CC BY
157
УДК 615.32:547.9+543.544 ФЛАВОНОИДЫ И ТЕРПЕНОИДЫ ЦВЕТКОВ ЛАВАНДЫ КОЛОСОВОЙ
© Мохаммед Ламрини1, В.А. Куркин1, П.Г. Мизина1, М.В. Беляева2, Ю.И. Арутюнов2, Л.А. Онучак2
1 Самарский государственный медицинский университет Росздрава, ул. Чапаевская, 89, Самара, 443099 (Россия) E-mail: [email protected] 2Самарский государственный университет, Самара (Россия)
E-mail: [email protected]
С целью внедрения в медицинскую практику нового вида лекарственного растительного сырья - цветков лаванды колосовой (Lavandula spica L.) изучен компонентный состав эфирного масла и флавоноидов сырья данного растения.
Методом газовой хроматографии изучен компонентный состав эфирного масла цветков лаванды колосовой. В эфирном масле цветков лаванды колосовой, собранных в Марокко, идентифицированы 58 веществ, среди которых к доминирующим компонентам относятся 12 терпеноидных соединений, а именно: гексил-изобутират + камфора (9,17%), линалоол (8,63%), линалиацетат (7,35%), лавандулол + борнеол (6,90%), геранилацетат (6,51%), 1,8-цинеол + лимонен (6,11%), а-копаен (6,06%), а-терпинеол (5,98%), лавандулилацетат (5,49%). В образце эфирного масла лаванды российского производства обнаружены и идентифицированы 76 веществ, причем среди них доминируют 2 терпеноида - линалоол (32,51%) и линалилацетат (28,06%). Из сырья данного растения впервые выделены также флавоноиды, идентифицированные как 7-0-В-Б-глюкопиранозид 5,7,41-тригидрооксифлавона (космосиин) и 7-0-В-Б-глюкопиранозид 5,7,3*,4*-тетрагидрооксифлавона (цинарозид).
Введение
Цветки лаванды колосовой (Lavandula spica L., сем. Яснотковые - Lamiaceae) обладают широким спектром биологической активности (антисептическое, желчегонное, седативное, мочегонное действие), однако это ценное растение не нашло пока широкого применения в медицинской практике Российской Федерации. В настоящее время в РФ производят лишь бактерицидные препараты «Ливиан» и лавандовый спирт на основе эфирного масла, получаемого из свежих цветков лаванды, тогда за рубежом это растение широко применяется в виде седативных препаратов («Нервофлукс» и др.) [1-6]. Внедрению в медицинскую практику воздушно-сухого сырья и препаратов на его основе препятствует недостаточная степень изученности химического состав и фармакологических свойств различных субстанций из цветков данного растения.
Для создания препаратов на основе цветков лаванды имеются объективные предпосылки в плане сырьевой базы, так как данное средиземноморское растение широко культивируется во многих странах мира, в том числе в Российской Федерации, в республиках бывшего СССР и Марокко. В литературе основное внимание исследователей было сосредоточено на изучении эфирного масла, получаемого из свежесобранного сырья, поскольку оно используется в качестве лекарственной субстанции [2, 3, 6].
Целью настоящей работы является изучение химического состава цветков лаванды колосовой и обоснование стандартизации по двум группам действующих веществ - эфирному маслу и флавоноидам.
Экспериментальная часть
В качестве объекта исследования использовали цветки лаванды колосовой, собранные в Марокко в долине Атласских гор (2006 г.) и высушенные на открытом воздухе в тени.
Эфирное масло, полученное из цветков лаванды колосовой, собранных в Марокко, исследовали в сравнении с российским промышленным образцом эфирного масла (фирма «Floria Pharma»).
* Автор, с которым следует вести переписку.
Извлечения из сырья получали классическим способом методом мацерации с использованием в качестве экстрагента водного спирта.
Содержание эфирного масла лаванды, определенное методом 1 (ГФ СССР XI издания) [7], колеблется в образцах цветков лаванды от 0,60 до 1,70%. Это дает основание рекомендовать для цветков лаванды числовой показатель «не менее 0,5%».
Исследование эфирного масла лаванды колосовой, произрастающей в Марокко, проводили методом газовой хроматографии на хроматографе «Цвет 500» с пламенно-ионизационным детектором. Использовали капиллярную колонку длиной 30 метров с внутренним диаметром 0,32 мм, заполненную неподвижной жидкой фазой DB-5 (5% дифенилполисилоксан, 95% диметилполисилоксан). Температурное программирование осуществляли следующим образом: 40 °С в течение 3 мин, далее температура поднималась до 200 °С со скоростью 5 °С в минуту и оставалась при этом значении до конца эксперимента. Кроме того, в эксперименте использовали следующие параметры: давление 0,7 кгс/см2, ввод пробы с делителем потока 1/10, объем пробы 0,5 мкл.
Анализ каждой пробы проводили 3 раза. Концентрацию веществ рассчитывали по методу внешнего стандарта по формуле: С1=(Ь1/Ьст)-Сст, где Сст - концентрация раствора гексанола-1, Сст=0.72 г/л, ^т=23.5 мм - средняя высота пика стандарта из 8 опытов, h1 - высота пика 1-го вещества в мм. Приведенные линейные индексы удерживания рассчитывали по формуле: IT= ((tri-trz)/(trz+1-trz)+Z)-100. В эфирном масле цветков лаванды колосовой, собранных в Марокко, идентифицированы 58 веществ, среди которых к доминирующим компонентам относятся 12 терпеноидных соединений, концентрации и линейные индексы удерживания которых приведены в таблице.
В сравнительном плане нам проведен анализ эфирного масла лаванды российского производства (фирма «Floria Pharma»). В исследуемом образце нами обнаружены и идентифицированы 76 веществ, причем среди них доминируют 2 терпеноидных компонента - линалоол (32,51%) и линалилацетат (28,06%).
С целью выделения флавоноидных соединений полученный водно-спиртовый экстракт упаривали под вакуумом, наносили на силикагель L40/100, высушивали и вносили в хроматографическую колонку со слоем силикагеля, сформированного в виде взвеси в хлороформе. Элюирование колонки смесью хлороформ-спирт в различных соотношениях и последующее рехроматографирование фракции с целевым флавоноида-ми на колонке с полиамидом «Wolem» (вода - спирт) позволило получить два индивидуальных соединения, дополнительную очистку которого удалось провести путем перекристаллизации из водного спирта. В ходе дальнейшего исследования флавоноидов 1 и 2 обнаружено, что они расщепляются под воздействием Р-глюкозидазы («Fluka», Венгрия) на глюкозу и агликоны, идентифицированные методом ТСХ с апигени-ном (5,7,41-тригидроксифлавон), и лютеолин (5,7,31,41-тетрагидроксифлавон) соответственно.
Для установления полной структуры гликозидов 1 и 2 нами использованы методы 1Н-ЯМР-, УФ-спектроскопии и масс-спектрометрии.
В спектре 1Н-ЯМР соединения 1 при 7,95 м.д. и 7,02 м.д. присутствуют два двухпротонных дублетных сигнала с константой спин-спинового взаимодействия (J) 9 Гц, отнесенные соответственно к протонам Н-21, 61 и Н-31, 51, два однопротонных дублетных сигнала при 6,81 м.д. и 6,43 м.д. с J = 2,5 Гц, характерные для протонов кольца А флавоноида (Н-8 и Н-6), а также синглетный сигнал протона Н-3 при 6,69 м.д. (флавоновая природа вещества). Кроме того, в спектре обнаружен и синглетный сигнал 5-ОН группы флавоноида, что позволило в совокупности с результатами ферментативного гидролиза и данных УФ-спектроскопии отнести углеводный фермент к 7-ОН группе, причем глюкоза присоединена в виде p-D-глюкопиранозильного остатка (характерный дублетный сигнал аномерного протона при 5,15 м.д, с J = 7,5 Гц).
Основные компоненты эфирного масла лаванды колосовой
№ пика R, с к IT hi, мм. /л г/ О Доля пика, % Название компонента
1 743 1033 515 15,7S 6,11 1 ^-цинеол, лимонен
2 S25 1074 450 13,7S 5,33 цис-линалоол оксид
3 S93 110S 72S 22,3 S,63 линалоол
4 971 1149 773 23,6S 9,17 гексилизобутират, камфора
5 1017 1173 5S2 17,S3 6,90 лавандулол, борнеол
6 1061 1196 504 15,44 5,9S а-терпинеол
7 1176 1261 620 19,00 7,35 линалилацетат
S 1229 1290 463 14,1S 5,49 лавандулилацетат
9 1357 1365 511 15,66 6,06 а-копаен
10 1391 13S5 549 16,S2 6,51 геранилацетат
Совокупность результатов химических исследований спектральных данных позволяет предложить для соединения (1) следующее строение: 7-О-Р-О-глюкопиранозид 5,7,41-тригидроксифлавона (космосиин). Аналогичным образом изучена и химическая структура цинарозида (2).
Космосиин (1) Цинарозид (2)
Космосиин (7-О-р-Э-глюкопиранозид апигенина). Кристаллы светло-желтого цвета состава С21Н20О10 с т.пл. 225-227 °С (водный спирт); УФ-спектр: Хтах 270, 335 нм; +№оАс 269, 378 нм. Масс-спектр: 270 (М+ агликона, 100%). 1Н-ЯМР в ^ацетоне (200 МГц, м.д.): 12,50 (с, 5-ОН группы), 7,95 (д, 9 Гц, Н-21 и Н-61 -2Н), 7,02 (д, 9 Гц, Н-31 и Н-51 - 2Н), 6,81 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,89 (с, Н-3), 6.43 (д, 2 Гц, Н-6), 5,15 (д, 7,2 Гц, Н-11), 4,0-3,3 (м, 6Н глюкозы).
Цинарозид (7-О-р-Б-глюкопиранозид лютеолина). Кристаллы светло-желтого цвета состава С21Н20О11 с т.пл. 232-234 °С (водный спирт); УФ-спектр: Хтах 257, 266 пл, 352 нм; +№оАс 258, 268 (пл), 380 нм. Масс-спектр: 286 (М+ агликона, 100%). 1Н-ЯМР-спектр в ^ацетоне (200 МГц, м.д.): 7,38 (дд, 9 и 2 Гц, Н-6’), 7.36 (д, 2,5 Гц, Н-2’), 6.87 (д, 9 Гц, Н-5’), 6,80 (д, 2,5 Гц, Н-8), 6,59 (с, Н-3), 6.43 (д, 2 Гц, Н-6), 5,09 (д, 7,2 Гц, Н-1’), 3,9-3,3 (м, 6Н глюкозы).
Следует отметить, что космосиин и цинарозид впервые выделены из цветков лаванды колосовой. Что касается вообще флавоноидов, то в зарубежной литературе сообщают о наличии в цветках лаванды лютеолина (5,7,31,41-тетрагидроксифлавон), однако этот факт еще требует подтверждения, так как в ходе настоящих исследований лютеолин в цветках лаванды не обнаружен.
На наш взгляд, в плане стандартизации сырья и препаратов лаванды колосовой представляет интерес не только эфирное масло, но и вещества ароматической природы, в том числе флавоноиды, обусловливающие характер кривой поглощения УФ-спектров водно-спиртовых извлечений цветков данного растения (рис.).
УФ-спектры растворов извлечений из цветков лаванды колосовой. Обозначения: 1 - раствор извлечения из цветков лаванды колосовой;
2 - раствор извлечения из цветков лаванды колосовой с добавлением алюминия хлорида
200 250 300 350 400 450 [пт]
АЬгогЬапсе
Список литературы
1. Абдельхай Сежильмасси. Лекарственные растения в Марокко. Касабланка, 1995. С. 145.
2. Государственный реестр лекарственных средств. Официальное издание. М., 2004. Т. 1. 1404 с.
3. Куркин В.А. Фармакогнозия: учебник. Самара, 2004. 1180 с.
4. Idrissi A., Berrada M. Etude chimiquecomparative de quelques population de lavandula du Maroc // Colloque int. sur les plantes aromatiques et medicinales du Maroc. Rabat, 1985. P. 220.
5. Nafysi A. T. Review of Traditional Medicine in Iran // Isfahan Univercity Publications. Isfahan, 1989. P. 122.
6. Wagner H. Pharmazeutische Biologie. Drogen und ihre Inhaltsstoffe. Stuttgart-New York: Gustav Fischer Verlag. 1993. 522 s.
7. Государственная Фармакопея СССР. Одиннадцатое издание. - Вып. 1: Общие методы анализа. М., 1987. С. 336.
Поступило в редакцию 2 сентября 2007 г.
