CC BY
46
УДК 615.32 : 616.36. И.П. Убеева. Б.В. Балданов,
К.С. Лоншакова, С.М. Николаев, Е.А. Ботоева
ФИТОКОРРЕКЦИЯ ХРОНИЧЕСКОГО ТОКСИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ ПЕЧЕНИ БАД «БАЙКАЛЬСКИЙ-7»
В экспериментальных условиях было показано, что применение БАД «Байкальский-7», состоящей из Calendula officinalis L., Rosa majalis Herrm., Grataegus sanguinea L, Inula helenium L, Helichrysum arenarium L., Glicyrrhiza glabra L., Mentha piperita L., при хроническом токсическом гепатите способствовало уменьшению выраженности основных патогенетических синдромов повреждения печени: цитолиза, холестаза, диспротеинемии. Гепа-тозащитный эффект развивался на фоне коррекции интенсивности свободно-радикальных процессов, уменьшения содержания малонового диальдегида и диеновых конъюгатов, повышения концентрации восстановленного глутатиона и индукции активности каталазы и супероксиддисмутазы в сыворотке крови.
Ключевые слова: фитотерапия, экспериментальный гепатит, гепатопротекторы.
I.P. Ubeeva, B.V. Baklanov, K.S. Lonshakova, S.M. Nicolaev, E.A. Botoeva
THE PHITOCORRECTOIN OF CHRONIC TOXIC LIVER INJURY BY MEANS OF BIOLOGICAL ACTIVE ADDICTION «BAIKALSKY-7»
Under experimentalconditions it has been shown that the use of biological active addiction «Baikalsky-7» containing Calendula officinalis L., Rosa majalis Herrm., Grataegus sanguinea L, Inula helenium L, Helichrysum arenarium L., Glicyrrhiza glabra L., Mentha piperita L. while duration of chronic toxic hepatitis has reduced basic pathogenetic syndrome of liver injury: cytolysis, cholestasis and dysproteinemia. The hepatoprotective effect has developed on the background of correction the intensity of free radical processes, decrease the content of malondialdehyde and diene conjugate and increase of glutathione concentration, induction of catalase activation and superoxidedismutase in blood plasma.
Key words: phitotherapy, experimental hepatitis, antioxidant, hepatoprotectors.
В лечении хронических вирусных гепатитов решающая роль отводится противовирусным препаратам, однако их применение ограничивается возможным развитием токсических воздействий и побочных реакций при недостаточно высоком терапевтическом эффекте. В последние годы внимание гепатологов привлекает использование препаратов растительного происхождения в качестве дополнительного средства коррекции повреждений печени. Фитопрепараты отличаются широким спектром фармакотерапевтической активности, возможностью длительного применения, низкой токсичностью.
Цель работы - определение фармакотерапевтической эффективности БАД «Байкальский-7» при экспериментальном хроническом повреждении печени.
Материалы и методы: Биологически активная добавка «Байкальский-7» представляет собой сочетание семи видов сухого измельченного сырья лекарственных растений: цветков ноготков (Calendula officinalis L.), плодов шиповника (Rosa majalis Herrm ), плодов боярышника кровавокрасного (Grataegus sanguinea L.), корневищ девясила высокого (Inula helenium L.), цветков бессмертника песчаного (Helichrysum arenarium L.),
корней солодки голой (Glicyrrhiza glabra L.), листьев мяты перечной (Mentha piperita L.), взятых в равных частях. Указанная композиция была разработана с учетом фармакологических свойств, входящих в ее состав лекарственных растений. Наличие различных по составу биологически активных веществ позволило достичь потенцирования эффектов и поливалентного профилактического действия. Доклинические исследования фармакологической активности, фармакотерапевтической эффективности и безопасности БАД «Байкальский-7», проведенные в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН в соответствии с требованиями, предъявляемыми к разработке БАД, показали, что испытуемое средство обладает выраженной гепатопротекторной активностью.
Для определения особенностей фармакоте-рапевтического действия БАД «Байкальский-7» выполнена экспериментальная работа на 90 беспородных белых крысах обоего пола с исходной массой 180,0±20,0. Животных содержали в идентичных условиях на стандартном рационе вивария (Приказ М3 СССР № 1179 10.10.83 г.). Эксперименты проводили в соответствии с Правилами проведения работ с использованием эксперимен-
тальных животных (Приложение к приказу М3 СССР №755 от 12 августа 1977 г.).
Хронический токсический гепатит вызывали введением 50%-ного масляного раствора тетрах-лорметана подкожно в объеме 0,2 мл/100 г массы животного два раза в неделю в течение 2 месяцев. Все крысы были разделены на 4 группы: I - ин-тактные крысы, II - контрольная группа животных с хроническим СС14-гепатитом, III - группа сравнения, животные с хроническим СС14-гепатитом, получавшие известный гепатопротектор карсил в дозе 50 мг/кг и IV - крысы с СС14-гепатитом, принимавшие БАД «Байкальский-7». Настой БАД «Байкальский-7» вводили в дозе 0,3 г/кг массы животного в пересчете на суховоздушное сырье один раз в сутки со 2-го месяца (31-го дня эксперимента) внутрижелудочно ежедневно в течение 30 дней. Животным контрольной группы вводили зондовым методом дистиллированную воду в соответствующем объеме.
Функциональное состояние печени животных оценивали в динамике на 44, 58 и 72-е сутки эксперимента на основе общепринятых биохимических методов: определения активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатами-нотрансферазы (ACT) по Райтману и Френкелю, щелочной фосфатазы по Бессею, Лоури и Броку, В-липопротеидов по Бурштейну и Самай, холестерина по Илька, тимоловой пробы по Хуэрго и Поппер (Меньшиков, 1987). Состояние анти-оксидантной защиты оценивали по активности основных антиоксидантных ферментов - ката-лазы, супероксиддисмутазы (СОД) сыворотки крови, содержанию восстановленного глутатиона (GSH). Каталазную активность сыворотки крови крыс определяли по методу Г.А. Бобенко, М.Н. Гайнацкого (1976) и М.А. Королюка и др. (1988), основанному на способности перекиси водорода образовывать окрашенный комплекс с солями мо-либдата аммония. Метод определения активности СОД базировался на торможении реакции автоокисления адреналина при pH 10,2 (Брусов и со-авт, 1976). Интенсивность процессов перекисно-
го окисления липидов оценивали по содержанию малонового диальдегида (МДА) (Темирбулатов, Селезнев, 1981) и диеновых конъюгатов (ДК) в сыворотке крови [5].
Статистическая обработка полученных данных проводилась на основе современных пакетов прикладных математических программ с использованием критерия Стьюдента. Различия считались статистически достоверными при р < 0,05.
Результаты и обсуждение. При длительном введении гепатотоксина на фоне жесткой модели гепатита у экспериментальных животных к 30-м суткам опыта отмечалось снижение массы тела на 19±2,3 г, ухудшился аппетит, животные стали менее подвижными. При лабораторных исследованиях обнаруживалось достоверное повышение активности маркеров цитолиза (АЛТ, ACT), хо-лестаза (щелочной фосфатазы, В-липопротеидов, холестерина) и диспротеинемии (тимоловая проба) по сравнению с интактной группой животных, сохраняющееся на протяжении всего периода наблюдения. Формирование хронического токсического поражения печени сопровождалось выраженной активацией процессов перекисного окисления липидов, что находило отражение в увеличении скорости накопления продуктов свободнорадикального окисления липидов: повышении содержания диеновых конъюгатов и малонового диальдегида, снижении активности СОД и каталазы (табл. 2).
В группе сравнения через 14 суток введения эталонного гепатопротектора карсила (44-й день опыта) у животных с моделью хронического гепатита наблюдалось достоверное снижение выраженности синдрома цитолиза по сравнению с контролем (табл. 1). В этот период животным еще вводился тетрахлорметан и формировалась модель хронического повреждения печени, однако при введении БАД «Байкальский-7» у крыс отмечалась тенденция к снижению биохимических показателей, характеризующих основные патогенетические синдромы, хотя достоверных отличий от контроля в данный срок выявить не удалось.
Таблица 1
Динамика биохимических показателей сыворотки крови при хроническом токсическом гепатите белых крыс
Показатели Группы ЖИВОТНЫХ
I II III IV
Интактная группа Контрольная (CCl4) Группа сравнения (CCl4+ карсил) Опытная группа - (CCl4 + БАД «Байкальский-7»)
44-е сутки опыта (14-е сутки введения БАД «Байкальский-7»)
Общий белок г/л 74,5±4,1 65,9±3,2 68,2 ±4,4 71,8 ±2,2
Тимоловая проба, ед 1,36±0,19 5,16±0,17 4,87±0,38 4,58±0,24
АЛТ, мкМ/мл'ч 0,68±0,11 4,58±0,29 3,45±0,12 * 3,96±0,35
ACT, мкМ/мл'ч 0,41±0,05 3,94±0,27 3,78±0,19 3,56±0,22
Холестерин, ммоль/л 1,33±0,05 2,21 ±0,14 1,94 ±0,12 1,78 ±0,15
fi-липопротеиды, ед. оп. пл 30 ±2,5 49,3 ±5,1 44,6 ±3,4 46,4 ±3,6
Щелочная фосфатаза, ед. 144±10 196±15 177±16 172±12
58-е сутки опыта (28-е сутки введения БАД «Байкальский-7»)
Общий белок г/л, 74,5±4,1 63,6 ±2,9 67,2 ±3,4 71,7 ±2,3*
Тимоловая проба, ед 1,36±0,19 5,46 ±0,29 4,35 ±0,21 4,05 ±0,18*
АЛТ, мкМ / мл ч 0,68±0,11 4,89±0,43 3,58 ±0,16* 3,77 ±0,14*
ACT, мкМ / мл ч 0,41±0,05 3,21±0,19 2,75 ±0,16 2,51 ±0,12*
Холестерин ммоль/л 1,33±0,05 2,49 ±0,15 1,97 ±0,15 1,83 ±0,11*
fi-липопротеиды, ед оп. пл 30 ±2,5 54,8 ±4,9 43,1±2,6* 44,3±4,7*
Щелочная фосфатаза, ед, 144±10 223±15 185±16 177±12*
72-е сутки опыта
Общий белок, г/л 74,5±4,1 70,6 ±3,4 73,4 ±4,1 75,2 ±4,1
Тимоловая проба, ед 1,36±0,19 3,68 ±0,21 3,31 ±0,15 2,80 ±0,15*
АЛТ, мкМ/мл'ч 0,68±0,11 2,56 ±0,27 1,61 ±0,13* 1,75 ±0,21*
ACT, мкМ/мл'ч 0,41±0,05 1,86 ±0,17 1,42 ±0,21 1,02 ±0,12*
Холестерин, ммоль/л 1,33±0,05 1,89 ±0,13 1,51 ±0,11 * 1,31 ±0,10*
Р-липопротеиды, ед оп. пл 30 ±2,5 46,4 ±3,5 39,8 ±3,2 36,8 ±3,2*
Щелочная фосфатаза, ед 144±10 187±16 153±14 146±13*
* - достоверные отличия от контроля, р < 0,05.
При этом в группе животных, получавших БАД «Байкальский-7» уменьшалась интенсивность процессов ПОЛ: содержание МДА снижалось на 27%, ДК на 21% по сравнению с контролем. Введение карсила вызывало у крыс уменьшение накопления продуктов ПОЛ на 14% и 19%.
О росте уровня антиоксидантной защиты при введении БАД «Байкальский-7» свидетельствовало достоверное повышение активности СОД и каталазы, содержания GSH. При введении карсила рост уровня антиоксидантной защиты был выражен в меньшей мере (табл. 2).
Таблица 2
Динамика показателей перекисного окисления липидов и активности ферментов антиоксидантной защиты в сыворотке крови белых крыс при длительном введении СС14
Показатели Группы животных
II III IV
Интактная группа Контрольная (СС14) Группа сравнения (СС14+ карсил) Опытная группа (СС14 + БАД «Байкальский-7»)
44-е сутки опыта (14-е сутки введения БАД «Байкальский-7»)
МДА, мкм/л-мин 2.13 ±0,2 8,01+0,62 6,84 ± 0,27 5,22 ±0,18*
ДК, уе. 259,4 ±41,2 626,5 ± 48,3 506,2 ±40,6* 463,35 ± 37,2*
Каталаза, мкат/л 4,31 ±0,3 2,72 ±0,11 5,27 ±5,14* 6,44 ± 0,28*
СОД, мкм/л 17,92 ±1,3 10,20 ±0,8 13,3 ±1,9 15, 5 ± 1,1*
вЯН, мМ/л 9,70 ± 0,76 4,16 ±0,27 11,09 ±0,87 14,16 ±0,82
58-е сутки опыта (58-е сутки введения БАД «Байкальский-7»)
МДА, мкм/л мин 2,44 ±0,17 5,96 ± 0,34 4,72 ±0,87 4,46 ±0,52*
ДК, уе. 172,18 ±11,4 425,78 ±8,1 355,41 ± 17,8 289,15 ±9,2*
Каталаза, мкат/л 3,93 ± 0,21 1,98±0,13 4,21 ± 3,7 4,16 ±3,9
СОД, мкм/л 12,90 ±0,8 9,35 ± 0,78 14,44 ± 1,1* 16,04 ±0,71*
вян, мМ/л 8,36 ± 0,67 6,56 ± 0,48 10,28 ±0,87 12,38 ±0,94
Патоморфологические исследования позволили отметить, что введение БАД «Байкальский-7» крысам с хроническим СС14-гепатитом в течение 2 недель (44-е сутки опыта) приводило к значительному уменьшению явлений набухания клеток. Снижалась выраженность полиморфноклеточной инфильтрации в паренхиме и по ходу сосудов, уменьшались явления отека в портальных трактах. Слабая жировая инфильтрация выявлялась только при гистохимическом изучении печени в виде очень мелких капель. Содержание гликогена в четырех случаях из пяти было очень близко к норме.
На 58-е сутки эксперимента в группе животных, получавших БАД «Байкальский-7», при хроническом токсическом гепатите отмечалось снижение активности АЛТ на 25%, АСТ - на 20,6%. Длительное введение фитосбора (в течение 28-и суток) сопровождалось уменьшением активности щелочной фосфатазы на 22%, а также значительным снижением содержания холестерина и Р-липопротеидов. В данной группе животных достоверно уменьшалась диспротеинемия и возрастала концентрация общего белка (табл. 1). При этом наблюдалось повышение активности катала-зы в 2,1-2,4 раза, СОД - в 1,2-1,5 раза, GSH - в
1,6-1,9 раза. Также отмечено снижение концентрации продуктов ПОЛ: МДА у получавших БАД «Байкальский-7» на 27%, ДК - на 21% по сравнению с показателями контрольной группы животных. В группе сравнения при использовании кар-сила в этот период отмечался менее выраженный фармакотерапевтический эффект, уменьшение накопления МДА на 14%, незначительное повышение уровня антиоксидантной защиты.
На 28-е сутки применения БАД
«Байкальский-7» (58-е сутки опыта) наблюдался более демонстративный фармакотерапевтический эффект. В этот период отмечено стойкое снижение скорости накопления продуктов пе-роксидации липидов в сыворотке крови животных с хроническим гепатитом: содержание МДА снижается на 46%, диеновых конъюгатов - на 30%. Наблюдалась не только положительная динамика показателей, характеризующих цитолиз и холестаз, но и увеличение содержания общего белка, достоверное снижение показателя тимоловой пробы. Скорость секреции желчи и содержание желчных кислот в ней достигали исходного уровня. На этом фоне содержание холестерина в желчи превышало контроль на 24%. При гистологическом изучении в группе животных, полу-
чавших БАД «Байкальский-7», в подавляющем большинстве случаев (4 из 6) наблюдалось отсутствие соединительнотканных волоконец и полиморфноклеточной инфильтрации в отличие от показателей контрольных животных. В структуре печени увеличивается количество гепатоцитов с крупными темноокрашенными ядрами, при этом явления жировой дистрофии отсутствуют.
В последующие сроки наблюдения (72-е сутки) на фоне прекращения введения СС14 в опытной группе животных, получавших БАД «Байкальский-7», сохранялись достоверные отличия показателей АЛТ и АСТ по сравнению с контрольной группой, что указывало на мембраностабилизирующий эффект фитосбора, отчетливо снижалась выраженность синдрома холе-стаза (табл. 1). В группе животных, получавших БАД «Байкальский-7», на 72-е сутки только в одном случае из пяти отмечена клеточномезенхимальная реакция в органе. В этот срок в группе контрольных животных сохранялось полнокровие и расширение капилляров, клеточная инфильтрация и явления фибриллогенеза. Содержание гликогена, активность СДГ и ЛДГ были повышены, присутствовала жировая инфильтрация в виде мелких капель по периферии долек. У всех животных, получавших БАД «Байкальский-7», содержание гликогена не отличалось от такового в печени интактных животных, отсутствовала жировая инфильтрация, активность окислительновосстановительных ферментов достигала уровня интактной группы крыс.
Таким образом, в экспериментальных условиях на модели хронического токсического гепатита было установлено, что применение БАД «Байкальский-7» оказывает многогранное положительное воздействие на патологический процесс. Фармакологическая поддержка комплексным фитопрепаратом при токсическом гепатите привела к уменьшению выраженности ПОЛ, способствовала снижению основных патогенетических синдромов повреждения печени - цитолиза, холестаза, диспротеинемии. Гепатозащитный эффект развивался на фоне коррекции интенсивности свободнорадикальных процессов, уменьшения содержания малонового диальдегида и диеновых конъюгатов, повышения концентрации восстановленного глутатиона и индукции активности каталазы и супероксиддисмутазы в сыворотке крови. Морфологические исследования подтверждают данные о положительном влиянии БАД «Байкальский-7» на функциональную ак-
тивность гепатоцитов, восстановление структуры органа, уменьшение клеточной инфильтрации, снижение развития соединительной ткани.
Литература
1. Вайс Р.Ф., Финтельман Ф. Фитотерапия: руководство / Пер. с нем. - М.: Медицина. - 2004. - 552 с.
2. Грау Ю., Юнг Р., Мюнкер Б. Дикорастущие лекарственные растения: пер. с нем. - М., 2003. - 287 с.
3. Карпеев А.А. и соавт. Фитотерапия: методические рекомендации / Утв. М3 РФ. - 2000. - 18 с.
4. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г.. Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы // Лабораторное дело. - 1988. - С.16-18.
5. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарби-туровой кислоты // Современные методы в биохимии. - М., 1977. - С. 66-68.
6. Турищев С.Н. Фитотерапия: учеб. пособие для студ. - М., 2003. - 304 с.
7. Чевари С., Чаба И., Секей Й. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод ее определения в биологических материалах // Лабораторное дело. - 1985. - №11. - С.678-681.
Убеева Ираида Поликарповна - доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой инфекционных болезней Бурятского государственного университета. г. Улан-Удэ, ул. Октябрьская, 36а, тел. 8(3012) 448255. E-mail:[email protected].
Балданов Батор Владимирович - зав. отделением МУЗ «Городская инфекционная больница». г. Улан-Удэ, ул. Октябрьская, 36 а, тел.: 8 (3012) 448255.
Лоншакова Клара Сергеевна - профессор кафедры анатомии и физиологии Бурятского государственного университета.
Николаев Сергей Матвеевич - доктор медицинских наук, профессор кафедры клинической фармакологии Бурятского государственного университета.
Ботоева Елена Аполлоновна - кандидат медицинских наук, доцент кафедры акушерства и гинекологии Бурятского государственного университета.
Ubeeva Iraida Policarpovna, doctor of medical sciences, professor, the head of department of infectious diseases, Buryat State University. Ulan-Ude, October str., 36a, tel.: 8(3012) 448255.
Baldanov Bator Vladimirovich, Ulan-Ude, head of department, MUZ Municipal Infectious Hospital. Ulan-Ude, October str., 36a, tel.: 8(3012) 448255.
Lonshakova Clara Sergeevna, professor, department of anatomy and physiology, Buryat State University.
Nikolaev Sergei Matveevich, doctor of medical sciences, professor, department of clinical pharmacology, Buryat State University.
Botoeva Elena Apollonovna, candidate of medical sciences, associate professor, department of obstetrics and gynaecology, Buryat State University.
