CC BY
44
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ
УДК 616.36-005.8:616-092.9
ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КОРРЕКЦИЯ ИММУНОМЕТАБОЛИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ ГЕПТРАЛОМ И МЕКСИКОРОМ У ЖИВОТНЫХ НА ФОНЕ ИШЕМИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ
У экспериментальных животных в условиях ишемического поражения печени установлены выраженные изменения иммунной реактивности, функциональной активности полиморфноя-дерных лейкоцитов и гепатоцитов. Определена эффективность использования гептрала и мексикора как отдельно, так и в сочетании в коррекции нарушений иммунной реактивности, функциональной активности гепатоцитов и нейтрофилов.
Ключевые слова: ишемическое поражение печени, гептрал, мексикор, иммунометаболический статус.
С.В. ТЕРЕХОВА Н.А. БЫСТРОВА Е.С. ЛИТВИНОВА Е.В. ГАВРИЛЮК
Курский государственный медицинский университет
e-mail: [email protected]
Введение. Гипоксические состояния осложняют течение многих заболеваний различного генеза, являясь важнейшей составляющей самых разнообразных нозологических форм патологии: все виды дыхательной, сердечно-сосудистой недостаточности, кровопотеря, ишемия миокарда, нарушения мозгового или периферического кровообращении, термические и механические травмы. В хирургической практике нередко приходится на время прекращать кровоснабжение оперируемого органа, создавая искусственную ишемию. Это определяет исключительную важность и социальную значимость проблемы защиты организма от кислородной недостаточности и энергодефицита [2, 4].
По современным представлениям, главной мишенью для гипоксии является энергетический обмен. Энергодефицит и активация на его фоне перекисного окисления липидов приводят к комплексной модификации всех функций биологических мембран, в том числе мембран иммуно-цитов и эритроцитов. При этом при гипоксии замыкается порочный круг: недостаток кислорода нарушает энергетический обмен и стимулирует свободнорадикальное окисление, а активация сво-боднорадикальных процессов, повреждая мембраны митохондрий и лизосом, усугубляет энергодефицит [4, 7].
Иммунные нарушения, возникающие при гипоксии различного генеза, и механизмы их развития остаются все еще малоизученными [7, 8].
Раскрытию механизмов нарушений иммунного и метаболического гомеостаза при ишеми-ческом поражении печени, разработке способов фармакологической коррекции данных нарушений в настоящее время уделено недостаточное внимание.
Цель исследования - изучение иммунотропной и метаболической активности гептрала и мексикора у интактных животных и в условиях ишемического поражения печени.
Материалы и методы. Эксперименты проводили на 144 здоровых половозрелых крысах линии Вистар, массой 180-200 г. В опытах использовали животных, прошедших карантинный режим вивария Курского государственного медицинского университета и не имевших внешних признаков каких-либо заболеваний. Все исследования проводили в одно и то же время суток, с 8 до 12 ч, с соблюдением принципов, изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, ис-
пользуемых для экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986) и согласно правилам лабораторной практики РФ (приказ МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 г.).
Острое ишемическое поражение печени вызывали оперативным методом под внутрибрю-шинным гексеналовым наркозом (30 мг/кг веса). Операция выполнялась из верхнесрединного лапаротомного доступа. Ишемию печени вызывали пережатием гепатодуоденальной связки после ее инфильтрации 0,5 мл 0,5% раствора новокаина с помощью турникета в течение 20 минут [1].
Способ введения препаратов соответствовал рекомендациям, приведенным в пособии по фармакотерапии М.Д. Машковского «Лекарственные средства». Перерасчет доз с человека (средний вес 70 кг) на животных - белых крыс производился в сторону увеличения в 5,9 раз. Первое введение препаратов выполнялось за 1 час до манипуляции. Мексикор вводился внутрибрюшинно по 5 мг/кг через 24 часа №5, гептрал внутримышечно по 5,5 мг/кг через 24 часа №5.
Для оценки неспецифической резистентности устанавливали фагоцитарно-метаболическую активность полиморфноядерных лейкоцитов по фагоцитарному числу (ФЧ) и фагоцитарному индексу (ФИ), показателям спонтанного и индуцированного зимозаном НСТ-теста опсонизированного зимозаном (о/з) и неопсонизированного (н/з) [и, 12]. Оценка иммунологической реактивности основывалась на показателях гуморального иммунного ответа (ГИО) (количество антителообразующих клеток - АОК) и гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (разнице масс регионарного и контрлатерального лимфатических узлов - РМ и по разнице количества в них кариоцитов - РК) [6].
В сыворотке крови экспериментальных животных определяли концентрацию общего билирубина, общего белка, фибриногена и активность аспартат- и аланинаминотрансфераз (АЛТ и ACT), щелочной фосфатазы (ЩФ), у~гл}тамилтРанспептиДазь1 (ГГТ), ставили тимоловую пробу (ТП) и определяли протромбиновый индекс (ПТИ). Величины всех перечисленных показателей определяли унифицированными методами с использованием стандартных наборов реактивов [9]. Выраженность перекисного окисления липидов оценивали по содержанию ацилгидроперекисей (АГП) и малонового диальдегида (МДА), кроме этого, в сыворотке крови определяли активность каталазы [3, ю].
Статистическую обработку результатов исследования проводили, используя параметрические и непараметрические методы [5].
Результаты и их обсуждение. В условиях введения интактным животным гептрала достоверных различий между изучаемыми показателями иммунной реактивности и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови получено не было (табл. l).
Таблица 1
Иммунный и метаболический статусы при введении гептрала и мексикора интактным животным (М±т)
Показатели Единицы измерения 1 2 3 4
Интакпгные животные Гептрал Мексикор Гептрал + Мексикор
АОК 1С)3/сел. 19,7±1,4 18,9±З,1 21,7±2,2 23,7±3,9
РМ мг 3,12±0,07 2,41±0,05 3,0±0,12 2,89±0,22
РК 106 1,8з±о,о8 1,б7±0,12 1,59±0,21 2,01±0,27
ФИ % 71,7±3,6 б7,о±4,7 б9,5±4,2 70,4±3,3
ФЧ абс. 2,54±о,14 2,31±0,0б 2,4±0,11 2,54±0,12
НСТ-сп. mOD 0,79±0,05 0,91±0,12*1 0,б9±0,05*з 0,90±0,04*1з
НСТ-ст. н/з 111OD О,89±О,С>7 1,2б±0,07*1 0,84±0,04*З 0,91±0,04*з
НСТ-ст. о/з mOD 0,93±0,04 1,5±о,13*1 0,92±0,03*3 1,б4±о,и*1'3
ACT Е/л 41,4±4,2 44,7±7Д 39>4±4>1 43,7±8,О
АЛТ Е/л 3б,3±3,4 37>4±7>° 58,I±4,2 41,2±7,1
ГГТ Е/л ю,7±1,з 9,8±2,2 9,7±2Д 11,2±1,8
ЩФ Е/л 295,О±18,4 248,6±23,4 400,3±37,8*I,2 385,5±21,2*1,2
Билирубин мкмоль/мл 13Д±2,1 15,4±4,4 12,3±2,0 п,о±1,9
ПТИ % 51,3±5,3 52,8±4,4 4б,4±4,7 50,2±4,7
ТП ед. S-H 2,9б±одз 2,6±0,24 2,5б±0,21 2,48±0,22
АГП усл. ед. 1,71±о,3 1,44±о,27 1,б2±0,12 1,77±о,14
МДА мкмоль/л 3,б4±о,9 3,39±о,3 3,61±0,21 3,07±0,71
Каталаза кат/л io,6±i,7 14,3±3,7 11,6±2,2 12,8±З,1
Примечание. Здесь и в табл. 2 звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (р < 0,05); цифры рядом со звездочкой - по отношению к показателям какой группы даны эти различия.
При этом гептрал приводит у иитактиых животных к повышению кислородзависимой активности нейтрофилов периферической крови, о чем свидетельствует повышение значения НСТ-теста спонтанного и стимулированного опсонизированного и неопсонизированного (табл. 1).
Введение интактным животным мексикора не оказывает достоверного влияние на изучаемые показатели иммунной реактивности и функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови (табл. 1).
Применение сочетания гептрала с мексикором позволило по сравнению с группой животных, получавших только гептрал, повысить значения НСТ-теста стимулированного опсонизированного (табл. 1).
После введения гептрала интактным животным у последних не получено было достоверных различий в функциональной активности гепатоцитов и уровне продуктов ПОЛ в плазме крови (табл. 1).
Тогда как применение мексикора как отдельно, так и в сочетании с культуральной жидкость аллогенных гепатогептралом у животных повышает активность в плазме крови щелочной фосфатазы (табл. 1).
В условиях ложной операции (без моделирования ИПП) достоверных различий между изучаемыми показателями иммуно-метаболического статуса получено не было (табл. 2).
В условиях моделирования ИПП у экспериментальных животных супрессируется иммунная реактивность: гуморальный иммунный ответ на эритроциты барана (снижение количества иммунных АО К) и гиперчувствительность замедленного типа (снижение РМ и РК) (табл. 2).
Кроме того, у данной группы животных снижается как метаболическая, так и фагоцитарная активность полиморфноядерных лейкоцитов (табл. 2).
Применение гептрала позволило у животных в условиях ИПП нормализовать ФЧ полиморфноядерных лейкоцитов и их кислородзависимую активность, корригировать, но не до уровня контрольной группы животных, количество АОК и ФИ нейтрофилов периферической крови (табл. 2).
Использование мексикора у животных с ИПП лишь корригирует количество АОК, фагоцитарную активность полиморфноядерных лейкоцитов (табл. 2).
Таблица 2
Иммунный и метаболический статусы при введении гептрала и мексикора животным с ишемическим поражением печени (М±т)
Показатели Единицы измерения 1 2 3 4 5 б
Интакт-ные животные Ложная операция ИПП ИПП + гептрал ИПП + мек-еикор ИПП + гептрал + мекеикор
АОК юз/сел. 19,7±1,4 21,6±2,1 8,4±о,93*12 9,1±1,2*12 12,6±1,1*1"4
РМ мг 3,12±0,07 3,04±0,04 2,01±0,04*12 4,27±0,04*1-з 4,1±о,оз*и 4,31±0,03*1-з.5
РК 106 1,8з±о,о8 1,8±0,21 0,92±0,02*12 2,24±0,03*1_3 2,0±0,0*1_4 2,з6±0,04*1_з.5
ФИ % 71,7±3,6 б9,7±4,2 4б,8±з,о*12 5б,0±2,0*1"3 54,7±2,2*1"3 66,8±2,7*3-5
ФЧ абс. 2,54±о,14 2,47±о,14 1,5±0,05*!.2 2,3б±0,1б*3 2,21±0,04*1"3 2,5±0,2*3
НСТ-сп. тОП 0,79±0,05 о,77±о,оз 0,49±0,02*12 0,58±0,09*12 0,5б±0,04*12 о, 8i±o, 03*3-5
НСТ-ст. н/з тОП О,89±О,С>7 о,87±о,с>4 0,54±0,04*1.2 о,79±о,о8*з о.б^о.оз*1^ 0,9±о,04*3.5
НСТ-ст. о/з тОП 0,93±0,04 о,95±о,оз о,55±°>°5*1,2 0,9б±0,05*з 0,б7±0,04*ч 1,02±0,04*3.5
ACT Е/л 41,4±4,2 42,7±4,4 5б,8±3,7*1-2 49,8±2,1*1"3 50,1±2,1*1"3 40,2±3,3*3-5
АЛТ Е/л 3б,3±3,4 35,6±3,о 49,5±4,о*12 4б,о±4,7*1-2 47,4±2,7*1-2 35,1±2,0*3-5
ГГТ Е/л ю,7±1,з п,3±1,4 14,о±О,8*12 14,о±о,7*1.2 lS.Sii^*1^ 11,7± 1,4*з-5
ЩФ Е/л 295,О±18,4 251,3±33,7 1136,з± 95,б*12 42б,8±б5,з'1-з 500,6±71,7*!-з 437,7±30,1*!-з
Билирубин мкмоль /мл 13Д±2,1 12,6±з,4 19,6±2,з*12 18,з±1,4*12 14,9±о,9*3.4 12,6± 1,7*3.4
ПТИ % 51,3±5,3 48,6±4,8 37,8±3,3*12 42,2±2,9*1'2 43>7±1>4*1-3 52,6±з,7*3-5
ТП ед. в-Н 2,9б±одз 2,8±о,з 3,71±о,О8*12 3,8±о,11*12 2,91±0,09*3.4 2,8l±0,07*3.4
АГП усл. ед. 1,71±о,з 1,7±0,21 2,57±o,I8*12 1,б7±о,19*з 2,01±0,04*1_4 1,б2±0,07*3.5
МДА мкмоль /Л 3,б4±о,9 3,71±о,27 8,13±О,9*12 6,23±0,23*1"3 5,91±о,14*1_з 6,07±0,8Т1-з
Каталаза кат/л 10,6±1,7 12,4±з,о 14,2±1,9*1 15>2±1,7*1-2 17,2±2,1*1.2 1б,2±1,1*12
Сочетанное применение мексикора с гептралом нормализует функционально-метаболическую активность полиморфноядерных лейкоцитов, повышает, но не до уровня нормы количество АОК и гиперчувствительность замедленного типа (табл. 2).
На 5-е сутки после моделирования ИПП в плазме крови экспериментальных животных происходит повышение активности АЛТ, ACT, ЩФ и ГГТ, возрастает тимоловая проба, концентрация общего билирубина и снижается ПТИ. Эти изменения свидетельствуют о возникновении у отравленных животных синдрома холестаза, цитолиза, снижении синтетической активности гепато-цитов и возникновении иммунного воспаления (табл. 2).
Кроме этого, в данной группе животных возрастает в плазме крови уровень продуктов ПОЛ (МДА и АГП) при повышении активности каталазы (табл. 2).
Использование гептрала у животных с ИПП позволило корригировать активность в плазме крови ACT, щелочной фосфатазы, значения ПТИ и уровень МДА, не оказывая влияние на другие измененные показатели метаболического статуса (табл. 2).
Применение мексикора у животных с ИПП нормализует уровень общего билирубина, тимоловую пробу и корригирует активность ACT, щелочной фосфатазы, значения ПТИ и уровень МДА (табл. 2).
Сочетанное использование у экспериментальных животных с ИПП гептрала и мексикора позволило нормализовать функцию гепатоцитов, за исключением активности щелочной фосфатазы и уровня в плазме крови МДА (табл. 2).
Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о выраженных изменениях иммунной реактивности и функциональной активности полиморфноядерных лейкоцитов и гепатоцитов в условиях ишемического поражения печени и возможности использования гептрала и мексикора в коррекции выявленных иммунометаболических нарушений.
Следует отметить, что применение гептрала и мексикора оказывает более выраженное влияние на функцию гепатоцитов, при этом сочетанное их введение оказывает выраженный эффект на все показатели иммунометаболического статуса в условиях ишемического поражения печени.
Литература
1. Антопольская, Е.В. Коррекция ишемии печени при ее резекции в условиях обескровливания : авто-реф. дне.... канд. мед. наук // Е.В. Антопольская. - Харьков, 1988 - 21 с.
2. Дудка, ВТ. Функциональная активность гепатоцитов в условиях острого токсического поражения печени и воздействия постоянного магнитного поля / ВТ. Дудка, АВ. Пигарева, АИ. Конопля, Е.С. Романова, В.П. Гав-рилюк // Системный анализ и управление в биомедицинских системах. - 2006. - Т. 5, № 2. - С. 223-224.
3. Кушманова, О.Д., Ивченко Е.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. // О .Д. Кушманова. - М.: Медицина, 1983. - С. 98-99.
4. Лазаренко, В.А. Коррекция иммунометаболических нарушений у больных с критической ишемией нижних конечностей атеросклеротического генеза / В.А. Лазаренко, С.Б. Николаев, НА. Быстрова, А.И. Конопля // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2010. - № 2. - С. 77-83.
5. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. - М.: Высшая школа, 1980. - 243 с.
6. Мальберг, К. Метод локального гемолиза / К Мальберг., Э. Зигль // Иммунологические методы. -М.: Медицина, 1987. - С. 262-267.
7. Новиков, В.В. Растворимые формы мембранных антигенов клеток иммунной системы / В.В. Новиков, А.Ю. Барышников, А.В. Караулов // Иммунология. - 2007. - Т. 28, № 4. - С. 249-254.
8. Онищенко, НА. Клеточные технологии и современная медицина / НА. Онищенко // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2004- - № 4. - С. 2-11.
9. Подымова, С.Д. Болезни печени (руководство для врачей) // С.Д. Подымова. - М. : Медицина, 1998. - 704 с.
10. Стальная, Н.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / Н.Д. Стальная, Т.Г. Гаришвилли // Современные методы в биохимии. - М., 1977- ~~ С. 66-68.
11. Федосеева, Т.В. Руководство по иммунологическим методам в гигиенических исследованиях. // ТВ. Федосеева, Л.В. Порядин, Л.В. Ковальчук и др. - М., 1993. - С. 319.
12. Щербаков, В.И. Применение НСТ-теста для оценки чувствительности нейрофилов к стимуляторам / В.И. Щербаков // Лаб. дело. - 1989. - № 2. - С. 30-33.
PHARMACOLOGICAL CORRECTION OF IMMUNOMETABOLIC INFRINGEMENTS RY HEPTRAL AND MEXICOR AT ANIMALS AGAINST ISCHEMIC DEFEAT OF THE LIVER
J U TEREHOVA Al experimental animals in the conditions of ischemic defeat
N A RIQTRillfA "I a liver the expressed changes of immune reactance, functional
activity of neutrophils and hepatocytes are established. Efficiency E.S. LITVINOVA of heptral and mexicor use as separately and in a combination in
E.V. GAVRILIOUK correction of infringements of immune reactance, functional ac-
tivity of hepatocytes and neutrophils is defined.
Kursk State Medical University
Keywords: ischemic lesion of a liver, heptral, mexicor, ime-mail: [email protected] mune and metabolic status.
