Фармакодинамическое моделирование сарколизина in vitro и его клиническая эффективность при резистентных формах хронического лимфолейкоза Текст научной статьи по специальности «Клиническая медицина»



46 КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ

УДК 616-006.446.2-036.12:615.277.3.015 A. K. Golenkov1, E. V. Kataeva1, T. D. Lutskaya1, T. A. Mitina1, A. V. Kildushevsky1, N. V. Inutkina1, A. N. Inshakov2, N. A. Oborotova 2, A. Yu. Baryshnikov2 IN VITRO PHARMACODYNAMIC MODELING OF SARCOLYSIN AND ITS CLINICAL EFFECTIVENESS IN PATIENTS WITH RESISTANT CHRONIC LYMPHOCYTIC LEUKEMIA 1 M. F. Vladimirsky MORCI, Moscow 2 N. N. Blokhin Russian Cancer Research Center RAMS, Moscow ABSTRACT The sensitivity of tumor cells to 12 cytostatic preparations was defined in vitro MTT-assay at the 49 resistant and 14 previously untreated CLL patients: untreated patients' relations of sensitive/assessed were higher than resistant ones' (0,82 ± 0,03 and 0,5 ± 0,08; р<0,05). It was shown that more effective agent on resistant patients was sarcolysin (72,7 %). We treated 21 resistant CLL patients with sarcolysin and 58,2 % pts achieved response. 63,6 % among more sensitive pts achieved response in MTT-assay (n=11; LD50 = 2,41 ± 0,9 mgk/ml). 33,3 % among lesser sensitive pts achieved response in MTT-assay (n=6; LD50 = 8,3 ± 2,1 mgk/ml; p<0,05). Overall survival significantly differed between two groups, in the group with chemotherapy of sarcolysin median duration was 80 month, and that was higher then the control — 53 month (p=0,19). Key words: chronic lymphocytic leukemia, MTT-assay, resistance, sarcolysin. А. К. Голенков1, E. В. Катаева1, Т. Д. Луцкая1, Т. А. Митина1, А. В. Килъдюшевский1, Н. В. Инюткина1, А. Н. Иншаков2, Н. А. Оборотова2, А. Ю. Барышников2 ФАРМАКОДИНАМИЧЕСКОЕ МОДЕЛИРОВАНИЕ САРКОЛИЗИНА IN VITRO И ЕГО КЛИНИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИ РЕЗИСТЕНТНЫХ ФОРМАХ ХРОНИЧЕСКОГО ЛИМФОЛЕЙКОЗА МОНИКИ им. М. Ф. Владимирского, Москва 2ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина, Москва РЕЗЮМЕ Определяли чувствительность опухолевых лимфоцитов in vitro к 12 цитостатическим препаратам 49 резистентных и 14 первичных больных ХЛЛ методом МТТ-анализа: у ранее нелеченных больных отношения чувствительны/исследованы были достоверно выше, чем у резистентных больных (0,82 ± 0,03 и 0,5 ± 0,08; р<0,05). Было выявлено, что наиболее эффективным препаратом у резистентных больных был сарколизин — 72,7 %. 21 резистентного больного ХЛЛ лечили сарколизином, из них ответили на лечение 58,2 %. У более чувствительных в МТТ-тесте больных (n=11; LD50 = 2,41 ± 0,9 мкг/мл) — 63,6 % ответивших. У менее чувствительных (n=6; LD50 = 8,3 ± 2,1 мкг/мл;p<0,05) — 33,3 % ответивших. Анализ общей выживаемости резистентных больных ХЛЛ показал, что при ХТ сарколизином медиана составила 80 мес., что было больше контроля — 53 мес. (p=0,19). Ключевые слова: хронический лимфолейкоз, МТТ-анализ, резистентность, сарколизин.

№4/том3/2004 РОССИЙСКИЙ БИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ

ВВЕДЕНИЕ

Лечение резистентных форм хронического лимфо-лейкоза (ХЛЛ) является актуальной и трудной проблемой для клинической гематологии. Существует несколько подходов к вопросу преодоления лекарственной устойчивости в клинике: увеличение дозовых нагрузок ранее применявшихся противоопухолевых препаратов, использование полихимиотерапевтических комбинаций. Такое лечение ведет к усилению миело-токсичности и иммуносупрессии, способствует развитию инфекционных осложнений и нуждается в адекватной сопроводительной терапии, значительно ухудшая качество жизни таких больных. Другой путь — поиск новых лекарственных средств или расширение показаний для уже применявшихся препаратов.

В связи с этим особый интерес представляет изучение клинического значения чувствительности опухолевых клеток к различным химиопрепаратам (ХП) in vitro МТТ-методом с целью осуществления детерминированного подхода в лечении рефрактерных форм ХЛЛ [9; 12]. В литературе имеется немало сообщений о том, что МТТ-анализ позволяет выявить взаимосвязь между чувствительностью опухолевых клеток к ХП in vitro и клиническим ответом [1; 2; 8; 11]. Это дает возможность использовать МТТ-метод как моделирующую систему для изучения действия различных цитостатиков на клетки опухоли в культуре, как новых, так и практически не используемых препаратов в терапии ХЛЛ [3; 5; 7; 10].

Целью настоящего исследования явилось обоснование применения лекарственного препарата, ранее не применявшегося в лечении ХЛЛ, на основе изучения результатов чувствительности опухолевых клеток резистентных больных в МТТ-тесте in vitro.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В исследование включено 63 больных В-клеточ-ным ХЛЛ. В группе пациентов было 26 женщин и 37 мужчин в возрасте от 43 до 78 лет. Стадию заболевания устанавливали соответственно критериям Rai: у 3 больных была диагностирована I стадия (4,8 %), у 26 больных — II стадия (41,3 %), у 12 пациентов — III стадия (19,0 %), у 22 — IV стадия (34,9 %). При имму-нофенотипическом исследовании лимфоцитов крови выявлено превалирование В-клеточной опухолевой популяции (высокая экспрессия CD5+ (65,8±5,4 %) и CD19+ (86,3±3,9 %), среднее значение CD23+ составило 32,5±6,8 %) в сочетании с низкой экспрессией Т-клеточных маркеров (CD3+ 8,9±2,4 %). Наличие лим-фаденопатии, гепато- и спленомегалии определялись как пальпаторно, так и с помощью методов лучевой диагностики.

Из 63 исследуемых 49 проводилось предшествующее лечение лейкераном, циклофосфаном, преднизо-лоном, дексаметазоном или программной ПХТ в среднем в течение 48 мес. В результате этого сформировалась резистентность к проводимой ранее терапии. Резистентными считались больные, не отвечающие на 2 курса химиотерапии, или через 3 мес. от начала ле-

чения. Более подробно данные предшествующего лечения отражены в табл. 1.

Таблица 1

Предшествующее лечение резистентных больных хроническим лимфолейкозом (и=49)

Препараты и комбинации Количество больных Среднее количество курсов Период от начала лечения до формирования резистентности, мес.

Лейкеран 26 (53,1 %) 10,5 (3-20)

Цшслофосфан 10 (20,4 %) 6,2 (3-8)

Преднгоолон 10 (20,4 %) 3,2 (2-5)

Дексамегазон 1 (2,0 %) 4 47,8 (15-166)

СОР 34 (69,4 %) 6,5 (2-15)

CHOP 17 (34,7 %) 3,5 (2-8)

LVPP 2(4,1%) 3,5 (3^1)

Для объективизации картины чувствительности опухолевых клеток в исследование были включены также 14 первичных больных.

Определение чувствительности опухолевых лимфоцитов к цитостатическим препаратам методом МТТ-анализа

Исследование чувствительности опухолевых лимфоцитов к цитостатикам проводили первичным больным до лечения, а больным, которые ранее получали терапию, не менее, чем через 2 мес. после последнего курса.

Мононуклеарные клетки выделяли из гепаринизи-рованной крови исследуемых больных общепринятым методом на градиенте плотности Ficoll-Paque (Pharmacia, Sweden).

1-2х105 живых клеток помещали в объеме 180 мкл 10%-й эмбриональной телячьей сыворотки (RPMI-1640) в 96-луночные плоскодонные планшеты (Costar, USA). К ним добавляли 20 мкл цитостатических препаратов (преднизолон, винкристин, винбластин, до-ксорубицин, рубомицин, лейкеран, мелфалан, вепезид, сарколизин, флударабин, цитарабин, блеомицин) в 5 концентрациях.

Для расчета концентраций противоопухолевых препаратов использовали теоретическую плазменную концентрацию (ТПК), которую получили на основе терапевтической дозы препарата [4]. Использовали 10-, 5-, 1-, 0,5- и 0,1-кратную ТПК (табл. 2).

В контроль добавляли 0,15 М NaCl. Смесь инкубировали в течение 4 дней при температуре 37 °С и 5 % СО2.

На заключительном этапе в каждую лунку добавляли 20 мкл тетразолиевой соли МТТ (3-[4,5-dimethyl-thiazol-2,5-diphenyl] tetrazolium bromid) в концентрации 5 мг/мл и инкубировали в течение 5-6 ч при температуре 37 °С и 5 % СО2. В дальнейшем измеряли оптическую плотность на анализаторе иммунофер-ментных реакций «Униплан» АИФР-01 (Россия). МТТ метаболизируется жизнеспособными клетками, превращаясь в нерастворимый в воде фармазан, тем самым изменяя оптическую плотность раствора пропор-

Таблица 2

Концентрации противоопухолевых препаратов в МТТ-пробе (мкг/мл)

Препарат 10-ТПК 5-ТПК 1-ТПК 0,5-ТПК 0,1-ТПК

Преднизолон 250 31,25 3,9 0,48 0,06

Винкристин 50 12,5 3,12 0,74 0,19

Винбластин 13 4,32 1,44 0,48 0,16

Доксорубицин 8 2 0,5 0,125 0,03

Рубомицин 2 0,5 0,125 0,03 0,008

Лейкеран 31,25 6,25 1,25 0,25 0,05

Алкеран (сарколизин) 12,5 6,25 3,12 1,56 0,78

Вепезид 50 12,5 3,12 0,74 0,19

Флюдарабин 33,3 11,1 3,7 1,23 0,41

Цитарабин 10 2,5 0,63 0,16 0,04

100

90 -80

t 70-

5

а 60-

I

1 50-

г 40-

| 30-

I 20-

S ю-

0

циентов, к преднизолону — 35 %, к рубомицину — 43,6 %. В то же время выявлена высокая чувствительность опухолевых клеток клинически резистентных больных к сарколизину (71,7 %) in vitro, который ранее в лечении больных ХЛЛ не применялся (рис. 2).

1 □ доксорубицин

2 ■ рубомицин

3 |_винкристин

4 | винбластин

5 ■ лейюран

6 □ сарколизин

7 □ этопоаид

8 □ цитарабин

9 Щ предщаолон

10 □ даксаматаэон

11 □ Флюдарабин

12 □ блеомицин

3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Химиопралареты

ционально количеству выживших клеток. Опухолевые лимфоциты считали чувствительными к исследуемому препарату, если количество погибших клеток в культуре составляло не менее 50 %.

Результаты и обсуждение

Рассматривая скрининг чувствительности опухолевых клеток к 12 цитостатическим препаратам в культуре у 14 ранее нелеченных больных (рис. 1), видим, что у данной категории пациентов чувствительность выявлена на довольно высоком уровне (от 72,7 до 92,9 %).

1 2

3

4

5

6

7

8 9

10 11 12

Рис. 2. Чувствительность опухолевых клеток резистентных больных к химиопрепаратам (и=49)

При рассмотрении данных исследования чувствительности опухолевых клеток методом МТТ в совокупности по всем препаратам у ранее нелеченных и рефрактерных больных было установлено, что в группе больных, которые ранее не лечились, отношение чувствительных клеток ко всем исследованным было достоверно больше (0,82±0,03), чем в группе рефрактерных к лечению (0,5±0,08) (^><0,05). Это свидетельствует о том, что развивающаяся клиническая ре-фрактерность у больных сопровождалась снижением чувствительности опухолевых клеток к ХП в культуре по сравнению с пациентами, которые еще не лечились (табл. 3).

Таблица 3

Характеристика лекарственной чувствительности в культуре лимфоцитов у ранее нелеченных и рефрактерных больных ХЛЛ

Показатель Нелеченные больные Рефрактерные больные

Отношение чувствительны/исследованы (М±т) 0,82±0,03 0,5±0,08

Достоверность <0,05

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Химиолрепараты

Рис. 1. Чувствительность опухолевых клеток ранее нелеченных больных к химиопрепаратам (и=14)

Данные чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам в культуре МТТ у 49 клинически резистентных больных ХЛЛ оказались на более низком уровне по сравнению с данными у первичных больных, что связано, по-видимому, с длительным лечением в течение 15-166 мес. многими химиопрепаратами. Отмечено значительное снижение чувствительности опухолевых клеток к цитостатикам, которые больные получали ранее: к лейкерану чувствительны 27,3 % па-

Как видно из проведенного скрининга, в группе резистентных больных (n=49) чувствительность к сарколизину оказалась самой высокой (71,7 %) по сравнению с другими препаратами. Это послужило основанием для изучения противоопухолевого эффекта сар-колизина у больных с резистентными формами ХЛЛ. Следует учесть, что сарколизин ранее не был рекомендован для терапии ХЛЛ.

Основываясь на полученных результатах, свидетельствующих о высокой чувствительности опухолевых клеток к сарколизину в культуре МТТ, 21 рефрактерный к проводимому ранее ХТ лечению больной В-ХЛЛ был пролечен сарколизином. Средний возраст больных составил 60,4 года (43-77), из них 8 мужчин, 13 женщин, со II стадией — 8 человек, с III стадией —

1 2

5, с IV стадией — 8. У 17 больных подсчитаны значения ЬБ50, т. е. определена концентрация сарколизина, при которой происходила гибель 50 % клеток больного. Средняя доза сарколизина на курс лечения составила 58,8 мг (30-100) из расчета 50 мг/м2, препарат вводился в виде внутривенных инфузий, количество проведенных курсов было 3,7 (2-10) (в табл. 4).

Таблица 4

Режим лечения сарколизином рефрактерных больных хроническим лимфолейкозом

Число больных Стадия Количество курсов сарколизина Суммарная доза сарколизина на 1 больного, мг Средняя доза сарколизина на курс, мг

21 II IV 3,7 (2-10) 230 (90-940) 58,8 (30-100)

Статистические параметры гематологических данных больных до и после лечения сарколизином представлены в табл. 5.

Таблица 5

Характеристика противоопухолевого эффекта сарколизина у 21 рефрактерного больного хроническим лимфолейкозом

Признак До лечения, М±т После лечения, М±т Р

Лейкоциты крови, х109/л 76,5±18,0 27,3±11,3 <0,05

Абсолютный лимфоцитоз крови, х109/л 55,0±10,8 20,5±5,4 <0,05

Лимфоцитоз крови, % 88,6±4,4 74,6±4,9

Размеры печени от края реберной дуги, см 4,5±0,5 1,4±0,5 <0,01

Размеры селезенки от края реберной дуги, см 10,2±1,7 4,1±1,5 <0,05

Количество зон увеличенных лимфатических узлов для каждого больного 9,1±0,6 6,6±0,6 <0,005

Количество нейтрофилов, х10®/л 11,4±8,1 20,4±4,5

Гемоглобин, г/л 101,6±4,6 112,5±1,8 <0,05

На фоне проведенной терапии у больных снизились лейкоцитоз крови (р<0,05) и абсолютный лимфо-цитоз (р<0,05), достоверно уменьшились размеры печени и селезенки, уменьшилось количество зон увеличенных лимфоузлов (р<0,005), увеличилось число нейтрофилов в 1 л крови с 11,4 до 20,4х109/л, немного вырос уровень гемоглобина.

Эффективность проведенного лечения оценивали в соответствии с критериями Национального института рака США(КС1) [6]

Полную ремиссию (ПР) регистрировали при отсутствии лимфаденопатии, гепато- или спленомега-лии, симптомов интоксикации. Количество клеток: нейтрофилов больше 1,5х109/л, тромбоцитов больше 100х109/л, гемоглобин более 11 г/дл, лимфоцитов менее 4,0х109/л. Костный мозг нормальной клеточности; лимфоцитов менее 30 %.

Частичную ремиссию (ЧР) отмечали при 50 % редукции лимфоцитов крови и 50 % редукции лимфаде-нопатии и/или 50 % редукции спленомегалии и/или ге-патомегалии. Нейтрофилы — более 1,5х109/л или 50%-е повышение от исходного уровня. Тромбоциты — более 100х109/л или 50%-е повышение от исходного уровня. Гемоглобин — более 11,0 г/дл (не связано с гемотрансфузиями) или 50%-е увеличение от исходного уровня.

Стабилизацию болезни (СБ) регистрировали при отсутствии полной ремиссии, частичного ответа или прогрессирования заболевания.

Прогрессирование болезни (ПБ) отмечали при наличии хотя бы одного признака из перечисленных: более 50%-е увеличение в размерах, по крайней мере, 2 лимфатических узлов или новые очевидные лимфатические узлы; более 50%-е увеличение спленомегалии или гепатомегалии либо появление их, если не были представлены; трансформация в более агрессивную гистологию (синдром Рихтера или пролимфоцитарная лейкемия); более 50%-е увеличение абсолютного числа циркулирующих лимфоцитов.

В зависимости от ответа на лечение больных делили на 2 группы: ответившие и не ответившие на ХТ. Ответ должен был сохраняться не менее 2 мес. К ответившим относили больных, достигших полной и частичной ремиссии, к не ответившим — больных, у которых произошла стабилизация болезни или про-грессирование заболевания.

В результате после проведения в среднем около 4 курсов сарколизина у большинства (у 58,2 %) рефрактерных больных получен высокий ответ на химиотерапию (табл. 6, рис. 3).

Таблица 6

Эффективность лечения сарколизином рефрактерных больных ХЛЛ

Количество больных Полная ремиссия Частичная ремиссия Стабилизация болезни Прогрессировал ие болезни

21 1 (4,8) 11(53,4) 8 (38,1) 1 (4,8)

* В скобках — %.

Рис. 3. Эффективность противоопухолевого лечения сарколизином (п = 21)

При сопоставлении клинических наблюдений с данными чувствительности опухолевых клеток 17 больных в МТТ-пробе по LD50 получены результаты, которые представлены в табл. 7.

Таблица 7

Сравнение клинического ответа и чувствительности опухолевых клеток к сарколизину in vitro у 17 рефрактерных больных ХЛЛ

Таблица 8

Зависимость жизнеспособности клеток от концентрации сарколизина в культуре МТТ

Пациенты LD50 сарколизина в культуре (мкг/мл) Р

Ответившие (ПР+ЧР) 2,1±0,7 <0,05

Не ответившие (ПБ+СБ) 7,2±2,0

Пациенты Среднее значение LD50 (мкг/мл) Концентрация сарколизина в МТТ-пробе (мкг/мл)

0,78 11,56 3,12 16,25 12,5

Количество живых клеток

Более чувствительные в культуре («=П) 2,41±0,9 61,4±2,6 45,1±2,2 33,8±1,4 21,4±1,9 20,1±2,1

Менее чувствительные в культуре (Л=6) 8,3±2,1 84,8±2,5 76,1±1,7 51,1±1,8 47,4±2,0 41,4±1,4

Достоверность 0,01 0,03 0,002 0,0002 0,002 0,0003

Среднее значение LD50 у больных, ответивших на лечение, составило 2,1±0,7 мкг/мл, у не ответивших — 7,2±2,0 мкг/мл, что было достоверно больше (¿>=0,025). Таким образом, МТТ-проба — важный диагностический критерий, позволяющий прогнозировать результаты клинической эффективности сарколизина.

При этом у 6 пациентов, ответивших на терапию сарколизином, была II стадия ХЛЛ, у 2 — III стадия. Препарат был эффективен и при IV стадии заболевания, когда удалось достичь полной ремиссии заболевания. В группе не ответивших на лечение эти показатели существенно не отличались (II стадия — 4 больных, III стадия — 2, IV стадия — 2), что свидетельствует об одинаковой эффективности терапии сарколизином больных с разными стадиями заболевания.

Заслуживает особого внимания рассмотрение фар-макодинамического действия сарколизина в культуре у каждого обследуемого больного. Для достижения полученных результатов мы разделили 17 больных, опухолевые клетки которых чувствительны к сарколизину, на 2 группы: в первую вошли более чувствительные пациенты, у которых процент живых клеток оказался меньше 50 % с ТПК сарколизина 3,12 мкг/мл (11 больных), во вторую — менее чувствительные, у которых процент живых клеток превысил барьер в 50 % с этой концентрацией препарата (6 пациентов) (табл. 8).

Построены фармакодинамические кривые, отражающие зависимость количества жизнеспособных клеток от 5 возрастающих концентраций сарколизина (рис. 4).

Средняя кривая — это средние значения живых клеток всех исследованных больных при каждой концентрации сарколизина. Нижняя кривая отражает средние значения процента живых клеток при 5 концентрациях сарколизина у 1-й группы более чувствительных больных. Верхняя кривая показывает средние значения процентов живых клеток при 5 возрастающих концентрациях во 2-й группе пациентов — менее чувствительных в МТТ-культуре. Сравнение результатов показало, что у более чувствительных пациентов среднее значение живых клеток по ТПК сарколизина

о Все больные (п=17) v Б-е, более чувствительные In vttra (n=11; 1 ПР. б ЧР, 4 СБ) д Б-е, менее чувствительные In vttra (n = 6; 2 ЧР, 3 СБ, 1 ПБ)

6 8 10 12 14

в культуре (мкг/мл)

Рис. 4. Фармакодинамика сарколизина в культуре опухолевых клеток in vitro у 17 рефрактерных больных ХЛЛ

составляет 33,8 %, у менее чувствительных больных оно достоверно больше — 61,1 % (р<0,0001). Средние значения процентов живых клеток при каждой концентрации сарколизина отражены в табл. 8. Четко виден дозозависимый эффект сарколизина, при увеличении его концентрации количество живых клеток уменьшается. Эти данные нашли подтверждение и при лечении больных: при низких значениях LD50 клинический ответ был получен с меньшей дозой сарколизина, высокие значения LD50 потребовали назначения большей дозы сарколизина.

Наиболее важным в исследовании является совпадение клинических результатов терапии сарколизином с данными в культуре МТТ.

В 1-й группе более чувствительных в МТТ-тесте пациентов (n=11) у 6 больных зафиксирована частичная ремиссия, у 1 — полная ремиссия, у 4 — стабилизация болезни; всего 63,6 % ответивших. Во 2-й группе менее чувствительных в культуре МТТ (n=6) частичная ремиссия наблюдалась только у 2 больных, у 3 — стабилизация болезни, у 1 — прогрессирование заболевания; всего — 33,3 % ответивших. Эти данные

КЛИНИЧЕСКАЯ ОНКОЛОГИЯ 51

свидетельствуют о лучших клинических результатах у больных, более чувствительных к сарколизину в культуре, указывают на выраженную зависимость между лабораторными и клиническими показателями.

При анализе токсичности сарколизина было установлено, что наиболее часто встречались тошнота и рвота (23,8 % больных). Осложнения со стороны гематологических показателей наблюдались редко (19 % больных). Только у 3 (14,3 %) больных наблюдалась тромбоцитопения I—II степени, у 1 (4,8 %) пациента развилась лейкопения I степени. При этом дополнительного лечения не требовалось.

Одним из важных прогностических факторов в клинической гематологии является общая выживаемость больных. При использовании сарколизина в качестве монотерапии выживаемость рефрактерных больных составила от 3 до 32 мес., медиана — 13 мес.

При оценке общей выживаемости рефрактерных больных, которых последние месяцы лечили сарколи-зином, было проведено сравнение общей выживаемости контрольной группы с исследуемыми больными. Контрольная группа была представлена 27 пациентами, страдающими ХЛЛ, которых лечили стандартными программами ХТ (лейкеран, циклофосфан, предни-золон, СОР, СНОР), у этих больных также была сформирована резистентность к проводимому лечению. Группа была приблизительно равнозначна по стадиям заболевания. Продолжительность жизни этих больных на стандартной терапии составила от 10 до 148 мес.

Кривые продолжительности жизни контрольной группы и группы, леченной сарколизином, изображены на рис. 5. При использовании сарколизина больные имели медиану выживаемости 80,6 мес., при использовании стандартных программ ХТ медиана выживаемости составила 53,6 мес., но различия были недостоверны (¿>=0,19). Это связано, по-видимому, с тем, что не удалось четко выделить в контрольной группе длительность резистентности.

Функция выживания —ft— - цензурированием наблюдение

| 0,4 I 0,35

И од

0,25

од---14--

0,05--—--

0 1 1 I 1 1 1 1 1 1 1 I 1 I 1 I 1 1 1 1 1 1 1 Г I 1 I 1 I 1 1 1 1 1 1 1 1 '/i О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120 130 140 150 160 170 180 190 Продолжительность жизни (мес.)

Рис. 5. Сравнение общей выживаемости рефрактерных больных ХЛЛ на стандартных программах ХТ и терапии сарколизином

Таким образом, при скрининге чувствительностей опухолевых клеток к различным ХП было установлено, что наиболее эффективным препаратом у резистентных больных ХЛЛ оказался сарколизин, что и послужило предпосылкой к проведенному лечению. Клинический ответ свидетельствует о дозозависимом эффекте сарколизина, что подтверждалось данными фармакодинамики в культуре МТТ. При рассмотрении клинических ответов после терапии сарколизином у больных с различной чувствительностью в культуре МТТ выявлена четкая взаимосвязь: в группе больных, более чувствительных к сарколизину в МТТ-тесте, LD50 у которых достигалась при концентрации препарата 2,4±0,9 мкг/мл, выявлена большая клиническая эффективность сарколизина (63,6 % ответивших) по сравнению с менее чувствительными в культуре, LD50 у которых составила 8,3±2,1 мкг/мл, p<0,01 (33,3 % ответивших). При этом клинический эффект не зависел от стадии заболевания.

Анализ общей выживаемости резистентных больных ХЛЛ показал, что при химиотерапии сарколизи-ном медиана составила 80 мес., что было больше контроля (53 мес.).

Таким образом, проведенные исследования, основанные на определении чувствительности опухолевых лимфоцитов, а также фармакодинамическое моделирование сарколизина в культуре и полученные результаты лечения показывают клиническую эффективность сарколизина в химиотерапии резистентных больных ХЛЛ.

ЛИТЕРАТУРА

1. Голенков А. К., Трифонова Е. В., Катаева Е. В. и др. Характеристика лекарственной устойчивости опухолевых плазмоцитов in vitro у больных множественной миеломой с различным ответом на химиотерапию // Терапевтический архив. — 2000. — 8. — С. 38-41.

2. Катаева Е. В., Голенков А. К., Трифонова Е. В. и др. Сравнительный анализ данных МТТ-пробы у больных хроническим лимфолейкозом с различным ответом на химиотерапию // Российский биотерапевтический журнал. — 2002. — 1. — С. 65-67.

3. Катаева Е.В. Химиотерапия резистентных форм хронического лимфолейкоза с учетом результатов чувствительности опухолевых клеток in vitro: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. — М., 2004.

4. Фрешни Р. Культура животных клеток. Методы. — М.: Мир, 1989. — С. 264-265.

5. Bosanquet A. G., Brito-Babupulle F., Sykes H. V., Thornton P. D. Ex Vivo Efficacy of the Nitrosoureas Carmustine (BCNU) and Lomustine (CCNU) in Chronic Lymphocytic Leukemia (CLL) and Clinical Responses in Heavily Pretreated Patients // Blood. — 2002. — Vol. 100, No. 11 (2). — P. 363b.

6. Cheson B. D., Bennet J. M., Rai K. R. et al. Guidelines for clinical protocols for Chronik Lymphocytic Leukemia: recommendations of theNational Cancer Institute sponsored Working Group // Am. J. Haematol. — 1988 — Vol. 29. — P. 152-163.

7. De Vries J. F., Barge R. M. Y., Willemze R., Falkenburg J. H. F. Cytarabine-mediated killing of B-CLL cells does not

require cell proliferation and DNA incorporation // Hematol. J. — 2003. — Vol. 4. — S. 2. — P.189.

8. Morabito F., Stelitano C., Callea I. et al. In vitro drug-induced cytotoxicity predicts clinical response to fludarabine in B-cell chronic lymphocytic leukaemia // Br. J. Haematol. — 1998. — Vol. 102. — P. 528-531.

9. Mosmann T. Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival. Application to prolifiration and cytotoxicity assays // J. Immunol. Methods. — 1983. — Vol. 65. — P. 55.

10Pepper C. J., Thomas A., Hoy T. et al. The vitamin D3 analogue, EB 1089, defines a novel class of therapeutic agents for

the treatment of B-cell chronic lymphocytic leukemia // The Hematol. J. — 2003. — Vol. 4, S. 2. — P. 133.

11.Silber R., Degar B., Costin D. et al. Chemosensitivity of lymphocytes from patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia to chlorambucil, fludarabine, and camptothecin analogs // Blood. — 1994. — Vol. 84. — P. 3440-3446.

12.Weisenthal L. M., Dill P. L., Finklestein J. Z. Laboratory detection of primary and acquired drug resistance in human lymphatic neoplasms // Cancer Treatment Reports. — 1986. — Vol. 70. — P. 1283-1295.