CC BY
421
УДК 579.64:632.937
ЭНДОФИТНЫЕ БАКТЕРИИ, НАСЕЛЯЮЩИЕ СЕМЕНА ПШЕНИЦЫ, ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ПРОДУЦЕНТЫ МИКРОБНЫХ ПРЕПАРАТОВ ДЛЯ СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА*
А.В. ЩЕРБАКОВ, младший научный сотрудник
A.Н. ЗАПЛАТКИН, инженер-микробиолог
B.К.ЧЕБОТАРЬ, кандидат биологических наук, зав. лабораторией
ВНИИСХМ Россельхозакадемии.
E-mail: vladchebotar@rambler.ru
Резюме. Собрана уникальная коллекция семян пшеницы из 39-и районированных сортов, каждый из которых протестирован на наличие эндофитных бактерий. Всего удалось выделить 50 их морфотипов, у которых определяли фунгицидную, бактерицидную и ростстимулирующую активность. Из 50 выделенных штаммов эндофитных бактерий пшеницы лишь 12 обладали фунгицидной активностью против трех видов р. Fusarium. При этом зоны ингибирования гриба составляли 7,3. ..14,5 мм. Кроме того, 7 штаммов обладали бактерицидной активностью против всех изученных штаммов фитопатогенных бактерий, 13 - только против Clavibacter michiganensis, 11 штаммов демонстрировали высокую ростстимулирующую активность, увеличивая длину корня салата в 2,3-4,6 раза. На основании полученных данных отобран выделенный из эндосферы зерна пшеницы перспективный штамм эндофитных бактерий Bacillus subtilis 8А. Проведенные лабораторные эксперименты показали, что он демонстрирует потенциал хозяйственно-ценных свойств не только в экспериментах in vitro, но и в условиях биоконтроль-ного эксперимента in planta и может быть рекомендован как перспективный для производства экспериментальных партий высокоэффективного микробного препарата защитного действия для зерновых культур.
Ключевые слова: пшеница, эндофитные бактерии, биоконтроль фитопатогенов, ростстимуляция, гнотобиотические системы.
Ассоциации растений с микроорганизмами, стимулирующими их развитие, привлекают внимание ученых не только с точки зрения исследования фундаментальных основ сосуществования и взаимодействия различных организмов, но и возможного использования таких ассоциаций в практике экологически ориентированного адаптивного растениеводства. Микроорганизмы, существующие внутри растения, включая надземную, подземную части и семена, и благотворно влияющие на их развитие, не вызывая симптомов заболевания (эндофитные микроорганизмы), представляют как научный, так и практический интерес. Они используют внутреннюю среду растения - эндосферу, в качестве уникальной экологической ниши, защищающей их от изменений окружающей растение внешней среды, которая возникла в результате сотен миллионов лет совместной эволюции растений и бактерий [1, 2].
Эндофитные бактерии колонизируют те же экологические ниши в растении, что и болезнетворные микроорганизмы, и поэтому служат перспективным биологическим средством для борьбы с фитопатогенами, то есть выступают в роли так называемого «биоконтрольного» агента [3...5]. Эндофитные бактерии были обнаружены внутри тканей таких важнейших сельскохозяйственных культур, как пшеница [6], рис [7, 8], кукуруза [9, 10], хлопок [9, 11], картофель [12, 13], сахарный тростник [14] и др.
Цель наших исследований - выделение бактериальных эндофитов из семян озимой пшеницы, изучение их хозяйственно-ценных свойств и отбор наиболее перспективных штаммов для создания микробного препарата защитно-стимулирующего действия на зерновых культурах.
Условия, материалы и методы. Для выделения эндофитных бактерий предварительно была создана коллекция из 39 образцов семян озимой пшеницы различных сортов и географического происхождения.
Эндофитные бактерии выделяли методом поверхностной стерилизации. Предварительно был оптимизирован ее протокол, позволяющий полностью подавить всю эпифитную микрофлору семян, но сохранить в жизнеспособном состоянии находящиеся в них эндофитные бактерии и зародыш семени:
2 мин. в 70%-ном этаноле, 1 мин. в стерильной воде, 20 мин. в 30 %-ном растворе гипохлорита натрия, 1 мин. в стерильной воде, 20 мин. в 30 %-ном растворе гипохлорита натрия, 5-кратно в стерильной воде. Отмытые семена подсушивали в асептических условиях и раскладывали на поверхность агаризованой среды R2A [14]. Чашки Петри с семенами инкубировали 48 ч при 28°C, в случае отсутствия бактериального роста на поверхности агара, семена отбирали и стерильно растирали в ступке с добавлением 10 мл стерильного физиологического раствора. Полученную суспензию из разрушенных остатков семян и физиологического раствора методом последовательных серийных разведений поверхностно высевали на среду R2A. Далее, чашки Петри инкубировали 48 ч при 28°С. Затем, подсчитывали число выросших бактериальных колоний, отдельные клоны отсевали на стерильные чашки Петри и в пробирки со скошенной средой R2A, проверяли чистоту полученных бактериальных изолятов и их культурально-морфологические свойства.
В качестве тест-культур при изучении фунгицидных свойств выделенных изолятов эндофитных бактерий использовали штаммы фитопатогенных и токсигенных грибов: Fusarium graminearum, Fusarium culmorum, Fusarium sporotrichioides (штаммы из коллекции ВИЗР, предоставлены Т.Ю. Гагкаевой). Бактерицидную активность проверяли на 4-х штаммах фитопатогенных бактерий (из коллекции фитопатогенных микроорганизмов ВИЗР предоставлены А.М. Лазаревым): Pseudomonas syringae (шт. 213), Pseudomonas syringae (шт. 8511), Erwinia carotovorasubs. atroseptica (шт. 822), Clavibacter michiganense subsp. sepedonicum (шт. 6028). Фунгицидную и бактерицидную активность определяли согласно методике [6].
Для оценки ростстимулирующей активности эндофитных бактерий использовали семена кресс-салата Витаминный. Их обрабатывали суспензиями изучаемых штаммов с титром клеток 105 КОЕ/мл и раскладывали в 3-х кратной повторности по чашкам Петри с увлажненной до полной влагоемкости ватой и фильтровальной бумагой. Контрольный вариант обрабатывали стериль-
*Работа поддержана Госконтрактом Минобрнауки №14.512.11.0031 от 07 марта 2013 г., Госконтрактом Минобрнауки №
16.М04.11.0013 от29.04.2011.
Таблица1. Хозяйственно-ценные свойства (антагонизм к фитопатогенным грибам и бактериям, способность к стимуляции роста) выделенных бактериальных изолятов
Стимуляция роста
Сте- Антагонизм в отношении1 пшеницы2 (увели-
пень чение)
ак- Clavibacter mich. subsp. sepedonicum Erwinia caro- Pseudomonas общей зеленой массы
тив- ности F.cul- morum F.grami- nearum F.sporotri- chioides tovora subsp. atroseptica 822 syringae, 213 syringae 8511 длинны корешка
+ 25A, 31A, 2A, 3A, 9A, 9A, 13A, 25A, 12A, 13A, 36A, 3A, 6A, 7A, 3A, 26A, 2A, 3A, 6A, 2A, 9A, 2A, 19A,
13B, 36B, 11A, 16A, 37A, 13B, 15B, 6B, 13B, 26B, 8A, 11A, 12A, 30A, 31A, 21A, 26A, 19A, 24A, 21A, 25A,
2C, 19C, 19A, 20A, 35B, 36B, 37B, 7C, 7D, 35D, 13A, 15A, 16A, 32A, 37A, 7B, 15B, 30A, 15B, 26A, 32A,
19D 32A, 39A, 2B, 7C,7D, 15D, 35F 20A, 26A, 30A, 39A, 2B, 20B, 24B, 26B, 32B, 36A, 7B,
7B, 11B, 13B, 35D 37A, 39A, 13B, 20B, 26B, 36B, 35B, 37B, 13B, 15B,
20B, 21B, 6B, 11B, 13B, 26B, 36B, 39B, 15C, 39B, 2C, 16B, 19B,
30B, 35B, 15B, 16B, 25B, 2C, 35C, 15D,35D, 35C,7D, 21B, 24B,
37C, 39C, 7D, 26B, 32B, 39B, 37C, 19D, 15E 35D,39D 30B, 36B,
19D,39D, 15C, 39C, 7D, 19E, 35E, 37B, 7C,
19E,39E 15D, 19D, 15E, 35E, 39E, 35G 39E, 19F 37C, 7D, 15D,19D, 35D
++ 2A, 6A, 9A, 6A, 12A, 13A, 11A, 31A, 32A, 2A, 11A, 20A, 2A, 9A, 31A, 2A, 6A, 7A, 8A, 9A, 8А, 31A, 8А, 30A,
11A, 16A, 26A, 31A, 25B, 30B, 37C 32A, 7B, 15B, 32A, 7B, 30B, 8A, 11A, 11A, 12A, 35A, 36A, 2B, 11B,
2B, 6B, 7B, 37A, 6B, 15B, 16B, 19B, 20B, 37B, 37C 12A, 13A, 25A, 30A, 2B, 7B, 35B, 15E,
16B, 24B, 16B, 24B, 15C, 35C, 16A, 25A, 31A, 32A, 19B, 24B, 19E
7C, 7D 25B, 32B, 36B, 37B, 15C, 15D 37C, 39C, 15D 6B, 16B, 25B, 32B, 7C, 15C, 7D, 15D, 15E 36A, 37A, 6B, 19B, 25B, 30B, 35B, 37B, 7C, 37C, 7D 36B, 15D
+++ 3A, 8А, 30A, 35A, 26B, 35B 8А 2A, 6A, 8А, 16A, 19A, 26A, 30A, 2B, 6B, 16B, 19B, 26B, 19C, 19D 19A 36A 19A, 35A, 32B, 35C 25A, 15E 39D
0 7A, 12A, 7A, 15A, 21A, 3A, 7A, 12A, 3A, 6A, 7A, 19A, 21A, 24A, 9A, 15A, 13A, 15A, 3A, 7A, 3A, 6A, 7A,
13A, 15A, 24A, 25A, 15A, 20A, 21A, 9A, 15A, 16A, 25A, 35A, 36A, 19A, 20A, 16A, 20A, 11A, 13A, 9A, 12A,
19A, 20A, 30A, 35A, 24A, 35A, 36A,21A, 24A, 25B, 2B, 19B, 20B, 21A, 24A, 24A, 39A, 26A, 37A, 13A, 16A,
21A, 24A, 36A, 19B, 39A, 7B, 11B, 30B, 32B, 35B,21B, 24B, 35B, 35A, 7B, 2B, 11B, 6B, 13B, 20A, 24A,
26A, 32A, 26B, 39B, 2C, 20B, 21B, 24B,36B, 37B, 39B, 2C, 7C, 19C, 11B, 19B, 13B, 16B, 7C, 19C, 31A, 35A,
36A, 37A, 7C, 19C, 35C, 32B, 39B, 2C, 2C, 19C, 19D, 35C, 35D, 21B, 24B, 21B, 2C, 37C, 37A, 39A,
39A, 11B, 15E, 35E, 15C, 35C, 39D, 15E, 39D, 19E, 19F, 30B, 35B, 19C, 39C, 37C, 39C, 6B, 25B,
15B, 19B, 19F, 35F, 39C, 39D, 19E, 35E, 39E, 35F 37B, 39B, 19D,39D, 19D, 39E, 32B, 39B,
21B, 25B, 35D, 35G 15E, 19E, 35E, 19F, 35G 39B, 19C, 19E, 35E, 35F6A, 2C, 19C,
30B, 32B, 39E, 19F, 35G 39C, 35D, 39E, 19F, 25B, 30B, 35C, 39C,
37B, 39B, 39D, 35F, 35F, 35G 35E, 12A, 35E, 39E,
15C, 35C, 35G 15A, 16A, 35F, 35G,
37C, 39C, 20A, 21A, 11A, 26B,
15D, 35D, 32A, 39A, 15A
39D, 15E, 11B, 16B,
19E, 35E, 21B, 19F
39E, 19F,
35F, 35G
1 - степень фунгицидной и бактерицидной активности (радиус зоны подавлений фитопатогена): «0» - 0...1 мм; «+» - 1...5 мм;«++» - 5.15 мм; «+++» - более 15 мм; 2 - средняя прибавка в длине корешка и зеленой массе проростков пшеницы: «0» -0.10 %, «+» - 10.30 %, «++» ... 30.50 %, «+++» - более 50 %.
ной водой. В каждой повторности использовали по 50 семян. Чашки культивировали при 28 0С 72 ч, после чего измеряли длину проростков.
Эффективность колонизации корневой системы пшеницы (сорт Веда, селекции Краснодарского НИ-ИСХ) перспективным штаммом определяли методом гнотобиотических систем [16]. Его молекулярногенетическую идентификацию, оценку ростстимули-рующей активности, эксперименты по биоконтролю фитопатогена in planta проводили по изложенным ранее методикам [17].
Результаты и обсуждение. В ходе проведения экспедиции в районы основного возделывания пшеницы в Российской Федерации (Ростовская область, Краснодарский и Ставропольский край, Северная Осетия) была собрана уникальная коллекция семян этой культуры из 39-и районированных сортов, каждый
из которых протестировали на наличие эндофитных бактерий. Всего было выделено 50 их морфотипов, у которых определяли фунгицидную, бактерицидную и ростстимулирующую активность. Интересно отметить, что у 14 из 39 исследованных сортов пшеницы не удалось выделить эндофитные бактерии ни на одной из используемых питательных сред (анализ повторяли три раза) и только у 4 сортов они были выделены на всех питательных средах. Наибольшее число эндофитных бактерий удалось выделить на специализированной среде для выделения псевдомонад. В качестве характерной особенности можно отметить присутствие в большинстве образцов не более 2...
3 различных морфотипов бактерий. Наибольшее их число выделено из 2-х образцов (сорт Нота, Кущев-ский р-он, Краснодарский край и сорт Крупинка, ОПХ «Михайловское», Северная Осетия). Численность
эндофитной микрофлоры для большинства образцов колебалась в пределах 103...104 КОЕ на 1 семя, доминирующей группой бактерий, присутствовавших в семенах пшеницы, были грамположительные спорообразующие палочки рода Bacillus.
В результате исследований впервые в мире удалось создать уникальную коллекцию штаммов эндофитных бактерий, обитающих в зерне пшеницы различного эколого-географического происхождения и обладающих такими хозяйственно-ценными свойствами, как фунгицидная и бактерицидная активность, стимуляция роста растений. Из 50 выделенных штаммов эндофитных бактерий пшеницы лишь 12 обладали фунгицидной активностью против всех трех видов р. Fusarium. Причем зоны ингибирования гриба составляли 7,3.14,5 мм. Вероятно, это связано с низкой встречаемостью грибов р.Fusarium в исследуемых образцах зерна, из-за чего у эндофитных бактерий могла сильно уменьшиться «биологическая целесообразность» продукции фунгицидных веществ. Кроме того, 7 штаммов обладали бактерицидной активностью против всех исследованных штаммов фитопатогенных бактерий, а 13 - только против Clavibacter michiganensis, 11 штаммов демонстрировали высокую ростстимулирующую активность, увеличивая длину корня салата в 2,3-4,6 раза (табл. 1).
Приведенные результаты позволяют оценить степень активности того или иного бактериального изо-лята и подобрать необходимый штамм, обладающий максимально выраженной активностью либо против всех фитопатогенов, либо против определенного, наиболее важного в конкретной фитосанитарной обстановке. Штаммы, характеризовавшиеся выраженной ростстимулирующей активностью, например, 25А, 15Е, можно использовать как вероятные продуценты соответствующих микробных препаратов.
В качестве перспективного штамма защитного действия, обладающего комплексом фунгицидных свойств против токсигенных грибов рода Fusarium, как наиболее важных фитопатогенных объектов зерна пшеницы, мы отобрали бактериальный изолят 8А. Он характеризовался наличием четко выраженных фунгицидных свойств против всех 3-х тест-объектов фитопатогенных грибов, а также наличием ростстимулирующей активности (средняя прибавка по длине корешков проростков пшеницы находилась на уровне 16 %). Дальнейшие исследования были связаны с изучением этого изолята.
Штамм 8А характеризовался следующими культурально-морфологическими и физиологобиохимическими свойствами. Клетки представляли собой грамположительные спорообразующие палочки правильной формы размерами 2,0.. .2,5 мкм с центральным расположением спор, споры были чуть смещены к краю клетки. Каталаза положительный. На питательном агаре штамм образовывал сухие колонии кремового цвета, пастообразной консистенции с неровными изрезанными краями, диаметр колоний 5.10 мм. Опти-
мальная температура для роста 28 °С, при температуре более 45 °С и менее 15 °С рост был замедленный. В качестве источника углерода штамм использовал ара-бинозу, ксилозу, маннит, глюкозу, галактозу, фруктозу, мальтозу, сорбит, глицерин, декстрин, крахмал с образованием кислоты; рамнозу и дульцит с образованием щелочи. Штамм 8А способен использовать минеральные формы азота - соли аммония, нитраты, аминокислоты и белки. По результатам молекулярно-генетической идентификации на основании анализа последовательности генов 16S рРНК он отнесен к виду Bacillus subtilis (степень генетического сходства 99 %).
Эффективность использования бактериальных препаратов во многом определяется способностью заселения микроорганизмами исследуемого штамма ризосферы и эндосферы того или иного растения. Чем выше его колонизационная активность, тем эффективнее бактерии интродуцируются в растение и соответственно проявляют свои антагонистические функции. В эксперименте с использованием гнотобиотических систем установлена высокая колонизационная активность Bacillus subtilis 8А. Он активно заселяет ризоплану и ризосферу растений пшеницы, по численности значительно превосходя контрольный штамм B. subtilis Ч-13 (продуцент микробного препарата Экстрасол) и другой штамм эндофитных бактерий 2А, также выделенный из зерна озимой пшеницы (табл. 2).
Таблица 2. Приживаемость эндофитных бактерий, выделенных из семян озимой пшеницы, в ризосфере и на корнях пшеницы сорта Веда
Численность бакте рий
ризосфера Корень отноше-
Штамм 105 KOE/ раст. 105 KOE/г ризосферы 105 KOE/ корень ние корень/ ризосфера, %
2А 8А B. subtilis Ч-13 32,3 ± 5 55,9 ± 9 21,7 ± 5 27,1 ± 7 38.5 ± 10 16.5 ± 3 11,0 ± 2 15,3 ± 4 1,7 ± 0,1 34.3 27.3 4,8
В эксперименте по биоконтролю in planta поражен-ность проростков болезнями (фузариозными гнилями) в значительной мере определялась инокуляцией исследуемым штаммом. Использование образца микробного препарата на основе Bacilus subtilis 8A достоверно приводило к полному подавлению развития фузариозной гнили. На пораженность проростков гельминтоспо-риозными гнилями обработка семян бактериальной культурой не оказывала достоверного влияния.
Выводы. Таким образом, проведенные лабораторные эксперименты показали, что выделенный из эндосферы зерна пшеницы штамм эндофитных бактерий Bacillus subtilis 8А демонстрирует потенциал хозяйственно-ценных свойств не только в экспериментах in vitro, но и в условиях биоконтрольного эксперимента in planta и может быть рекомендован как перспективный штамм для производства экспериментальных партий высокоэффективного микробного препарата защитного действия для зерновых культур.
Литература.
1. Ryan R.P., Germaine K., Franks A., Ryan D.J., Dowling D.N. Bacterial endophytes: recent developments and applications // FEMS Microbiol. Lett. - 2008. - V. 278. - P. 1-9.
2. Ruby E.J., Raghunath T.M. A Review: Bacterial endophytes and their bioprospecting//Journal of Pharmacy Research. - 2011. -V. 4(3). - P. 795-799.
3. Berg G., Eberl L., Hartmann A. The rhizosphere as a reservoir for opportunistic human pathogenic bacteria. //Environ. Microbiol. -2005. - V.7. - P. 1673-1685.
4. Lima A.C.F., Pizauro J.M., Macari M., Malheiros E.B. Efeito do uso de probiotico sobre o desempenho e a atividade de enzimas digestivas de frangos de corte //Revista Brasileira de Zootecnia. - 2003. - V. 32. - P. 200-207.
5. Koumoutsi A., Chen X-H., Henne A., Liesegang H., Hitzeroth G., Franke P., Vater J., Borriss R. Structural and functional characterization of gene clusters directing nonribosomal synthesis of bioactive cyclic lipopeptides in Bacillus amyloliquefaciens strain FZB42// J. Bacteriol. - 2004. - V. 186. - No. 4. - P. 1084-1096.
6. Чеботарь В.К., ЩербаковА.В., Фадеева М.А., Мальфанова Н.В., Ерофеев С.В., ЧижевскаяЕ.П., Гагкаева Т.Ю., Гаврилова О.П., Филипас А.С., Бондаренко А.М., Тарасов А.Л. Выявление взаимодействия токсигенных грибов и эндофитных бактерий в зерне пшеницы для создания способов борьбы с токсигенными инфекциями и получения высококачественных продуктов питания.//Материалы Всероссийской научной конференции «Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в агропромышленном комплексе России», 14-15 апреля 2010 г. - М.,2010. - с.35-39.
7. Baldani V., Baldani J., Dobereiner J.Inoculation of rice plants with the endophytic diazotrophs Herbaspirillum seropedicaeand Burkholderiaspp. // Biol. Fertil. Soil. - 2000. - V. 30. - P. 485-491.
8. Okunishi S., Sako K., Mano H., Imamura A.,Morisaki H.Bacterial flora of endophytes in the maturing seeds of cultivated rice (Oryza sativa) //Microbes and Environments. - 2005. - V. 20. - P. 168-177.
9. McInroy J., Kloepper J. Survey of indigenous bacterial endophytes from cotton and sweet corn // Plant and Soil. - 1995. -V. 73 - P. 337-342.
10. Rijavec T., Lapanje A., Rupnik M.Isolation of bacterial endophytes from germinated maize kernels // Can. J.Microbiol. - 2007. -V. 53. - P. 802-808.
11. Misaghi I.J., Donndelinger C.R.Endophytic bacteria in symptom free cotton plants // Phytopathology. - 1990. - V. 80. -P. 808-811.
12. Sturz A.V., Christie B.R., Matheson B.G.Associations of bacterial endophyte populations from red clover and potato crops with potential foe beneficial allelopathy// Can. J. Microbiol. - 1998. - V. 44. - P. 162-167.
13. Krechel A., Faupel A., Hallmann J., Ulrich A., Berg G. Potato associated bacteria and their antagonistic potential towards plant pathogenic fungi and the plantparasitic nematode Meloidogyne incognita (Kofoid &White) // Chitwood. Can. J. Microbiol. - 2002. -V. 48. - P. 772-786.
14. Rennie R.J., Freitas J.R.D., Ruschel A.P., Vose P.B.Isolation and identification of N2fixing bacteria associated with sugarcane (Saccharum sp.) // Can. J. Microbiol. - 1982. - V. 28. - P. 462-467.
15. Opelt K., Chobot V., Hadacek F., Schonmann S., Eberl L., Berg G. Investigations of the structure and function of bacterial communities associated with Sphagnum mosses // Environ. Microbiol. - 2007. - V. 9. - P. 2795-2809.
16. Simons M., A. J. van der Bij, I. Brand, L. A. de Weger, C. A. Wijffelman, and B. J. J. Lugtenberg. Gnotobiotic system for studying rhizosphere colonization by plant growth-promoting Pseudomonas bacteria// Mol. Plant-Microbe Interact. - 1996. - V.9. - P.600-607.
17. Щербаков А. В, Брагина А. В., Кузьмина Е. Ю., Берг К., Мунтян А. Н., Макарова Н. М., Мальфанова Н. В., Кардинале М., Берг Г., Чеботарь В. К., Тихонович И. А. Эндофитные бактерии сфагновых мхов как перспективные объекты сельскохозяйственной микробиологии. // Микробиология. - 2013. - Т. 82. - №3. - С.312-322.
ENDOPHYTIC BACTERIA INHABITING WHEAT SEEDS AS PERSPECTIVE PRODUCENTS OF MICROBIAL PREPARATIONS FOR AGRICULTURE
A.V. Shcherbakov, A.N. Zaplatkin, V.K. Chebotar
Summary. Unique collection of wheat seeds from 39 regional varieties has been collected and each sample was tested on presence of endophytic bacteria. Altogether 50 morphotypes of endophytic bacteria were isolated and tested on fungicide, bactericide and plant growth promotion activity. It was shown that from 50 isolated strains of endophytic bacteria isolated from wheat seeds only 12 demonstrated fungicide activity against all three tested types of genus Fusarium. Inhibition zones of phytopathogenic fungi averaged 7,3-14,5 mm. From 50 tested strains 7 demonstrated bactericide activity against all tested strains of phytopathogenic bacteria and 13 strains only against Clavibacter michiganensis, 11strains demonstrated high plant growth promotion activity increasing lettuce root length by 2,3-4,6 times. On the basis of obtained data most promising strain of endophytic bacteria isolated from endosphere of wheat seeds Bacillus subtilis 8A has been selected. Laboratory experiments showed that strain seeds Bacillus subtilis 8A demonstrated potential of beneficial properties not only in experiments in vitro but in biocontrol experiment in planta as well and can be recommended as promising strain for production of experimental batches of highly efficient microbial preparation for protection of cereals.
Key words: wheat, endophytic bacteria, phytopathogens biocontrol, plant growth promotion, gnotobiotic systems.
УДК 634.23:631.535:631.87
ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ХИТОЗАНОВЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ РАЗМНОЖЕНИИ ВИШНИ СТЕПНОЙ ЗЕЛЁНЫМИ
ЧЕРЕНКАМИ
В.И. УСЕНКО, доктор сельскохозяйственных наук, директор
Т.Е. БОЯНДИНА, младший научный сотрудник НИИ садоводства Сибири им. М.А. Лисавенко Рос-сельхозакадемии
E-mail: niilisavenko@hotbox.ru
Резюме. Представлены результаты исследований по размножению сортов вишни степной Селиверстовская и Шадринская способом зелёного черенкования с использованием для об-
работки черенков традиционного стимулятора корнеобразо-вания индолилмасляной кислоты (ИМК) в качестве эталона и новых хитозановых препаратов и их составляющих (Хорион, Хорион + микроэлементы, ортофосфат калия) при рН 6 и 5. В качестве контроля выступал вариант с предпосадочной обработкой зеленых черенков водой. Черенки сорта Селиверстовская, выдержанные перед посадкой в воде, корней не образовывали, обработанные ИМК окоренялись на 3,0 %, а новыми препаратами - на 3,1.13,1 %, у сорта Шадринская окореняемость черенков составила соответственно 43,6, 56,0 и 71,8.90,0 %. На обоих сортах самая высокая величина этого показателя достигалась при более кислой среде растворов.
