripes after 33 cycles in all cell lines samples. LRP (MVP) genes expression of mRNA, unfortunately, never managed to see. YB1 gene mRNA expression is well, it is typically for cancer cells. mRNA of gene was found in mel MtpX and mel Ibr subclones cell lines. Mel Kor cells didn't contain mRNA of MDR1 gene. The study of the Rh123 emission from cells showed that mel Kor control cells had accumulated Rh123 and didn't throw it out. Mel Ibr cell line accumulated Rh123 and threw out the half part of it. Mel MtpX cell line had accumulated the less part of Rh123 and almost all were thrown out.
Thus, the study shows that mel Kor cell line that are sensitive to Aranoza doesn't express pgp170, not contain mRNA of multi-drug resistance genes and does not throw Rh123. Mel Ibr cells resistant to the Aranoza cytotoxic action express pgp170 ,contain mRNA of MDR1 gene and throw out Rh123. However, mel MtpX cell line resistant to Aranoza does not express pgp170, but contains mRNA of MDR1 gene and actively throws out Rh123.
Key words: the human melanoma cell lines, multi-drug resistance, liposomes.
Введение
МЛУ является основным препятствием эффективности химиотерапии [2; 5-8; 19; 23-25]. В опухолевых клетках в ответ на действие даже одного цитостатического агента может развиваться МЛУ к большому количеству других препаратов, еще не воздействовавших на опухоль, различающихся по структуре и механизмам действия [13; 20]. Для изучения лекарственной чувствительности клеток к противоопухолевым препаратам используются перевиваемые клеточные линии [9; 11; 12; 21; 22]. В рамках программы разработки противоопухолевых вакцин была создана панель перевиваемых клеточных линий меланомы кожи человека [1; 14-17]. Эти клеточные линии были использованы при изучении цитотоксического действия противоопухолевых препаратов [9; 18]. При этом было обнаружено, что некоторые клеточные линии устойчивы к цитотоксическому действию, определенному в МТТ-тесте, и индукции апоптоза [10]. Изучение механизма лекарственной устойчивости показало, что клетки линий mel Mtp-Х и mel Z не экспрессируют рецептор внешнего апоптоза CD95/Fas, и это было причиной отсутствия индукции апоптоза [3; 4]. Однако клетки линии mel Ibr экспрессировали CD95/Fas рецептор, но не гибли под воздействием препаратов [3; 4; 10]. Предположили, что в этих клетках имеется гиперэкспрессия одного из генов МЛУ.
Целью настоящей работы стала характеристика МЛУ в клеточных линиях метастатической меланомы кожи человека, полученных в «РОНЦ им. Н.Н. Блохина».
Материалы и методы
Клеточные линии
Исследования проводили на 3 клеточных линиях диссеминированной меланомы кожи человека: mel Kor, mel Mtp-Х и mel Ibr. Клеточные линии культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10 % ТЭС, 10 мМ HEPES (Sigma, США), 2мМ L-глутамин (Sigma, США), 40 нг/мл гентамицин (ICN, США), пируват натрия (ПанЭко, Россия), 0,1 %-ный раствор аминокислот и 0,1 %-ный раствор витаминов (ПанЭко, Россия) при +37 °C в атмосфере
5 %-ного СО2. Клетки поддерживали в логарифмической фазе роста постоянным пересевом культуры через 3-4 дня.
Определение экспрессии гликопротеида pgp170 Экспрессию pgp170 определяли в прямой реакции иммунофлуоресценции с помощью МКА Mouse Anti-Human P-glycoprotein, меченных фико-эритрином (Dako, Дания). Реакцию учитывали на проточном цитометре FACSCantolI (Becton Dickinson, США).
Определение мРНК генов МЛУ Определяли мРНК генов, ответственных за МЛУ - MDR1, BCRP, MRP1 и LRP (MVP), в ОТ-ПЦР. Для выделения тотальной РНК клетки (12*106) снимали с культурального флакона раствором трипсина с ЭДТА, и осаждали центрифугированием. Затем клетки лизировали 1 мл тризола (Tri reagent, «MRC», США). Образцы инкубировали 5 мин при комнатной температуре. Далее все процедуры выделения РНК проводили в соответствии с протоколом производителя Tri reagent. РНК разводили деионизованной водой до конечной концентрации 1 мкг/мкл и хранили при температуре -20 °С. Качество выделенной РНК проверяли с помощью электрофореза в 1 %-ном агарозном геле. Образцы с ясно видимыми полосами 18S и 28S РНК были использованы для дальнейшего анализа. Фотографировали гель при помощи аналоговой видеокамеры с использованием программы Gel Imager.
Реакцию ОТ проводили с использованием случайных гексануклеотидных праймеров. Реакционная смесь для реакции обратной транскрипции: буфер для обратной транскрипции, смесь дезокси-нуклеотид-трифосфатов (дНТФ) 2,5 мМ каждого, праймеры (Random Hexamer «Thermo Scientific», США) 0,2 мкг на пробу, ингибитор РНКаз (Ribolock RNase «Thermo Scientific», США) 20 ед. на пробу, обратная транскриптаза (RevertAid Reverse «Thermo Scientific», США) - 100 ед., тотальная РНК - 2 мкг.
Далее пробирки с реакционной смесью помещали в программируемый термостат и инкубировали 50 мин при +42 °С. Для выравнивания ко-
личества кДНК в разных образцах амплифицирова-ли ген домашнего хозяйства GAPDH.
Для амплификации кДНК использовали специфические праймеры, приведенные в табл. ПЦР проводили на амплификаторе «Терцик» («ДНК-технология», Россия).
Условия амплификации: +94 °C 30 с., затем 25 - 40 циклов +94 °C 10 с., +60 °C 10 с., +72 °C 10 с., затем +72 °C 1 мин. Конечная концентрация фермента для полимеризации (TagDNA Polimerase «Thermo Scientific», США) - 1 ед. на пробу. Число циклов подбирали таким образом, чтобы оказаться в экспоненциальной фазе образования продуктов реакции. Продукты амплификации, предварительно помеченные бромистым этидием, в количестве 20 мкл разделяли в 2 %-ном агарозном геле. Фотографировали гель при помощи видеосистемы «DNA Analyzer» (США).
Выброс родамина 123
Функцию Р-гликопротеина определяли по выбросу из клеток родамина 123 (Rh123). Для этого клетки снимали с культуральных флаконов раствором Версена, отмывали, затем к 5*105 клеток в объеме 50 мкл добавляли по 1 мл бессывороточной среды RPMI-1640 и по 3 мкл Rh123.
Клетки инкубировали в течение 15 мин при комнатной температуре, после чего двукратно отмывали раствором PBS. Клетки делили на две части и помещали в новые пробирки в 50 мкл раствора PBS. В контрольную пробирку добавляли 1 мл полной среды роста, а в опытную - 2 мкл раствора винкристина и 1 мл полной среды роста и инкубировали их в течение 30 мин при +37 °С.
После двукратной отмывки PBS клетки ре-суспендировали в 300 мкл PBS и анализировали на проточном цитофлюориметре FACSCantoII (Becton Dickinson, США).
МТТ-тест
В МТТ-тесте изучали цитотоксическое действие на клеточные линии противоопухолевого препарата из группы нитрозоалкилмочевины аранозы в лекарственной форме «Араноза лио-филизат для приготовления раствора для инъекций» (Научно-производственный филиал «Нау-копрофи» ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» Минздрава России, Москва).
Клетки сажали в 96-луночные плоскодонные планшеты по 7*103 клеток в 180 мкл среды роста на лунку. Через 24 ч в лунки с клетками добавляли по 20 мкл аранозы в концентрациях 56 мкг/мл; 112 мкг/мл; 225 мкг/мл; 450 мкг/мл и 900 мкг/мл. В контрольные лунки добавляли по 20 мкл полной ростовой среды.
Клетки инкубировали с препаратом в течение 24 ч при +37 °С и 5 % СО2. После инкубации в каждую лунку вносили по 20 мкл раствора МТТ (1 мг/мл, Sigma, ^emical Co, США) и оставляли еще на 4 ч при +37 °C при 5 % СО2. По окончании инкубации планшеты центрифугировали, отбирали супернатант и вносили в лунки по 150 мкл ДМСО
(ПанЭко, Россия) для растворения кристаллов формазана, после чего планшеты встряхивали на шейкере для равномерного распределения окрашивания.
Оптическую плотность раствора формазана определяли на фотометрическом анализаторе им-муноферментных реакций «АИФР - 01 Униплан» (ЗАО, «Пикон», Россия) при длине волны 530 нм. Величина поглощения прямо пропорциональна числу живых клеток. Цитотоксичность (Ц) оценивали в % по формуле:
Ц = ) х 100%, где
Ок
Ок - оптическая плотность в контрольных лунках, Оо - оптическая плотность в опытных лунках.
Эффективность препарата оценивали по ИК50 - концентрации, при которой происходит ингибирование роста 50% клеток.
Результаты
Определение чувствительности клеток mel Kor к цитотоксическому действию аранозы показало, что ИК50 для них равнялась 0,45 мг/мл. Для клеток линий mel Ibr и mel MtpXИК50 после 24 ч инкубации с аранозой не была достигнута. Таким образом, клетки mel Kor чувствительны к действию аранозы, а клетки mel Ibr и mel MtpX устойчивы (рис. 1).
В реакции иммунофлуоресценции было показано, что от 35 до 50 % клеток линии mel Ibr экс-прессировали pgp170 (рис. 2). Клетки mel Kor и mel MtpX не экспрессировали Р-гликопротеин.
В ПЦР определяли мРНК генов, ответственных за множественную лекарственную устойчивость - MDR1, BCRP, MRP1 и LRP (MVP). Образцы лизатов опухолевых клеток были уравнены по гену GAPDH. Все остальные гены были оценены в сравнении с ним.
Во всех образцах линий клеток мРНК генов BCRP и MRP1 экспрессируются слабо, а экспрессию мРНК гена LRP (MVP) вообще не удалось увидеть. Однако мРНК гена YB1 экспрессируется хорошо, что характерно для большинства опухолевых клеток.
Наиболее интересные результаты получены при определении мРНК гена MDR1. мРНК этого гена обнаружили в клетках mel MtpX и субклонах линии mel Ibr. Клетки линий mel Kor и mel Mtp не содержат мРНК гена MDR1 (рис. 3).
Исследование выброса родамина из клеток показало, что контрольные клетки mel Kor накапливали Rh123 и не выбрасывали его.
Клетки линии mel Ibr накапливали Rh123 и половину выбрасывали. Клетки линии mel MtpX накапливали мало Rh123 и почти весь его выбрасывали (рис. 4). На рисунке показаны средние каналы флюоресценции (mean).
42 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МНОЖЕСТВЕННОЙ...
Таблица
Специфические праймеры, использованные для амплификации кДНК_
Название гена Последовательность Длина фрагмента
GAPDH Прямой: СССТООССЛЛООТСЛТССЛТОЛСЛЛС ТТТ Обратный: вОССЛТОЛООТССЛССЛСССТОТТОСТвТЛ 513 пн
LRP Прямой: СССССЛТЛССЛСТЛТЛТССЛТОТв Обратный: ТСОЛЛЛЛОССЛСТОЛТСТССТв 405 пн
BCRP Прямой: ТОСССЛООЛСТСЛЛТОСЛЛСЛв Обратный: ЛСЛЛТТТСЛООТЛООСЛЛТТОТв 172 пн
MDR1 Прямой: СССЛТСЛТТОСЛЛТЛОСЛОв Обратный: ОТТСЛЛЛСТТСТвСТССТОЛ 167 пн
MRP1 Прямой: ЛТСЛЛОЛССОСТОТСЛТТОв Обратный: вЛОСЛЛООЛТОЛСТТОСЛОв 180 пн
YB-1 Прямой: ЛСЛЛОЛЛвОТСЛТСОСЛЛСОЛЛв Обратный: ООТТООЛЛТЛСТОТООТСОЛСв 476 пн
Концентрация, мкг/мл
-в— mel Kor -И—mel Ibr -A—mel Mtp-X
Рис.1. Цитотоксический эффект действия аранозы на клеточные линии меланомы.
2,96 °Л>
к
10° 10'
mel Kor контроль
10" Empty
3.46 <Vo
mel Ibr контроль
103
mi i | ■ jHl
............о.
10* ю° ю'
mel Kor (PE)
mel Ibr (PE)
2,92 <Vo
Empty
34.2 %
Рис. 2. Гистограммы клеток, окрашенных моноклональными антителами к pgp170, меченными фикоэритрином.
Рис. 3. Экспрессия генов, ответственных за лекарственную устойчивость в различных клетках меланомы человека:
1 - mel Kor; 2 - mel Mtp клон X; 3 - mel Mtp; 4 - mel Ibr клон 1; 5 - mel Ibr клон 2; 6 - mel Ibr клон 3.
Mean-1157
1
Empty
mel Kor накопление Eh 123
Mean-1175
Empty
mel Ibr н акопление Ehl 23
iimtii
A
Empty
mel Kor выброс Eh 123
Empty
mel Ibr выброс Eh 123
Mean-23
10" Empty
mel Mtp clone X накопление Eh 123 mel Mtp clone X выброс Eh 123
Рис. 4. Накопление и выброс родамина 123 (mean - средний канал флюоресценции).
44
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МНОЖЕСТВЕННОЙ..
Заключение
Таким образом, исследование показало, что чувствительные к аранозе клетки линии mel Kor не экспрессируют pgp170, не содержат мРНК генов множественной лекарственной устойчивости и не выбрасывают родамин 123. Резистентные к цито-токсическому действию аранозы клетки mel Ibr экспрессируют pgp170, содержат мРНК гена MDR1 и выбрасывают родамин 123. Однако устойчивые к
Литература
аранозе клетки линии mel MtpX не экспрессируют pgp170, но содержат мРНК гена MDR1 и активно выбрасывают родамин 123. Вероятно, на этих клетках экспрессирован другой эпитоп pgp170, который не выявился МКА, которые мы применяли для детекции. Охарактеризованные клеточные линии могут быть использованы для изучения преодоления МЛУ.
1. Барышников АЮ. Принципы и практика вакцинотерапии рака // Бюллетень Сибирского отделения РАМН. - 2004. - № 2. - С. 59-63.
2. Барышников А.Ю., Степанова Е.В. Молекулярные биомаркеры в диагностике лекарственной резистентности // Аллергия, астма и клиническая иммунология. - 2009. - № 1. - С. 23.
3. Барышникова М.А., Грищенко Н.В., Бурова О.С. и др. Роль CD95/Fas рецептора в индукции апоптоза противоопухолевыми препаратами // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 3. - С. 3-8.
4. Барышникова МА., Грищенко НВ., Полозкова А.П. Влияние лекарственных форм аранозы на индукцию апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 64.
5. Блохин Д.Ю., Соколовская А А, Власенкова Н.К. и др. Множественная лекарственная устойчивость опухолевых клеток, резистентных к апоптозу // Вестник РАМН. - 2007. - № 10. - С. 41-6.
6. Богуш Т.А., Смирнова Г.Б., Богуш ЕА., Барышников А.Ю. Маркеры множественной лекарственной резистентности солидных опухолей человека: методические, фундаментальные и клинические аспекты // Российский биотерапевтический журнал. - 2006. - Т. 5, № 3. - С. 82-92.
7. Богуш Т.А., Гришанина А.Н., Богуш ЕА. и др. Влияние ABC -транспортеров на противоопухолевую терапию рака толстой кишки // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2006. - Т. 16, № 2. - С. 55-62.
8. Богуш ТА, Дудко Е.А., Богуш Е.А., Барышников А.Ю. Характеристика взаимодействия специфических антител с PGP в клетках Т-лимфобластного лейкоза линии JURKAT // Антибиотики и химиотерапия. - 2009. -Т. 54, № 1-2. - С. 3-9.
9. Грищенко НВ, Альбассит Б., Барышникова М.А.и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм противоопухолевых препаратов из класса нитрозомочевины // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 49-54.
10. Грищенко Н.В., Барышникова М.А., Полозкова А.П. и др. Липосомальные противоопухолевые препараты не используют CD95-зависимый сигнальный путь апоптоза // Российский биотерапевтический журнал. - 2014. - Т. 13, № 1. - С. 37-42.
11. Козеев С.Г., Барышникова М.А., Афанасьева ДЛ. и др. Сравнение цитотоксического действия двух лекарственных форм аранозы // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 2. - С. 24.
12. Ланцова А.В., Барышникова М.А., Санарова ЕВ. Изучение в системе in vitro наноструктурированной лекарственной формы лизомустина // Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т.11, №2. - С. 31.
13. Литвяков Н.В. Градиентный феномен экспрессии генов множественной лекарственной устойчивости в опухоли молочной железы при проведении неоадъювантной химиотерапии: связь с прогрессированием заболевания // Сибирский онкологический журнал. - 2013. - Т. 58, № 4. - С. 5.
14. Михайлова И.Н., Лукашина М.И., Барышников А.Ю. и др. Клеточные линии меланомы - основа для создания противоопухолевых вакцин // Вестник РАМН. 2005. - № 7. - С. 37-40.
15. Михайлова И.Н., Ковалевский ДА.. Бурова О.С. и др. Экспрессия раково-тестируемых антигенов в клетках меланомы человека // Сибирский онкологический журнал. - 2010. - Т. 37, № 1. - С. 29-39.
16. Михайлова Т.В, Барышникова М.А., Клименко ОВ. и др. Разработка липосомальной формы противоопухолевой вакцины // Российский биотерапевтический журнал. - 2011. - Т.10, №4. - С. 61-6.
17. Михайлова Т.В., Барышникова М.А., Бурова О.С. и др. Сравнение уровня экспрессии HSP70 на клеточных линиях меланомы // Российский биотерапевтический журнал. - 2010. - Т. 9, № 1. - С. 43-8.
18. Славина Е.Г., Бигвава ХА., Заботина Т.Н. и др. Модификация фактором некроза опухоли (ФНО-альфа) цитотоксиче-ского и апоптотического действия противоопухолевых лекарств в клетках меланомы человека // Российский биотерапевтический журнал. - 2009. - Т. 8, № 4. - С. 37-44.
19. Шоуа И Б, Полозкова А.П., Оборотова НА. и др. Действие липосомального доксорубицина на клетки линии, экспрес-сирующие активный pgp170 // Российский биотерапевтический журнал. - 2004. - Т. 3, № 1. - С. 20-3.
20. Szakass G., Paterson J.K., Ludwing J.A. et al. Targetting multidrug resistance in cancer // Nan Rev Drug Discov. - 2006. - № 5. - P. 219-34.
21. Sokolovskaya A.A., Zabotina T.N., Blokhin D.Yu. et al. Comparative analysis of apoptosis induced by various anticancer drugs in Jurkat cells // Experimental Oncology. - 2001. - 1(23). - P. 46-50.
22. Sokolovskaya A.A., Zabotina T.N., Blokhin D.Yu. et al. CD95-dificient cells of Jurkat/A4 subline are resistant to drug-induced apoptosis // Experimental Oncology. - 2001. - 3(23). - P. 175-81.
23. Stavrovskaya A.A., Sedyakhina N.P., Stromskaya T. et al. Prognastic value of P-glicoprotein and correlation with CD34 antigen // British J. Heamatology. - 1998. - 5-6(28). - P. 469-82.
24. Turkina A.G., Baryshnikov A. Yu., Sedyakhina N.P. et al. Studies of P-glycoprotein in chronic myelogenousleukaemia patients: Expression, activity and correlations with CD34 antigen // British J. Heamatology. - 1996. - 92. - P. 88-96.
25. Turkina A.G., Zabotina T.N., Kusnetzov S.V. et al. Studies of some mechanisms of drug resistance in chronic myeloid leukemia (CML) // Advances in Experimental Medicine and Biology. - 1999. - 457. - P. 477-88.
