CC BY
46УДК [577.21 + 579.25. 579.22; 577.213]
Н.П. Максимова, Е.А. Храмцова, И.Н. Феклистова, Ю.М. Кулешова, С.С. Жардецкий, Е.Г. Веремеенко
ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ К СОЗДАНИЮ ШТАММОВ-ПРОДУЦЕНТОВ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА ОСНОВЕ РИЗОСФЕРНЫХ БАКТЕРИЙ
PSEUDOMONAS
Белорусский государственный университет, биологический ф-т Республика Беларусь, 220030, Минск, пр. Независимости, 4
Введение
Одной из важнейших задач современной биотехнологии является создание высокопродуктивных форм микроорганизмов, способных синтезировать биологически активные соединения (антибиотики, фитогормоны, витамины, ферменты и др.). Особенно перспективными в этом плане являются бактерии рода Pseudomonas, обладающие природной способностью синтезировать свыше 300 наименований различных антимикробных соединений, подавляющих развитие возбудителей заболеваний сельскохозяйственных растений; фитогормоны - индолил-3-уксусную кислоту (ИУК), гиббереллины, цитокинины, этилен,
аммиак и др. а также ряд соединений, стимулирующих иммунитет и повышающих их устойчивость к неблагоприятным факторам окружающей среды. За последние два десятилетия в этом направлении достигнуты значительные успехи, обусловленные как совершенствованием традиционных методов селекции, так и новых современных подходов.
Целью работы являлась разработка генетических и генно-инженерных подходов получения штаммов-продуцентов биологически активных соединений - фитогормонов, антибиотиков и пигментов на основе ризосферных бактерий рода Pseudomonas.
Материалы и методы
Объекты исследований - штаммы бактерий P. aurantiaca B-162, P mendocina В-1299, P. putida КМБУ 4308 дикого типа и их регу-ляторные мутанты, а также штаммы E.coli DH 5а, E coli TG-1 trpB28, E. coli S17/1 (pro"; thi") pUT(ApR):: miniTn5(SmR) и E. coli S17/1(pro ; thi ) pUT(ApR):: miniTn5(KmR), фитопатогенные бактерии и грибы различных родов и видов, векторные плазмиды pUC18, pAYC31, pXcmKn12 и др. Бактерии выращивали в жидкой минимальной среде М9, а также среде Канеда, освобожденной от ионов железа [1] и питательном бульоне на круговой качалке (180-200 об/мин); при необходимости культивирование бактерий осуществляли на агаризо-ванных средах различного состава. Температура выращивания - 28°-37°С, время - 24-96 ч в зависимости от используемых штаммов и целей эксперимента.
Для выделения феназиновых антибиотиков и пирролнитрина бактерии выращивали в среде, предложенной Levitch, Stadtman и van Pee [2, 3], для выделения ИУК - в среде РС
[4]. В качестве источника углерода и энергии при культивировании микроорганизмов использовали глюкозу (0,2 %) или сукцинат Na (0,4 %). Центрифугирование культуральной жидкости (КЖ) осуществляли при 5000 об/ мин в течение 15 мин. Концентрацию бактерий в среде культивирования определяли по калибровочной кривой известным методом
[5], клеточный экстракт получали путем обработки суспензии клеток ультразвуком (30 кШ, 3 раза по 15 с).
Выделение хромосомной ДНК и электрофорез в агарозном геле проводили согласно стандартным методикам [6]. Подбор праймеров для полимеразной цепной реакции осущест-
вляли с использованием базы данных Basic Local Alignment Search Tool.
Мутанты получали путем обработки бактерий К-метил-К'-нитро-К-нитрозогуанидином в концентрации 200 мкг/мл, либо с помощью транспозонного мутагенеза по известной методике [7]. Для определения активности 3-дезокси^-арабиногептулозонат-7-фосфат-синтазы (ДАГФ-синтазы), фосфоенолпируват-синтазы (ФЕП-синтазы), трансальдолазы и антранилат-синтазы использовали методы [8, 9 и др.]. Выделение феназинов осуществляли согласно [10], пирролнитрина - [11], а их иден-
тификацию с помощью жидкостного хроматографа с масс-спектрометрическим детектором LCMS-QP8000a («Shimadzu» Japan). Выделение и очистку пиовердина, а также определение его концентрации в растворе проводили по методике, описанной ранее [1]. Выделение N-ацил-гомосерин лактона, его идентификацию и количественный анализ осуществляли по известным методом [12].
Антимикробную активность бактерий изучали стандартным методом [13]. Статистическую обработку данных проводили с использованием Microsoft Excel для Microsoft Office 2000.
Результаты и обсуждение
Создание продуцентов индолил-3-уксусной кислоты на основе ризосферных бактерий Р. тепйоета
В ходе изучения пути синтеза индолил-3-уксусной кислоты (ИУК) и механизмов ее регуляции у ризосферных бактерий P men-docina ВКМВ1299 установлено, что синтез ауксина у данных бактерий осуществляется с участием ИПВК-пути (через индол-3-пировиноградную кислоту), в котором задействовано три фермента - триптофан-аминотрансфераза, индолпируват-декарбо-ксилаза и индолацетальдегид-дегидрогеназа [14]. Показано, что регуляция шикиматного пути у изучаемых бактерий осуществляется на уровне 3-дезокси-0-арабиногептулозонат-7-фосфат-синтазы (ДАГФ-синтазы) с помощью ретроингибирования двумя аминокислотами - тирозином и триптофаном. Репрессия синтеза данного фермента у изучаемых бактерий не зарегистрирована. Синтез триптофана контролируется с помощью репрессии trpE-, trpD- и ^С-генов триптофаном, а также пу-
тем ретроингибирования антранилат-синтазы триптофаном. Синтез двух ферментов -индолпируват-декарбоксилазы и триптофан-аминотрансферазы индуцируется триптофаном, синтез последнего фермента, кроме того, репрессируется антранилатом.
С помощью НГ-мутагенеза и последующей селекции клонов на устойчивость к токсическому аналогу триптофана - 5-фтор-DL-триптофану получены регуляторные мутанты, способные к сверхсинтезу ИУК. Продукция гормона у одного из полученных мутантов (штамм 9-40) оказалась в 10 раз выше, чем у исходного штамма [15]. Сверхсинтез ИУК коррелировал с повышенным уровнем синтеза ключевых ферментов ароматического пути - ДАГФ-синтазы и триптофан-синтазы в 2 раза, триптофан-аминотрансферазы и индолилпируват-декарбоксилазы - примерно в 8 раз (Табл. 1). Кроме того, при обработке растений препаратом мутантных бактерий P. mendocina 9-40 в экспериментах in vitro наблюдалась значительная стимуляция их роста (Рис. 1).
Таблица 1
Активность ферментов пути синтеза ИУК у бактерий дикого типа Р. твпйоета ВКМВ1299 и регуляторного мутанта 9-40
Ферменты Удельная активность (нмоль/мин • мг белка)
Дикий тип Мутант 9-40
ДАГФ-синтаза 7,1 14,5
Антранилат-синтаза 1,0 2,2
Триптофан-аминотрансфераза 3,0 25,0
Индолилпируват-декарбоксилаза 8,6 700
Рис. 1. Стимуляция роста растений томата под действием препарата мутантных бактерий P mendocina 9-40.
С целью создания генно-инженерного штамма-продуцента ИУК на основе бактерий P. mendocina было осуществлено клонирование ipdc-гена (кодирует синтез фермента индолилпируват-декарбоксилазы) с использованием векторов pUC18 и pXcmKn12 в клетках E. coli DH5a. В результате, была получена гибридная плазмида pTVN4 (4,5 т.п.н.) со вставкой ipdc-гена, размер которого - 1,7 т.п.н. [16]. Наличие вставки ipdc-гена было доказано с помощью повторной ПЦР, способно-стьи синтезировать ИУК рекомбинантными бактериями E. coli, а также по наличию в их клетках ИПВК-декарбоксилазной активности. Осуществлено секвенирование /pdc-гена и установлен его точный размер - 1 764 п.н. Проведено переклонирование /pdc-гена в вектор pAYC31 с целью изучения его экспрессии в клетках P mendocina. Сконструирована плазмида pAYSCD1.7, стабильно наследующаяся в бактериях P. mendocina. Наличие в их клетках рекомбинантной плазмиды со встроенным ipdc-геном обеспечивает повышенный уровень синтеза ИПВК-декарбоксилазы (в 5,3
раза) и ауксина, соответственно. Таким образом, регуляторный мутант P mendocina 9-40 и рекомбинантный штамм, клетки которого несут плазмиду pAYC1.7, включающую ipdc-ген, могут быть рекомендованы для создания новых биопрепаратов биостимулирующего рост растений действия.
Создание продуцентов антибиотиков ароматической природы на основе ризосферных бактерий P aurantiaca
Анализ ризосферных бактерий рода Pseudomonas на предмет высокой антимикробной активности и наличия в их геноме генов, контролирующих синтез антибиотиков пирролни-трина, феназинов, 2,4-диацетилфлороглюцинола и пиолютеорина позволил отобрать штамм Р. aurantiaca B-162, пригодный для использования в биотехнологических целях.
Масс-спектрометрический анализ фена-зинового комплекса, синтезируемого бактериями P. aurantiaca B-162 показал, что он включает феназин, 1-оксифеназин и феназин-1,6-дикарбоксилат (Рис. 2, Рис. 3) [17, 18].
Рис. 2. Спектр поглощения (А) и масс-спектр (Б) феназина и феназин-1,6-дикарбоксилата: 1 - феназин,
2 - феназин-1,6-дикарбоксилат.
Рис. 3. Спектр поглощения (А) и масс-спектр (Б) 1-оксифеназина.
Установлено, что исследуемые бактерии являются природными продуцентами фена-зинов, уровень продукции которых составляет в оптимизированных условиях 71-76 мг/л, что превышает таковой у известных бактерий
Pseudomobas. Масс-спектрометрический анализ позволил выявить у бактерий P aurantia-ca В-162 антибиотик пирролнитрин (Рис. 4), уровень продукции которого соответствует 5,6 мг/л.
Рис. 4. Спектр поглощения (А) и масс-спектр (Б) пирролнитрина.
Наибольшая антимикробная активность топатогенных грибов A. alternatа и Е culmorum пирролнитрина проявляется в отношении фи- (фунгицидная доза составляет 2,5-3,5 мкг/мл),
тогда как бактерицидная доза в отношении фи-топатогенных бактерий Pseudomonas и Erwinia в 3,5 раза выше (7,5-12,5 мкг/мл).
Исследование механизмов синтеза фе-назиновых антибиотиков у бактерий P. aurantiaca В -162 осуществляли на уровне ключевых ферментов щикиматного пути -ДАГФ-синтазы, фосфоенопируват-синтазы (ФЕП-синтазы), трансальдолазы, а также антранилат-синтазы -основного фермента пути синтеза триптофана - предшественника пирролнитрина. Установлено, что ДАГФ-синтаза изучаемых бактерий представлена двумя изоферментами (ДАГФ-синтазой [phe] и ДАГФ-синтазой [tyr]), которые подвержен-ны ретроингибированию фенилаланином и тирозином. Кроме того, активность ДАГФ-синтазы ингибируется феназином, действие которого носит бесконкурентный характер, и стимулируется ионами металлов, наиболее активными среди которых являются ионы Со2+, Си2+ и Fe2+. Синтез ДАГФ-синтазы у бактерий P. aurantiaca B-162 осуществляется конститутивно [20]. На активность ФЕП-синтазы оказывают стимулирующее действие ионы Mg2+, Fe2+ и Со2+, в то время как трансальдолаза с помощью ионов металлов не регулируется. Антранилат-синтаза подвержена ретроинги-бированию триптофаном, что характерно для всех представителей рода Pseudomonas. Кроме того, установлено, что синтез антибиотиков феназинового ряда у бактерий P. aurantiaca B-162 контролируется QS-системой с участием позитивного регулятора метаболизма #-гексаноил-гомосерин лактона [21].
Впервые с помощью химического мутагенеза и последующей селекции на устойчивость к токсическим аналогам метаболитов ароматических пути (азасерину, т-фтор-DL-фенилаланину и 6-диазо-5-оксо^-норлейцину) получены мутанты P. aurantiaca B-162 - продуценты антибиотиков феназинового ряда, уровень синтеза которых у отдельных штаммов (а именно, мутанта B-162/498 и B-162/55 достиг 205 мг/л, что в 3 раза, выше, чем у бактерий дикого типа). В ходе дальнейшего мутагенеза получен штамм B-162/255, устойчивый к более высоким концентрациям т-фтор-DL-фенилаланина, уровень продукции феназинов у которого достиг 420-450 мг/л, что в 5,6 раза выше, чем у бактерий дикого типа и почти в
17 раз - чем у ранее описанных продуцетов P. fluorescens и P. chlororaphis. Установлено, что в основе сверхсинтеза феназиновых антибиотиков у мутантных штаммов лежит дерегуляция ДАГФ-синтазы (снятие ингибирования фе-нилаланином, тирозином и феназином), либо сверхсинтез N-гексаноил-гомосерин лактона (в 2 и 2,3 раза выше для мутантов B-162/298 и B-162/255, соответственно, чем у исходного штамма) [19, 22].
Показано, что бактерии P. aurantiaca обладают антимикробной активностью в отношении широкого спектра фитопатогенных микроорганизмов - бактерий (E. aroideae; E. carotovora; P. atrofaciens; P. glycinea; P. lachrymans; P. lupini; P. pisi; P. syringae; P. vignae; P. xanthochlora ) и грибов (A. alternata; A. brassicicola A. infec-toria A. ternnuisima, Ascochyta sp.; B. cinerea; F. avenaceum; F. culmorum; F. culmorum; F. cul-morum; F. oxysporum; F. oxysporum; F. sambuci-num; F. emitectum; 13 - S. sclerotiorum, 14 - P. infestans; 15 - P. infestans) [23]. На примере мутантных бактерий P. aurantiaca В-162/498 продемонстрирована антифунгальная активность в системе in planta, что проявлялось в подавлении развития инфекций, вызванных B. cinerea, Ascochyta sp., F. avenaceum и F. semitectum, а также снятии неспецифического фитотоксического действия этих организмов в отношении исследуемых культур растений (огурцы и пшеница).
В условиях производственного эксперимента показано, что 4-х кратная обработка растений огурца культурой клеток мутантно-го штамма P. aurantiaca В-162/498 привела к увеличению их высоты на 50 % по сравнению с контрольной группой [24]. Показано, что ростостимулирующая активность бактерии P. aurantiaca связана с синтезом фитогормона гиббереллиновой кислоты [25].
Создание продуцентов флуоресцирующего пигмента пиовердина Рм на основе ризосферных бактерий P putida
Известно, что ризосферные бактерии рода Pseudomonas способны синтезировать водорастворимые желто-зеленые флуоресцирующие пигменты - пиовердины, выполняющие функции сидерофоров. Молекулы пиовердинов состоят из трех структурно-функциональных элементов, представленных
хромофором (диоксихинолиновым ядром), дикарбоновой кислотой (или ее амидом) и пептидной цепью. В состав диоксихиноли-нового ядра входит катехольная структура, две реакционно-активные ОН-группы которой находятся в С8- и С9-положении. Две других ОН-группы принадлежат гидроксили-рованным производным К5-оксиорнитина и К-оксиаспарагиновой кислоты, находящихся в пептидной части молекулы пигмента. Перечисленные группы обеспечивают высокую хе-латирующую активность пиовердинов. В этом плане представлялось интересным изучить физико-химические свойства пиовердина Рт, синтезируемого ризосферными бактериями Р. putida КМБУ 4308, в том числе его антиок-сидантную активность.
Анализ молекулярного строения пигмента позволил установить, что в его состав, помимо ароматического (диоксихинолинового) ядра, входит пептид, включающий пять различных аминокислот: треонин, серин, лизин, аспарагиновую кислоту и Ка-оксиорнитин в молярном соотношении 3:2:1:1:1. Исследование физико-химических свойств пиовердина Рт показало высокую степень сродства пигмента не только к Бс3+-ионам, а
также ионам тяжелых металлов - 2п2+, №2+, Со2+, Бп2+, Си2+, Сё2+, и Мо6+. Хелатирующая Бе3+-ионы активность пиовердина Рт обеспечивает бактериям Р. putida антимикробную активность в отношении широкого спектра про- и эукарио-тических микроорганизмов [26].
Использование методики перекисного восстановления в системе ПНТХ (ПНТБ)-рибофлавин позволило впервые зарегистрировать наличие антиоксидантной активности у пиовердина Рт. При этом уровень антирадикальной активности пигмента оказался достаточно высоким и сравнимым с таковым для известных органических антиоксидантов природного происхождения. В частности, 50 %-ое ингибирование свободнорадикальных процессов в присутствии пиовердина Рт наблюдалось при его концентрации 25 мкг/мл, а максимальный уровень (около 90 %) - при 90 мкг/мл, что сопоставимо с действием меланина и других полифенолов (Табл. 2) [27].
Полученные результаты открывают перспективы для использования пиовердина Рт в качестве антирадикального агента и разработке на его основе антиоксидантных препаратов нового поколения.
Таблица 2
Сравнительная характеристика активности антирадикальных препаратов
природного происхождения
Соединение Антирадикальная активность I50 мкМ/л Цитотоксическое действие (IC50 мкМ/л*)
Пиовердин Pm 20,6+ 3,5 2010+9,3
Кверцетин 35,7 + 1,6 64,1+ 5,1
Морин 52 + 2 454,2+ 14,2
Рутин 31,5 + 2,5 >1280
Примечание. Цитотоксичность по отношению к культуре клеток линии К562 эритробластного криза хронического миелоидного лейкоза человека.
С использованием НГ и транспозонного (Тп5) мутагенеза получены мутанты Б14, Б17, Б18, Б19 Р. putida, характеризующиеся повышенной в 1,6-2,5 раза по сравнению с бактериями дикого типа продукцией пио-
вердина Рт (Табл. 3) и обладающие высокой антимикробной активностью. Особенностью полученных мутантов является способность к синтезу пигмента в присутствии ионов железа [5].
Таблица 3
Продукция пиовердина Р мутантными штаммами Р. риНйа
Уровень синтеза пиовердина Pm при оптимальных условиях
Штамм Количество пиовердина мкг/мл Количество клеток х109/мл Удельная продукция пиовердина мкгх10-9/КОЕ
Дикий тип 752 2,77 271,48
М 8 1220 1,92 635,42
F14 900 1,79 502,79
F17 800 1,81 441,99
F18 930 2,04 455,88
F19 938 1,75 536,00
Исследование антагонистической активности бактерий Р. риИ^ КМБУ 4308 показало высокую антимикробную (подавляет рост более 95,9 % культур) активность изучаемых бактерий. Не менее интересным свойством бактерий Р. риНёа КМБУ 4308 оказался их фитостимулирующий эффект, связанный, вероятно, с антиоксидантной активностью пигмента. Стимулирующее действие изучаемых бактерий зарегистрировано в отношении 24 сельскохозяйственных культур. На уровне проростков увеличение основных показателей роста возрастало в 2-4 раза. Полученные
данные аргументировали вывод, что штамм Р. риНёа КМБУ 4308 является перспективным объектом агробиотехнологии и может быть использован для создания на его основе биопрепарата широкого спектра противоми-кробного действия, обладающего одновременно антиоксидантной активностью, а также способностью стимулировать рост растений. Особенно перспективным оказалось применение препаративной формы бактерий Р. putida КМБУ 4308 для борьбы с галловой нематодой (эффективность подавления инфекции на культуре огурцов [28].
Заключение
Таким образом, на основе ризосферных бактерий Pseudomonas осуществлено конструирование штаммов-продуцентов биологически активных веществ - индолил-3-уксусной кислоты (на основе штамма P. mendocina), антибиотиков феназинового ряда (на основе P. aurantiaca) и флуоресцирующего пигмента пиовердина (на основе P. putida). Показано, что уровень синтеза
ИУК возрос в 10 раз (по сравнению с исходным штаммов дикоого типа), феназиновых антибиотиков - в 6 раз, пиовердина - в 2,5 раза. Изучены механизмы, лежащие в основе повышения продуктивности штаммов, дана оценка их биологической активности. Рассмотрены возможные подходы к практическому использованию штаммов-продуцентов.
Список литературы
1. Кулешова, Ю.М Идентификация и характеристика пиовердина Pm - нового антирадикального соединения, синтезируемого бактериями Pseudomonas putida КМБУ4308 / Ю.М Кулешова, Н.П. Максимова, О.В. Блажевич, И.В. Семак // Труды Белорусс. Гос. ун-та. -2006. - Выпуск 1. С. 89-97.
2. Levitch, M.E. Regulation of aromatic amino acid biosynthesis in phenazine-producing strains / M.E. Levitch // J. Bacteriol.- 1970.- Vol. 103, № 1. - P. 16-19.
3. van Pée, K.H. The biosynthesis of brominated pyrrolnitrin derivatives by Pseudomonas au-reofaciens / K.H. van Pée, O. Salcher, P. Fischer, M. Bokel, F. Lingens // J. Antibiot. (Tokyo). -1983. - Vol. 36, № 12. - P. 1735-1742.
4. Dubeikovsky, F.N. Growth promotion of blackcurrant softwood cutting by recombinant strain Pseudomonas fluorescens BSP53a synthesizing an increased amount ofindolil-3-acetic acid / F.N. Dubeikovsky, E.A. Mordukhova, VV Kochetkov [et al.] // Soil Biol. Biochem. - 1993. - Vol. 25. - P. 1277-1281.
5. Кулешова, Ю.М. Получение бактерий Pseudomonas putida КМБУ4308, способных к сверхпродукции пигмента пиовердина Рт / Ю.М. Кулешова, Н.П. Максимова, М.В. Ка-маева // Вестн. Белорус. ун-та. - Сер. 2: Химия. Биология. География. - 2006. - № 2. -С. 48-52.
6. Sambrook, J., Fritsch E., Maniatis T. Molecular cloning: a laboratory manual / J. Sambrook, E. Fritsch, T. Maniatis // Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Publications, NY. - 1989. - 468 p.
7. De Lorenzo, V. Mini-Tn5 transposon derivatives for insertion mutagenesis, promoter probing, and chromosomal insertion of cloned DNA in gramnegative eubacteria / V. De Lorenzo, M. Herrero, U. Jakubzik, K. Timmis // J. Bacteriology. - 1990. -Vol. 172, № 11. - P. 6568-6572.
8. Jensen, R.A., Nester E.W. The regulatory significance of intermediary metabolites: control of aromatic acid biosynthesis by feedback inhibition in Bacilllus subtilis / R.A. Jensen, E.W. Nester // J. Mol. Biol. - 1965. - Vol. 12, № 2. - P. 468-481.
9. Ito, J. Regulation of the enzymes of the tryptophan pathway in Escherichia coli / J. Ito, I.P. Crawford // Genetics. - 1965. - Vol. 52, № 6. - P. 1303-1316.
10. Levitch, M.E. Regulation of aromatic amino acid biosynthesis in phenazine-producing strains of Pseudomonas / M.E. Levitch // J. Bacteriol. -1970. - Vol. - 103, № 1. - Р. 16-19.
11. Burkhead, K.D. Pyrrolnitrin production by biological control agent Pseudomonas cepacia B37w in culture and in colonized wounds of potatoes / K.D. Burkhead, D.A. Schisler, P.J. Slininger // Appl. Environ. Microbiol.- 1994.-Vol. 60, № 6. - P. 2031-2039.
12.McClean, K.H._Quorum sensing and Chromobacterium violaceum: exploitation of violacein production and inhibition for the detection of N-acylhomoserine lactones / K.H. McClean, M.K. Winson, L. Fish et al. // Microbiology. - 1997. - Vol. 143, № 12. -Р. 3703-3711.
13. Основы учения об антибиотиках: [Учеб. пособие для биол. спец. ун-тов] / Н. С. Егоров, 455 с. ил. 22 см, 3-е изд., перераб. и доп. М. Высш. школа 1979.
14. Храмцова, Е. А. Синтез индол-3-уксусной кислоты ризосферными бактерия-
ми Pseudomonas mendocina / Е.А. Храмцова, С.С. Жардецкий, Л.Е. Садовская, Н.П. Максимова // Научные труды Молекулярная и прикладная генетика. - Минск: Институт генетики и цитологии Национальной академии наук Беларуси. - Минск, 2006. - Т. 3. - С.146-153.
15. Храмцова, Е. А. Синтез индол-3-уксусной кислоты ризосферными бактериями Pseudomonas mendocina. Характеристика регуляторных мутантов / Е.А. Храмцова, С.С. Жардецкий, Н.П. Максимова // Вестн. Белорус. Гос. Ун-та. Серия 2. Химия. Биология. География. - 2006. - № 2. - С 69-73.
16. Жардецкий, С.С. Клонирование гена синтеза ИУК бактерий P. mendocina, способных стимулировать рост растений / С. С. Жар-децкий, Е. А. Храмцова, Н. П. Максимова // Сб. тезисов докладов Международной школы-конференции, посвященной 100-летию со дня рождения С.И. Алиханяна, 28 ноября - 1 декабря 2006 г., Москва - Пущино. - С. 96.
17. Феклистова, И.Н. Оптимизация условий синтеза феназина бактериями Pseudomonas aurantiaca B-162 / И.Н. Феклистова, Н.П. Максимова // Вест. Белорус. ун-та.- Сер. 2: Химия. Биология. География.- 2005.- № 3.-С. 29-31.
18. Феклистова, И.Н. Синтез феназиновых соединений бактериями Pseudomonas aurantiaca B-162 / И.Н. Феклистова, Н.П. Максимова // Вест. Белорус. ун-та.- Сер. 2: Химия. Биология. География.- 2005.- № 2.- С. 66-69.
19. Feklistova, I.N. Obtaining Pseudomonas aurantiaca strains capable of overproduction of phenazine antibiotics / I.N. Feklistova, N.P. Maksimova // Microbiology. - 2008. -Vol. 77, № 2. - P. 176-180.
20. Феклистова, И. Н. ДАГФ-синтаза Pseudomonas aurantiaca B-162: регуляция активности и синтеза / И. Н. Феклистова, Н. П. Максимова // Молекул. генетика, микро-биол. и вирусол. - 2005.- № 4.- С. 34-36.
21. Феклистова, И.Н., Плотностно-зависимая регуляция синтеза антибиотиков феназиново-го ряда бактериями Pseudomonas aurantiaca В-162 / И.Н. Феклистова, Н.П. Максимова // III Съезд Общества биотехнологов России им. Ю.А. Овчинникова (ОБР), 25-27 октября 2005 г., Москва. - С. 78.
22. Веремеенко, Е.Г. Создание и селекция штаммов Pseudomonas aurantiaca, способных
к сверхпродукции антибиотиков феназинового ряда / Е.Г. Веремеенко, Н.П. Максимова //Современное состояние и перспективы развития микробиологии и биотехнологии: материалы международной конференции, Минск, 2-6 июня 2008 г. / Институт микробиологии НАН Беларуси; редкол.: Э.И. Коломиец [и др.]. -Минск, 2008, С. 208-210.
23. Феклистова, И.Н. Бактерии Pseudomonas aurantiaca B-162 как основа биопрепарата для защиты растений / И.Н. Феклистова, Н .П. Максимова // Земляробства i ахова раслш. - 2006. - № 2. - С. 42-44.
24. Феклистова И.Н., Максимова Н.П. Стимулирующая рост растений активность ри-зосферных бактерий Pseudomonas aurantiaca / И.Н. Феклистова, Н.П. Максимова // Регуляция роста, развития и продуктивности растений: Материалы V междунар. науч. конф., Минск, 28-30 ноября 2007 г. / Нац. акад. наук Беларуси. Ин-т эксп. Ботаники им. В.Ф. Купревича. Белорусское общественное объединение физиологов растений. - Минск, 2007.- С. 206.
25. Feklistova, I.N. Increased bean (Faseolus vulgaris) root growth by treatment of steam cuttings with Pseudomonas aurantiaca КМБУ-498 strain / I.N. Feklistova // Biodiversity. Ecology. Adaptation. Evolution: Proceedings of the III international young scientists conference, Одес-
са, 15-18 мая 2007 г. / Мин-во обр. и науки Ураины. Одесский нац. ун-т им. И.И. Мечникова. Ин-т ботаники им. М.Г. Холодного НАН Украины.- Одесса, 2007.- С. 149-150.
26. Максимова, Н.П. Биосинтез биологически активных соединений ароматической природы микроорганизмами / Н. П. Максимова, В.В. Лысак, Е.В. Доброжинецкая [и др.] // Выбраныя навуковыя працы Белару-скага дзяржаунага ушверЫтэта. Б1ялопя. Геаграф1я. / Адк. рэд. I. I. Шрожшк.- Мн.: БДУ, 2001.-Т. 7.- С. 102-126.
27. Кулешова, Ю.М. Характеристика антирадикальной активности бактериального пигмента пиовердина Рт / Ю.М. Кулешова, Н.П. Максимова // Вестн. Белорус. гос. ун-та. -Сер. 2: Химия. Биология. География. - 2006. -№1. - С. 57-60.
28. Маслак, Д.В. Оценка нематицидной активности нового фитозащитного биопрепарата не-мацида, КС / Д.В. Маслак, И.В. Можарова, Д. А. Долматов, Н. П. Максимова // Современное состояние и перспективы развития микробиологии и биотехнологии: Материалы VI междунар. науч. конф., Минск, 2-6 июня 2008 г. / Нац. акад. наук Беларуси. Отд-е химии и наук о Земле. Ин-т микробиологии. БРФФИ. Бел. Общественное объединение микробиологов. ООО «Актив Био Тех».- Минск, 2008.- С. 310-312.
Дата поступления статьи 27 октября 2008 г.
