CC BY
559
Вестник Томского государственного университета. Биология. 2014. № 1 (25). С. 42-55
биотехнология и микробиология
УДК 579.26 +632.937
A.A. леляк1, м.В. Штерншис2
1 Научно-производственная фирма «Исследовательский центр», наукоград Кольцово, Новосибирская обл., Россия 2Новосибирский государственный аграрный университет, г. Новосибирск, Россия
антагонистический потенциал сибирских штаммов Bacillus spp. в отношении возбудителей болезней животных и растений
Установлено, что наибольшую антагонистическую активность сибирские штаммы бактерий Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens и Bacillus licheni-formis проявляют в отношении St. aureus. Высокой активностью в отношении C. albicans обладали штаммы B. subtilis ВКПМ В-16041, DSM 24613, B. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, DSM 24614 и B. amyloliquefaciens ВКПМ В-10643, DSM 24615. Все штаммы показали наличие бактерицидного действия средней и слабой степени в отношении других использованных в опыте грамотрицательных бактерий - C. freundii, E. coli, K. pneumonia, P. vulgaris, P. aeruginosa, Salmonella sp., Sh. sonnei, Sh. flexneri IIa. Эти же штаммы бактерий-антагонистов проявили ингибирующие свойства в отношении большинства использованных в опыте фи-топатогенов. На возбудителя альтернариоза A. solani наибольшее ингибирующее действие оказали штаммы B. amyloliquefaciens Ba-1 и Ba-2, B. licheniformis ВКПМ В-10561, DSM 24609 и B. subtilis Bs-1. В подавлении роста возбудителя корневых гнилей B. sorokiniana высокую активность проявили штаммы B. subtilis Bs-1, B. amyloliquefaciens Ba-1 и Ba-2, которые также были максимально активными по сравнению с остальными по отношению к возбудителю серой гнили растений B. cinerea. В то же время установлено, что штаммы B. licheniformis не подавляли роста B. cinerea. Против фитопатогенных грибов рода Fusarium и возбудителя фитофтороза пасленовых культур Ph. infestans все изученные бактерии Bacillus spp. показали высокий уровень ингибирующей активности. У бактерий B. licheni-formis Bl-1, ВКПМВ-10562, DSM 24610 и ВКПМВ-10564, DSM 24612 отсутствовала антагонистическая активность в отношении F. solani ВКПМВ-163.
Ключевые слова: антагонистическая активность; Bacillus subtilis; Bacillus amyloliquefaciens; Bacillus licheniformis; патогенные бактерии; фитопатоген-ные грибы.
Введение
Спорообразующие бактерии рода Bacillus являются продуцентами широкого спектра биологически активных веществ (БАВ), в том числе ферментов, липопептидных и других антибиотиков, спектр которых зависит от геогра-
Tomsk State University Journal of Biology. 2014. № 1 (25). Р. 42-55
фического происхождения изолятов [1, 2]. Продукция БАВ обусловливает высокую бактерицидную и бактериостатическую активность Bacillus spp. в отношении патогенных грамположительных (Clostridium spp., Corynebacte-rium spp., Staphylococcus aureus) и грамотрицательных (Treponema pallidum, Neisseria meningitis) бактерий [3], а также фунгицидную (фунгистатическую) активность в отношении фитопатогенных грибов - Rhizoctonia solani, Botrytis cinerea, Aspergillus niger [4, 5]. Таким образом, представители рода Bacillus обладают бактерицидной и фунгицидной активностью и рассматриваются как перспективные биологические агенты для создания противомикробных препаратов. Пробиотики на основе бактерий B. subtilis успешно применяют в медицине для терапии инфекций различной этиологии [6-8]. В ветеринарной медицине препараты и кормовые добавки, включающие в качестве действующего начала бактерии рода Bacillus, используют для снижения падежа, повышения привесов, снижения конверсии кормов в свиноводстве [9, 10], птицеводстве [11], при выращивании крупного рогатого скота [12]. В защите растений от возбудителей болезней была показана эффективность штаммов B. subtilis в качестве биофунгицидов для культур открытого и защищенного грунта [13, 14], а также в технологии хранения овощей [15].
Цель работы - оценить антагонистическую активность сибирских природных штаммов бактерий рода Bacillus как потенциальной основы биопрепаратов для управления здоровьем животных и растений.
Материалы и методики исследования
Культуры микроорганизмов. Штаммы бактерий-антагонистов патогенной микрофлоры - Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens и Bacillus licheni-formis - были выделены из почвы лесных биоценозов Новосибирской области и депонированы во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ, Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов, г. Москва) и Немецкой коллекции микроорганизмов и клеточных культур (Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH, Braunschweig, Germany). Чистые культуры фитопатогенных грибов (Bipolaris sorokiniana ВКПМ В-532, Botrytis cinerea ВКПМ В-1006, Fusarium graminearum ВКПМ В-147, Fusarium solani ВКПМ В-163, Fusarium chlamydosporum ВКПМ В-899, Fusarium oxysporum ВКПМ В-349, Fusarium avenacium ВКПМ В-623) были получены в ВКПМ. Остальные тест-объекты (штаммы Alternaria solani A7 АКТЛ 112, А7 НКЛ 2в, А7 АКТЛ 125 3б, Botrytis cinerea M-01, M-4-2, Fusarium solani К 6, Phytophthora infestans, расы 3,4 и 1-11) выделены авторами из инфицированных растений, а чистые культуры патогенных бактерий (Candida albicans, Citrobacter freundii, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosae, Salmonella enterica subsp. enterica serovar choleraesuis, Salmonella enterica subsp. enterica serovar enteritidis, Salmonella
enterica subsp. enterica serovar paratyphi B, Salmonella enterica subsp. enterica serovar typhimurium, Shigella sonnei, Shigella flexneri IIa, Staphylococcus aureus) - из патологического органного материала, полученного от павших сельскохозяйственных животных (молодняк крупного рогатого скота, свиньи).
Изучение антагонизма. Антагонистическую активность в отношении патогенов определяли методом перпендикулярных штрихов на чашках Петри с мясо-пептонным агаром (МПА, Meat Infusion Agar (Standart Infusion Agar), HiMedia) и выражали в мм зоны полного угнетения роста патогена [16]. Для оценки антагонистической активности штаммов в отношении C. albicans, с целью формирования одинаково благоприятных условий для роста и развития и патогена, и штамма-антагониста, в МПА добавляли 1% глюкозы (a-D глюкоза (декстроза) моногидрат, Cerestar). Испытуемый штамм бактерии-антагониста высевали штрихом (полоской) по диаметру чашки Петри с МПА, посевы инкубировали в термостате при температуре (37+0,5)°С в течение 48+1 ч. По окончании времени инкубации перпендикулярно к штриху антагониста подсевали тест-культуры патогенов, после чего посевы помещали в термостат при указанной ранее температуре еще на 20+1 ч. Если изучаемый штамм-антагонист оказывал антимикробное действие в отношении изучаемых патогенов, то последние росли на расстоянии от его штриха, которое и являлось количественной мерой антагонистической активности. Антагонистическую активность в отношении фитопатогенов определяли модифицированным методом агаровых блоков и выражали в виде ингибирующей активности [17]. Фитопатогенные грибы выращивали на картофельно-глю-козном агаре. Поверхность агаризованной питательной среды в чашках Петри засевалась бактериальными штаммами для получения равномерных газонов. Чашки инкубировали 48 ч при 28°С, затем на их поверхность в центр помещали грибные блоки диаметром 1 см, вырезанные из колоний грибов. В контроле среда использовалась без внесения бактерий. Измерение диаметров выросших грибных колоний проводилось на 5 сутки сокультивирова-ния при 25°С. Ингибирующую активность вычисляли, исходя из диаметров колоний в контрольном и опытном вариантах, по формуле (Дк-До)/Дк, где Дк - диаметр колоний в контроле, До - в опыте, выражая в %.
Данные в таблицах представлены в виде средней арифметической с доверительными интервалами. Статистическая обработка полученных данных выполнена в программе StatSoft STATISTICA for Windows 6.0.
Результаты исследования и обсуждение
Анализ антагонистической активности в отношении патогенных бактерий. Результаты определения антагонистической активности изученных штаммов в отношении патогенов представлены в табл. 1.
В зависимости от ширины зоны угнетения роста микробных тест-объектов можно выделить высокую (от 11 до 30 мм), среднюю (в пределах 4-10 мм) и слабую (до 4 мм) антагонистическую активность.
Наибольшее антагонистическое действие бацилл отмечено в отношении
St. aureus.
Т а б л и ц а 1
Антагонистическая активность бактерий в отношении патогенов, зона угнетения роста, мм
Наименование патогенного тест-микроорганизма Штаммы бактерий-антагонистов
Bs-1 Ba-1 Ba-2 Bl-1 Bl-2 Bl-3 Bl-4
C. albicans 359 18+2,35 20+3,06 20+3,12 5+0,49 4+1,08 5+0,54 12+1,41
C. albicans 604 12+0,87 30+2,19 13+1,50 8+0,76 10+0,82 10+0,90 6+0,54
C. albicans 616 30+2,28 30+2,06 15+2,04 10+1,88 10+1,16 5+0,66 6+0,49
C. freundii 1 2+0,12 5+0,27 7+0,60 2+0,17 2+0,28 2+0,09 2+0,32
C. freundii 2 4+0,40 5+0,61 5+0,58 2+0,20 3+0,44 2+0,18 4+0,60
C. freundii 17 10+0,70 5+0,56 5+0,70 2+0,19 2+0,22 3+0,30 4+0,41
E. coli 582 6±0,61 8+0,72 10+0,86 2+0,13 2+0,21 2+0,24 2+0,20
E. coli 2 6+0,44 10+1,09 10+1,23 2+0,33 2+0,30 2+0,22 2+0,38
E. coli 457 7+0,50 6+1,15 11+1,42 2+0,28 3+0,46 3+0,51 5+0,67
K. pneumonia 995 1+0,11 9+0,94 15+1,63 6+1,06 4+0,53 3+0,40 4+0,59
K. pneumonia 47 8+0,61 8+0,70 8+0,65 6+0,49 5+0,44 6+0,56 0
K. pneumonia 3/3 5+0,40 5+0,33 6+0,44 5+0,37 4+0,22 2+0,19 2+0,20
P. vulgaris 14 6+0,59 3+0,27 6+0,65 2+0,20 4+0,39 2+0,30 0
P. vulgaris 222 7+0,84 7+0,69 6+0,70 29+1,39 10+1,06 12+1,11 10+0,90
P. vulgaris 88 6+0,70 7+0,84 10+0,93 3+0,12 3+0,29 2+0,21 2+0,31
P. aeruginosa 884 15+1,04 2+0,19 6+0,70 3+0,31 2+0,22 2+0,19 2+0,34
P. aeruginosa 17 8+0,92 2+0,20 6+0,45 3+0,41 3+0,32 4+0,57 4+0,60
P. aeruginosa 12 2+0,12 4+0,30 3+0,32 3+0,27 4+0,36 3+0,19 3+0,29
Salmonella enterica subsp. enterica serovar choleraesuis 5+0,40 6+0,53 6+0,50 5+0,44 2+0,20 2+0,23 3+0,31
Salmonella enterica subsp. enterica serovar enteritidis 8+0,66 13+1,14 30+1,43 20+1,70 20+1,65 18+1,40 20+1,59
Salmonella enterica subsp. enterica serovar paratyphi B 5+0,39 7+0,69 6+0,65 2+0,15 2+0,22 2+0,13 3+0,31
Salmonella enterica subsp. enterica serovar typhimurium 5+0,41 10+1,02 10+1,14 4+0,52 3+0,33 3+0,30 2+0,20
Sh. sonnei 7+0,60 11+0,97 7+0,60 10+1,06 10+1,14 2+0,16 4+0,24
Sh. flexneri IIa 12+0,71 21+1,48 18+2,03 4+0,44 2+0,35 2+0,30 2+0,19
St. aureus 209 22+1,36 20+1,19 25+1,46 27+1,66 20+1,39 26+1,40 20+1,06
St. aureus 211 23+1,41 24+1,56 25+1,17 28+1,69 22+1,54 24+1,19 20+1,05
St. aureus 12 24+1,70 30+2,48 29+2,07 30+1,90 24+1,27 30+1,90 22+1,88
Высокой активностью в отношении C. albicans обладали штаммы B. sub-tilis ВКПМ В-16041, DSM 24613 (далее по тексту Bs-1), B. amyloliquefaciens ВКПМ В-10642, DSM 24614 (далее по тексту Ba-1) и B. amyloliquefaciens ВКПМ В-10643, DSM 24615 (далее по тексту Ba-2). Остальные штаммы бацилл проявили к данному патогену среднюю антагонистическую активность.
Т а б л и ц а 2
ингибирующая активность бактерий в отношении фитопатогенов, %
Наименование фитопатогенного тест-микроорганизма Штаммы бактерий-антагонистов
Bs-1 Ba-1 Ba-2 Bl-1 Bl-2 Bl-3 Bl-4
A. solani A7 АКТЛ 112 68,5+1,19 71,4 +2,07 71,4+1,55 71,4+1,80 65,7+2,19 68,6+2,23 37,1+1,07
A. solani А7 НКЛ 2в 66,7+2,09 50,0 +1,85 56,7+1,90 66,7+2,44 66,7+2,70 66,7+2,19 66,7+2,17
A. solani А7 АКТЛ 125 3б 66,7+2,03 66,7 +2,12 66,7+2,09 66,7+2,11 66,7+2,10 66,7+2,09 60,0+1,90
B. sorokiniana ВК11М В-532 81,8+2,49 81,8 +2,29 81,8+2,47 36,4+1,16 41,8+1,50 67,3+2,07 27,3+1,26
B. cinerea M-01 62,5+1,92 62,5 +2,05 62,5+2,13 53,3+1,88 51,1+1,80 55,6+1,94 22,2+0,98
B. cinerea ВКПМ В-1006 50,0+2,24 50,0 +2,17 50,0+2,01 0 0 0 0
B. cinerea M-4-2 68,7+2,30 68,7 +2,46 68,7+2,41 68,8+2,03 48,6+2,11 68,7+1,95 37,5+0,88
Fusarium graminearum ВКПМ В-147 54,5+1,74 54,5 ±1,83 54,5+1,80 50,0+1,75 31,8+1,40 45,4+1,66 31,8+1,19
Fusarium solani ВКПМ В-163 44,4+1,33 44,4 +1,40 44,4+1,37 0 0 33,3+1,18 0
A. solani A7 АКТЛ 112 68,5+2,20 71,4 +2,69 71,4+2,55 71,4+2,71 65,7+2,38 68,6+2,30 37,1+1,15
A. solani А7 НКЛ 2в 66,7+2,07 50,0 +1,92 56,7+1,84 66,7+2,04 66,7+2,12 66,7+2,29 66,7+2,31
A. solani А7 АКТЛ 125 3б 66,7+2,18 66,7 +2,81 66,7+2,60 66,7+2,55 66,7+2,74 66,7+2,15 60,0+2,18
B. sorokiniana ВК11М В-532 81,8+2,96 81,8 +2,70 81,8+2,66 36,4+1,18 41,8+1,60 67,3+2,00 27,3+0,93
B. cinerea M-01 62,5+2,45 62,5 +1,97 62,5+2,17 53,3+1,70 51,1+1,64 55,6+1,50 22,2+0,98
B. cinerea ВКПМ В-1006 50,0+1,74 50,0 +1,66 50,0+1,54 0 0 0 0
B. cinerea M-4-2 68,7+2,15 68,7 +2,26 68,7+2,33 68,8+2,40 48,6+1,83 68,7+2,01 37,5+1,14
Fusarium graminearum ВКПМ В-147 54,5+1,59 54,5 +1,60 54,5+1,83 50,0+1,19 31,8+1,62 45,4+1,18 31,8+0,87
Fusarium solani ВКПМ В-163 44,4+0,75 44,4 +1,13 44,4+1,04 0 0 33,3+0,60 0
Fusarium chlamydosporum ВКПМ В-899 76,2+2,29 76,2 +2,61 64,3+2,16 52,4+1,67 47,6+1,32 61,9+1,70 16,7+0,29
Fusarium solani К 6 68,9+2,09 77,8 +2,73 77,8+2,44 40,0+1,90 40,0+1,33 48,9+1,12 0
Fusarium oxysporum ВКПМ В-349 76,2+2,09 76,2 +2,40 76,2+2,33 47,6+2,19 64,3+1,96 52,4+1,47 23,8+0,85
Fusarium avenacium ВКПМ В-623 76,1+2,44 76,2 +3,85 76,2+2,41 59,5+1,94 64,3+1,87 64,3+2,03 23,8+0,70
Ph. infestans расы 3,4 80,0+2,55 80,0 +2,79 80,0+2,64 66,0+1,95 66,0+2,04 68,0+2,17 50,0+1,03
Ph. infestans расы 1-11 70,0+2,69 75,0 +2,70 75,0+2,13 62,5+1,98 57,5+1,72 67,5+2,03 25,0+0,81
Все штаммы показали наличие бактерицидного действия средней и слабой степени в отношении других использованных в опыте грамотрицатель-ных бактерий - C. freundii, E. coli, K. pneumonia, P. vulgaris, P. aeruginosa, Salmonella sp., Sh. sonnei, Sh. flexneri IIa. Зона угнетения роста составляла в среднем 2-10 мм в зависимости от вида тест-объекта.
Таким образом, все изученные штаммы бактерий B. subtilis, B. amyloliquefaciens и B. licheniformis подавляли рост патогенных бактерий, хотя и в различной степени.
Анализ антагонистической активности в отношении фитопатогенных грибов. Штаммы бактерий-антагонистов проявили ингибирующие свойства в отношении большинства использованных в опыте фитопатогенов (см. табл. 2).
На возбудителя альтернариоза A. solani наибольшее ингибирующее действие оказали штаммы B. amyloliquefaciens Ba-1 и Ba-2, B. licheniformis ВКПМ В-10561, DSM 24609 (далее по тексту Bl-1) и B. subtilis Bs-1. В подавлении роста возбудителя корневых гнилей B. sorokiniana высокую активность проявили штаммы B. subtilis Bs-1, B. amyloliquefaciens Ba-1 и Ba-2. Эти же штаммы были максимально активными по сравнению с остальными по отношению к возбудителю серой гнили растений B. cinerea. В то же время установлено, что штаммы B. licheniformis не подавляли роста B. cinerea (штамм ВКПМ В-1006). Против фитопатогенных грибов рода Fusarium и возбудителя фитофтороза пасленовых культур Ph. infestans все изученные нами бактерии Bacillus spp. показали высокий уровень ингибирующей активности. У бактерий B. licheniformis Bl-1; ВКПМ В-10562, DSM 24610 (далее по тексту Bl-2) и ВКПМ В-10564, DSM 24612 (далее по тексту Bl-4) отсутствовала антагонистическая активность в отношении F. solani ВКПМ В-163.
Проведенные исследования показали, что помимо бактерицидного действия, которое штаммы B. subtilis, B. amyloliquefaciens и B. licheniformis оказывали на патогенные бактерии, они проявляют ингибирующую активность в отношении фитопатогенных грибов. Ряд авторов указывал на подобное антибактериальное и фунгистатическое действие спорообразующих бактерий [18-21]. Как отмечено выше, это связано с тем, что перечисленные бактерии в процессе жизнедеятельности выделяют антимикробные вещества широкого спектра действия [22, 23]. Поэтому спорообразующие бактерии применяют в качестве действующего начала как лекарственных препаратов [24, 25], так и экологически безопасных средств защиты растений от болезней [26, 27].
Нами установлено наличие антагонизма изученных штаммов бактерий рода Bacillus в опытах in vitro в отношении бактерий - возбудителей болезней животных и человека - C. freundii, E. coli, K. pneumonia, P. vulgaris, P. aeruginosa, Salmonella sp., Sh. sonnei, Sh. flexneri IIa, St. aureus и C. albicans. Что касается антагонистической активности в отношении фитопатогенных грибов, то добавление изученных штаммов в питательную среду подавляло рост опасных возбудителей болезней растений A. solani, B. sorokiniana, Ph. infestans и грибов рода Fusarium в большей или меньшей степени в за-
висимости от штамма тест-микроорганизма. Для одного из использованных в эксперименте штаммов - B. cinerea ВКПМ В-1006 - не выявлено ингиби-рующего действия со стороны бактерий-антагонистов B. licheniformis. Наши результаты согласуются с данными, полученными другими авторами в работах, касающихся патогенных бактерий Corynebacterium diphteriae, St. au-reus, Streptococcus haemolyticus, P. aeruginosa [28] и фитопатогенных грибов [29, 30]. Так, Н.И. Габриэлян с соавторами [28] показали, что штамм бактерии B. subtilis, входящий в состав препарата споробактерин, обладает высокой антагонистической активностью в отношении стафилококков (St. aureus, St. epidermidis, St. saprophyticus), дрожжеподобных грибов Candida spp. и энтерококков (Enterococcus faecium). В то же время авторы отмечают, что среди изученных штаммов другого вида энтерококка - E. faecalis - лишь 50% были чувствительны к штамму-антагонисту. Авторы указывают, что изученный ими штамм B. subtilis эффективно подавлял лишь 36,8% штаммов патогенных бактерий, среди которых были E. coli, Klebsiella spp., Serratia spp. и др., тогда как изученные в нашей работе штаммы бактерий-антагонистов B. subtilis, B. amyloliquefaciens и B. licheniformis в 100% случаев ингибировали перечисленных патогенов.
Продемонстрировано наличие у B. subtilis ингибирующей активности по отношению к таким фитопатогенным грибам, как A. alternata, B. cinerea, B. sorokiniana, Cladosporium sp., F. avenacium, F. oxysporum и др. [31]. При этом отмечено, что некоторые из изученных авторами штаммов обладали 100%-ной ингибирующей активностью в отношении B. cinerea и F. oxyspo-rum, чего не наблюдалось в наших экспериментах.
Наблюдающиеся различия в оценке антагонистической активности бактериальных штаммов, представленные в разных работах, могут быть связаны с разным географическим происхождением изучаемых культур [32]. Различия в антагонистической активности против штаммов патогенов одного вида можно объяснить вариабельным составом пептидогликана бактериальной клетки, который является регулятором взаимоотношений в системе «прокариот - прокариот», а также регулятором внутриродового и межродового антагонизма в условиях межмикробных взаимодействий [33].
Заключение
Таким образом, в результате проведенных исследований был выявлен антагонистический потенциал природных сибирских штаммов бактерий рода Bacillus. Все изученные штаммы бактерий-антагонистов B. subtilis, B. amy-loliquefaciens и B. licheniformis проявили бактерицидное и фунгистатическое действия in vitro на чистых культурах патогенных бактерий и фитопатоген-ных грибов. Подавление штаммами-антагонистами роста патогенов, вызывающих болезни сельскохозяйственных животных и растений, перспективно для создания биопрепаратов, обеспечивающих получение экологически
безопасной продукции животноводства и растениеводства, что важно для решения проблем здорового питания населения.
Литература
1. Price N.P.J., Rooney A.P. et al. Mass spectrometry analysis of lipopeptides from Bacillus
strains isolated from diverse geographical locations // FEMS Microbiology Letters. 2007. №. 271. P. 83-89.
2. Balaban N.P., Mardanova A.M., Malikova L.A. et al. Isolation and characterization of Bacil-
lus amyloliquefaciens H2 glutamyl endopeptidase that is secreted in stationary phase of culture growth // Annals Microbiology. 2008. Vol. 58. № 4. P. 697-704.
3. Бала С.С. Антагонистическая активность пробиотиков на основе аэробных спорообра-
зующих бактерий // Успехи современного естествознания. 2004. № 12. С. 84.
4. Chiou A.L., Wu W.S. Formulation of Bacillus amyloliquefaciens B190 for control of lily grey
mould (Botrytis elliptica) // Journal of Phytopathology. 2003. Vol. 151, № 1. P. 13-18.
5. Chebotar V.K., Makarova N.M., Shaposhnikov A.I. Antifungal and phytostimulating charac-
teristics of Bacillus subtilis Ch-13 rhizospheric strain, producer of biopreparations // Appl. Biochem. Microbiol. 2009. № 4. P. 419-423.
6. Пушкарев А.М., Туйгунова В.Г., Зайнуллин Р.Р. и др. Использование антагонистических
свойств бактерий Bacillus .subtilis в терапии госпитальной инфекции мочевых путей // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2007. № 2. C. 90-93.
7. Бондаренко В.М., Воробьев А.А. Дисбиозы и препараты с пробиотической функцией //
Журнал микробиологии. 2004. № 3. C. 84-92.
8. Лазовская А.Л., Гришина Н.В., Воробьева З.Г. и др. Антагонистическая активность
споровых пробиотиков и влияние на лекарственную чувствительность микобакте-рий туберкулеза // Вестник Российского университета дружбы народов. Сер. Медицина. 2010. № 1. C. 18-24.
9. Ушакова Н.А., Котенкова Е.В., Козлова А.А., Нифатов А.В. Изучение механизмов пробиотического действия штамма Bacillus subtilis 8130 // Прикладная биохимия и микробиология. 2006. Т. 42, № 3. С. 285-291.
10. ФедороваМ.П., Тарабукина Н.П., НеустроевМ.П., КириллинаВ.И. Применение пробиотиков из штаммов бактерий Bacillus subtilis для получения здоровых поросят // Зоотехния. 2011. №2. C. 16-17.
11. Беркольд Ю.И., Иванова А.Б. Влияние пробиотических препаратов на основе Bacillus subtilis на физиологические показатели роста цыплят-бройлеров // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. 2006. № 4. С. 45-48.
12. Хазиахметов Ф.С., Башаров А.А., Нугуманов Г.О. Оценка эффективности комплексного препарата пробиотика с биологически активными веществами при выращивании телят // Проблемы биологии продуктивных животных. 2011. № 2. С. 106-109.
13.ХайруллинР.М., Егоршина А.А., ЛукьянцевМ.А. и др. Биологические особенности эн-дофитных штаммов Bacillus subtilis как перспективной основы новых биопрепаратов // Аграрная Россия. 2011. №1. С. 49-53.
14. Пусенкова Л.И., Глез В.М., Зейрук В.Н. и др. Биопрепараты для защиты картофеля от болезней // Защита и карантин растений. 2010. № 10. С. 26-28.
15. Рудаков В.О., Морозов Д.О., Седых А.Н. Способ, позволяющий сократить потери сахарной свеклы в кагатах // Защита и карантин растений. 2010. № 6. С. 66-67.
16. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М. : МГУ, Наука, 2004. 528 с.
17. Соколова М.В. Хитинолитическая и антигрибная активность трех штаммов бактерии рода Serratia // Современная биотехнология в решении проблем защиты растений. СПб., 1995. С. 214-224.
18. Волков М.Ю., Ткаченко Е.И., Воробейников Е.В. и др. Метаболиты Bacillus subtilis как новые перспективные пробиотические препараты // Ж. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 2007. № 2. С. 75-80.
19. Бойко Н.В., Туряница А.И., Попович Е.П. и др. Антагонистическое действие культур Bacillus subtilis на бактерии рода Klebsiella // Микробиологический журнал. 1989. № 1. С. 87-91.
20. Актуганов Г.Э., Мелентьев А.И., Кузьмина Л.Ю. и др. Хитинолитическая активность бактерий Bacillus Cohn. - антагонистов фитопатогенных грибов // Микробиология. 2003. Т. 72, № 3. С. 356-360.
21. Оришак Е.А., Бойцов А.Г., Нилова Л.Ю. Изучение антагонистической активности споросодержащих пробиотиков // Профилактическая и клиническая медицина. 2009. № 3. С. 199-202.
22. Кудрявцева, В.А., Осадчая А.И., Сафронова Л.А. Аэробы рода Bacillus как источник продуцентов литических ферментов // Биотехнология. 2004. № 4. С. 24-33.
23. Михайлова H.M, Блинкова Л.П, Гатауллин А.Г. Биологические свойства новых изо-лятов Bacillus subtilis // Журнал микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии. 2007. № 4. С. 41-46.
24. Осипова И.Г., Михайлова Н.А., Сорокулова И.Б. и др. Споровые пробиотики // Журнал микробиологии. 2003. № 3. С. 113-119.
25. Никитенко В.И. Медицинский институт Оренбурга представляет препарат споробак-терин // JAMA. 1991. Vol. 64. № 1. P. 31.
26. Кузьмина Л.Ю., Логинов О.Н., Бойко Т.Ф. и др. Эффективность бактериальных препаратов при защите растений яровой пшеницы от твердой головни // Сельскохозяйственная биология. 2003. № 5. С. 69-73.
27. Белов Л.П., Шкаликов В.А., Дунаева Ю.С. Возможности использования препарата на основе Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis в растениеводстве // АГРО XXI. 2008. № 4-6. С. 35.
28. ГабриэлянН.И., ДавыдовД.С., ГорскаяЕ.М. и др. Антагонизм in vitro споробактерина в отношении нозокомиальных штаммов микробов // Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2008. № 6. С. 12-18.
29. Agarry O.O., Akinyosoye F.A., Adetuyi F.C. Antagonistic properties of microogranisms associated with cassava (Manihot esculenta Crantzj products // African Journal of Biotechnology. 2005. Vol. 4. P. 627-632.
30. Chan Yiu-Kwok, SavardM.E., ReidL.M. et al. Identification of lipopeptide antibiotics of a Bacillus subtilis isolate and their control of Fusarium graminearum diseases in maize and wheat // BioControl. 2009. Vol. 54. P. 567-574.
31. Минина Т.С., Захарова Р.Ш., Уразбахтина Н.А. и др. Новые эндофитные штаммы Bacillus subtilis как основа биофунгицидов // Вестник Казанского ГАУ. 2009. № 2. С. 118-123.
32. Beric T., Kojic M., Stancovic S., Topisirovic L. et al. Antimicrobial Activity of Bacillus sp. natural isolates and their potential use in the biocontrol of phytopathogenic bacteria // Food Technology and Biotechnology. 2012. Vol. 50. P. 25-31.
33. Семенов А.В. Характеристика антагонистической активности Staphylococcus aureus при межмикробных взаимодействиях // Вестник Томского государственного университета. Биология. 2011. № 3 (15). С. 56-66.
Поступила в редакцию 01.10.2013 г.
Авторский коллектив:
Леляк Анастасия Александровна - канд. биол. наук, зав. лабораторией НПФ «Исследовательский центр» (наукоград Кольцово, Новосибирская область, Россия). E-mail: [email protected] Штерншис Маргарита Владимировна - д-р биол. наук, профессор кафедры энтомологии и биологической защиты растений Новосибирского государственного аграрного университета (г Новосибирск, Россия). E-mail: [email protected]
Tomsk State University Journal of Biology. 2014. № 1 (25). Р. 42-55
Anastasya A. Lelyak1, Margarita V. Shternshis2
1 Research Center, Ltd, Scientific Town Koltsovo, Novosibirsk region, Russian Federation.
E-mail: [email protected]
2 Department of Entomology and Biological Control, Novosibirsk State Agrarian University,
Novosibirsk, Russian Federation. E-mail: [email protected]
Antagonistic potential of siberian strains of Bacillus spp. towards agents causing animal and plant diseases
Bacteria of Bacillus genus are known as the producers of biologically active substances (BAS) including enzymes and antibiotics, whose diversity depends on geographical origin of isolation. BAS production causes high bactericidal and bacteriostatic activity of Bacillus spp. towards zoopathogenic Gram-positive and Gram-negative bacteria and also fungicidal and fungistatic activity towards phyto-pathogenic fungi. In veterinary, preparations and fodder additives, including bacteria of Bacillus genus are used for cattle-plague decrease and weight increase of animals. In plant protection against agents causing diseases the efficacy of Bacillus spp. as the basis of biological fungicides is shown in fields and greenhouses.
The aim of this article is to evaluate Siberian wild strains of Bacillus genus bacteria as potential basis of biological formulations for animal and plant health management. The bacterial strains Bacillus subtilis, Bacillus amyloliquefaciens and Bacillus licheniformis were isolated from forest soil of Novosibirsk region and were registered in All-Russian collection of industrial microorganisms (VKPM) and German collection of microorganisms and cell cultures (DSMZ). Pure cultures of phytopathogenic fungi Bipolaris sorokiniana VKPM В-532, Botyrtis cinerea VKPM В-1006, Fusarium graminearum VKPM В-147, F. solani VKPM В-163, F chlamydosporum VKPM В-899, F oxysporum VKPM В-349 and F avenacium VKPM В-623 were received from VKPM. Other test-cultures including the strains of phytopathogenic fungi Alternaria solani, Botrytis cinerea, Fusarium solani and Phytophthora infestans, were isolated by authors from infected plants, and the strains of zoopathogenic bacteria Candida albicans, Citrobacter freundii, Escherichia coli, Klebsiella pneumonia, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosae, Salmonella choleraesuis, S. enteritidis, S. peretyphi, S. typhimurium, Shigella sonnei, Sh. flexneri Iia and Staphylococcus aureus were isolated from biological material of animal origin.
The strongest antagonistic action of Siberian Bacillus strains towards zoopath-ogens was observed against St. aureus. Towards C. albicans, the strains B. subtilis VKPM В-16041, DSM 24613, B. amyloliquefaciens VKPM В-10642, DSM 24614, VKPM В-10643 and DSM 24615 were shown to possess high activity. The rest of the bacteria revealed moderate antagonistic activity towards this pathogen. To-
www.journal.tsu/biology
wards other Gram-negative bacteria used in the experiments - C. freundii, E. coli, K. pneumonia, P. vulgaris, P. aeruginosa, Salmonella sp., Sh. sonnei, Sh. flexneri Ila all Bacillus strains revealed bactericidal action of moderate and weak degree. These very strains of antagonistic bacteria were shown to have inhibitory properties towards most phytopathogens used in the experiments. The highest inhibitory effect towards A. solani causing agent was observed by strains B. amyloliquefa-ciens Ba-1 and Ba-2, B. licheniformis VKPM B-10561, DSM 24609 and B. subtilis Bs-1. The strains B. subtilis Bs-1, B. amyloliquefaciens Ba-1 and Ba-2B revealed high activity in growth suppression of root rot causing agent B. sorokiniana. The same strains were very active compared with others towards plant grey mold causing agent B. cinerea. Simultaneously, the strains B. licheniformis did not suppress B. cinerea growth. All Bacillus spp., studied here, showed a high level of inhibitory activity towards Solanaceae phytophtora causing agent Ph. infestans. No antagonistic activity towards F. solani VKPM B-163 was displayed by bacterial strains B. licheniformis Bl-1; VKPM B-10562, DSM 24610, VKPM B-10564 and DSM 24612. The antagonistic potential of Siberian strains of bacteria of Bacillus genus towards zoopathogenic and phytopathogenic microorganisms revealed in this work testify of promising study of isolated antagonistic bacteria as a basis of ecologically safe biopreparations for plant and animal health management.
Key words: Bacillus subtilis; Bacillus amyloliquefaciens; Bacillus licheniformis; antagonistic activity; zoopathogenic bacteria; phytopathogenic fungi.
Received, October 01, 2013
References
1. Price NPJ, Rooney AP et al. Mass spectrometric analysis of lipopeptides from Bacillus strains
isolated from diverse geographical locations. FEMS Microbiology Letters. 2007;271:83-89.
2. Balaban NP, Mardanova AM, Malikova LA et al. Isolation and characterization of Bacillus
amyloliquefaciens H2 glutamyl endopeptidase that is secreted in stationary phase of culture growth. Annals Microbiology. 2008;58(4):697-704.
3. Bala SS. Antagonisticheskaya aktivnost' probiotikov na osnove aerobnykh sporoobrazuyushchikh bakteriy. Uspekhi sovremennogo estestvoznaniya. 2004. No 12. PP. 84. [Bala SS. Antagonistic activity of probiotics on the basis of aerobic spore-forming bacteria. Uspehi sovremennogo estestvoznanija. 2004;12:84.] In Russian
4. Chiou AL, Wu WS. Formulation of Bacillus amyloliquefaciens B190 for control of lily grey
mould (Botrytis elliptica). J of Phytopathology. 2003;151(1):13-18.
5. Chebotar VK, Makarova NM, Shaposhnikov AI. Antifungal and phytostimulating characteristics of Bacillus subtilis Ch-13 rhizospheric strain, producer of biopreparations. ApplBiochemMicrobiol. 2009;4:419-423.
6. Pushkarev A.M., Tuygunova V.G., Zaynullin R.R. i dr. Ispol'zovanie antagonisticheskikh
svoystv bakteriy Bacillus subtilis v terapii gospital'noy infektsii mochevykh putey. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii i immunologii. 2007. No 2. PP. 90-93. [Pushkarev AM, Tui-gunova VG, Zainullin RR, Kuznetsova TN, Gabidullin YuZ. Use of antagonistic properties of Bacillus subtilis bacteria for treating nosocomial urinary tract infections. J. of Microbiology, Epidemiology andImmunobiology. 2007;2:90-93.] In Russian
7. Bondarenko V.M., Vorob'ev A.A. Disbiozy i preparaty s probioticheskoy funktsiey. Zhurnal
mikrobiologii. 2004. No 3. PP. 84-92. [Bondarenko VM, Vorobyev AA. Dysbiosis and pro-biotic preparations. Journal of Microbiology. 2004;3:84-92.] In Russian
8. Lazovskaya A.L., Grishina N.V., Vorob'eva Z.G. i dr. Antagonisticheskaya aktivnost' sporo-
vykh probiotikov i vliyanie na lekarstvennuyu chuvstvitel'nost' mikobakteriy tuberkuleza.
Vestnik Rossiyskogo universiteta druzhby narodov. Ser. meditsina. 2010. No 1. PP. 18-24. [Lazovskaya AL, Grishina NV, Vorobyeva ZG, Slinina KN, Kulchidskaya MA, Vasilieva EA. Antagonistic activity of bacterial spore former probiotics and effects on tuberculosis mycobacteria drug susceptibility. PFUR Bulletine. Medicine. 2010;1:18-24.] In Russian
9. Ushakova N.A., Kotenkova E.V., Kozlova A.A., Nifatov A.V. Izuchenie mekhanizmov pro-
bioticheskogo deystviya shtamma Bacillus subtilis 8130. Prikladnaya biokhimiya i mik-robiologiya. 2006. Vol. 42, No 3. PP. 285-291. [Ushakova NA, Kotenkova EV, Kozlova AA, Nifatov AV. Study of the mechanisms of Bacillus subtilis 8130 probiotic activity. Appl Biochem Microbiol. 2006;42(3):285-291.] In Russian
10. Fedorova M.P., Tarabukina N.P., Neustroev M.P., Kirillina V.I. Primenenie probiotikov iz shtammov bakteriy Bacillus subtilis dlya polucheniya zdorovykh porosyat. Zootekhniya. 2011. No 2. PP. 16-17. [Fedorova MP, Tarabukina NP, Neustroev MP, Kirillina VI. Application of antibiotics from Bacillus subtilis strains in growing healthy hoglings. Zootechniya. 2011;2:16-17.] In Russian
11. Berkol'd Yu.I., Ivanova A.B. Vliyanie probioticheskikh preparatov na osnove Bacillus subtilis na fiziologicheskie pokazateli rosta tsyplyat-broylerov. Sibirskiy vestnik sel'skokhozyaystvennoy nauki. 2006. No 4. PP. 45-48. [Berkold YuI, Ivanova AB. Effect of probiotic preparations on the basis of Bacillus subtilis on physiological growth indices of chicken broilers. Siberian Herald of Agricultural Science. 2006;4:45-48.] In Russian
12. Khaziakhmetov F.S., Basharov A.A., Nugumanov G.O. Otsenka effektivnosti komplek-snogo preparata probiotika s biologicheski aktivnymi veshchestvami pri vyrashchivanii telyat. Problemy biologii produktivnykh zhivotnykh. 2011. No 2. PP. 106-109. [Khaziakhmetov PhS, Basharov AA, Nugumanov GO. Efficacy assessment of complex probiotic preparation with bioactive substances for milk fed calves. Problems of Productive Animal Biology. 2011;2:106-109.] In Russian
13. Khayrullin R.M., Egorshina A.A., Luk'yantsev M.A. i dr. Biologicheskie osobennosti endofitnykh shtammov Bacillus subtilis kak perspektivnoy osnovy novykh biopreparatov. Agrarnaya Rossiya. 2011. No 1. PP. 49-53. [Khairullin RM, Egorshina AA, Luk'yantsev MA, Urazbakhtina NA, Irgalina RSh, Sakhabutdinova AR. Biological features of Bacillus subtilis endophytic strains as the perspective base of new biopreparations. Agrarnaya Russia. 2011;1:49-53.] In Russian
14. Pusenkova L.I., Glez V.M., Zeyruk V.N. i dr. Biopreparaty dlya zashchity kartofelya ot bolezney. Zashchita i karantin rasteniy. 2010. No 10. PP. 26-28. [Pusenkova LI, Gles VM, Zeiruk VN. Biopreparations for potato protection from diseases. Zashchita I Karantin Rasteniy. 2010;10:26-28.] In Russian
15. Rudakov V.O., Morozov D.O., Sedykh A.N. Sposob, pozvolyayushchiy sokratit' poteri sakharnoy svekly v kagatakh. Zashchita i karantin rasteniy. 2010. No 6. PP. 66-67. [Rudakov VO, Morozov DO, Sedykh AN. Method allowing to reduce losses of sugar beet in clamps. Zashchita I Karantin Rasteniy. 2010;6:66-67.] In Russian
16. Egorov N.S. Osnovy ucheniya ob antibiotikakh. M.: MGU, Nauka, 2004. 528 pp. [Egorov NS. Fundamentals of antibiotics theory. Moscow: Moscow state university; Nauka, 2004. 528 p.] In Russian
17. Sokolova M.V Khitinoliticheskaya i antigribnaya aktivnost' trekh shtammov bakterii roda Serratia. Sovremennaya biotekhnologiya v reshenii problem zashchity rasteniy. SPb., 1995. PP. 214-224. [Sokolova MV Chitinolytic and antifungal activity of three Serratia strains. Modern biotechnology in solving plant protection problems. Saint-Petersburg: 1995. p. 214-224.] In Russian
18. Volkov M.Yu., Tkachenko E.I., Vorobeynikov E.V. i dr. Metabolity Bacillus subtilis kak novye perspektivnye probioticheskie preparaty. Zh. mikrobiol. epidemiol. i immunobiol. 2007. No 2. PP. 75-80. [Volkov MYu, Tkachenko EI, Vorobeichikov EV, Sinitsa AV. Bacillus subtilis metabolites as a novel promising probiotic preparation. J. of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2007;2:75-80.] In Russian
19. Boyko N.V., Turyanitsa A.I., Popovich E.P. i dr. Antagonisticheskoe deystvie kul'tur Bacillus subtilis na bakterii roda Klebsiella. Mikrobiologicheskiy zhurnal. 1989. No 1. PP. 87-91. [Bojko NV, Turianitsa AI, Popovich EP, Viunitskaia VA. Antagonistic action of Bacillus subtilis cultures on bacteria of the genus Klebsiella. Mikrobiologicheski zhurnal. 1989;1:87-91.] In Russian
20. Aktuganov G.E., Melent'ev A.I., Kuz'mina L.Yu. i dr. Khitinoliticheskaya aktivnost' bak-teriy Bacillus Cohn. - antagonistov fitopatogennykh gribov. Mikrobiologiya. 2003. Vol. 72, No 3. PP. 356-360. [Aktuganov GE, Melentiev AI, Kuzmina LY, Galimzyanova NF, Shiro-kov AV. Chitinolytic activity of bacteria Bacillus Cohn. as antagonists of phytopathologic fungi. Mikrobiologiya. 2003;72(3):356-360.] In Russian
21. Orishak E.A., Boytsov A.G., Nilova L.Yu. Izuchenie antagonisticheskoy aktivnosti spo-rosoderzhashchikh probiotikov. Profilakticheskaya i klinicheskaya meditsina. 2009. No 3. PP. 199-202. [Orishak EA, Boitsov AG, Nilova LY. Study of antagonistic activity of spore-containing probiotics. Preventivnaja I klinicheskaja medizina. 2009;3:199-202.] In Russian
22. Kudryavtseva, V.A., Osadchaya A.I., Safronova L.A. Aeroby roda Bacillus kak istochnik produtsentov liticheskikh fermentov. Biotekhnologiya. 2004. No 4. PP. 24-33. [Kudryavtseva VA, Osadchaja AI, Safronova LA Aerobic organisms of the genus Bacillus as a source of lytic enzymes producers. Biotechnologija. 2004;4:24-33.] In Russian
23. Mikhaylova H.M, Blinkova L.P, Gataullin A.G. Biologicheskie svoystva novykh izoly-atov Bacillus subtilis. Zhurnal mikrobiologii, epidemiologii, immunobiologii. 2007. No 4. PP. 41-46. [Mikhailova NM, Blinkova LP, Gataulhn A.G. Biologic characteristics of new Bacillus subtilis isolates. J. of Microbiology, Epidemiology and Immunobiology. 2007;4:41-46.] In Russian
24. Osipova I.G., Mikhaylova N.A., Sorokulova I.B. i dr. Sporovye probiotiki. Zhurnal mikrobiologii. 2003. No 3. PP. 113-119. [Osipova IG, Mikhailova NA, Sorokulova IB, Vasilieva EA, Gaiderov AA. Spore probiotics. Zhurnal mikrobiologii. 2003;3:113-119.] In Russian
25. Nikitenko V.I. Meditsinskiy institut Orenburga predstavlyaet preparat sporobakterin. JAMA. 1991. Vol. 64. No 1. PP. 31. [Nikitenko VI. Orenburg medical institute presents preparation "sporobakterin". JAMA. 1991;64(1):31.] In Russian
26. Kuz'mina L.Yu., Loginov O.N., Boyko T.F. i dr. Effektivnost' bakterial'nykh preparatov pri zashchite rasteniy yarovoy pshenitsy ot tverdoy golovni. Sel'skokhozyaystvennaya biologiya. 2003. No 5. PP. 69-73. [Kuzmina LY, Loginov ON, Bojko TF, Isaev RF, Sveshnikova EV, Melentiev AI. Effectiveness of bacterial preparations at protecting spring wheat plants from stinking smut. Selskokhoziastvennaia biologiya. 2003;5:69-73.] In Russian
27. Belov L.P., Shkalikov V.A., Dunaeva Yu.S. Vozmozhnosti ispol'zovaniya preparata na osnove Bacillus subtilis i Bacillus licheniformis v rastenievodstve. AGRO XXI. 2008. No 4-6. PP. 35. [Belov LP, Shkalikov VA, Dunaeva YS. Possibilities of using preparations on the basis of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis in plant science. Agro XXI. 2008;4-6:35.] In Russian
28. Gabrielyan N.I., Davydov D.S., Gorskaya E.M. i dr. Antagonizm in vitro sporobakterina v otnoshenii nozokomial'nykh shtammov mikrobov. Vestnik transplantologii i iskusstven-nykh organov. 2008. No 6. PP. 12-18. [Gabrielyan NI, Davydov DS, Gorskaya EM, Spirina TS, Osipova IG. In vitro antagonism of Sporobacterin against nosocomial strains of microbes. Vestnik transplantologii I iskusstvennyh organov. 2008;6:12-18.] In Russian
29. Agarry OO, Akinyosoye FA, Adetuyi FC. Antagonistic properties of microorganisms associated with cassava (Manihot esculenta CrantzJ products. African J. Biotechnol. 2005;4:627-632.
30. Chan Yiu-Kwok, Savard ME, Reid LM et al. Identification of lipopeptide antibiotics of a Bacillus subtilis isolate and their control of Fusarium graminearum diseases in maize and wheat. BioControl. 2009;54:567-574.
31. Minina T.S., Zakharova R.Sh., Urazbakhtina N.A. i dr. Novye endofitnye shtammy Bacillus subtilis kak osnova biofungitsidov. Vestnik Kazanskogo GAU. 2009. No 2. PP. 118123. [Minina TS, Zakharova RS, Urazbakhtina NA, Khairulin RM. Novel endophytic Bacillus subtilis strains as biofungicide basis. Vestnik of Kazan State Agrarian University. 2009;2:118-123.] In Russian
32. Beric T, Kojic M, Stancovic S, Topisirovic L. et al. Antimicrobial activity of Bacillus sp. natural isolates and their potential use in the biocontrol of phytopathogenic bacteria. Food Technology and Biotechnology. 2012;50:25-31.
33. Semenov A.V. Kharakteristika antagonisticheskoy aktivnosti Staphylococcus aureus pri mezhmikrobnykh vzaimodeystviyakh. Vestnik Tomskogo gosudarstvennogo universiteta. Biologiya. 2011. No 3(15). PP. 56-66. [Semenov AV. Characteristic of antagonistic activity of Staphylococcus aureus in cross-species interaction between microorganisms. Tomsk State University Journal of Biology. 2011;3(15):56-66.] In Russian, English summary
