CC BY
49
УДК 615.32.-092:616.61
А.О. Занданов Т.А. Ажунова 2, С.М. Николаев 2, С.В. Лемза 2, О.Д. Цыренжапова 2
ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ДИГДА-ШИ-ТАН» ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ГЕПАТИТЕ
1 Бурятский государственный университет (Улан-Удэ) 2 Институт общей и экспериментальной биологии СО РАН (Улан-Удэ)
Установлено гепатозащитное действие растительного средства при экспериментальном гепатите. Растительное средство дигда-ши-тан. снижает, содержание ТБК-активных продуктов в тканях и крови, повышает активность дезинтоксикационной функции печени, стимулирует, регенераторные процессы, в печени.
Ключевые слова: дигда-ши-тан, экспериментальный гепатит, перекисное окисление липидов
PHARMACOTHERAPEUTiC EFFECTiVENESS OF COMPLEX HERBAL REMEDY “DiGDA-SHi-TAN” AT THE EXPERiMENTAL HEPATiTiS
A.O. Zandanov 1, T.A. Azhunova 2, S.M. Nikolaev 2, S.V. Lemza 2, O.D. Tsyrenzhapova 2
1 Buryat State University, Ulan-Ude
2 Institute of General and Experimental Biology SB RAS, Ulan-Ude
Hepatoprotective activity of herbal remedy at the experimental hepatitis was established. The herbal remedy digda-shi-tan decreases the content of TBA-active products in blood and tissues, increases activity of disintoxication function of liver and stimulates reparative processes in liver.
Key words: digda-shi-tan, experimental hepatitis, lipid peroxidation
В развитии заболеваний печени имеют значение различные факторы, в том числе вирусы, токсические вещества, гормональные и метаболические нарушения, неправильное питание и др. [12]. В настоящее время только вирусным гепатитом С поражено не менее 1 % населения мира, примерно у 75 % пациентов развивается хронический гепатит [13].
В этой связи профилактика и лечение заболеваний печени являются одним из актуальных направлений современной медицины. В комплексной терапии поражений печени важную роль играют ге-патопротекторы, среди которых группа лекарственных средств растительного происхождения является самой многочисленной. Популярность растительных гепатопротекторов обусловлена их широким спектром действия, обладающими такими важными преимуществами, как высокая эффективность, малая токсичность, доступность, взаимозаменяемость и возможность длительного применения без побочных проявлений. При применении фитопрепаратов действует целый комплекс биологически активных веществ, в котором биологически активные вещества находятся в оптимальных сочетаниях, что обеспечивает благотворное влияние на все системы и функции организма [14]. Преимущественная фарма-котерапевтическая и профилактическая эффективность растительных средств обусловлена не только их воздействием на патологический процесс, но и их регулирующим влиянием на соответствующие функциональные системы с повышением резистентности организма в целом [7].
Целью исследования явилось определение фармакотерапевтической эффективности ком-
плексного растительного средства при повреждениях печени и выявление возможных механизмов его действия.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В трактате тибетской медицины отдельная глава посвящена описанию признаков и лечения болезней печени. В зависимости от наличия признаков назначается определенная диета и многокомпонентные препараты из растений, среди которых чаще всего используются софора желтоватая, эмблика лекарственная (ее заменитель в Сибири — яблоня ягодная), сверция, шлемник байкальский, зубчатка поздняя, шафран посевной, разные виды горечавок, молочаев и др. [11].
На основании данных о применении препаратов лекарственных растений в научной и традиционной медицине была выбрана композиция, представляющая интерес для изучения в качестве гепатопротек-торного средства и включающая: надземную часть горечавника бородатого (Gentianopsis barbata (Froel) Ma.), траву зубчатки обыкновенной (Odontites vulgaris Moench.), плоды яблони ягодной (Malus baccata (L.) Borkh.) и корни софоры желтоватой (Sophora flavescens Soland.), названной дигда-ши-тан, взятых в соотношении 4 : 3 : 2 : 1 масс. частей. В состав растительного средства дигда-ши-тан входят ксантоны, алкалоид гецианин, гликозид гентиопикрин, дубильные вещества, флавоноиды, кумарины, иридоиды, сапонины, каротиноиды, витамин С, фенолкарбо-новые кислоты, микроэлементы [2],
Эксперименты выполнены на 50 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160—180 г.
Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (ИОЭБ СО РАН) на обычном для указанного вида животных рационе при свободном доступе к воде и пище. При проведении экспериментов руководствовались требованиями Всемирного общества защиты животных (WSPA) и Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей (Страстбург, 1986). Тетрациклиновый гепатит вызывали у крыс путем внутрижелудочного введения тетрациклина гидрохлорида в виде суспензии с Т“№ееп-80 (1 : 10) в дозе 1 г/кг массы 1 раз в сутки ежедневно в течение 7 дней [8].
Введение животным комплексного растительного средства осуществляли в соответствии с условиями эксперимента интрагастрально в экспериментально-терапевтической дозе в форме отвара, приготовленного по требованиям ГФ Х1 издания [4], в объеме 10 мл/кг 1 раз в сутки. В качестве контроля служили крысы, которым вводили воду, очищенную в аналогичных условиях, в соответствующих объемах. Исследования проводили через 7 суток от начала эксперимента.
Для оценки фармакотерапевтической эффективности лекарственного растительного средства были использованы наиболее информативные и широко апробированные методы [8]. Так, антиок-сидантные свойства указанных средств оценивали по их влиянию на интенсивность образования продуктов свободнорадикального окисления биомакромолекул (СРО) и эндогенную антиоксидантную систему организма (АОС) Концентрацию ТБК-активных продуктов определяли спектрофо-
тометрически в сыворотке крови [10] и гомогенате печени, определяли активность каталазы [5]. Продолжительность гексеналового сна оценивали при однократном внутрибрюшинном введении крысам гексенала в дозе 70 мг/кг [3]. Экскреторно-поглотительную функцию печени оценивали по скорости выведения бромсульфалеина с желчью [9].
Морфофункциональную состоятельность печени животных определяли с использованием ряда гистологических и гистоэнзимологических методов [6]. При патоморфологических исследованиях срезы печени фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и фиксаторе Буэна. Депа-рафинированные срезы ткани печени окрашивали гематоксилин-эозином.
Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны с применением пакета прикладных программ «Excel 2003». Различия значимыми принимались с помощью критерия t Стъюдента при вероятности 95 % (P < 0,05).
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
При повреждении печени крыс тетрациклином курсовое введение растительного средства дигда-ши-тан в экспериментально-терапевтической дозе указанное средство подавляло образование ТБК-активных продуктов в сыворотке крови и в гомогенате печени на 46 и 44 % соответственно и повышало активность каталазы в эритроцитах на 21 % по сравнению с контрольными показателями (табл. 1); отмечали стимулирующее влияние указанного средства на дезинтоксикационную функцию печени: при повреждении печени животных этанолом и тетрациклином продолжительность гексеналового сна у крыс, получавших отвар ука-
Таблица 1
Влияние комплексного средства дигда-ши-тан на состояние антиоксидантной системы у крыс
при тетрациклиновом гепатите
Показатели Группы животных
Интактная Контрольная (тетрациклин) Опытная (тетрациклин + дигда-ши-тан)
МДА в сыворотке крови, мкМ/мл мин 2,48 ± 0,11 4,68 ± 0,14 2,56 ± 0,25*
МДА в гомогенате печени, нМ/г ткани 1,30 ± 0,10 3,20 ± 0,16 1,80 ± 0,10*
Активность каталазы в сыворотке крови, мкат/л 3,86 ± 0,12 2,47 ± 0,18 2,98 ± 0,24
Примечание: * - (здесь и далее) различия при сравнении данных опытной и контрольной групп животных значимы ф < 0,05).
Таблица 2
Влияние растительного средства дигда-ши-тан на продолжительность гексеналового сна у крыс
при повреждении печени тетрациклином
Группы животных Продолжительность гексеналового сна, мин
7-е сутки 14-е сутки
Интактная 14,0 ± 0,4 16,20 ± 1,2
Контрольная (этанол) 23,3 ± 3,5 21,3 ± 2,0
Опытная 1 (этанол + дигда-ши-тан) 17,5 ± 0,3* 15,3 ± 0,4*
Контрольная (тетрациклин) 25,2 ± 1,5 23,0 ± 2,1
Опытная 2 (тетрациклин + дигда-ши-тан) 16,6 ± 1,3* 14.2 ± 1,0*
Таблица 3
Влияние комплексного растительного средства дигда-ши-тан на коэффициент элиминации БСФ у крыс
при тетрациклиновом гепатите
Группы животных Время максимальной элиминации БСФ, мин Максимальный коэффициент ретенции БСФ (пик) Коэффициент ретенции БСФ за 60 мин Коэффициент ретенции БСФ за 180 мин
Интактная 70,0 ± 1,0 269 229 20
Контрольная 90,1 ± 1,2 183 151 54
Опытная (тетрациклин + дигда-ши-тан) 40,0 ± 1,0* 148 116 20
занного фитосбора, укорачивалась на 25 и 35 % (7-е сутки) по сравнению с контролем (табл. 2).
В таблице 3 показано, что отвар дигда-ши-тан оказывает стимулирующее влияние на экскреторно-поглотительную функцию печени: коэффициент ретенции бромсульфалеина (БСФ) снижается на 63 % (180 мин) по сравнению с контролем.
Патоморфологическими исследованиями подтверждена эффективность отвара испытуемого средства при тетрациклиновом повреждении печени у крыс. В частности, при введении указанного растительного средства наблюдали увеличение клеток Купфера, значительное количество фигур митозов в гепатоцитах и двуядерных клеток. При гистохимическом исследовании выявлялось повышение активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) по сравнению с контролем, а гранулы диформазана имели овальную форму. Ближе к центру долек находили скопление темно-окрашенных гепатоцитов с гиперхромными ядрами, балочное строение долек печени представлялось более упорядоченным, что свидетельствовало о защите структуры и стимуляции регенераторных процессов в печени под влиянием данного растительного средства.
Таким образом, курсовое введение крысам растительного средства дигда-ши-тан при тетра-циклиновом повреждении печени сопровождается ингибированием процессов свободнорадикального окисления (СРО), снижением активности мембраносвязанных ферментов, нормализацией и повышением активности дезинтоксикационных возможностей поврежденного органа. В таблице
3 показано, что отвар дигда-ши-тан оказывает стимулирующее влияние на экскреторно-поглотительную функцию печени: коэффициент ретенции бромсульфалеина (БСФ) снижается на 63 % (180 мин) по сравнению с контролем, ускоряются процессы репаративной регенерации печени.
По результатам наших исследований при повреждения печени тетрациклином установлено закономерное участие активации свободнорадикального окисления биомакромолекул в патогенезе развития повреждения печени. При поражении печени резко снижается функциональная состоятельность ферментной антиоксидантной защитной системы (каталаза). Ведущим молекулярно-клеточным механизмом в действии указанного растительного средства является его способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления биомакромолекул с одновременным повышением
активности ферментов антиоксидантной защиты организма при повреждении печени.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В токсическом действии высоких доз тетрациклина большое значение имеют механизмы активации свободнорадикального окисления биомакромолекул. Установленный молекулярно-биологический механизм активации свободнорадикальных процессов с дестабилизацией биомембран можно рассматривать с позиций общей патологии как один из универсальных при повреждениях печени.
Влияние многокомпонентного растительного средства при повреждении печени обусловлено наличием в них комплекса биологически активных веществ и, прежде всего, соединений фенольной природы. Благодаря их доминирующему содержанию обеспечивается ингибирующее действие на свободнорадикальное окисление биомакромолекул, стабилизация биологических мембран с последующим повышением функциональной активности органа. При его курсовом введении в экспериментально-терапевтических дозах животным с повреждениями печени предотвращается дисфункция, грубая деструкция и ускоряется инволюция нарушений в печени. Полученные результаты исследований аргументируют целесообразность широкого применения растительного средства в комплексном лечении и профилактике заболеваний печени.
ЛИТЕРАТУРА
1. Апросина З.Г. Хронические вирусные заболевания печени // Тер. архив. — 1995. — № 5. — С. 77-80.
2. Биологически активные вещества растительного происхождения. — М., 2001 -2002. — Т. 1. — 350 с. — Т. 2. — 764 с. — Т. 3. — 216 с.
3. Гацура В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ. — М., 1974. — 144 с.
4. Государственная фармакопея СССР Х1 изд. // Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. — М., 1990. — Вып. 2. — С. 238.
5. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова,
B.Е. Токарев // Лаб. дело. — 1988. — № 6. —
C. 16—19.
6. Микроскопическая техника: Руководство для врачей и лаборантов. — М., 1996. — 544 с.
7. Николаев С.М. Растительные лекарственные препараты при повреждениях гепатобилиарной системы. — Новосибирск, 1992. — 155 с.
8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2005. — 832 с.
9. Соловьев В.И., Егоренко Г.Г., Фирсов А.А. Использование математической модели фармакокинетики при изучении функции печени у белых крыс методом бромсульфалеиновой пробы // Лаб. дело. — 1976. — № 9. — С. 538 — 542.
10. Темирбулатов Р.А., Селезнев Е.И. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови
и его диагностическое значение // Лаб. дело. — 1981. - № 4. - С. 209-211.
11. Чжуд-ши. Т.3. Тантра наставлений; пер. с тибетского Д.Б. Дашиева. — Улан-Удэ, 1991. — 286 с.
12. Ушкалова Е.А. Место эссенциальных фосфолипидов в современной медицине // Фармате-ка. - 2003. - № 10. - С. 40-46.
13. Keeffe E.B. Treatment of chronic hepatitis C with pegylated interferon // Medscape Gastroenterol. - 2001. - Vol. 193, N 2. - P. 265-275.
14. Pradhan S.C., Girish C. Hepatoprotective herbal drug, silimarin from experimental pharmacology to clinical medicine // Ind. J. Med. Res. - 2006. -Vol. 124. - P. 491 -504.
Сведения об авторах
Занданов Александр Октябриевич - кандидат медицинских наук, доцент кафедры терапии № 1 медицинского факультета Бурятского государственного университета
Ажунова Татьяна Александровна - доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047, г Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6; тел.: 8 (30l2) 43-34-63; e-mail: t.azhunova&mail.ru)
Николаев Сергей Матвеевич - доктор медицинских наук, профессор, заведующий отделом биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН
Цыренжапова Октябрина Дашиевна - доктор медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН
Лемза Сергей Васильевич - кандидат биологических наук, старший научный сотрудник лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН
