CC BY
82
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
Ксения Анатольевна Архипова1, Вера Александровна Рыбко2,
Валерия Владимировна Землякова3, Олег Петрович Близнюков4, Дмитрий Владимирович Мартынков5, Галина Ивановна Губина6,
Ирина Борисовна Зборовская7
ЭКСПРЕССИЯ КАВЕОЛИНА-1 В ОПУХОЛЯХ МЯГКИХ ТКАНЕЙ
1 Аспирант, лаборатория регуляции клеточных и вирусных онкогенов НИИ канцерогенеза ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
2 Научный сотрудник, лаборатория регуляции клеточных и вирусных онкогенов НИИ канцерогенеза ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
3 К. б. н., научный сотрудник, лаборатория эпигенетики Медико-генетического научного центра РАМН (115478, РФ, г. Москва, ул. Москворечье, д. 1)
4 К. м. н., старший научный сотрудник, отделение патологической анатомии опухолей человека НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
5 Аспирант, отделение общей онкологии НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им.. Н. Н. Блохина РАМН
(115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
6 К. м. н., ведущий научный сотрудник, отделение абдоминальной онкологии НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
7 К. б. н., заведующая лабораторией регуляции клеточных и вирусных онкогенов НИИ канцерогенеза ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН (115478, РФ, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24)
Адрес для переписки: 115478, г. Москва, Каширское шоссе, д. 24, НИИ канцерогенеза ГУ РОНц им. Н. Н. Блохина РАМН, лаборатория регуляции клеточных и вирусных онкогенов, Архипова Ксения Анатольевна; e-mail: [email protected]
Кавеолин-1 (Cav-1) — представитель семейства белков, формирующих структуру кавеол и участвующих в процессах эндоцитоза, липидном обмене и регуляции сигнальных каскадов. До сих пор нет однозначного мнения о том, является ли Cav-1 истинным геном-супрессором, так как его экспрессия в опухолях может как повышаться, так и снижаться в зависимости от их гистогенеза. Исследования экспрессии Cav-1 в опухолях мезенхимального происхождения довольно немногочисленны, а их результаты противоречивы. целью данного исследования являлось изучение экспрессии белка Cav-1a в мягко-тканных опухолях человека. Исследуемая группа включала 4 доброкачественные опухоли и 18 злокачественных. Одновременно проводили анализ экспрессии Cаv-1a в образцах условно нормальной ткани мезенхимального происхождения, полученных от этих же больных. Обнаружено, что экспрессия Cаv-1a снижена в 16 образцах сарком по сравнению с условной нормой, в двух образцах сарком уровень экспрессии Cаv-1a был повышен. Во всех образцах доброкачественных опухолей уровень экспрессии Cаv-1a не изменялся. В целях выявления возможных механизмов снижения экспрессии Cаv-1a проанализировали уровень экспрессии мРНК гена CAV-1 и метилирование его промотора. Уровень экспрессии мРНК гена CAV-1 коррелировал с уровнем экспрессии белка в исследованных образцах, метилирование промотора не выявлено. Таким образом, исследование показало, что Cav-1 в опухолях мягких тканей может рассматриваться в качестве гена — супрессора опухолевого роста.
Ключевые слова: кавеолин-1, опухоли мягких тканей, метилирование.
В последние годы при исследовании механизмов I мейства кавеолинов — структурным компонентам ка-
канцерогенеза большое внимание уделяется белкам се- I веол — омега-образных впячиваний плазматической
мембраны, которые обнаруживаются в клетках тканей многих типов, однако их количество может варьировать. Ими особенно богаты адипоциты, эндотелиальные клетки, пневмоциты I типа, фибробласты, гладкие и поперечно-полосатые клетки мышечной ткани.
Кавеолы представляют собой особый тип липидных рафтов, обогащенных холестеролом, сфинголипидами и гликосфинголипидами, а также большим числом сигнальных молекул, таких, как рецепторы УЕСРЯ1, иРЛЯ, ЕСРЯ; киназы семейства Яге, С-белки (Н-Яав), N0-синтаза и т. д. Функции кавеол довольно разнообразны. Они участвуют в процессах эндоцитоза, регуляции обмена холестерола, а также в регуляции сигнальных каскадов [1—4]. В 1994 г. М. Р. ИвапИ и соавт. предложили теорию «сигналосомы», согласно которой кавеолы за счет непосредственного связывания сигнальных молекул с кавеолином-1 могут не только регулировать отдельные сигнальные каскады, но и способствовать их взаимодействию, концентрируя молекулы разных каскадов [5].
Семейство кавеолинов включает в себя 3 белка — кавеолин-1, -2 и -3 (Сау-1—3), различающихся функциями и тканеспецифичной экспрессией. Наиболее распространенным и изученным среди них является Сау-1. Это интегральный белок плазматической мембраны, имеющий две изоформы, которые различаются длиной №концевого домена. Сау-1 в короче а-изоформы на 31 аминокислоту и не имеет ключевого регуляторного сайта фосфорилирования по тирозину в 14-м положении (У14). Именно поэтому в своей работе мы исследовали уровень экспрессии белка Сау-1а как более функционально значимого. Помимо У14 Сау-1 имеет еще один сайт фосфорилирования по серину в 80-м положении (Я80), 3 сайта пальмитилирования, 2 сайта связывания с актином на каждом конце молекулы и домен взаимодействия с рядом сигнальных молекул (например, УЕСРЯ1, ЕСРЯ, Н-Яав, киназы семейства Яге, N0-синтаза).
Накопленные данные о роли Сау-1 в канцерогенезе свидетельствуют о том, что изменение его экспрессии сильно зависит от конкретной модельной системы или типа и стадии заболевания. Для целого ряда клеточных систем показано, что при злокачественной трансформации клеток количество белка Сау-1 резко снижается, а восстановление его экспрессии на прежнем уровне приводит к остановке опухолевого роста [6]. В клетке Сау-1 также может выполнять антипролиферативные и проапоптотические функции. Все это свидетельствует в пользу того, что Сау-1 может рассматриваться в качестве опухолевого супрессора.
В данной работе мы проанализировали экспрессию белка Сау-1а в доброкачественных и злокачественных опухолях мягких тканей методом вестерн-блотт-анализа. В целях определения возможного механизма снижения экспрессии белка исследовали уровень экспрессии мРНК и статус метилирования промотера гена CAV-1.
© Архипова К. А., Рыбко В. А., Землякова В. В., Близнюков О. П., Мартынков Д. В., Губина Г. И., Зборовская И. Б., 2009 УДК 616.74-006-02:577.218
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Проводили исследование операционного материала, полученного от больных с опухолями мягких тканей, проходивших лечение в НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН с 2005 по 2007 г. У каждого из 22 пациентов был взят образец опухолевой и прилегающей условно нормальной мезенхимальной ткани сходного гистогенеза.
Весь полученный материал проходил гистологическую верификацию в отделе патологической анатомии опухолей человека НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н. Н. Блохина РАМН и классифицирован по системе FNCLCC.
После взятия образцы тканей замораживали и хранили в жидком азоте. Характеристики исследованных образцов приведены в табл. 1.
Таблица 1
Характеристика исследованных опухолей мезенхимального происхождения
Тип опухоли Степень злокачественности Число пациентов
Доброкачественные
липома — 2
лейомиома — 1
шваннома — 1
Злокачественные
липосаркома
высокодифференци- рованная 1 2
2 1
низкодифференци- рованная 2 3
лейомиосаркома 3 1
злокачественная шваннома 3 2
злокачественная фиброзная гистиоцитома 2 1
3 3
синовиальная саркома 2 1
3 3
низкодифференцированная саркома — 1
Всего — 22
Определение содержания белка Cav-1 методом Вестерн-блотт-анализа
Для получения белкового лизата замороженные образцы гомогенизировали в лизирующем буфере (100 мМ NaCl, 10 мМ Tris-HCl, pH 7,8, 10 мМ EDTA, 1% Triton X-100, 10% глицерин, 0,1% SDS, 0,5% деоксихолат натрия, 0,05 мМ NaVO4, 10 мМ NaF, ингибиторы протеаз) и инкубировали в течение 16 ч при температуре +4 °С при постоянном перемешивании. Затем лизаты центрифугировали в течение 20 мин при 12 000 g. Концентрацию белков в супернатанте определяли методом Бредфорда (Bio-Rad Laboratories GmbH) согласно рекомендациям производителя. Электрофоретическое разделение белков проводили в 12% SDS—ПААГ. После переноса белков на поливинилденфторидную (PVDF) мембрану блотт делили на 2 части, одну из которых гибридизовали с моноклональными анти-кавеолин-1а-антителами (Sigma), другую — с моноклональными анти-актин-антителами (Cell Signaling). В качестве вторичных антител использовали HRP-конъюгированные антитела против иммуноглобулинов кролика (Upstate).
Определение содержания мРНК гена CAV-1 методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), сопряженным с обратной транскрипцией
РНК выделяли с использованием реактива «TRIzol» (Life Technologies, Inc.) согласно рекомендациям производителя. Перед проведением реакции обратной транскрипции РНК обрабатывали ДНКазой (1 ед. на 1 мкг РНК). Реакцию обратной транскрипции проводили по стандартной методике в объеме 50 мкл, реакционная смесь содержала 2 мкг тотальной РНК, 80 пмоль праймера олиго^^, по 400 мкМ каждого нуклеотида, буфер для обратной транскриптазы, 250 ед. ингибитора нуклеаз и 200 ед. обратной транскриптазы MМuLV.
Для амплификации интересующих генов в ПЦР использовали следующие пары праймеров:
CAV1-F: 5'- CGACCCTAAACACCTCAACGATG-3';
CAV1-R: 5'-GCAGACAGCAAGCGGTAAAACC-3';
GAPGH-F: 5'-TGCACCACCAACTGCTTAG-3';
GAPGH-R: 5'-CTGTTGCTGTAGCCAAATTC-3'.
Определение метилирования промотора гена CAV-1 методом метилчувствительной полимеразной цепной реакции (МЧ-ПЦР)
ДНК выделяли с использованием раствора STE и последующей фенолхлороформной экстракцией. МЧ-ПЦР проводили по стандартной методике. Геномную ДНК обрабатывали метилчувствительной рестриктазой HpaII (CCGG), после чего проводили ПЦР, в реакцию брали 150 нг гидролизованной ДНК (праймеры):
CAV1-F: 5'-ATTGTGGATTGTTTCTGCCGC-3';
CAV1-R: 5'-CGTGGCTGGATGAAAACTGTG-3'.
В целях исключения ложноположительных и ложноотрицательных результатов проводили мультилокус-ные ПЦР с тремя парами праймеров: один фрагмент принадлежал изучаемому гену, а два других служили положительным и отрицательным контролем. Полноту гидролиза ДНК оценивали путем МЧ-ПЦР фрагмента гена Ing1-1b, содержащего сайты узнавания рестриктаз HpaII, не метилированного ни в нормальных, ни в опухолевых
тканях. Внутренним контролем ПЦР служил фрагмент восьмого экзона гена Ext2, не содержащий сайтов узнавания указанных рестриктаз [7]. Продукты разделяли в 8% полиакриламидном геле и окрашивали нитратом серебра.
РЕЗУЛЬТАТЫ
В большинстве работ, посвященных скрининговым исследованиям экспрессии Сау-1 в опухолях разного генеза, использовали иммуногистохимический метод. Однако метод иммуногистохимии по сравнению с вестерн-блотт-анализом имеет достаточно низкую чувствительность. Поэтому мы провели исследование экспрессии Сау-1 а в опухолях мягких тканей методом вестерн-блотт-анализа. Он позволил выявить, что Сау-1а экспрессируется во всех исследуемых образцах опухолей, как в доброкачественных, так и в злокачественных.
Уровень экспрессии Сау-1а, сопоставимый с таковым для нормальной ткани, наблюдался в образцах доброкачественных опухолей, которые включали в себя
2 липомы, одну шванному типа А и одну лейомиому (рис. 1). Во всех шести злокачественных опухолях жировой природы уровень экспрессии Сау-1 а был снижен независимо от дифференцировки опухоли и степени злокачественности. Уровень Сау-1а также оказался снижен во всех образцах злокачественных фиброзных гистиоцитом (ЗФГ), в 3 из 4 образцов синовиальных сарком, в 2 злокачественных шванномах и одной низкодифференцированной саркоме. Суммарные результаты исследования экспрессии Сау-1а приведены в табл. 2.
Стоит отметить, что в группу сарком со сниженной экспрессией Сау-1 а вошли как опухоли высокой степени дифференцировки, так и низкодифференцированные. В двух из исследованных опухолей уровень Сау-1а был существенно выше, чем в нормальной ткани. Один образец представлял собой лейомиосаркому, другой — синовиальную саркому (см. рис. 1).
В связи с небольшим количеством исследуемого материала мы провели исследование уровня экспрессии мРНК гена CAV-1 только для трех пар образцов опухолей с измененной экспрессией белка — лейомиосар-комы, ЗФГ и дедифференцированной липосаркомы. В проанализированных образцах уровень экспрессии мРНК Сау-1 полностью совпадал с уровнем экспрессии белка, а именно в лейомиосаркоме он был выше, а в ЗФГ и липосаркоме — ниже, чем в норме (рис. 2).
Таблица 2
Изменение экспрессии белка Сav-1 а в опухолевой ткани по сравнению с условно нормальной тканью
Экспрессия белка Сav-1 а Доброкачественные опухоли Злокачественные опухоли
Не изменилась 4 из 4 (100%) —
Снизилась - 16 из 18 (88,9%)
Повысилась - 2 из 18 (11,1%)
Рисунок 1. Экспрессия Сav-1а в образцах условно нормальной и опухолевой тканей по данным вестерн-блотт-анализа.
1, 3 — дедифференцированные липосаркомы; 2, 4 — высокодифференцированные липосаркомы; 5 — синовиальная саркома; 6 — лей-омиосаркома; 7 — лейомиома; 8, 9 — липомы; 10 — шваннома; Н — условно нормальная ткань; О — опухолевая ткань.
А. Примеры опухолей со сниженным уровнем экспрессии Сау-1. Б. Образцы с повышенной экспрессией Сау-1. В. Экспрессия Сау-1 в группе доброкачественных опухолей.
По данным некоторых исследований, в ряде опухолей промотор гена CAV-1 может подвергаться метилированию, что приводит к снижению экспрессии белка. Мы проверили статус метилирования промотора гена CAV-1 в образцах с пониженным уровнем белковой экспрес-
Кавеолин-1
Актин
A
Кавеолин-1
ОАРРН
Б
Рисунок 2. Уровень экспрессии белка Саv-1 и его РНК в образцах условно нормальной и опухолевой тканей. 1 — лей-омиосаркома; 2 — ЗФГ; 3 — дедифференцированная липосар-кома; Н — условно нормальная ткань; О — опухолевая ткань.
А. Экспрессия белка (вестерн-блотт-анализ). Б. Экспрессия мРНК (ОТ-ПЦР).
сии. При анализе 10 пар образцов (условно нормальная ткань — опухолевая ткань) метилирование промоторной области гена CAV-1 не выявлено.
ОБСУЖДЕНИЕ
Опухоли мезенхимального происхождения довольно редки и составляют, по разным оценкам, 1—2% от всех злокачественных опухолей. Эта группа чрезвычайно разнообразна, существует более 100 гистологических вариантов. При этом течение заболевания часто имеет индивидуальные клинические, прогностические и терапевтические особенности. Все это, безусловно, затрудняет исследование как отдельных гистологических форм, так и в целом мезенхимальных опухолей различного происхождения.
В данной работе мы провели анализ экспрессии Сау-
1 а в 18 злокачественных и 4 доброкачественных опухолях мягких тканей. Во всех исследованных образцах обнаружена экспрессия Сау-1 а, однако уровень этой экспрессии соответствовал условно нормальному только в доброкачественных опухолях, в злокачественных опухолях он был преимущественно снижен. Сходные результаты получили К. Ш1ееЬеп и др., исследуя доброкачественные и злокачественные мезенхимальные опухоли методом иммуногистохимии. В частности, во всех исследованных доброкачественных опухолях уровень экспрессии Сау-1 соответствовал нормальному или превышал его. В то же время снижение экспрессии наблюдалось в большинстве исследованных злокачественных сарком, которые включали в себя фибросаркомы, синовиальные саркомы, ЗФГ, лейомиосаркомы и ангиосаркомы [8]. Эти данные хорошо согласуются с полученными нами результатами.
При имунногистохимическом исследовании опухолей жировой ткани и гладкой мускулатуры исследователи под руководством I. Bayer-Garner получили результаты, несколько отличающиеся от приведенных выше. В группе высокодифференцированных злокачественных опухолей уровень экспрессии Cav-1 был так же высок, как и в доброкачественных опухолях и нормальной ткани. Однако группа опухолей низкой степени диффе-ренцировки характеризовалась сниженным уровнем экспрессии Cav-1 [9]. Эти данные позволяют предположить, что уровень экспрессии Cav-1 может коррелировать со степенью злокачественности опухоли. Однако это несколько расходится с полученными нами результатами о снижении уровня экспрессии Cav-1 а в исследованной группе злокачественных опухолей независимо от степени их дифференцировки и злокачественности.
Потеря или снижение экспрессии Cav-1 наблюдается и в эпителиальных опухолях, например, таких, как аденокарциномы молочных желез и яичников [10; 11]. На клеточных моделях показано, что во всех случаях мелкоклеточного и в 30% случаев немелкоклеточного рака легкого происходит снижение или полная утрата экспрессии гена CAV-1 [12]. Такие же закономерности обнаруживаются и в первичных опухолях легких, причем для плоскоклеточного рака данное нарушение коррелирует с неблагоприятным прогнозом [13]. Более того, для рака почек, прямой кишки и легкого наблюдали двухфазный тип экспресии Cav-1, при котором уровень его экспрессии снижен в первичной опухоли, но резко повышается при метастазировании [14—16]. Из этих данных следует, что уровень экспрессии Cav-1 не только зависит от гистогенеза опухоли, но и может меняться в процессе опухолевой прогрессии. Показано также, что уровень экспрессии Cav-1 изменяется при развитии множественной лекарственной устойчивости [17]. Таким образом, данный ген может быть интересен не только как дифференциальный, но и как прогностический маркер.
В настоящее время механизмы функционирования и регулирования экспрессии кавеолинов в различных типах опухолей и опухолевых клеточных линиях активно изучаются. Ген CAV-1 картирован в локусе 7q31, который часто делетируется в различных типах злокачественных опухолей. Это служит подтверждением гипотезы о том, что Cav-1 является опухолевым супрессором. При исследовании гена CAV-1 в клеточной линии рака молочной железы J. A. Engelman и соавт. показали гиперметилирование промоторной области, что приводило к сильному снижению экспрессии белка [18]. По данным нашего исследования метилирование про-моторной области гена CAV-1 не выявлено, несмотря на снижение экспрессии Cav-1 а в злокачественных мезенхимальных опухолях. Эти данные позволяют предположить, что регулирование экспрессии Cav-1 а в мезенхимальных опухолях осуществляется на транскрипционном уровне.
Проведенные нами исследования в группе опухолей мезенхимального происхождения подтверждают результаты, полученные при анализе уровня экспрессии данного белка в ряде эпителиальных опухолей, и дают основания предположить, что Cav-1 может служить маркером опухолевого роста и в саркомах мягких тканей.
Работа частично финансирована ЗАО Фирма Центр внедрения «ПРОТЕК», договор № 349 от 01.01.06 и государственным контрактом. № 02.522.11.2005 от. 27 апреля 2007 г.
Авторы выражают, благодарность Т. К. Харатишвили и С. А. Меликову за помощь в сборе операционного материала.
ЛИТЕРАТУРА
1. Razani B., Woodman S. E., Lisanti М. P. Caveolae: from cell biology to animal physiology // Pharmacol. Rev. — 2002. — Vol. 54, N 3. — P. 431—467.
2. Krajewska W. М., Maslowska I. Caveolins: structure and function in signal transduction // Cell. Mol. Biol. Lett. — 2004. — Vol. 9, N 2. — P. 195—220.
3. Parton R. G., Hanzal-Bayer М., Hancock J. F. Biogenesis of caveolae: a structural model for caveolin-induced domain formation // J. Cell. Sci. — 2006. — Vol. 119, N 5. — P. 787—796.
4. Quest A., Gutierrez-Pajares J. L., Torres V. Caveolin-1, an ambiguous partner in cell signaling and cancer // J. Cell. Mol. Med. — 2008. — Vol. 12, N 4. — P. 1130—1150.
5. Caveolae, caveolin and caveolin-rich membrane domains: a signalling hypothesis / Lisanti М. P., Scherer P. E., Tang Z., Sargiaco-mo М. // Trends Cell. Biol. — 1994. — Vol. 4, N 7. — P. 231—235.
6. Quest A. F., Leyton L., Parraga М. Caveolins, caveolae, and lipid rafts in cellular transport, signaling, and disease // Biochem. Cell. Biol. — 2004. — Vol. 82, N 1. — P. 129—144.
7. Аномальное метилирование некоторых генов-супрессоров при спорадическом раке молочной железы / Землякова В. В., Жевлова А. И., Отрельников В. В., Любченко Л. Н., Шабанов М. А., Вишневская Я. В., Третьякова В. А., Залетаев Д. В., Немцова М. В. // Мол. биол. — 2003. — N 4. — P. 591—597.
8. Down-regulation of caveolin-1, a candidate tumor suppressor gene, in sarcomas / Wiechen K., Sers C., Agoulnik A., Arlt K., Pietel М., Schlag P. М., Schneider U. // Am. J. Pathol. — 2001. — Vol. 158, N 3. — P. 833—839.
9. Bayer-Garner I., Morgan М., Smoller B. R. Caveolin expression is common among benign and malignant smooth muscle and adipocyte neoplasms // Mol. Pathol. — 2002. — Vol. 15, N 1. — P. 1—5.
10. Clinical significance of Caveolin-1, Caveolin-2 and HER2/neu mRNA expression in human breast cancer / Sagara Y., Mimori K., Yoshi-naga K., Tanaka F., Nishida K., Ohno S., Inoue H., Mori М. // Br. J. Cancer. — 2004. — Vol. 91, N 5. — P. 959—965.
11. Caveolin-1 is down-regulated in human ovarian carcinoma and acts as a candidate tumor suppressor gene / Wiechen K., Diatchenko L., Agoulnik A., Scharff K. М., Schober H., Arlt K., Zhumabayeva B., Sie-bert P. D., Dietel М., Schafer R., Sers C. // Am. J. Pathol. — 2001. — Vol. 159, N 5. — P. 1635—1643.
12. Different roles for caveolin-1 in the development of non-small cell lung cancer versus small cell lung cancer / Sunaga N., Miyajima K., Suzuki М., Sato М., White М. A., RamirezR. D., Shay J. W., Gazdar A. E., Minna J. D. // Cancer Res. — 2004. — Vol. 64, N 12. — P. 4277—4285.
13. Expression of caveolin-1 is associated with poor prognosis of patients with squamous cell carcinoma of the lung / Yoo S. H., Park Y. S., Kim H. R., Sung S. W., Kim J. H., Shim Y. S., Lee S. D., Choi Y. L., Kim М. K., Chung D. H. // Lung Cancer. — 2003. — Vol. 42, N 2. — P. 195—202.
14. Caveolin-1 levels are down-regulated in human colon tumors, and ectopic expression of caveolin-1 in colon carcinoma cell lines reduces cell tumorigenicity / Bender F. C., Reymond М. A., Bron C., Quest A. F. // Cancer Res. — 2000. — Vol. 60, N 20. — P. 5870—5878.
15. Up-regulated caveolin-1 accentuates the metastasis capability of lung adenocarcinoma by inducing filopodia formation / Ho C. C., Huang P. H., Huang H. Y., Chen Y. N., Yang P. C., Hsu S. М. // Am. J. Pathol. — 2002. — Vol. 161, N 5. — P. 1647—1656.
16. Increased expression of caveolin-1 and microvessel density correlates with metastasis and poor prognosis in clear cell renal cell carcinoma / Joo H. J., Oh D. K., Kim Y. S., Lee K. B., Kim S. J. // BJU. Int. — 2004. — Vol. 93, N 3. — P. 291—296.
17. Role of caveolin-1 in etoposide resistance development in A549 lung cancer cells / Belanger М. М., Gaudreau М., Roussel E., Couet J. //
Cancer Biol. Ther. — 2004. — Vol. 3, N 10. — P. 954—959.
18. Engelman J. A., Zhang X. L., Lisanti M. P. Sequence and detailed organization of the human caveolin-1 and -2 genes located near the D7S522 locus (7q31.1). Methylation of a CpG island in the 5' promoter
region of the caveolin-1 gene in human breast cancer cell lines // FEBS Lett. — 1999. — Vol. 448, N 2—3. — P. 221—230.
Поступила 01.09.2008
Ksenia Anatolievna Arhipova1, Vera Alexandrovna Rybko2, Valeria Vladimirovna Zemlyakova3, Oleg Petrovich Bliznyukov4, Dmitry Vladimirovich Martynov5, Galina Ivanovna Gubina6, Irina Borisovna Zborovskaya7
CAVEOLIN-1 EXPRESSION IN SOFT TISSUE TUMORS
1 MSc, Post-Graduate Student, Laboratory for Cellular and Viral Oncogen Regulation, Carcinogenesis Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
2 MSc, Researcher, Laboratory for Cellular and Viral Oncogen Regulation, Carcinogenesis Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
3 MD, PhD, Researcher, Epigenetics Laboratory, Research Centre for Medical Genetics RAMS (1, Moskvorechie ul., Moscow, 115478, Russian Federation)
4 MD, PhD, Senior Researcher, Human Tumor Pathologic Anatomy Department, Clinical Oncology Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
5 MD, Post-Graduate Student, General Oncology Department, Clinical Oncology Research Institute,
N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
6 MD, PhD, Leading Researcher, Abdominal Oncology Department, Clinical Oncology Research Institute,
N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
7 MSc, PhD, Head, Laboratory for Cellular and. Viral Oncogen Regulation, Carcinogenesis Research. Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS (24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation)
Address for correspondence: Arhipova Ksenia Anatolievna, Laboratory for Cellular and Viral Oncogen Regulation, Carcinogenesis Research Institute, N. N. Blokhin RCRC RAMS, 24, Kashirskoye sh., Moscow, 115478, Russian Federation: e-mail: [email protected]
Caveolin-1 belongs to a family of caveolae-forming proteins that participate in cellular processes such as endocytosis, lipid metabolism and regulation of signaling cascades. It is not clearly understood whether CAV-1 is a true supressor gene because its expression in tumors can be both increased and decreased depending on the histogenesis. Little is known about Cav-1 expression in mesenchymal tumors and the data obtained by today are rather controversial. The purpose of this study was to evaluate CAV-1 expression using Western-blot analysis in a group of human soft-tissue mesenchymal tumors. We studied 4 benign and 18 malignant tumor samples of different localization and morphology. The conditionally normal mesenchymal tissue specimens from the same patients were analyzed in parallel. Cav-1 protein expression was shown to be decreased in 16 and increased in 2 sarcoma cases as compared to conditionally normal tissue. The expression level was not changed in any of the 4 benign mesenchymal tumor specimens. To reveal the possible mechanism of this reduction we analyzed Cav-1 mRNA level and promoter methylation status. The mRNA expression level correlated with the protein level in tumor samples compared to non-neoplastic tissue, and no promoter methylation was shown. CAV-1 may therefore be considered a suppressor of tumor growth in soft tissue tumors.
Key words: caveolin-1, soft tissue tumors, methylation.
