CC BY
14ПРОДЛЕНИЕ СРОКА ХРАНЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ НЕМАЦИД И АУРИН С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПРЕПАРАТА ЛИГНОГУМАТ
И.Н. Феклистова, к.б.н., Д.В. Маслак, Н.П. Максимова, д.б.н., Белорусский ГУ, Л.В. Тугаринов,
ООО «ЛИГНОГУМАТ» Россия
Разработан новый способ увеличения сроков хранения недавно созданных нами биопрепаратов Немацид и Аурин с использованием препарата Лигногумат. Наиболее эффективным является хранение препарата Немацид в присутствии Лигногумата марки Б натриевый (1,5 %), для Аурина оптимально внесение Лигногуматов марок Б натриевый и БМ калийный (0,5 %).
Ключевые слова: Pseudomonas, феназин, пиовердин, нематоды, биопрепараты, лигногумат.
Недавно на основе бактерий рода Pseudomonas нами разработаны новые биопестицидные препараты Немацид (ТУ BY 300042160.011-2009), Аурин (ТУ BY 300042160.012-2009), предназначенные как для защиты сельскохозяйственных культур от фитопатогенов, так и для стимуляции роста растений. В ходе испытаний указанные биопрепараты показали высокую эффективность применения, однако их существенным недостатком является малый срок хранения (2-3 месяца при комнатной температуре), что ограничивает объем производства и сроки реализации продукции [1-12].
Известно, что совмещение биопрепаратов на основе живых культур микроорганизмов и препарата Лигногумат (гуминовое удобрение с микроэлементами в хелатной форме со свойствами регулятора роста и антистрессанта) приводит к увеличению срока хранения биопрепаратов http://www.humate.spb.ru .
Цель данной работы - разработка нового способа продления срока хранения биопестицидных препаратов Немацид и Аурин с использованием препарата Лигногумат.
Препараты Немацид и Аурин (согласно ТУ BY) хранят в сухих, защищенных от атмосферных осадков помещениях при температуре не выше +10° С и не ниже +4° С, в качестве стабилизатора используют 0,5 %-бензоат натрия. Однако хранение больших объемов препаратов в холодильных камерах нецелесообразно, вследствие чего возникла необходимость увеличения срока хранения биопрепаратов в температурном режиме от + 10° С до +22° С.
Были проведены исследования жизнеспособности бактерий P. aurantiaca B-162/498 и P. putida U, являющихся основой биопрепаратов Аурин и Немацид соответственно, при хранении в смеси с Лигногуматами. В работе использованы препараты Лигногумата следующих марок: Б и БМ калийный, Б и БМ натриевый и ВМ-NPK калийный, предварительно доводили значение рН до 6,5-7,0 и стерилизовали автоклави-рованием при 0,5 атм в течение 30 мин. Лигногуматы марок Б представляют собой 20% водный раствор натриевых или калийных солей гуминовых веществ, Лигногуматы марки БМ представляют собой водный раствор натриевых или калийных солей гуминовых веществ с микроэлементами, Лигногумат марки ВМ-NPK представляют собой 12% водный раствор калийных солей гуминовых веществ с микроэлементами и макроэлементами (азотом, фосфором, калием). Лигногумат имеет государственную регистрацию в Белоруссии № 11-070006 удостоверение № 740. Для закладки на хранение биопрепараты Аурин и Немацид смешивали с препаратами Лиг-ногумата (конечная концентрация 0,5 % и 1,5 %). Образцы хранили при комнатной температуре в течение 7 мес.
Критерием оценки жизнеспособности бактерий при хранении с препаратом Лигногумат служил титр клеток - это количество клеток, определяемое стандартным методом. Высевы из смеси производили на поверхность агаризованной среды на основе гидролизата кильки, инкубировали при 28° С в течение 24 ч. Опыты проводили в трех повторностях.
Результаты испытаний представлены в таблицах 1 и 2.
Жизнеспособность клеток бактерий P. putida U и P. auran-tiaca B-162/498 в присутствии Лигногуматов выше, чем при хранении в стандартных условиях. При этом клетки P. putida U, составляющие основу биопрепарата Немацид, сохраняются
в течение 6 мес при внесении Лигногумата в конечной концентрации 1,5 % - процент жизнеспособных клеток от 9,2 до 18,7, тогда как клетки P. aurantiaca B-162/498 (основа препарата Аурин) - при внесении Лигногумата в конечной концентрации 0,5 % (процент физиологически активных клеток от 10,5 до 21,1).
Литература
I. Whipps J.M. Microbial interactions and biocontrol in the rhizosphere // J. Experiment. Botany.- 2001.- Vol. 52, № 1.- P. 487-511. 2. Dwivedi D., B.N. Johri. Antifungals from fluorescent pseudomonads: biosynthesis and regulation // Current Science.- 2003.- Vol. 85, № 12.- P. 1693-1703. 3. Siddiqui I.A., Haas D., Heeb S. Extracellular protease of Pseudomonas fluorescens CHA0 a biocontrol factor with activity against the root-knot nematode Meloidogyne incognita //Appl. Environ. Microbiol.- 2005.- Vol. 71, № 9.- P. 5646-5649. 4. http://www.humate.spb.ru/ 5. Феклистова И.Н., Максимова Н.П. Бактерии Pseudomonas aurantiaca B-162 как основа биопрепарата для защиты растений // Земляробства i ахова раслш.- 2006.- № 2.- С. 42-44. 6. Molecular mechanisms of defense by rhizobacteria against root disease. R.J. Cook, L.S. Thomashow, D.M. Weller e.a. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1995.- Vol. 92, № 10.- P. 4197-4201. 7. Feklistova I. N., Maksimova N. P. Obtaining Pseudomonas aurantiaca strains capable of overproduction of phenazine antibiotics // Microbiology.-2008. -Vol. 77. - No. 2.- P. 176-180. 8. Prischepa L., Voitka D., Feklistova I., Maximova N. Bioproducts in the control of soil-borne pathogens under cover // Zeszyty problemowe Postçpôw Nauk Polniczych. - 2008. -Z. 529. - P. 149-154. 9. Feklistova I.N., Maximova N.P. Perspectives of gib-berellin-producing Pseudomonas rhizobacteria application in agriculture // Plant growth substances: intracellular hormonal signaling and applying in agriculture: Abstracts 2nd international symposium, Kyiv, 8-12 october 2007 г.-P. 123. 10. Пат. 2051586 РФ. Штамм бактерий Pseudomonas putida - биостимулятор роста растений// Максимова Н.П., Лысак В.В., Игнатович О.В., Фомичев Ю.К. № 2051586. Заявл. 12.07.1991. Опубл. 10.01.1996. 5с.
II. Максимова Н.П., Блажевич О.В., Лысак В.В., Фомичев Ю.К. Характеристика флуоресцирующего пигмента пиовердина Pm Pseudomonas putida M // Микробиология. 1994. Т.63 № 5. С. 1038-1044. 12. Максимова, Н.П. Генетические подходы создания штаммов-продуцентов биологически активных соединений на основе ризосферных бактерий Pseudomonas / Н.П. Максимова, Е.А. Храмцова, И.Н. Феклистова, Ю.М. Кулешова, С.С. Жардецкий, Е.Г. Веремеенко//Молекулярная и прикладная генетика - 2008.- Т.8. - С. 143-151.
1. Жизнеспособность бактерий Р. рШ1йа и в смеси с Лигногу-матами (исходный титр 7,6x10' клеток/мл), % жизнеспособных _клеток за 7 месяцев испытаний_
Вариант хранения 1 2 3 4 5 6 7
1.+вода 0,5% 2 4,6 2,9 5,5 1,8 0,4 0,9
2.+Б калийный 0,5 % 5,8 5,4 4,8 3,7 2,9 1,1 0,9
3.+Б калийный 1,5 % 20,0 19,4 17,8 15,5 14,6 9,2 3,5
4.+БМ калийный 0,5 % 7,3 7,0 5,5 4,4 3,5 2,1 1,4
5.+БМ калийный 1,5 % 22,4 19,9 16,6 16,1 15,5 10,1 5,4
6.+Б натриевый 0,5 % 4,8 4,1 3,6 2,9 2,5 1,5 1,1
7.+Б натриевый 1,5 % 30,1 27,1 24,8 19,9 19,3 18,7 10,0
8.+БМ натриевый 0,5% 2,7 2,4 2,1 1,9 1,5 1,1 0,7
9.+БМ натриевый 1,5 % 24,4 23,5 22,8 21,9 20,3 16,2 10,1
10.+ВМ-№К калийный 0,5% 4,7 7,4 4 3,9 2,5 0,1 1,1
11.+ВМ-№К калийный 1,5% 19,0 17,1 14,8 15,9 17,3 0,12 0,5
2. Жизнеспособность бактерий P. aurantiaca В-162/498 в смеси с Лигногуматами (исходный титр составил 7,2*109 клеток/мл), % _'жизнеспособных клеток за 7 месяцев испытаний_
№ вар. 1 2 3 4 5 6 7
1 17 20 15,7 16,8 11,0 13 1,62
2 82,1 81,4 69,9 53,1 39,5 10,5 1,63
3 40,0 33,3 28,4 27,7 25,7 12,1 9,8
4 65,3 59,1 47,8 39,7 26,9 17,5 10,5
5 39,4 34,4 28,8 23,3 21,5 11,1 6,8
6 71,1 69,3 57,4 49,9 39,5 21,1 11,6
7 33,3 31,1 29,5 27,7 22,2 16,1 1,9
8 55,5 47,7 39,3 31,8 24,5 13,7 2,4
9 31,9 28,5 22,6 18,4 15,1 9,9 3,1
10 90,1 83,3 77,2 63,2 49,4 14,4 1,6
11 40,2 35,1 29,1 27,4 25,5 6,8 0,8
PROLONGATION OF THE STORAGE TIME OF BIOPREPARATIONS NEMACIDE AND AURINE USING THE PREPARATION LIGNOHUMATE I.N. Feklistova, D. V. Maslak, N.P. Maksimova, L. V. Tugarinov* Belarusian State University, pr. Nezavisimosty 4, Minsk, 220030 Republic Belarus *OOO Lignogumat, Malookhtinskii pr. 61A, of. 201, S. Peterburg, 195112 Russia A new method of extending the expiry date of the biopesticides Nemacide and Aurine with the use of Lignohumate was developed. The most effective is to store Nemacide in the presence of Lignohumate B sodium (1.5%); for Aurine, the addition of Lignohumate B sodium and BMpotassium (0.5%) is an optimum method.
Key words: Pseudomonas, phenazine, pyoverdin, nematodes, biopesticides, Lignohumate
