Экспериментальная химиотерапия Текст научной статьи по специальности «Фундаментальная медицина»

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ХИМИОТЕРАПИЯ

С.М. Адекенов РАСТЕНИЯ □

ПЕРСПЕКТИВНЫЕ ИСТОЧНИКИ НОВЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СОЕДИНЕНИЙ

АО МНПХ «Фитохимия», Казахстан, Караганда

Нами проведено выделение суммы экстрактивных веществ из 160 видов и эфирных масел из 105 видов растений флоры Казахстана и изучена их противоопухолевая активность.

По результатам скрининга выраженной цитотоксиче-ской активностью в отношении личинок морских рачков Artemia salina (Leach) обладают эфирные масла из растений блощницы простертой, войлочнолиста хлопковидного, иссопа остроплодного, кахриса Гердера, котовника украинского, пижмы улытауской, полыни белоземельной, тимьяна частолистного, т. Дмитриевой, т. Маршала, т. обыкновенного, шлемника почтизернистого, шульции косматой, ферулы татарской, суммы экстрактивных веществ из аконита белоустого, а. противоядного, живокости илийской, рябчика малого, которые могут быть перспективными источниками для создания препаратов противоопухолевого действия.

Исследование противоопухолевой активности суммы экстрактивных веществ проводили на белых беспородных мышах и крысах с перевиваемыми опухолями: лимфосар-комой Плиса, карциносаркомов Уокера, карциномой Герена, саркомой 45, саркомой М-1, РМЖ РМК-1, солидной опухолью Эрлиха, альвеолярным раком печени РС-1, саркомой 37, саркомой 180, лейкемией Р-388 УСПХ и лейкемией L-1210. При этом определено, что суммы экстрактивных веществ из василька ложнопятнистого, в. русского, гайллардии крупноцветковой, девясила каспийского, д. высокого, наголоватки многоцветковой, пижмы Китта-рианской, п. сантолиной, п. улутауской и п. обыкновенной, полыни гладкой, п. тонковатой, п. широколистной, п. селитряной, п. мелкоцветковой, п. сантолинолистной, п. шелковистой, тысячелистника азиатского, т. мелкоцветкового, т. обыкновенного, т. благородного, скерды кровельной, стизолофуса бальзамического, хартолеписа среднего ингибируют рост штаммов лимфосаркомы Плисса, саркомы 180, опухоли Эрлиха, карциносаркомы Уокера, саркомы 37 на 48-77%.

Как перспективные источники новых противоопухолевых соединений определены растения 28 видов сем. Астровых (Сложноцветных), 3 видов сем. Лютиковых, 7 видов сем. Губоцветных, 3 видов сем. Зонтичных и 1 вида сем. Лилейных, произрастающие на территории Казахстана. При этом следует отметить, что противоопухолевая активность не является исключительным свойством определенных таксонов.

Алясова А.В.1, Конторщикова К.Н.1,

Сазанов А.И.1, Пименов В.Г.2 ИЗМЕНЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ НЕКОТОРЫХ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ЖИВОТНЫХ □ ОПУХОЛЕНОСИТЕЛЕЙ ПОД ВЛИЯНИЕМ ХИМИОТЕРАПИИ И ОЗОНОТЕРАПИИ 'НГМУ

2Институт химии высокочистых веществ РАН, Москва

Цель исследования. Выявить влияние цитостати-ков и низких концентраций озонированного физиологического раствора (ОФР) на содержание цинка, меди, железа в плазме крови больных РМЖ и в тканях экспериментальных животных-опухоленосителей.

Материал и методы. Под наблюдением находилось 142 больных РМЖ в возрасте 35-65 лет с гистологически доказанным диагнозом заболевания. Преобладали женщины с III-IV стадиями РМЖ (82,3% -117 человек). Все пациентки получали стандартное противоопухолевое лечение. 48 больным III-IV стадиями, после подписания информированного согласия, дополнительно проводились инфузии ОФР по методу, разработанному авторами (патент №2207862 от 10.07.03). Экспериментальная часть исследования выполнена на 80 лабораторных животных. Содержание цинка, меди, железа оценивалось в плазме и тканях различных органов (сердце, печень, почки, легкие, мозг, опухоль). Работа выполнена с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европейского сообщества. Для определения содержания микроэлементов использовался метод атомноэмиссионной спектрографии. Полученные результаты были обработаны с помощью пакета статистических программ STATISTICA 6.0.

Результаты. Установлено, что ПХТ способствовала значимому уменьшению уровня цинка и достоверному возрастанию содержания железа в плазме крови больных. Добавление к стандартному лечению ОФР сопровождалось значимым увеличением сывороточного содержания цинка и снижением концентраций меди и железа. Выявленные изменения ассоциировались с увеличением общей и безрецидивной выживаемости в этой группе.

Введение доксорубицина животным-опухоленоси-телям сопровождалось достоверным уменьшением концентраций микроэлементов в тканях по сравнению с показателями интактных особей. Применение ОФР совместно с доксорубицином способствовало уменьшению степени выраженности металлодепрессивного действия препарата.

Таким образом, совместное использование цито-статиков и низких концентраций озонированного физиологического раствора способствовало перераспределению содержания цинка, меди, железа в организме больных РМЖ и животных-опухоленосителей.

Бадун Г.А.2, Будько А.П. \ Дейчман З.Г.1,

Колесникова Е.Ю.1, Чернышева М.Г.2 ЦИФЕТРЕЛИН □

СИНТЕЗ МЕЧЕНОГО ПРЕПАРАТА И ПОДХОДЫ К ИЗУЧЕНИЮ ФАРМАКОКИНЕТИКИ

:РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва

Введение. Цифетрелин - пентапептид, аналог гипота-ламического гормона соматостатина, отобран по результатам изучения гормональной, цитотоксической и противоопухолевой активности для доклинического изучения. Ранее оптимизирован метод синтеза и наработано несколько серий Цифетрелина, на основе которых разработан проект ФСП на субстанцию, и создана модель лекарственной формы для перорального применения.

Цель работы. Выполнение этапа доклинического изучения по созданию отечественного противоопухолевого препарата - синтез меченого препарата и изучение его выведения из организма мышей.

Материалы и методы Радиоактивную метку в Цифетрелин вводили с помощью метода термической активации трития. Для очистки меченого препарата использовали пластинки ТСХ Silufol UV-254 и жидкостной хроматограф НР 1050, Hewlett-Packard, США.

Изучение выведения Цифетрилина после перо-рального введения в дозе 10 мг/кг проводили на 5 мышах-самках CBA. Кал и мочу собирали раздельно, за периоды 0-5; 5-24; 24-48; 48-72 ч. Аликвоты обработанных мочи и кала анализировали в 3 повторностях. Радиоактивность образцов измеряли в сцинтил-ляционной жидкости «Ultima gold», Perkin Elmer, на счетчиках 1219 Rack Beta, LKB Vallac.

Результаты. Ранее было показано, что радиохимический выход меченого Цифетрелина оказался низким (1-2 %), а отделение целевого продукта от радиоактивных примесей затруднено из-за того, что при обработке вещества потоком атомов трития происходит отщепление защитных групп, и главное, разрыв связи C-S в остатке цистеина. Для увеличения радиохимического выхода меченого продукта тритиевую метку вводили в тетрапептид, а затем проводили стадию химического синтеза меченого тетрапептида с цистеином. Изучение выведения [3Н]-Цифетрелина показало, что с калом выводится более 78%, а с мочой

- около 16% введенной дозы. Необходимо отметить снижение подвижности, потребления корма и воды, а также падение веса у животных (на 3 г) во время проведения эксперимента, что, вероятно, обусловлено действием препарата. 3

Выводы: кумулятивная экскреция 3Н-соединений с мочой и калом мышей после однократного перо-рального введения [3Н]-Цифетрелина в дозе 10 мг/(188 мкКи кг) составляет 16% и 78% соответственно, при этом основные процессы выведения заканчиваются к 24 часам наблюдения (с мочой выводится около 13% от введенной дозы, с калом - более 72%).

1Т.Н.. Богатыренко,1 Т.А. Сашенкова, 2Л.М. Байдер,

2З.В. Куроптева, гН.П. Коновалова ПОВЫШЕНИЕ

ХЕМОСЕНСИБИЛИЗИРУЮЩЕГО ЭФФЕКТА ГИДРОКСАМОВЫХ КИСЛОТ С ПОМОЩЬЮ ДОНОРОВ ОКСИДА АЗОТА

'ИПХФ РАН, Черноголовка

2ИБФ им. Н.М. Эмануэля РАН, Москва

Введение. В последнее время в качестве важного звена в противораковой терапии рассматривают ингибиторы COX. Выбор обусловлен вовлечением этих ферментов во все основные события канцерогенеза. Одним из перспективных классов соединений, обладающих определенными преимуществами перед традиционно рассматриваемыми ингибиторами COX (НСПВС), являются гидроксамовые кислоты (ГК).

Усиление хемосенсибилизирующих свойств ГК с помощью доноров NO - новый перспективный путь получения эффективных лекарственных средств, способных усиливать противоопухолевые свойства известных цитостатиков и не обладающих ульцероген-ным эффектом.

Материал и методы. Противоопухолевую активность изучали на лимфолейкозе Р-388 мышей линии BDFi. Критерием эффективности лечения служило увеличение продолжительности жизни и число излеченных животных.

Исследуемые соединения вводили внутрибрюшин-но 7-кратно в дозе 40 мг/кг, сначала NaNO3, через10 минут производные гидроксамовых кислот (аспара-гилгидроксамовой и салицилгидроксамовой). Цикло-фосфан в дозе 20 мг/кг вводили двукратно на 1-е и 6-е сутки после перевивки опухоли.

Задачи исследования. Изучение влияния на противоопухолевую активность сочетанного действия NaNO3 и комбинации циклофосфана с производными гидроксамовых кислот.

Результаты. Известно, что в основе механизма действия нитратов и нитритов лежит реакция превращения ионов МО3- и МО2- в оксид азота (N0), который повышает цитотоксичность ряда химиотерапевтических препаратов, в частности, алкилирующих. Предполагают, что сенсибилизация, опосредованная N0, вызывается усилением ингибирования ферментов, участвующих в репарации ДНК.

Продолжительность жизни животных при комбинированном введении циклофосфана и нитрата натрия увеличивалась на 30% по сравнению с монотерапией циклофосфаном. Ранее нами было показано, что в биологических системах производные гидроксамовых кислот, которые мы включили в исследуемую комбинацию, не являются эффектвными донорами N0 и не обладают противоопухолевой активностью, но при сочетанном введении с циклофосфаном оказывают определенный хемосенсибилизирующий эффект.

Продолжительность жизни животных увеличивается на 40% при комбинации циклофосфан-аспара-гилгидроксамовая кислота и на 70% при комбинации циклофосфан - салицилгидроксамовая кислота по сравнению с монотерапией циклофосфаном. Комбинации исследуемых производных гидроксамовых кислот с нитратом натрия не проявили противоопухолевой активности. Усиление генерации N0 при сочетанном введении циклофосфана, гидроксамовых кислот и нитрата натрия, кроме увеличения продолжительности жизни приводит к 40 %-ному излечиванию животных при уменьшении терапевтической дозы циклофосфана в 6 раз.

Выводы. Показана возможность повышения эффективности химиотерапии циклофосфаном через сенсибилизацию гидроксамовыми кислотами, усиленную донором оксида азота. Сенсибилизация, опосредованная гидроксамовыми кислотами и оксидом азота, позволяет резко снизить токсичность цитостатика, добиться увеличения продолжительности жизни и числа излеченных животных.

Т.Г. Боровская, В.Е. Гольдберг,

Полуэктова М.Е., Пахомова А.В.,

Щемерова Ю.А., Перова А.В., Румпель О.А. ОТДАЛЕННЫЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ЦИТОСТАТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ РАЗНЫХ ГРУПП

НА РЕПРОДУКТИВНУЮ ФУНКЦИЮ И ПУТИ ИХ СНИЖЕНИЯ

НИИ фармакологии СО РАМН, Томск

Задачи исследования: Проведение в эксперименте сравнительной оценки отдаленных последствий воздействия на репродуктивную систему цитостати-ческих препаратов с разным механизмом действия.

В задачи исследования входило выяснения вопроса

о том, какие из них приводят к бесплодию, с чем связано его появление и возможно ли его предотвратить.

Материалы и методы. Эксперименты проведены на 400 крысах (самках, самцах) популяции Вистар. Состояние репродуктивной системы оценивали через

3 и 6 мес. после введения антрациклинов, платиноидов, таксанов, ингибиторов топоизомеразной активности. Определяли способность к спариванию, к зачатию, возможность сохранения беременности, проводили гистологическое исследование гонад, у крыс-самцов изучали показатели спермограммы.

В качестве средств фармакорекции использовали антиоксиданты; гормональные препараты, препараты, активирующие андрорецепторы, а также средства фармакотерапии, активизирующие процессы регенерации гонад.

Результаты. Установлено, наступления стерильности у крыс-самцов и ранней менопаузы у крыс-самок следует ожидать, прежде всего, на фоне использования антрациклиновых антибиотиков. Учитывая, что в онкологической практике, в ряде случаев, существует возможность модификации химиотерапии, то одним из путей борьбы с бесплодием может быть использование менее токсичных в этом плане препаратов. Результаты исследований показали, что из числа гормональных средств, оказывающих защитное действие на яичники, наиболее эффективными являются эстроген-гестаген-ные препаратами, по сравнению с антагонистами гонадотропин рилизинг-гормона. Выявлено, что препараты синтетического и природного происхождения, обладающие антиоксидантными свойствами, препараты природного происхождения, активизирующие анд-рорецепторы, снижают гонадотоксичность антибла-стомных средств. При поиске средств защиты от мужского бесплодия установлено, что к числу таковых могут принадлежать средства фармакотерапии, стимулирующие процессы репаративной регенерации тестикулярной ткани в целом.

Выводы. Степень выраженности гонадотоксич-ности зависит от вида цитостатического воздействия. Одним из путей борьбы с бесплодием, вызванным цитостатическим воздействием, может быть использования менее токсичных цитостатических и препаратов средств фармакотерапии.

Боровская Т.Г., Щемерова Ю.А.,

Полуэктова М.Е., Пахомова М.Е.,

Перова А.В., Румпель О.А, Гольдберг В.Е. КОРРЕКЦИЯ

НАРУШЕНИЙ СПЕРМАТОГЕНЕЗА, ВЫЗВАННЫХ

ЦИТОСТАТИЧЕСКИМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ

НИИ фармакологии СО РАМН, Томск

В настоящее время в связи с обнадеживающими результатами лекарственного лечения целого ряда онкологических заболеваний возрастает интерес к проблеме бесплодия, как к одному из последствий цитостатической химиотерапии. Установлено, что вклад в токсичность противоопухолевых препаратов вносит индуцируемое ими усиление процессов перекисного окисления липидов. Для снижения токсичности цитостатических препаратов могут применяться антиоксиданты, безопасность использования которых в онкологической практике является доказанной. К числу препаратов такого плана относится экстракт левзеи сафлоровидной (ЭЛ С).

Задача исследования. Изучить возможность коррекции гонадотоксических эффектов цитоста-тического препарата вепезид, обладающего выраженным повреждающим действием на сперматогенез, с помощью экстракта левзеи сафлоровидной.

Материалы и методы. Вепезид вводили крысам линии Вистар однократно, внутривенно в МПД равной 30 мг/кг. ЭЛС - внутрижелудочно в дозе 1 мл/кг за 5 дней до и после введения цитостатического препарата. Состояние сперматогенеза оценивали на 2; 16; 36 и 90-е сутки после введении вепезида по следующим показателям: общее количество сперматозоидов (ОКС), процент их патологических форм (НПФ), количество канальцев со слущенным эпителием.

Результаты. Введение вепезида вызывало снижение ОКС во все сроки исследования (на 40-75 % по сравнению с интактными животными), которое было максимально выражено на 36-е сутки опыта. Отмечалось также достоверное возрастание ППФ спермиев (более чем в 2 раза) с 16 по 36-й дни экс-

перимента и увеличение количества канальцев со слущенным эпителием на 16-е сутки опыта. При сочетанном введении вепезида и ЭЛС ОКС оказалось статистически значимо выше с 16 по 36-й день опыта на 40 - 50 %, снижался также ППФ сперматозоидов и количество канальцев со слущенным эпителием по сравнению с таковым при введении одного вепезида. Количество канальцев со слущенным эпителием на 16-е сут опыта уменьшалось в 2 раза, ППФ - в 2,5 раза.

Вывод. ЭЛС может быть использован в качестве средства для профилактики и коррекции нарушений сперматогенеза, вызванных цитостатиче-ским воздействием.

Бочарова О.А.

ВЕРОЯТНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ДЕЙСТВИЯ ФИТОАДАПТОГЕНОВ

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Становится очевидной проблема повышения эффективности противоопухолевой терапии и разработки патогенетически обоснованных методов лечения онкологических заболеваний в том числе с использованием биотерапевтических подходов. Вместе с тем актуальна профилактика онкологической заболеваемости в целом, а также рецидивов и метастазов после специального лечения злокачественных новообразований. Учитывая, что ключевым механизмом процессов старения и опухолеобразования может быть нарушение адгезионных взаимодействий (и как следствие - дисдифференцировка), рак можно рассматривать как стремительное старение клеток органа. Вместе с тем существует прямая зависимость частоты возникновения опухолей от скорости старения популяции. Поэтому применение фитоадаптогенов-геро-протекторов в онкологии можно считать оправданным. Фитоадаптогены обладают комплексным характером действия на организм. Являются антимутагенами, усиливая, в частности, корректорную активность ДНК-полимеразы. Являются иммуномодуляторами; индуцируют выработку интерферона; повышают содержание ИЛ-12, стимулируя МК-клетки и макрофаги; снижают уровень ИЛ-10, снимая его супрессивные эффекты в отношении клеточного звена иммунитета; подавляют содержание ИЛ-6, ослабляя кахексию у онкобольных. Обладают антистрессорной активностью, снижая образование кортизола и адено-кортикотропного гормона при стрессе. Повышают вместе с тем уровень естественных антидепрессантов

- эндорфинов, дофамина. Являясь антиоксидантами, снижают образование в организме, в частности МДА, активизируют ферменты антиоксидантной защиты (СОД, каталазы и др.). Связываясь с белком множественной лекарственной устойчивости, который “выкачивает” из опухолевой клетки токсины, способствуют накоплению цитостатиков в опухолевых клетках, тем самым повышая эффективность ХТ. Ингибируют теломеразную активность и индуцируют апоптоз опухолевых клеток. Обладают антиангиогенным действием на опухоль. Являясь индукторами дифферен-цировки, адаптогены снижают темпы пролиферации опухолевых клеток. Вместе с тем усиление на опухолевых клетках экспрессии адгезивных лигандов для эффекторов иммунитета вызывает лизис последними клеток мишеней, ослабляя "ускользание" опухоли от иммунологического надзора. Создание лекарств-регуляторов на основе фитоадаптогенов перспективно для профилактики и лечения злокачественных новообразований, а также болезней старения.

Бочарова О.А., Лыженкова М.А., Карпова Р.В., Ильенко В.А., Чулкова С.В., Клименков А.А. ИЗМЕНЕНИЕ УРОВНЯ

НЕКОТОРЫХ ЦИТОКИНОВ У ПАЦИЕНТОВ С РАСПРОСТРАНЕННЫМ РАКОМ ЖЕЛУДКА ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ КОМПЛЕКСНОГО ФИТОАДАПТОГЕНА

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Задачи исследования. Определение содержания цитокинов в сыворотке крови пациентов с распространенным раком желудка, получавших комплексный фи-тоадаптоген ФМ-40 на фоне хирургического лечения.

Материалы и методы. ФМ-40 включает компоненты 40 фитоэкстрактов, сертифицирован в качестве парафармацевтика. Показан лечебный эффект ФМ-40 в отношении ДГПЖ, лейкоплакии слизистой оболочки полости рта, распространенного РЖ. У пациентов с РЖ IV стадии, принимавших ФМ-40, выявлено снижение уровня опухолевых маркеров; завышенного уровня стресс-гормона кортизола; отмечена нормализация иммунного и антиоксидантного статуса; продолжительность жизни больных возросла в 2,5 раза (до 14-15 месяцев); больные принимали ФМ-40 в предоперационный период (7 дней), а также после операции курсами (1,5 мес) - в среднем 3-4 курса; уровень цитокинов иФН-у, ИЛ-12, ИЛ-6 и ИЛ-10 в сыворотке крови определяли за 7 дней до и через 4-5 месяцев после операции. Результаты.

У больных распространенным РЖ на фоне приема ФМ-40 выявлено повышение уровня ИФН-у (р<0,05) и ИЛ-12 (р<0,05), снижение содержания ИЛ-6

(р<0,05) и ИЛ-10 (р<0,05). ИЛ-12 является фактором созревания цитотоксических лимфоцитов, активизирует КК-клетки и макрофаги, а также выработку ИФН-у. Возрастание ИФН-у обеспечивает провоспа-лительную стимуляцию, что способствует увеличению активности макрофагов и КК-клеток в отношении опухоли. Полученные данные согласуются с ростом числа Т и КК-клеток, а также клеток с рецепторами лейкоцитарных интегринов (в том числе макрофагов). Вместе с тем известно, что уменьшение уровня ИЛ-10 снижает ингибирование активности клеточного звена иммунитета при опухолевом росте, что коррелирует с изменением показателей иммунного статуса. Подавление концентрации ИЛ-6, вероятно, способствует снижению степени распада мышечных белков, что может ослаблять симптомокомплекс кахексии у онкологических больных. Данные результаты согласуются с нормализацией аппетита, сна и работоспособности пациентов.

Выводы. Повышение уровня ИФН-у и ИЛ-12 под влиянием ФМ-40 может активизировать противоопухолевый ответ организма, снижая иммуносупрессив-ные эффекты ИЛ-10 и кахектическое воздействие ИЛ-6. Полученные результаты согласуются с биологическими и клиническими эффектами у больных распространенным РЖ на фоне приема ФМ-40.

Н.А. Брусенцов1, Ю.А. Пирогов2, Т.Н. Брусенцова3,

П.И. Никитин3, М.П. Никитин3, Т.И. Ксеневич3,

В.А. Полянский4, И.С, Голубева , М.В. Гуляев2,

Д.А. Тищенко2, А.В. Иванов1.

ВЫЯВЛЕНИЕ СОСУДОВ, ПИТАЮЩИХ ОПУХОЛЬ

:РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2НЦМТС МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 3ИОФ им. А.М. Прохорова РАН, Москва 4НИИМ МГУ, Москва

Задача исследования. В/в введение традиционных противоопухолевых препаратов (ТПП) лишь тор-

мозит распространение злокачественных опухолей в организме больного. Чтобы помочь больному справиться с такими опухолями, успешно используются: направленная регионарная внутриартериальная доставка комбинаций ТПП с магнитоуправляемыми противоопухолевыми нанопрепаратами и регионарная гипертермия; хирургические методы и биотерапия с другими терапевтическими воздействиями. Основные усилия при этом направлены на оптимизацию способов раннего выявления сосудов, питающих опухоли.

Материалы и методы. Декстранферрит (ДФ) синтезировали из наночастиц Fe3O4 и декстрана. Золи ДФ в разных дозах были испытаны в качестве Т2 и Т 2*-взвешенных негативных МРТ контрастных нанопрепаратов при визуализации: сосудов, питающих капсулу и опухоль, крови, направляющейся по сосудам к капсуле, текущей в капсуле и сосудах опухоли, таргетинга для подтверждения корректности доставки и распределения нанопрепаратов в опухоли при аденокарциноме молочной железы Са 755 самок мышей С57В1/6j с опухолями объёмом от 40 до 420 мм3. В период от 3 часов до 30 часов до проведения МРТ сканирования внутривенно вводили 0,02-0,2 мл 10 %-ного золя ДФ в полиглюкине. ДФ повышал контраст изображений органов и тканей, структур капсулы и сосудов, питающих опухоль

Результаты. При внутривенном введении ДФ с дополнительной инъекцией магневиста и последующим Т2-, Т2*-взвешенным 3Б-сканированием получены усиленные МРТ-изображения, на основании которых определены расположение и функциональное состояние поверхностных и других сосудов, питающих капсулу и опухолевые ткани.

Выводы. Разработан способ выявления сосудов, питающих опухоль, в эксперименте.

В.М. Бухман, Э.Р. Переверзева, И.Д. Трещалин, Е.Б. Исакова, Е.Н. Олсуфьева,

А.Н. Тевяшова, М.Н. Преображенская НОВОЕ ПОЛУСИНТЕТИЧЕСКОЕ ПРОИЗВОДНОЕ АНТИБИОТИКА КЛАССА АУРЕОЛОВОЙ КИСЛОТЫ НИИ НА им. Г.Ф. Г аузе РАМН, Москва

Задачи исследования. В лаборатории химической трансформации антибиотиков НИИ НА им. Г.Ф. Гаузе был синтезирован ряд производных ауреоловой кислоты. В опытах in vitro на клетках РТК линии HCT 116 была оценена их антипролиферативная активность. Соединение ЛХТА-1599 было отобрано, как активное (IC50 составила 120 nM). Задачей настоящего исследования явилось изучение его противоопухолевой активности in vivo.

Материал и методы. Опыты проведены на самках и самцах мышей B6D2F1 m тела 20-22 г. Лимфому Р388 перевивали внутрибрюшинно по 106 клеток на мышь в день 0. Рост асцитной лимфомы оценивали по параметру нарастания m тела и по УПЖ животных, %. Меланому В16 и аденокарциному молочной железы АК755 перевивали подкожно по 106 клеток на мышь в день 0. Эффект оценивали по ТРО, % в динамике. Соединение ЛХТА-1599 растворяли в изотоническом р-е NaCl и вводили в/в в диапазоне доз. Препаратом сравнения являлся антибиотик того же класса, оливомицин. Лечение начинали на 1 или 3 сутки. О токсичности судили по результатам ежедневного наблюдения, изменению m тела.

Результаты. Всего поставлено 4 опыта: 2 на Р388 и по 1 на солидных АК755 и В16. Показано, что ЛХТА-1599, примененный в/в ежедневно или раз в 3 сут*5 раз по 4 мг/кг вызывает достоверное УПЖ животных с лим-фомой Р388 (от 39 до 52%). _____________________

При применении оливомицина в дозе 2 мг/кг, не вызывающей лекарственной гибели, УПЖ составило 35%. Достоверное торможение роста меланомы мышей В-16 было получено при введении ЛХТА-1599 в диапазоне доз от 4 до 8 мг/кг пятикратно с интервалом 72 часа (максимальное ТРО составляло 100% на 10-17 сут). Оливомицин в этом эксперименте проявил близкую к ЛХТА-1599 противоопухолевую активность в дозе 2 мг/кг. Аналогичные результаты получены на модели АК755.

Выводы. Новое производное ауреоловой кислоты ЛХТА-1599 имеет значительно более широкий терапевтический интервал по сравнению с оливо-мицином, проявляет противоопухолевую активность в отношении как асцитной, так и солидной опухолей. Выявленная противоопухолевая активность позволяет передать препарат на дальнейшие этапы предклинического изучения.

О.А. Васильев

ПИАНОСОДЕРЖАЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ, АНТИПРОЛИФЕРАТИВНЫЕ ПРЕПАРАТЫ

ЦКБ РАН, Москва

Задача исследования. Поиск новых групп противоопухолевых препаратов.

Материалы и методы. Компьютерная программа для предсказания спектра биологической активности веществ PASS.

Результаты и выводы. Включение в молекулы биологически активных и лекарственных веществ HCN и ее производных позволит создать новые г-руппы антиметаболитов, обладающих высокими цитостатическими, антипролиферативными и противовоспалительными свойствами. Предполагается, что после проникновения в клетки вещества, содержащего HCN или ее производные, под воздействием кислот и ферментов может происходить разложение этого вещества на HCN, ее производные и лекарственное или биологически активное вещество.

Цианиды, блокируя цитохромоксидазы, будут вызывать клеточную гипоксию и гибель клеток. При включении синтезированных веществ в цепь биохимических реакций, без их разложения, можно предположить реакции, в результате которых будет тормозиться транспорт РНК, синтез и репликация ДНК, что может инициировать апоптоз.

В частности, бензцианофолат может угнетать дегидрофолат редуктазу, блокируя синтез пуринов. При разложении на C6H5CHO, фолиевую и HCN, последняя будет ингибировать цитохромоксидазы, вызывая гипоксию и гибель клеток. Проведенный анализ предполагаемого вещества - бензцианофолата - с помощью РАSS показал высокую цитостатическую и противоопухолевую активность:

- Antileukemic - 0,636;

- Cytostatic - 0,631;

- Antineoplastic (colorectal cancer) - 0,574.

Cнижение общетоксического действия HCN и ее

производных:

- точная дозировка,

- применение антидотов цианидов,

- лечение на фоне:

- оксигенотерапии,

- гипербарической оксигенации,

- совершенствование средств доставки

- липосомы,

- фуллерены,

- моноклональные антитела,

- преимущественно локальное, ультрасе-лективное применение.

М.Г. Воронков2, Л.А. Островская1, Д.Б. Корман1,

Н.В. Блюхтерова , М.М. Фомина , В.А. Рыкова ,

К.А. Абзаева , Л.В. Жилицкая ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ ПОЛИАКРИЛАТОВ БЛАГОРОДНЫХ МЕТАЛЛОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ 1ИБФ им. Н.М. Эмануэля РАН, Москва 2ИИХ им. А.Е. Фаворского СО РАН, Иркутск

Задачи исследования. Оценка противоопухолевой активности металлополиакрилатов, составляющих новую для онкологии группу соединений, а также в изучении связи «структура - эффект» в ряду производных полиакриловой кислоты, содержащих различные, в том числе благородные (платина, золото, серебро), металлы.

Материалы и методы. Исследована токсичность и противоопухолевая эффективность 14 производных полиакриловой кислоты, содержащих различные металлы. Определены параметры острой токсичности препаратов (ЬЭ50 и МПД) при их однократном внутрибрюшинном (в/б) введении в диапазоне доз от 10 до 250 мг/кг (мыши ББР1). Изучена противоопухолевая активность препаратов на моделях солидных опухолей - ЬЬС (мыши БББ1) и аденокарцинома АКАТОЛ (мыши Ва1Ь/с) при ежедневном, пятикратном в/б применении, начиная со следующих суток после перевивки опухоли. Противоопухолевый эффект препаратов оценивался при сопоставлении кинетики развития опухолей в группах леченных и контрольных животных. Показателем ростингибирующей активности соединений служил коэффициент ТРО, %.

Результаты. Установлено, что среди изученных соединений препарат феракрил обладает наименьшей токсичностью (ЬЭ50 и МПД составляют 200 и 150 мг/кг, соответственно), а никель- и станнум-замещённые производные проявляют наибольшую токсичность (ЬЭ50 и МПД - 15 и 10 мг/кг, соответственно). Среди полиакрилатов благородных металлов наименьшей токсичностью обладает препарат ауру-макрил, ЬБ50 и МПД которого равны 150 и 100 мг/кг, соответственно. Эти показатели составляют для платинакрила 75 и 50 мг/кг, для аргакрила 30 и 20 мг/кг. Обнаружено, что полиакрилаты благородных металлов являются наиболее эффективными среди 14 изученных соединений. Аурумакрил ингибирует рост ЬЬС и аденокарциномы АКАТОЛ на 6065%. Платинакрил тормозит развитие этих опухолей на 40 и 55%, а препарат аргакрил - на 90 и 40% по сравнению с контролем соответственно.

Выводы. Изучение противоопухолевой активности в ряду металлозамещённых производных полиакриловой кислоты на моделях солидных опухолей (ЬЬС и аденокарциномы АКАТОЛ) позволило установить, что полиакрилаты благородных металлов аурумакрил, аргакрил и платинакрил являются наиболее эффективными среди изученных соединений.

И.С. Голубева1, Н.П. Маркова1, Ю.Ю. Солуданов2,

Б.В. Страдомский2, Г.К. Герасимова1 ПРОТИВОПУХОЛЕВЫЕ ЭФФЕКТЫ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРЕПАРАТА СТЕЛЛАНИН :РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва,

2ООО «Фармпрепарат», Ростов-на-Дону

Введение. Препарат Стелланин (СТ) является комплексным гетероциклическим йодсодержащим соединением, состоящим из 20% 1,3-диэтилбензимидазолия трийодида + 80% низкомолекулярного ПВП.

Препарат обладает местной и системной антибактериальной активностью широкого спектра действия, противовоспалительным и регенерирующим действием, а также цитотоксическим действием в отношении культур опухолевых клеток человека. Компоненты препарата образуют прочный комплекс - молекулу Стелланина, из которой происходит постепенное медленное высвобождение йода. Вследствие этого вещество является нетоксичным: ЛД50 для крыс > 10000 мг/кг (Б.В. Страдомский с соавт.).

Задача исследования. Оценка противоопухолевого действия СТ в отношении перевиваемых опухолей мышей.

Материалы и методы. Противоопухолевая активность СТ в лекарственной форме «капли для приема внутрь» изучена на подкожно привитой меланоме В1б. Лечение начинали через 48 ч после подкожной перевивки опухоли. Препарат СТ в соответствующем разведении вводили мышам per os с помощью зонда. Дозы препарата 10 мг/кг, 25 мг/кг и 50 мг/кг. Лечение проводили в течение 10 дней в двух режимах:

I. ежедневно 3 раза в сутки с интервалом 3 ч;

II. 1 раз в сутки ежедневно.

Оценка противоопухолевого эффекта по показателям: ТРО и УПЖ животных, (% от контроля).

Результаты. Капли СТ при введении мышам рєг os тормозят рост подкожной меланомы В1б в зависимости от дозы и режима лечения. Максимальный эффект получен при дозе 50 мг/кг при трехразовом ежедневном в течение 10 дней введении per os (курсовая доза 1500 мг/кг): 80% ТРО непосредственно после окончания лечения, б7% через 7 дней после окончания лечения и сохранение более 50% ТP0 в течение 13 дней. УПЖ = 15%. При однократном ежедневном введении СТ в той же дозе ТP0 на уровне б0-51% сохранялся в течение 13 дней после окончания лечения. ПВП, входящий с состав препарата, не обладает противоопухолевой активностью. Во всех изученных дозах и режимах СТ не стимулировал рост опухолей. Гибели животных от токсичности СТ, т.е. ранее контроля, не наблюдалось.

Заключение. Впервые показана противоопухолевая активность содержащего 1,3-диэтилбензимидазолия трийо-дид противовоспалительного препарата СТ.

Л.Е. Голубовская1, Т.А. Титова2, В.Н. Толкачев2,

З.С. Смирнова2, О.В. Онопченко2,

М.А. Красильников2, Т.А. Федотчева3,

Н.Л. Шимановский , В.М. Ржезников1 ТРАНСФОРМИРОВАННЫЕ СТЕРОИДЫ КАК ПОТЕНЦИАЛЬНЫЕ ИНГИБИТОРЫ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ 'ГУ ЭНЦ?, Москва

^ОНЦ им. Н.Н. Блохина PAH^ Москва ^ГМУ, Москва

Задачи исследования. Эффективность традиционной адъювантной терапии гормонозависимых опухолей резко падает при возникновении МЛУ, механизмы действия которой могут быть связаны как с активизацией обратного транспорта лекарств, так и с нарушениями апоптоза раковых клеток. Синтез цитотоксических стероидов с широким спектром гормонального действия, включающим антиэстрогены, сильные и слабые эстрогены, позволяет провести поиск потенциальных ингибиторов МЛУ. С этой целью препараты указанных типов гормонального действия, показавшие высокую активность на опухоли Са 755, были исследованы на линиях клеток PМЖ человека MCF-7, чувствительной к тамоксифену, и двух линиях культуры, одна из которых резистентна к тамок-сифену MCF-7/r2, а другая к доксорубицину MCF-7/R.

Материалы и методы. Сублиния MCF-7/T2 была получена в результате длительного (60 суток) культивирования родительской линии MCF-7 в среде DMEM в присутствии тамоксифена, а MCF-7/R - в присутствии гентамицина. При определении скорости роста клеток использован МТТ-тест. Накопление и выброс опухолевыми клетками Докс контролировали методом конфокальной лазерной микроскопии на приборе LSM-S-Pascal.

Результаты и выводы. Наиболее выраженный цитостатический эффект на всех линиях MCF-7 обнаружен у антиэстрогеноцитостатика РО-716: 50 % и 76 %-ное подавление клеточного роста на MCF-7/T2 и MCF-7/R соответственно. Препарат обладает также химиосенсибилизирующим действием, усиливая более чем втрое эффект Докс. Он существенно замедляет транспорт Докс из опухолевых клеток: концентрация в них Докс, введенного совместно с РО-716, не изменялась в течение 30 мин, а без него уменьшалась на 13% уже через 15 мин. Препарат Р0-720, практически лишенный гормонального действия, превосходит Там на культуре MCF-7/Т (60 % против 52), а в комбинации с эстрадиолом - более чем вдвое. Менее активны препараты РО-727 и 731 с высокой эстрогенной активностью, хотя только у последнего зафиксировано усиление цитотоксического эффекта в комбинации с эстрадиолом. Полученные данные свидетельствуют

о перспективности дальнейшего изучения стероидных цитостатиков в качестве ингибиторов МЛУ.

СА Гончарова, Т.А. Раевская, Н.П. Коновалова, В.Д. Сень РАЗЛИЧИЯ В СКОРОСТИ РАЗВИТИЯ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ К ЦИСПЛАТИНУ И ПЛАТИНА(ГУ)-НИТРОКСИЛЬНОМУ КОМПЛЕКСУ ИПХФ РАН, Черноголовка

Максимальный противоопухолевый эффект цис-платина (комплекс двухвалентной платины Pt(II) недостижим из-за его высокой токсичности и быстрого развития резистентности. Перспективным способом улучшения химиотерапевтических свойств платиновых соединений является введение в их структуру биологически активных лигандов и превращение комплексов Pt(II) в менее реакционноспособные комплексы четырехваленой платины Pt(IV). Мы синтезировали ряд платина(1^-нитроксильных комплексов, содержащих биологически активные нитроксильные радикалы. Одним из них является комплекс*:

Ранее мы показали, что комплекс ВС118 проявляет в эксперименте высокую противоопухолевую активность, сравнимую с таковой цисплатина, и менее токсичен. При совместном введении комплекса ВС118 и цисплатина в низких дозах(1/20 от LD50) противоопухолевое действие взаимно усиливается (синергический эффект). В настоящей работе мы исследовали развитие устойчивости лейкоза Р388 к монотерапии цисплати-ном или комплексом ВС118, а также к комбинированной терапии этими препаратами. Резистентность индуцировали путем последовательной перевивки опухоли от леченных животных.

Все препараты вводили животным на 1; 3; 5 и 7 сутки после перевивки опухоли. В опытах по индукции устойчивости к комбинированной терапии препараты вводили в эти же сроки одновременно и в тех же дозах, что и при индукции устойчивости к монотерапии. На каждой трансплантационной генерации проверяли чувствительность каждого штамма к индуцирующей терапии и к двум другим воздействиям, применяемым в оптимальных дозах.

*ВС118[e-аммин-d-(4-амино-2,2,б,б-тетpаметилпипеpидин-1-оксил)-a,f-бис(ацетато)-b,c дихлороплатина(^)].

Резистентность к цисплатину развивалась к 9 генерации, одновременно снижалась чувствительность штамма к комбинированной терапии, но в течение двух генераций сохранялась чувствительность к ВС118. Устойчивость к комплексу ВС118 развивалась несколько позже - к 11 генерации, но при этом в течение еще четырех генераций сохранялась чувствительность к цисплатину и в течение трех генераций -к комбинированной терапии. Быстрее всего развивалась устойчивость к комбинированной терапии цис-платином и комплексом ВС118 - уже к 7-й генерации, при этом параллельно снижалась чувствительность к монотерапии каждым входящим в комбинацию препаратом. Эти данные предполагают наличие некоторых сходств в механизме развития устойчивости к цисплатину и к комплексу ВС118. Полученные в настоящей работе данные свидетельствуют о том, что комбинированная терапия цисплатином и комплексом ВС118 может быть эффективной для опухолей, которые ранее не подвергались лечению цисплатином.

Дерябина О.Н., Карпова В.Н., Букаева Е.О., Степанова Е.В., Барышников А.Ю., Плотникова Н.А. ЦЕРВИКОВАГИНАЛЬНЫЕ ИНДУЦИРОВАННЫЕ НЕОПЛАЗИИ: АНГИОГЕНЕЗ, ПАТОМОРФОЛОГИЯ ГОУ ВПО «МордГУ им. Н.П. Огарева», Саранск РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Цель исследования. Изучение влияния мелатонина и метформина на процессы неоангиогенеза в условиях экспериментального опухолевого роста, индуцированного бенз(а)пиреном.

Материал и методы исследования. Эксперимент был поставлен на 120 самках нелинейных белых мышей в возрасте 3 мес весом 20-22 г., поделенных на 4 группы по 30 животных. Моделирование цервикова-гинального канцерогенеза, индуцированного бенз(а)-пиреном, производили по стандартной методике. Животные 1 гр. получали с питьевой водой в ночные часы (19.00-07.00) мелатонин по 2 мг/л. Животные 2 гр. получали с питьевой водой в течение всего дня «сиофор 500» по 200 мг/л. Животные 3 гр. получали с питьевой водой в течение всего дня «сиофор 500» по 200 мг/л и мелатонин по 2 мг/л. Животные 4 гр. составили контроль по канцерогену и получали питьевую воду без добавления мелатонина и сиофора.

Результаты. Под влиянием бенз(а)пирена у мышей развивались опухоли шейки матки с частотой 80 % (24 животных из 30, получавших мелатонин), 67 % (20 животных из 30, получавших метформин), 60 % (18 животных из 30, получавших мелатонин и метформин) и 90 % (27 животных из 30) в контрольной группе.

Вывод. Введение мелатонина и сиофора способствовало снижению активности ангиогенеза в ткани индуцированных неоплазий. Мелатонин и метфор-мин обладают онкопротекторным действием, что проявляется уменьшением частоты, множественности и размеров опухолей шейки матки.

О. С. Жукова1, Г.К. Герасимова1, Ю.Ю. Солуданов2, Б. В. Страдомский2

ЦИТОТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ПРЕПАРАТА СТЕЛЛАНИН

'РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва,

2ООО «Фармпрепарат», Ростов-на-Дону

Введение. Препарат Стелланин (СТ), разработанный в ООО «Фармпрепарат», является комплексным

гетероциклическим йодсодержащим соединением, состоящим из 20% 1,3-диэтилбензимидазолия трийо-дида + S0% низкомолекулярного ПВП. У препарата выявлены местная и системная антибактериальная активность широкого спектра действия, противовоспалительное и регенерирующее действие. Компоненты препарата образуют прочный комплекс - молекулу СТ, из которой происходит медленное высвобождение йода с образованием 1,3-диэтилбензимидазолия монойодида. Механизм бактерицидного действия основан на взаимодействии высвобождающегося йода с белками бактериальной стенки и ферментными белками микроорганизмов с образованием йодаминов, что приводит к денатурации белковых молекул. Противовоспалительное и регенерирующее действие СТ связывают с диэтилбензимидазолием, т. к. этими свойствами обладает также соединение - 1,3-диэтилбенз-имидазолия монойодид, у которого отсутствует про-тивомикробное действие (Б .В. Страдомский и др.).

Задача исследования. Оценка цитотоксического действия субстанции СТ, 1,3-диэтилбензимидазолия монойодид и механизма гибели опухолевых клеток.

Материалы и методы. Культуры опухолевых клеток человека: РІК линии LS174T и эритробласт-ный лейкоз линии К562. Цитотоксическую активность оценивали МTT-тестом после 72 ч инкубации при 37 °С (среда RPMI1640, 10 %-ная эмбриональная сыворотка теленка, 5 %-ное содержание СО 2 в атмосфере) по выживаемости клеток в присутствии субстанции СТ или 1,3-диэтилбензимидазолия монойодида в диапазоне концентраций 25 мкМ; 50 мкМ; 100 мкМ и 150 мкМ. Возможность индукции препаратом апоптоза определяли с помощью FLICA Apoptosis Detection Kits.

Результаты. На культуре клеток LS174T установлена зависимость цитотоксического эффекта от концентрации СТ при его однократном введении в среду инкубации клеток в диапазоне концентраций 20-150 мкМ: IC50=25 мкМ. Максимальный цито-токсический эффект (27-30% выжившей фракции клеток) достигнут при однократном введении препарата в концентрации 100 и 150 мкМ или при десятикратном введении СТ в концентрации 20 мкМ (по 5 раз в день на 1 и 2 сутки инкубации клеток). Механизм гибели клеток - апоптоз. Цитотоксиче-ской активности монойодида в диапазоне концентраций 25 - 100 мкМ не выявлено.

Заключение. Противовоспалительный препарат СТ обладает прямым цитотоксическим действием в отношении культур опухолевых клеток человека. Цитотоксическое действие СТ можно связать с выделяющимся из трийодида йодом, но не с бензими-дазольной частью молекулы СТ.

Г.И. Кабацкая1, В. Ф. Левшин2, М.Я. Шашкина2,

В.В. Решетникова2, Ю.Н. Соколов2, Г.А. Гордина2, А.В. Сергеев2

ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕПАРАТА «ЧАГОВИТ» В ГРУППАХ РИСКА

1ГОУ ВПО ММА им. Н. А. Сеченова, Москва 2РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. В экспериментальных работах доказано наличие у экстракта чаги (ЭЧ) антиканцерогенных, антимутагенных, иммуномодулирующих, антитоксических и других свойств. БАВ в ЭЧ, по-видимому, представлены суммой гуминовых кислот (хромогенным полифенольным комплексом), полисахаридами и другимиБАВ. В РОНЦ на основе ЭЧ созданы препараты «Чаговит» (ЧВ) и «Чагалюкс» (ЧЛ).

Цель нашего исследования заключается в оценке возможности использования препарата ЧВ в группах онкологического риска («злостные» курильщики, больные мастопатией) и при лечении больных сахарным диабетом (СД) II типа. Проведены рандомизированные исследования в 3 группах пациентов. I группа - «злостные» курильщики с длительностью курения 5-30 лет (166 человек), желающие отказаться от курения; II группа - больные мастопатией (98 женщин); III группа -больные сахарным диабетом (120 человек). Всем пациентам в опытных подгруппах ЧВ назначали по 2 капсулы 2 раза в день в течение 1-2 мес.

Результаты. Одним из важных факторов риска развития хронических и онкологических заболеваний является курение. При курении возникает привыкание, затрудняющее добровольно отказаться от курения. Применение препарата у курильщиков в течение 1-2 мес. способствовало сокращению числа выкуриваемых сигарет в 1,5 раза по сравнению с контролем. Число лиц, отказавшихся от курения, возрастало в 3 раза (30-35% в опытной группе, 10-12% в контроле). У 42-45% лиц улучшалось самочувствие (в контроле у 14-17%). Положительное влияние препаратов чаги у лиц, бросающих курить, по-видимому, обусловлено антитоксическими, адаптогенными, антиоксидантными свойствами препарата, который способствовал более быстрому снятию токсикозов никотинозависимости у курящих, ускорял нормализацию физиологических функций организма. Другой группой риска являются больные мастопатией. После 2 мес. применения ЧВ показано, что по эффективности действия ЧВ сопоставим с мастодиноном (одним из наиболее активных препаратов при лечении мастопатии). Он достоверно снимал боли и дискомфорт в молочных железах, предменструальную мастодинию, особенно на фоне астеноневротического синдрома. Отмечалась хорошая переносимость ЧВ. Больные СД II типа. СД - одно из наиболее распространенных, хронических заболеваний во всем мире. Основной проблемой СД является значительный риск развития осложнений. Избыточный вес (ожирение) сопутствует более 80% больных СД II типа. В подгруппе пациентов с длительным сроком СД (до 12 лет), имеющим осложнения (80%) и сопутствующие заболевания, в том числе гипертонию и др., ЧВ назначали на фоне гипогликемического лечения (диабетон, маннинил и др.). Через 1 мес. после начала терапии у пациентов наблюдалось достоверное снижение на 15% уровня глюкозы в крови. При этом у 50% пациентов исчезла жажда и сухость во рту, практически у всех наблюдалось повышение общего тонуса, у 33,3% снизился вес. В группе сравнения достоверных изменений не наблюдали. В подгруппе больных с длительностью заболевания менее 5 лет, имеющих меньше осложнений, ЧВ назначали на фоне снижения дозы ги-погликемических препаратов на 50%. Уровень глюкозы в крови больных через 1 мес. после начала применения комбинированной терапии снижался на 20%. У 35% пациентов исчезла жажда, у 45% - сухость во рту, 80% больных отмечали повышение общего тонуса, у 10% больных снизился вес. В контроле (традиционная терапия) изменений не наблюдалось. У больных в подгруппе с впервые выявленным СД II типа (без осложнений), ЧВ назначали на фоне диеты № 9 без применения традиционного гипогликемического лечения. В группе больных, получающих ЧВ в течение 1 мес., наблюдали статистически значимое снижение на 40% уровня глюкозы в крови натощак. У 35-40% пациентов исчезла жажда и сухость во рту, у 100% больных повышался общий тонус, у 65% -снизился вес. Все пациенты, получающие ЧВ, отмечали хорошую переносимость препарата и существенное клиническое улучшение состояния здоровья. В контрольной группе положительных изменений не наблюдали.

Выводы. Препараты чаги (ЧВ и ЧЛ) могут быть перспективны для химиопрофилактики рака и при лечении хронических сопутствующих заболеваний (мастопатия, СД II типа).

О.В. Калинина1, Б.А. Фролов1, А.А. Штиль2,

Н.М. Перетолчина2, З.С. Смирнова2 МИЛИАЦИН КАК СРЕДСТВО ПОВЫШЕНИЯ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ И СНИЖЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ МЕТОТРЕКСАТА НА ЬЬС МЫШЕЙ 'ГОУ ВПО ОрГМА, Оренбург 2РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Цель исследования. Оценка влияния пентацикли-ческого тритерпеноида милиацина на противоопухолевый и токсический эффекты метотрексата на модели карциномы легких Льюис.

Материалы и методы. ЬЬС перевивали мышам

- самцам ВББ^о 50 мг измельченной опухолевой ткани в 0,5 мл среды 199 подкожно в правую подмышечную область. После трансплантации ЬЬС животные были разделены на четыре группы:

I. Мыши не леченные (контроль);

II. Мыши, получавшие внутрибрюшинно однократно МТХ (фирма Эбеве, Австрия) в дозе 10 мг/кг;

III. Мыши, получавшие МТХ с последующим 3-кратным введением растворителя милиа-цина - твина-21 в 0,9% растворе хлорида натрия;

IV. Мыши, получавшие МТХ с последующим 3-кратным введением милиацина.

Лечение начинали через 48 часов после инокуляции опухоли Милиацин и растворитель вводили внутри-брюшинно через 1; 24 и 48 часов после введения МТХ.

Критериями оценки противоопухолевого эффекта служили: торможение роста опухоли (ТРО, %) и увеличение продолжительности жизни (УПЖ, %) опытных животных по сравнению с контрольными.

Токсичность в леченных группах оценивали по ранней гибели мышей по сравнению с гибелью не леченных животных. Результаты обрабатывали с использованием непараметрического критерия X и критерия Стьюдента. Различия считали статистически достоверными при р < 0,05.

Результаты. Тритерпеноид растительного происхождения милиацин повышает терапевтическую эффективность МТХ, их сочетанное применение вызывает высокое торможение роста ЬЬС: в течение 12 дней после введения цитостатика ТРО составляет 91- 84%, а статистически значимое ТРО сохраняется до 19 дня после окончания лечения (ТРО=60%). Кроме того, МТХ в сочетании с милиацином увеличивает продолжительность жизни мышей с ЬЬС на 36%, в то время как МТХ в монотерапии только на 9%.

Однократное внутрибрюшинное введение МТХ в дозе 10 мг/кг оказывает токсическое действие на мышей ВБр! с ЬЬС, вызывая гибель 33% животных в течение первых 5 суток после его применения. Милиацин уменьшает токсическое действие МТХ, снижая гибель животных до 13%.

Заключение. Полученные результаты исследования открывают перспективу использования милиаци-на при комбинированной химиотерапии злокачественных новообразований.

Данные, полученные нами ранее о иммунопротек-торном и гепатопротекторном действии милиацина дают основание продолжить исследование по сочетанному применению милиацина с другими противоопухолевыми средствами.

гКаршиева С.Ш., гРайхлин Н.Т, гЗимакова Н.И., гТрещалина Е.М., 2Небольсин В.Е. ВОЗМОЖНОСТИ

ЦИТОДИФФЕРЕНЦИРУЮЩЕЙ ТЕРАПИИ 1МЕЛАНОМЫ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ

1РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва

2ООО «Фарминтерпрайсез», Москва

Введение. Ранее in vitro на клетках мышиной меланомы Б1б и меланом человека MS и Mel5 было показано, что дикарбамин (Dcr) обладает антипро-лиферативной активностью, причем проявляет синергизм при сочетании с a-интерфероном. Изучение цитодифференцирующего действия Dcr на меланоме человека MeW показало способность интенсифицировать меланиногенез, что послужило основанием для изучения противоопухолевого эффекта этого агента на моделях меланомы in vivo.

Цель исследования: изучить возможности цитодифференцирующей терапии с использованием Dcr и его эффективность в сочетании с химиотерапией на моделях меланомы животных и человека.

Материалы и методы: В опытах использованы 3 вида меланом: мышиная меланома Б1б, меланомы человека - пигментированная MeK и беспигментная Mel7 (Банк опухолевых штаммов РОНЦ). Опухоли трансплантировали подкожно иммунокомпетентным или иммунодефицитным мышам, соответственно штамму. Dcr фирмы «Валента Фармацевтика», РФ. Для изучения эффективности комбинированной терапии с Dcr использованы стандартные для лечения диссеминированной меланомы аптечные препараты цисплатин (ЦП), дакарбазин (DTIC) и a-интерферон (a-ИФН). Все препараты применены в терапевтических дозах и режимах введения, Dcr в сочетании с a-ИФН и ЦП применяли в субтерапевтической дозе. Об эффективности лечения судили по стандартным критериям: ТРО% или T/C% и УПЖ%. Для гистохимического определения степени экспрессии аргирофиль-ных белков ядрышек (Ag-ОЯОР-белков) использовали реакцию с нитратом серебра. Интенсивность экспрессии Ag-ОЯОР-белков оценивали по количеству образующихся гранул серебра. Полученные данные обрабатывали статистически с помощью доверительного интервала по методу Стьюдента. Различия считались статистически достоверными при p<0,05.

В результате проведенных исследований показано, что:

- Dcr снижает экспрессию Ag-ОЯОР-белков в 2,0-2,5 раза (р<0,001) относительно контроля в клетках ксенографтов меланомы человека Mel7, что ведет к снижению скорости прохождения фаз клеточного цикла;

- цитодифференцирующая терапия с использованием Dcr вызывает высокий достоверный ингибирующий эффект на мышиной меланоме Б1б (ТРО=б9-93%, УПЖ=41%, p<0,05);

- эффективность цитодифференцирующей терапии с использованием Dcr на ксенограф-тах меланомы человека Melб и Мє17 ниже значимого уровня (Т/С=51-57%);

- комбинация Dcr+ЦП в сравнении с монохимиотерапией в 2 раза более эффективна по действию на опухолевый узел меланомы Б 1б (ТРО=85-88%, p<0,05) и по выживаемости мышей (УПЖ=38%, p<0,05);

- комбинация Dcr+a-ИФН показала активность по ингибирующему эффекту на Me^ человека на уровне одного a-ИФН (T/C=57-б0%, p>0,05);

- комбинация Dcr+DTIC на Mel7 человека достоверно более эффективна по сравнению с монотерапией по ингибирующему действию (T/C=3% против 5%, p<0,05) и выживаемости мышей (УПЖ=29% против 21%, p<0,05);

Заключение. Полученные данные позволяют считать, что двойные комбинации цисплатина и дакарбазина с Dcr перспективны для клинической апробации, т.к. дают возможность получить более высокий терапевтический результат. Комбинация Dcr+a-ИФН должна быть дополнительно изучена с терапевтической дозой Dcr, т. к. на модели п/к перевитого гемобластоза Френд с использованием препарата в более высокой дозе показала синергизм.

А.А. Кладиев, П.М. Бычковский, С.А. Красный,

Ю.П. Истомин, Е.Н. Александрова, Т.Л. Юркштович, Н.В. Голуб, В.А. Алиновская, Р.И. Костерова, ОЦЕНКА ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТИ ГЕЛЕОБРАЗУЮЩЕЙ ФОРМЫ ПРОСПИДИНА НА МОДЕЛЯХ САРКОМЫ М-1 И ЙЕНСЕНА У КРЫС Учреждение БГУ «НИИ ФХП», Минск РНПЦ ОМР им. Н.Н. Александрова, Минск

ООО «Биотехнологическая компания», Москва

Введение. В настоящее время в Российской Федерации выпускается несколько лекарственных форм проспидина, разрешенных для применения в медицинской практике: лиофилизированный порошок для инъекций и мазь с содержанием проспидина 30-50%.

К недостаткам существующих лекарственных форм проспидина следует отнести быстрое исчезновение из крови при внутривенном введении, низкую устойчивость в воде и водных растворах.

Цель исследования. Создание новой лекарственной формы проспидина в виде гидрогеля для локальной терапии различных патологических процессов, обеспечивающей увеличение эффекта противоопухолевого действия цитостатика.

Материалы и методы. Исследования проведены на крысах линии Вистар весом 120-160 г с перевитыми саркомой М-1 и саркомой Йенсена. Эксперименты проводили на 7-10 сутки после перевивки опухоли. В контрольной и опытной группе использовали по 8-10 крыс. Препарат проспидина в инъекционной форме и в виде гидрогелей вводили крысам однократно внутрибрюшинно (в объеме 1 или 2 мл на каждые 100 г веса животного). Критериями оценки противоопухолевого эффекта являлись: рост опухоли и продолжительность жизни животных. Объем опухоли (V, см3) рассчитывали по формуле Шрека:

Л

V = (а х b х с) х —, где 6

a, b, с - линейные размеры опухоли (см).

В течение 2 месяцев отмечали гибель крыс, определяя продолжительность жизни павших и излеченных животных. Животных считали излеченными при выживании в течение 2 месяцев после введения препарата и условии, что опухоль не пальпируется.

Результаты. Установлено, что препарат проспи-дина в виде гидрогеля является более эффективным по сравнению с инъекционной формой цитостатика. Медико-биологические исследования показали, что после введения инъекционной формы проспидина количество излеченных животных с саркомой М-1 и саркомой Йенсена составило 50% от общего числа.

Такие же дозы проспидина в составе препарата в виде гидрогеля излечили 7 из 8 (87,5%) и 10 из 10 (100%) крыс с саркомами М-1 и Йенсена, соответственно. Противоопухолевая активность полимерсодержащего препарата на основе проспидина в виде гидрогеля имеет более длительный период действия по сравнению с инъекционной формой. Установлено, что в начальный период времени (21 - 23 суток) тенденция торможения объема опухоли для двух препаратов на основе проспидина одинакова. Однако на 2325 сутки после введения препарата проспидина в инъекционной форме объем опухолей вновь увеличивается. Для препарата в виде гидрогеля рецидивный рост опухолей отсутствует.

Выводы. Предлагаемый препарат проспидина в виде гидрогелей обеспечивает существенное повышение (приблизительно в 2 раза) эффекта противоопухолевой активности по сравнению с инъекционной формой, а также пролонгирование терапевтического действия. Применение гидрогеля проспидина приводит к полному рассасыванию опухоли у всех экспериментальных животных.

Коняева О.И., Кульбачевская Н.Ю., Ермакова Н.П., Меркулова И.Б., Бухман В.М.

ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ СОНОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ С ТЕРАФТАЛОМ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ КОМБИНАЦИИ CMF НА КРЫСАХ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

В последние годы интенсивно изучается возможность повышения эффективности лечения онкологических больных сочетанием сонодинамической терапии (СДТ) с ХТ. Ранее продемонстрировано, что те-рафтал (ТФ) обладает свойствами соносенсибилизатора, а СДТ с противоопухолевой комбинацией CMF (циклофосфан + метотрексат + 5-фторурацил) проявляет высокую специфическую активность in vivo.

Целью настоящего исследования явилось изучение на крысах токсичности однократного и 3-кратного комбинированного применения циклофосфамида (С), метотрексата (М) и 5-фторурацила (F) при совместном применении с соносенсибилизатором терафталом (ТФ) и локальным УЗ-воздействием.

Материалы и методы. В работе было использовано 230 здоровых неинбредных крыс-самцов, массой 250-280 г. В качестве суммарных доз были выбраны таковые CMF, соответствующие 2/3 (доза, вызвавшая при однократном введении гибель 3 из 5 животных), 1/2 и 1/3 от доз, адекватных человеческой дозе, пересчитанной на крыс. Препараты, входящие в схему CMF применяли животным однократно внутривенно последовательно. ТФ использовали однократно внутривенно через 40 минут после введения цитостатиков в дозах 5 и 10 мг/кг. Через 40 минут после введения препаратов хвосты крыс подвергались воздействию УЗ с помощью установки УСДТ.

Результаты исследования. Токсичность стандартной схемы CMF (количество павших животных, клиническая картина интоксикации, изменение массы тела и аутопсия павших животных) практически не отличалась от токсичности CMF в сочетании с ТФ в дозе 5 мг/кг. Применение ТФ в дозе 10 мг/кг вызывало незначительное увеличение токсичности схемы CMF (по числу павших животных).

УЗ не усиливал токсичность комбинации "CMF + ТФ" и токсичность одной CMF. При многократном применении отмечена тенденция к усилению токсичности как самой комбинации CMF, так и при добавлении

к ней одного из компонентов (ТФ или УЗ) или при совместном использовании "ТФ + УЗ". УЗ и ТФ незначительно усиливают и пролонгируют гематологическую токсичность, вызванную действием CMF. УЗ не усиливает функциональные изменения со стороны печени, поджелудочной железы и почек, вызываемые применением CMF и "CMF + ТФ".

Заключение. Усиление токсичности CMF терафталом и УЗ в основном носит дозозависимый характер как для CMF, так и для ТФ.

А.И. Котельников1, Р.А. Котельникова1, В.С. Романова2, Н.П. Коновалова1, Г.Н. Богданов1, И.И. Файнгольд, Д.В. Мищенко\ Д.А. Полетаева1, А.В. Баринов1,

А.Ю. Рубцов1, Т.Е. Сашенкова1, Е.Н. Берсенева

ФУЛЛЕРЕНЫ И ИХ ПРОИЗВОДНЫЕ

В НАНООНКОЛОГИИ

'ИПХФ РАН, Черноголовка

2ИЭС им. А.Н. Несмеянова РАН, Москва

Введение. Значительное место среди современных наноматериалов занимают наноуглеродные структуры, в том числе фуллерены.

Активно развиваются работы по созданию водорастворимых производных фуллеренов, которые проявляют широкий спектр биологической активности: противоопухолевой, антиоксидантной, антивирусной, нейро-тропным и кардиопротекторным действием. Разработана уникальная методика синтеза гибридных биологически активных структур на основе фуллеренов (ГСФ) и эндо-металлофуллеренов путем селективного присоединение к фуллереновому ядру двух аддендов.

Одним из аддендов является аминокислота или пептид, обусловливающие водорастворимость производных фуллерена, а вторым - биологически активные группировки, обладающие антиоксидантным, фотосенсибилизирующим действием, которые создают возможность донировать оксид азота или ингибировать ключевые ферменты.

Развиты методики ковалентного присоединения фуллеренов к белкам и полинуклеотидам, что важно для исследования иммунологических свойств гибридных структур и их фотодинамического действия.

Цель исследования. Изучение противоопухолевой активности ГСФ на основе фуллерена С 60 и клинического цитостатика метотрексата, исследование возможности использования производных фуллеренов и эндометаллофуллеренов в качестве фотосенсибилизаторов и контрастирующих материалов в ЯМР-томо-графии, рентгензахватной и нейтронзахватной диагностике и терапии.

Материалы и методы. Эксперименты по определению противоопухолевой активности проводили на лейкемии Р388, используя мышей BDF. Препараты вводили внутрибрюшинно: метотрексат-фуллерен в дозе 2,5 мг/кг, метотрексат - в дозе 1,6 мг/кг на 1-7 сутки. Критерием активности служило увеличение средней продолжительности жизни животных.

Результаты. На основе разработанной методики синтезирована гибридная структура метотрек-сат-фуллерен. Показано, что токсичность данной структуры снижена в 4 раза по сравнению с исходным препаратом, а средняя продолжительность жизни животных возросла в 1,5 раза.

Созданы производные фуллерена С60 - эффективные хемосенсибилизаторы и ингибиторы процесса метастазирования при введении в комбинации с цитостатиками.

При этом доза цитостатиков уменьшается в 10 раз, что приводит к снижению их токсичности и предотвращает развитие резистентности.

Развиты методы синтеза водорастворимых производных фуллеренов и эндометаллофуллеренов, что позволяет проводить исследования нового класса биологически активных соединений, перспективных для применения в качестве фотодинамических соединений и контрастирующих веществ для ЯМР-томографии, а также рентгензахватной и нейтрон-захватной диагностики и терапии.

Выводы. Предложены оригинальные подходы к созданию новых наноматериалов на основе фулле-ренов для использования в качестве модификаторов терапевтического действия противоопухолевых препаратов, а также перспективных соединений для фотодинамики, ЯМР-томографии, рентгензахват-ной и нейтронзахватной диагностики и терапии.

В.П. Краснов, М.А. Королева,

Е.А.Ильичева, Смирнова Л.И.

ДИЗАЙН И ПЕРСПЕКТИВЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ САРКОЛИЗИНА И МЕЛФАЛАНА ИОС им. И.Я. Постовского УрО РАН, Екатеринбург РОНЦ им Н.Н. Блохина РАМн, Москва

Синтез и клиническое использование сарколи-зина и мелфалана представляют одну из ярчайших страниц истории развития ХТ опухолей. В создании этих соединений впервые реализована идея присоединения фрагмента азотистого иприта к молекуле природного метаболита фенилаланина.

Практически сразу после выявления высокой противоопухолевой активности сарколизина в опытах на животных появилось большое количество работ, посвященных синтезу и исследованию производных сарколизина. Многие из них обладали высокой противоопухолевой активностью, а спектр их противоопухолевого действия отличался от спектра исходного соединения.

Большой интерес представляли соединения, в которых сарколизин присоединен к молекуле природных метаболитов или их аналогов. Были синтезированы и изучены производные сахаров, глицеридов, стероидов, аминокислот и пептидов.

Особое внимание исследователей привлекали соединения, в которых молекула сарколизина входила в состав пептидов и пептидоподобных соединений. Некоторые из этих соединений были отобраны для проведения клинических исследований.

Препарат цифелин, представляющий собой дипептид сарколизина с валином, разрешен для клинического применения.

Пептиды мелфалана и другие его производные и в настоящее время являются перспективными объектами интенсивных исследований.

На их основе разработаны таргетные препараты, проходящие II фазу клинических испытаний: пептид мелфалана с 4-фторфе-нилаланином, цефалоспорино-вое производное мелфалана для терапии с использованием антител, трипептид 01у-Рго-Ме1 и другие.

Показано, что пептиды мелфалана обладают не только противоопухолевой, но и иной биологической активностью, например, радиопротекторной, а также используются в качестве необратимых ингибиторов ряда рецепторов.

Таким образом, дизайн новых производных сар-колизина и мелфалана не теряет своей актуальности.

Работа выполнена при финансовой поддержке Уральского отделения РАН (проекты 09-П-3-2001 и 09-И-3-2004) и Ведущих научных школ (НШ-65261.2010.3).

Кульбачевская Н.Ю., Коняева О.И.,

Ермакова Н.П., Бухман В.М.

ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ БЕЗОПАСНОСТИ СОНОДИНАМИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ С ТЕРАФТАЛОМ

ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ КОМБИНАЦИИ CMF НА КРЫСАХ

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

В последние годы интенсивно изучается возможность повышения эффективности лечения онкологических больных сочетанием сонодинамической терапии (СДТ) с ХТ. Ранее продемонстрировано, что те-рафтал (ТФ) обладает свойствами соносенсибилизатора, а СДТ с противоопухолевой комбинацией CMF проявляет высокую специфическую активность in vivo.

Целью настоящего исследования явилось изучение на крысах токсичности однократного и 3-кратного комбинированного применения циклофосфами-да (С), метотрексата (М) и 5-фторурацила (F) при совместном применении с соносенсибилизатором те-рафталом (ТФ) и локальным УЗ воздействием.

Материалы и методы. В работе было использовано 230 здоровых неинбредных крыс-самцов, массой 250-280 г. В качестве суммарных доз были выбраны дозы CMF, соответствующие 2/3 (доза, вызвавшая при однократном введении гибель 3 из 5 животных), 1/2 и 1/3 от доз, адекватных человеческой дозе пересчитанной на крыс. Препараты, входящие в схему CMF применяли животным однократно внутривенно последовательно. ТФ использовали однократно внутривенно через 40 минут после введения цитостатиков в дозах 5 и 10 мг/кг. Через 40 минут после введения препаратов хвосты крыс подвергались воздействию УЗ с помощью установки УСДТ.

Результаты исследования. Токсичность стандартной схемы СМР (количество павших животных, клиническая картина интоксикации, изменение m тела и аутопсия павших животных) практически не отличалась от токсичности СМF в сочетании с ТФ по 5 мг/кг. Применение ТФ по 10 мг/кг вызывало незначительное увеличение токсичности схемы CMF (по числу павших животных). УЗ не усиливал токсичность комбинации "СМF + ТФ" и токсичность одной СМЕ При многократном применении отмечена тенденция к усилению токсичности как самой комбинации ОМ7, так и при добавлении к ней одного из компонентов (ТФ или УЗ) или при совместном использовании "ТФ + УЗ". УЗ и ТФ незначительно усиливают и пролонгируют гематологическую токсичность, вызванную действием CMF. УЗ не усиливает функциональные изменения со стороны печени, поджелудочной железы и почек, вызываемые применением CMF и "CMF + ТФ".

Заключение. Усиление токсичности CMF тераф-талом и УЗ, в основном, носит дозозависимый характер как для CMF, так и для ТФ.

К.А. Лопатина, Е.П. Зуева, Л.А. Ефимова, Т.Г. Разина, С.Г. Крылова, Е.Н. Амосова, О.Ю. Рыбалкина, М.Ю. Хотимченко, Ю.С. Хотимченко ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ФУКОИДАНА ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ХТ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НИИ фармакологии СО РАМН, Томск

Недостатки большинства цитостатических препаратов - неизбирательность их действия и высокая токсичность, что часто является причиной изменения или отмены схемы лечения. Актуален поиск средств, повышающих эффективность химиопрепаратов.

Задачи исследования. Изучить влияние фукоида-на на развитие ЬЬС у мышей на фоне лечения цикло-фосфаном.

Материалы и методы. ЬЬС перевивали мышам-самкам линии С57В1/6 внутримышечно. ЦФ вводили в дозе 125 мг/кг однократно внутрибрюшинно на 10 сут развития опухоли. Фукоидан назначали внутрижелудоч-но с 7 сут развития опухоли курсом 11 введений в дозах 50 и 100 мг/кг. На 20 сут развития ЬЬС вычисляли процент торможения роста опухоли, частоту метастазирова-ния, количество, площадь метастазов. Статистическую обработку проводили с помощью критерия Вилкоксона-Манн Уитни и точного теста Фишера.

Результаты. ЦФ достоверно снижал т опухоли на 30%, количество метастазов - в 2,8 раза, площадь метастазов - в 9,8 раза относительно контроля. Количество метастазов в группе «Фукоидан 50 мг/кг + ЦФ» снижалось в 2,0 раза (Р<0,01), в группе «Фукоидан 100 мг/кг + ЦФ» - в 1,7 раза (Р<0,01) относительно этого показателя у животных, получавших цитостатик изолированно. Площадь метастазов при назначении фукоидана в дозе 50 мг/кг совместно с ЦФ уменьшалась в 2,5 раза (Р<0,01), фукоидана в дозе 100 мг/кг - в 1,7 раза (Р<0,05) по сравнению с таковой в группе «ЦФ». Фукоидан в дозе 100 мг/кг достоверно снижал количество метастазов (в 1,5 раза), их площадь -в 1,8 раза, а также т опухоли относительно контроля. Фукоидан в дозе 50 мг/кг достоверно уменьшал количество метастатических колоний в легких животных (в 1,4 раза) относительно нелеченой группы.

Выводы. Фукоидан в дозах 50 и 100 мг/кг повышает эффективность циклофосфана у мышей с ЬЬС и обладает самостоятельным антиметастатическим действием.

Работа выполнена при финансовой поддержке Федерального агенства по науке и инновациям РФ в рамках направления «Живые системы» ФНТЦП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического комплекса России на 2007-2012 годы» (государственный контракт №02.512.12.2043).

Т.А. Маньчева, Д.В. Демидов, В.Н. Анисимов,

Н.А. Плотникова, Т.В. Харитонова

ВЛИЯНИЕ МЕТФОРМИНА И МЕЛАТОНИНА

НА ПРОЦЕССЫ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ

ЛИПИДОВ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ

НОВООБРАЗОВАНИЯХ

ГОУ ВПО МорГУ им. Н.П.Огарева, Саранск

Задачей нашего исследования является изучение влияния совместного применения метформина и мелатонина на канцерогенез кожи, индуцируемый бенз(а)пиреном (БП) и уровень свободнорадикальных процессов у мышей.

Эксперимент выполнен на 220 самках нелинейных белых мышей 8ИК Мыши рандомизированно поделены на 4 группы по 50 мышей, оставшиеся 20 мышей служили интактным контролем. Животным экспериментальных групп два раза в неделю наносили на участок кожи спинки БП в концентрации 0,05%, растворенный в ацетоне в дозе 0,2 мл на мышь. Со следующего после введения канцерогена дня 2-я группа животных получала с питьевой водой в ночные часы (19.00-07.00) мелатонин в дозе 2 мг/л. 3-я группа - в течение всего дня метфор-мин в дозе 200 мг/л. 4-я группа - метформин в дозе 200 мг/л и в ночные часы мелатонин в дозе 2 мг/л. 1-я группа - контрольная по канцерогену (питьевая вода без добавления препаратов). Продолжительность опыта

- 26 недель, по окончании все мыши умерщвлены путем декапитации. У мышей из каждой группы взяты кровь и ткань кожи для биохимических и гистологических исследований. В сыворотке крови и гомогенатах опухолевой ткани оценивали интенсивность процессов

перекисного окисления липидов по уровню МДА и активности каталазы.

По сравнению с интактными, в группе контрольных животных, подвергавшихся воздействию только БП, отмечается достоверное увеличение (в 2,1 раза) содержания МДА в сыворотке крови (р<0,05) и в 2,3 раза в гомогенатах ткани опухолей кожи. При использовании мелатонина содержание МДА в сыворотке крови составило 1,53±0,14 ммоль/л, что достоверно ниже - в 2,6 раза (р<0,05) по сравнению с интактными и в 5,5 раз (р<0,001) - по сравнению с группой контрольных животных (БП+вода). Применение метформина отдельно и совместно с мелатонином привело к снижению уровня МДА в сыворотке крови до 1,72±0,15 ммоль/л и 2,4±0,44 ммоль/л, соответственно. По сравнению с контрольной группой отмечается достоверное снижение показателей МДА в 4,9 (р<0,001) и 3,5 раза (р<0,001), соответственно.

Анализ полученных результатов и сравнение их с показателями контрольной группы (индуцированный канцерогенез) позволяет предположить, что совместное применение мелатонина и метформина оказывает более выраженный корригирующий эффект на реакции пе-роксидации в сравнении с использованием данных препаратов по отдельности.

А.В. Масленникова, С.Н. Цыбусов, Е.И. Яковлева,

Л.И. Литвинова, Н.Б. Краснова ДИНАМИКА РАСПРЕДЕЛЕНИЯ,

НАКОПЛЕНИЯ И ВЫВЕДЕНИЯ КОЛЛОИДНОГО МАГНЕТИТА В ОРГАНИЗМЕ ПОСЛЕ ВНУТРИСОСУДИСТОГО ВВЕДЕНИЯ ГОУ ВПО НГМА Росздрава, Н. Новгород

Одним из наиболее перспективных компонентов систем направленного транспорта лекарств является магнетит (Бе304), однако данные относительно его динамики в организме, а также его влияния на органы и ткани при внутрисосудистом введении являются неполными и противоречивыми.

Целью настоящего исследования было изучение взаимодействия микрочастиц магнетита с органами и тканями после его внутрисосудистого введения, а также количественный анализ его распределения, накопления и выведения из организма.

Материалы и методы. Эксперименты проводились на белых беспородных крысах-самках весом 160-180 г. В хвостовую вену вводили коллоидный магнетит в дозе 25; 50; 100 и 125 мг на 1 кг веса. Животных выводили из эксперимента через 15; 30; 60 мин.; 3; 24 ч; 3; 5; 7; 15 и 20 сут после введения препарата. Проводилось гистологическое и электронно-микроскопическое исследование печени, селезенки, миокарда, почек, легких и головного мозга, а также определение концентрации железа в соответствующих тканях в различные сроки после введения магнетита.

Результаты. Во всех органах наблюдалась определенная последовательность перемещения частиц магнетита. Через 15-30 мин. после введения они локализовались в сосудах, межклеточном пространстве и мембранах отдельных клеток. В течение последующих 3 ч происходило последовательное проникновение феррочастиц через клеточную мембрану в цитоплазму и затем через кариолемму в ядро. Через 24 ч частицы магнетита определялись практически во всех структурах клетки, оставаясь в них в течение последующих 3 сут. Начиная с 3-4 сут., частицы магнетита начинали выводиться из организма различными путями, практически полностью элиминируясь в течение последующих трех недель. ГЭБ не являлся препятствием для магнетита, который обнаруживался в ткани ГМ примерно через 24 ч, локализуясь в основном в строме.

При количественном анализе железа в органах и тканях было установлено, что максимальное накопление частиц магнетита наблюдается в печени и селезенке, где концентрация железа за первые сутки возрастала более чем на порядок и сохранялась на этом уровне в течение следующих трех суток. Начиная с 3 и вплоть до 7 сут происходило быстрое уменьшение количества железа, после чего процесс выведения магнетита значительно замедлялся.

Выводы. Основная масса частиц магнетита после внутрисосудистого введения захватывается органами РЭС. Микрочастицы магнетита способны проникать через ГЭБ.

И.Б. Меркулова, Т.В. Абрамова, Н.Ю. Кульбачевская,

О.И. Коняева, В.М.Бухман, Ю.Е. Чикунова ГИСТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ КРЫС ПРИ 1-КРАТНОМ КОМБИНИРОВАННОМ ПРИМЕНЕНИИ СМР+ТФ И ЛОКАЛЬНЫМ УЛЬТРАЗВУКОВЫМ ВОЗДЕЙСТВИЕМ РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва

Цель исследования. Доклиническая оценка гистологических особенностей внутренних органов крыс при однократном применении комбинации СМБ в сочетании с соносенсибилизатором тераф-талом и локальным ультразвуковым воздействием.

Материалы и методы. Неинбредным крысам-сам-цам, однократно в/в вводили препараты комбинации СМБ в дозах, составляющих 1/2 и 1/3 от дозы для человека (ч/д) в пересчете на крыс.

ТФ вводили однократно в/в по 5 мг/кг через 40 мин после введения СМБ.

Локальное (хвост) УЗ-воздействие УСДТ-уста-новки в терапевтическом режиме применяли через 40 мин после введения СМб/СМР+Тф. Контрольным крысам внутривенно однократно вводили физиологический раствор натрия хлорида. На 3 и 30 сут после воздействий крыс умерщвляли усыплением диэтило-вым эфиром.

Кусочки органов подвергали общепринятой гистологической обработке; препараты изучали в окраске гематоксилином и эозином.

Результаты. На 3 сутки после применения СМБ в 1/2 или 1/3 ч/д отдельно, или с УЗ и ТФ (СМБ; СМБ+УЗ; СМБ+ТФ+УЗ) у крыс наблюдались дистрофические и деструктивные изменения различной степени в почках, печени, в сердце, надпочечниках, атрофические изменения в селезенке, лимфатических узлах, тимусе, семенниках, неострые воспалительные изменения в легких, тонкой кишке, причем эти изменения не имели четкой дозовой зависимости.

При применении 1/2 или 1/3 СМБ+УЗ морфологические изменения не отличались от таковых при применении только СМБ в обеих дозах как по качеству изменений, так и по количеству крыс с изменениями.

При применении 1/2 или 1/3 СМБ+ТФ+УЗ отмечено усиление атрофических изменений в селезенке, воспалительных изменений в легких, ослабление морфологических изменений в сердце и печени.

На 30 сутки после применения СМБ в 1/2 и 1/3 ч/д отдельно или с УЗ, или с ТФ и УЗ полного восстановления ранних изменений не наблюдалось в почках, тимусе, семенниках и легких у отдельных крыс; в селезенке и надпочечниках отмечены признаки репаративной гиперплазии.

Влияние ТФ и УЗ на морфологические особенности внутренних органов крыс при применении с комбинацией химиопрепаратов СМБ в 1/2 и 1/3 ч/д в этот срок не выражено.

Выводы. Локальное УЗ-воздействие не влияет на гистологические изменения во внутренних органах крыс, вызываемые комбинацией СМБ в 1/2 и 1/3 ч/д дозах. Применение ТФ с СМБ в 1/2 и 1/3 ч/д и с УЗ не влияет на гистологические изменения в большинстве внутренних органов крыс, но может усиливать атрофические изменения в селезенке и воспалительные изменения в легких, ослаблять дистрофические изменения в сердце и надпочечниках.

А.Н. Никитина, Е.Н. Бычкова,

А.Е. Щекотихин, М.Н. Преображенская ПОИСК

ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ В РЯДУ ^-ЗАМЕЩЕННЫХ

4,11-ДИМЕТОКСИНАФТО[2,3-^]ИЗАТИН-5,10-ДИОНОВ НИИ НА им Г.Ф. Г аузе РАМн, Москва

Введение. Ранее была разработана схема синтеза 4,11 -диметоксинафто [2,3-/] изатин-5, 10 -диона (ЛХТА-1655) и показана его способность модулировать активность митотических протеинкиназ. Для дальнейших исследований соединений этого класса нами был разработан метод синтеза Ж-замещенных нафтоизатиндионов и получены первичные данные об их антипролиферативной активности.

Цель исследования. Поиск потенциальных химиотерапевтических агентов и выявление взаимосвязей «структура активность» в ряду производных 4,11 -диметоксинафто [2,3-/] изатин-5, 10-диона.

Материалы и методы. Цитотоксичность соединений для клеток ИеЬа определяли МТТ-тестом.

Результаты. Для получения Ж-замещенных нафтои-затиндионов разработан метод, основанный на алкили-ровании 4,11-диметоксинафто[2,3-1]индол-5,10-диона и последующей модификации индольного ядра Ж-ал-килнафтоиндолдионов в изатиновое.

Изучение антипролиферативной активности препарата ЛХТА-1655 показало, что это соединение слабо ингибирует рост опухолевых клеток (например, для линии ИеЬа 1С50=95 мкМ).

Введение в положение 1 нафтоизатиндионов аминобутильных и бензильных групп ведет к значительному повышению антипролиферативной активности производных.

Для Ж-бензильных производных показано, что введение в пара- или мета-положения бензильного заместителя атома хлора или метильной группы приводит к более чем 30-кратному повышению активности в сравнении с Ж-незамещенным препаратом ЛХТА-1655.

Введение второго атома хлора в бензильный заместитель приводит к небольшому снижению активности новых препаратов по сравнению с моно-хлорпроизводными.

Скрининг Ж-замещенных нафтоизатиндионов на панели эукариотических митотических протеинки-наз, выполненный в компании РгоОтаєе бшЬИ, показал, что Ж-замещенные нафтоизатиндионы обладают существенно меньшей активностью, чем исходный препарат ЛХТА-1655.

Снижение активности Ж-замещенных нафтоиза-тиндионов в отношении протеинкиназ показывает важную роль МИ группы нафто[2,3-/]изатин-5,10-дионов при связывании с протеинкиназами.

Выводы. Обнаружена высокая биологическая активность Ж-замещенных нафтоизатиндионов и выявлена важная роль их некоторых функциональных групп в биологических свойствах соединений.

Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ-ТЖБС №07-03-92000-ННС-а.

В.Н. Осипов, К.А. Охманович,

О. С. Жукова, Л. И. Смирнова СИНТЕЗ И ИЗУЧЕНИЕ ЦИТОСТАТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ ХИНАЗОЛИНОВОГО РЯДА РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Достаточно большое число хиназолиновых производных являются противораковыми препаратами. В частности, в клинической практике широко применяются ингибиторы тирозин киназы эрлотиниб (Тарцева), гефи-тиниб и лапатиниб. В этом направлении производные 3-гидрокси-хиназолин-4-она являются интересными объектами для химической модификации и изучения биологических свойств.

Цель исследования. Синтез новых производных хиназолина и изучение цитотоксической активности полученных соединений.

Результаты. Нами синтезирован ряд производных 3-гидрокси-4(3Н)хиназолинона с применением новых, разработанными нами, методов синтеза. Эти методы включают в себя создание хиназолинового цикла и введение в него различных заместителей. Строение всех синтезированных соединений подтверждено набором физико-химических методов.

Для оценки цитотоксичности были отобраны 9 соединений по физико-химическим критериям фармако-форности (правило Липински). Результаты исследований цитотоксической активности на опухолевых клетках толстой кишки человека линии LS174T показывают, что все испытанные производные 3-гидрокси-4(3Н)хиназолинонов проявляют высокую цитотоксиче-скую активность (при концентрации соединений 10 мкМ выживаемость клеток 6-9%).

Скрининг, проведённый в различных научных центрах в США, показал противораковую активность одного из этих соединений на 7 различных мишенях.

Все соединения рекомендованы для исследований противоопухолевой активности в системе in vivo.

Выводы. Синтезированы новые производные 3-гидрокси-4(3Н)хиназолинона с потенциально высокой противоопухолевой активностью. Показано, что полученные соединения являются перспективными для дальнейшего изучения.

Покровский В.С., Лесная Н.А.,

Романенко В.И., Трещалина Е.М.

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ И ПЕРЕНОСИМОСТИ ТРЕХКОМПОНЕНТНЫХ КОМБИНАЦИЙ С АРАНОЗОЙ

НА МОДЕЛИ В/М ТРАНСПЛАНТИРОВАННОЙ LLC

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Комбинация EP - стандарт лечения МРЛ. Ранее было показано, что араноза (Ar) может существенно повышать эффективность многих цитостатиков, в том числе этопозида (Е) и цисплатина (P), а также ингибиторов топоизомеразы I иринотекана (I) и топотекана (T). Трехкомпонентные комбинации с включением Ar (ЕРАг, IPAr и TPAr) при определенных режимах применения позволяют добиться излечения 100% мышей с п/к трансплантированной LLC при начале лечения через 48 ч после трансплантации. Поскольку лечение пациентов проводят при развившейся опухоли, на доклиническом этапе важно оценить эффективность комбинаций в аналогичных условиях. Этому посвящено настоящее исследование.

Цель исследования: оценить эффективность и переносимость комбинаций EPAr, IPAr, TPAr на модели

развившейся в/м трансплантированной чувствительной опухоли ЬЬС.

Материалы и методы. Использованы мыши-самцы ББЕх и штамм ЬЬС из Банка РОНЦ (9-й пассаж). В опытные и контрольную (без лечения) группы включали по 8-10 мышей. Лечение развившихся опухолей начинали на 7 сутки при достижении Уср 1410 [1107^1713] мм3. Препараты вводили в/бр последовательно с интервалом

10-15 мин ежедневно однократно (I в дозе 30 мг/кг) или 3-кратно на 7-9 сутки после трансплантации опухоли в разовых дозах (Е - 10 мг/кг; Т - 0,75 мг/кг; Р - 2,5 мг/кг; Аг - 100 мг/кг). Эффективность оценивали по стандартным критериям: ТРО, % и УПЖ, % в сравнении с контролем без лечения. О переносимости химиотерапии судили по ожидаемым побочным эффектам: изменению массы тела и селезенки, а также возможной гибели мышей от токсичности. Статистическую обработку данных проводили по модифицированному методу Р.Б. Стрелкова, рассчитывая доверительный интервал средних сравниваемых величин.

Результаты исследования. Комбинации ЕРАг, 1РАг и ТРАг на развившейся в/м ЬЬС проявили длительное достоверное противоопухолевое действие, ТРО=65-76% (р<0,05) на 5-20 сутки после лечения, но без значимого продления жизни, УПЖ <18%. Достоверных различий между комбинациями нет. Переносимость лечения удовлетворительная, среди побочных эффектов всех комбинаций на 5-10 сутки отмечена незначительная потеря массы тела на <20%, для ЕРАг - достоверное уменьшение средней массы селезенки на <40% (р<0,05).

Заключение. 3-компонентные комбинации с этопо-зидом, цисплатином, иринотеканом, топотеканом и аранозой при лечении развившейся внутримышечно ЬЬС равноэффективны и не вызывают побочных эффектов, кроме значительного уменьшения массы селезенки при сочетании этопозида, цисплатина и аранозы.

И.Р. Просалкова1, Л.З. Болиева2, А.Б. Капитанов1, И.М. Лученко1, В.В. Решетникова 11, С.А. Хрусталев 1, М.Я. Шашкина1, А.В. Сергеев1 ЗНАЧЕНИЕ ПОЛИЕНОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ В ПРОФИЛАКТИКЕ

ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ НОВООБРАЗОВАНИЙ

1 РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва.

2ГОУ ВПО Северо-Осетинская ГМА, Владикавказ.

Введение. Полиеновые соединения (ПС) достаточно широко распространены в природе и к ним относятся ретиноиды, каротиноиды, токоферолы, ненасыщенные жирные кислоты (НЖК) и другие БАВ. ПС обладают двумя общими свойствами, имеющими важнейшее значение для биологии и медицины: они входят в состав всех клеточных и субклеточных мембран и являются мощными природными антиоксидантами, т.е. ингибируют образование свободных радикалов и активных форм кислорода. Многочисленные эпидемиологические исследования убедительно показали наличие обратной зависимости между количеством потребляемых человеком ПС и риском развития рака различных локализаций, а в экспериментальных работах доказана антиканцерогенная активность полиеновых структур. Цель исследования - итоговый анализ ранее разработанных нами препаратов и создание нового лекарственного средства на основе природного каротин-токо-феролового комплекса (КТК) и НЖК плодов шиповника, томатов и других растительных объектов.

В рамках государственной программы по ликвидации медицинских последствий аварии на Чернобыльской АЭС создан первый отечественный препарат в-каротин (БК).___________________________________

Препарат разработан в двух лекарственных формах, проведены все необходимые фармацевтические и доклинические медико-биологические исследования: изучена острая и хроническая токсичность, доказана антиканцерогенная, антимутагенная, иммуномодулирующая активность, изучена фармакокинетика на различных видах животных, разработаны и утверждены две ВФС, осуществлен опытно-промышленный и промышленный выпуск препарата. В дальнейшем на основе БK были разработаны комплексные препараты: «Бетаск», «^скатол», «^сксруїш» ^K, аскорбиновая кислота, токоферол ацетат, рутин) и др. Все препараты были изучены в эксперименте и доказано наличие у них антимутагенных, антиканцерогенных, иммуномодулирующих, антиоксидантных и других свойств. Были проведены наблюдения по оценке возможности использования «Kaскaтолa» и «Остругала» в группах онкологического риска (больные с мастопатией, «злостные курильщики» и др.). В настоящее время «^ска-тол» и «^скорую®) имеются в аптечной сети В задачи настоящего исследования входит разработка рецептуры нового препарата на основе природного KTK из вышеперечисленных растительных объектов, усовершенствование технологии получения активных субстанций, разработка готовой лекарственной формы и проведение всего комплекса фармацевтических исследований, включая подготовку необходимой нормативно-технической документации, опытно-про-мышлен-ный и промышленный выпуск лекарственного средства. K настоящему времени закончена работа по получению масляных экстрактов плодов шиповника (МЭШ), томатов и репейного масла. Доказано наличие у МЭШ антиканцерогенных свойств на различных моделях химического канцерогенеза у мышей, крыс, в том числе на модели эндогенного канцерогенеза, индуцированного длительным введением параоксифенил-молочной кислоты. МЭШ обладает антимутагенным, иммуномодулирующим и антитоксическим действием.

Выводы. Швый препарат на основе МЭШ, ли-копина из томатов и репейного масла можно рассматривать в качестве потенциального средства химиопрофилактики рака.

Розов Ф.Н., Гриненко Т.С., Левит Г.Л.,

Краснов В.П., Белявский А.В.

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ АЛКИЛИРУЮЩЕГО ПРЕПАРАТА ЛИЗОМУСТИНА ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ ГЕНЕТИЧЕСКИ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТОК IN VITRO AND IN VIVO

ИОС им. И.Я. Постовского УрО PAH, Екатеринбург

Эффективный перенос генов в CKK необходим для успешной генной терапии заболеваний гемопо-этической и иммунной системы. Одной из наиболее перспективных стратегий для увеличения доли CKK, несущих встроенные терапевтические последовательности, является использование системы селекции in vivo с помощью мутантной формы фермента O6-метилгуaнин-ДHK метилтрансферазы (МГМТм) в сочетании с обработкой алкилирующими ДОХ агентами. В данной работе мы показали, что клетки, экспрессирующие МГМТм, могут быть селектированы с помощью лизомустина, отечественного анти-ракового алкилирующего препарата из класса нитро-зоалкилмочевин. Экспрессия МГМТм в клетках лей-кемической линии Юб2 и первичных клетках костного мозга мыши защищает их от цитотоксического

действия лизомустина. Мы также показали на мышиной модели, что можно достичь специфической экспансии гемопоэтических клеток, экспрессирующих МГМТм, in vivo после трансплантации сублетально облученным реципиентам и селекции с помощью лизомустина.

Полученные данные свидетельствуют о том, что лизомустин может быть использован как эффективный селектирующий агент, потенциально применимый для генной терапии заболеваний гемопоэтиче-ской и иммунной системы.

С.Г. Романова1, Е.А. Лысенко2,

А.А. Штиль3, Г.А. Серебренникова4 ИССЛЕДОВАНИЕ

ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СВОЙСТВ БЕСФОСФОРНЫХ АНАЛОГОВ ЭДЕЛЬФОЗИНА

'UNMC, Omaha, USA 2МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва 3РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

4 МИТХТ им. М.В. Ломоносова, Москва

Введение. Ранее синтезированные бесфосфорные аналоги эдельфозина - катионные глицеролипиды алкильного типа - уже зарекомендовали себя в качестве агентов, способных индуцировать апоптоз лей-козных клеток линии К562.

Между тем внутриклеточные мишени их действия пока остаются малоизвестными.

Обладая высокой биологической активностью, граничащей с проявлением противоопухолевых свойств, данный класс соединений по-прежнему вызывает немалый интерес.

Цель исследования. Представленная работа направлена на изучение физико-химических свойств липидных систем, отвечая на вопросы о термодинамическом поведении и структурообразовании молекул глицеролипидов с простой эфирной связью в растворах.

Материалы и методы. Исследования выполнялись с помощью Zeta Plus Analyzer (Brookhaven Instrument Co, X = 635нм).

К тестированию были представлены катионные глицеролипиды, содержащие алкильные заместители различной длины в положениях С1 и С2 глицеринового скелета:*, присоединенного посредством сложноэфирной связи через 4 метиленовых звена к молекуле глицерина.

Приготовление опытных образцов осуществлялось методом порционного впрыскивания растворов липидов (микромолярных концентраций) в подходящем растворителе в воду при активном перемешивании и нагреве до 35-40 оС.

Результаты. Было показано чёткое самообразование устойчивых мицелл в водных растворах размерами не превышающими 120 нм.

Характер монодисперсности достигался озвучиванием образцов в течение 5-10 мин, при этом размеры мицелл сокращались до 80-90 нм, а величина разброса не превышала 11,5 %.

В работе дана оценка критической концентрации мицеллообразования (ККМ) липидов в водной среде. Показано единообразие в поведении ряда изученных соединений, ККМ (по методу с пиреном, Xex= 333нм) оказалась в диапазоне 1.6-2.3*10- М.

Выводы: В ходе работы выявлено самообразование мицеллярных единиц катионных глицероли-пидов в водном растворе, приведены характеристики размера частиц и ККМ.

*1,2-О-диаллил-; 1,2-О-диоктил-; 1,2-О-диоктадецил- и 1-О-октадецил-2-О-аллил-производные с катионной «головкой» в виде ДЖ-диметилэтаноламина

В.Д. Румянцева1, К. С. Щамхалов2,

В.М. Маркушев2, И.П. Шилов2,А.В. Иванов3,

Н.И. Полянская , А. С. Рябов2, А.Ф. Миронов1 ФЛУОРЕСЦЕНТНАЯ ДИАГНОСТИКА ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА ЖИВОТНЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СУБСТАНЦИЙ НА ОСНОВЕ Yb-КОМПЛЕКСОВ ПОРФИРИНОВ :МГАТХТ им. М.В. Ломоносова, Москва 2ИРЭ РАН, Фрязино

3РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Цель. разработка методики флуоресцентной диагностики (ФД) злокачественных опухолей с использованием субстанций на основе иттербиевых металло-комплексов порфиринов (ИМКП), в частности*:

В отличие от известных терапевтических фотосенсибилизаторов разработанные субстанции в диагностических концентрациях не создают токсичных концентраций синглетного кислорода при проведении процедуры ФД злокачественных новообразований.

Материалы и методы. Ряд водорастворимых и гидрофобных ИМКП, всего 21 соединение. Проводилось измерение их спектров поглощения на спектроф-луориметре LS-5B Perkin Elmer, спектров флуоресценции на разработанном в ИРЭ РАН макетном волоконно-лазерном онкофлуориметре и кинетических характеристик затухания люминесценции на экспериментальной установке, разработанной в ИРЭ РАН. Эксперименты по изучению биораспределения, фармакокинетики и флуоресцентного диагностического контрастного индекса (ФДКИ) проводились на мы-шах-самках линии Bulb/c с привитой LLC при дозах препарата на уровне 0,01-10мг/кг веса.

Результаты. Исследованы спектральные и кинетические характеристики ряда ИМКП; установлено, что синтезированные соединения обладают высокими фотофизическими характеристиками. Проведено изучение их биораспределения и фармакокинетики.

Показано, что величина ФДКИ опухоль/мышца достигает 10,0 при использовании водорастворимой дикалиевой соли УЬ(асас)-комплекса 2,4-диметоксиге-матопорфирина IX.

Выводы. Разработаны методика и экспериментальное оборудование для ФД злокачественных новообразований с использованием субстанций на основе ИМКП. Полученные данные позволяют рассматривать водорастворимую дикалиевую соль УЬ(асас)-комплекса 2,4-диметоксигематопорфирина IX как перспективный маркер для ФД опухолей без свойственной традиционным порфиринам фототоксичности.

А.В. Сергеев1, М.Я. Шашкина1, Л.З. Болиева2,

Е.Н. Павленко1, В.В. Решетникова1, С.А. Хрусталев1,

А.Е. Хубулова2, О.И. Тарасова1

СОЗДАНИЕ И ДОКЛИНИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ

НОВОГО ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО

ПРЕПАРАТА НА ОСНОВЕ ФИТОЭКСТРАКТОВ

1РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН, Москва

2СО гМа, Владикавказ

Введение. Экстракты корня солодки (ЭС), плодов шиповника (ЭШ), надземной части травы тысячелистника (ЭТ) обладают антиканцерогенным, антимутаген-ным, иммуномодулирующим, антитоксическим действием. В клинике доказано наличие у ЭС и ЭТ противовирусной и антимикробной активности, в том числе против вируса гепатита В и С, герпеса и ВИЧ-инфекции.

Целью настоящего исследования является создание нового лечебно-профилактического средства на основе водных лиофилизированных экстрактов вышеперечисленных растений и доклиническое медикобиологическое изучение отдельных компонентов и готовой лекарственной формы (ЛФ) препарата.

Результаты. С учетом предварительных исследований по фармакологии и иммунофармакологии (ИФ) отдельных фитоэкстрактов была разработана рецептура и ЛФ препарата в виде твердых желатиновых капсул. Отработаны методы стандартизации и контроля качества препарата, в том числе разработаны аналитические методы определения биологически активных веществ в субстанции и в ЛФ.

Анализ проводили по содержанию в препарате глицирризиновой кислоты и сумме полифенольных соединений. Образцы ЛФ были изучены в процессе длительного хранения при различных температурных режимах. Разработана необходимая нормативнотехническая документация и осуществлен опытнопромышленный выпуск препарата.

После соответствующей экспертизы получено разрешение на промышленный выпуск, применение и распространение препарата «Розолакрит» (РЛ) через аптечную сеть. В доклинических исследованиях всесторонне изучена иммуномодулирующая активность отдельных ФЭ и комплексного препарата.

При длительном введении мышам БАЬБ/с ФЭ и РЛ вместе с кормом в течение 4-6 недель наблюдалось усиление в 2-4 раза пролиферативной активности спленоцитов, образование Т-киллеров в смешанной культуре лимфоцитов, повышение активности натуральных киллеров и цитотоксической активности перитонеальных макрофагов.

Препараты частично снимали иммунодепрессию, индуцированную цитостатиком аранозой. Антиканцерогенное, антимутагенное и антиоксидантное действие ЭС изучено на модели канцерогенеза, индуцированного у крыс МГ-нитрозодиэтиламином (ДЕНА).

Антиканцерогенная активность ЭС проявлялась в достоверном снижении частоты возникновения и степени малигнизации неопластических изменений в печени, снижении множественности и злокачественности новообразований пищевода, в увеличении латентного периода появления опухолей и удлинении срока жизни животных.

ЭС уменьшал частоту хромосомных аберраций в клетках костного мозга и тормозил процесс перекис-ного окисления липидов, индуцированных ДЕНА. Длительное введение крысам ЭС уменьшало гематотоксичность и общую токсичность у крыс, вызванную хроническим введением ацетата свинца.

Выводы. Проведенные исследования позволяют рассматривать РЛ в качестве потенциального средства для химиопрофилактики рака.

М.А. Сироткина1’ 2, В.В. Елагин1, М.В. Ширманова1, А.В. Жеглов3, В.А. Каменский3, Е.В. Загайнова1 ПРИМЕНЕНИЕ ЗОЛОТЫХ НАНОЧАСТИЦ ДЛЯ ЛОКАЛЬНОГО НАГРЕВА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ОПУХОЛЕЙ 'НГМА

2ИХФ РАН им. Н.Н. Семенова, Москва 3ИПФ РАН, Н. Новгород

Цель. Разработка методики лазерной гипертермии опухолей на основе золотых наночастиц с прижизненным контролем накопления методом ОКТ.

*Гидрофобного Yb-комплекса 5, 10, 15, 20-тетра(1-М-(п-фторфенил)-2(о-хлорфенил) пиразол-4-ил) порфирина и водорастворимой дикалиевой соли УЬ(асас)-комплекса 2,4-диметоксигематопорфирина IX.

Материалы и методы. Исследование выполнено на модели опухоли рак шейки матки мышей. Золотые наночастицы с максимумом экстинкции 800-950 нм вводили в/в в дозе 108 частиц на животное. Накопление наночастиц в опухоли контролировали методом оптической когерентной томографии (ОКТ). Изображения получали каждые 30 мин до достижения максимально высокого уровня ОКТ сигнала. Затем на опухоль воздействовали лазером с X 810 нм. Гипертермию проводили при 44-45 °С в течение 20 мин. Нагрев контролировали ИК-термографом. Эффективность лечения оценивали по ТРО. Верификацию наночастиц в опухоли выполняли методом электронной микроскопии.

Результаты. Через 2-2,5 ч после инъекции наночастиц наблюдали постепенное возрастание сигнала на ОКТ-изображениях опухоли. Максимальный уровень сигнала отмечен через 4-5 ч после введения наночастиц, что соответствовало времени максимального накопления наночастиц в опухоли. В этот период проведена лазерная гипертермия опухолей. Анализ термограмм показал, что нагрев опухоли, содержащей наночастицы, происходит локально, без распространения на окружающие здоровые ткани. Отмечено, что скорость нагрева опухоли с наночастицами в 3-3,5 раза выше, а мощность лазера - на

0,2-0,3 Вт меньше, чем в случае гипертермии опухоли без наночастиц. ТРО составило 66% на 5 сутки после воздействия. Методом электронной микроскопии золотые наночастицы обнаружены как в цитоплазме опухолевых клеток, так и внутри ядра и рядом с митохондриями.

Выводы. Применение золотых наночастиц для гипертермии опухолей позволяет осуществлять более локальное лазерное воздействие при меньшей мощности излучения. Гипертермия с наночастицами приводит к значительному замедлению роста экспериментальной опухоли.

Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ (09-02-97072, 09-02-12215, 09-02-00539, 09-02-90736), грант президента МД-3018.2009.7.

П.И. Скопин ВЛИЯНИЕ

ОТРИЦАТЕЛЬНЫХ АЭРОИОНОВ КИСЛОРОДА НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ ХТ

ГОУ ВПО МорГУ им. Н.П. Огарёва, Саранск

Актуальность. Известный русский ученый А.Л. Чижевский считал, что развитие опухолевых образований может быть обусловлено систематическим аэроионным дефицитом, который постоянно испытывает человек. Это ведет к нарушению эндогенного электрообмена, снижает электрический потенциал клеток, тканей и органов, нарушает их метаболизм и вызывает преждевременное старение, на фоне которого и развиваются злокачественные образования. Следовательно, целесообразно изучение возможности включения аэроионотерапии в комплекс противоопухолевых методов лечения.

Цель. Изучение воздействия комбинации рубо-мицин+ОАИК на метаболические показатели и характеристики опухоли в условиях роста холангио-целлюлярного рака РС-1.

Материал и методы исследования. Эксперимент выполнен на 42 нелинейных белых крысах обоего пола массой 80-90 г, содержащихся в стандартных условиях в виварии ГОУ ВПО «МГУ им. Н.П. Огарёва». Использована модель неоплазии, создаваемая путем перевивки опухолевого штамма холангиоцел-

люлярного рака крыс РС-1 (опухолевый банк РОНЦ). На 21 сутки роста опухоли животные были разделены на 3 серии. Контрольную составили 14 животных с опухолью. В 1 экспериментальной группе (n=14) производилось моделирование противоопухолевой ХТ рубомицином в дозе 4 мг/кг, внутрибрюшинно на 20; 22; 24 и 26 сутки роста опухоли. Во 2 группе (n=14) оценивалось влияние комбинированного применения рубомицина и отрицательных аэроионов кислорода, образующихся под влиянием электроэффлювиальной люстры Чижевского (100 000 аэроионов в 1 см3 в 1 мин.). Люстра помещалась на расстоянии 1,5 м от клетки, проводилось ежедневное шестичасовое облучение. Животных забивали путем декапитации после в/брюшного введения раствора тиопентала натрия в дозе 50 мг/кг на 38 сутки после перевивки опухоли. В плазме, эритроцитах, гомогенатах печени, почек, сердца, а также в опухолевой ткани определяли содержание МДА и индуцированного железом Fe-МДА, отражающего резерв ПОЛ (Конюхова С.Г., 1989), рассчитывали антиокислительную активность (АО А) (Клебанов Г.И., 1999), расчет резерва липидов для перекисного окисления (РЛПО) осуществляли по методу Д.И. Кузьменко и Б.И. Лаптева (1997), определяли активность ферментов антиокислительной защиты

- каталазы (Королюк М. А., 1988) и СОД по методу С. Чевари (1990). Оценивали массу опухоли, ИМО, ИТРО. Статистическая обработка результатов проведена с помощью t-критерия Стьюдента и программы «Primer of Biostatistics for Windows» v.4.03 (1998).

Результаты. В условиях роста РС-1 выявлено значительное усиление процессов ПОЛ в организме животных на фоне резкого снижения антиоксидант-ной защиты, применение рубомицина усугубляло эти изменения. Применяемые в эксперименте ОАИК на фоне введения рубомицина повышали активность каталазы в плазме крови, почках на 144% (p<0,001) и 49% (p<0,001), соответственно, по сравнению с монотерапией рубомицином. При этом содержание МДА снизилось в эритроцитах на 8% (p<0,05), в плазме крови на 52% (p<0,001), в печени на 37% (p<0,001), что говорит о подавлении активности процессов ПОЛ в этих тканях. На этом фоне отмечалось повышение АОА в эритроцитах, плазме крови, тканях печени на 52% (p<0,05); 106% (p<0,001); 58% (p<0,001) соответственно. В эритроцитах, плазме крови и ткани печени увеличился РЛПО на 50% (p<0,05); 298% (p<0,001) и 319% (p<0,001) соответственно. В сердечной мышце ОАИК способствовали уменьшению кардиотоксичности рубомицина, что выражалось в снижении содержания МДА на 49% (p<0,005) на фоне увеличения РЛПО на 319% (p<0,001), усиления АОА на 110% (p<0,001), повышения активности каталазы на 71% (p<0,001). Важно, что в ткани опухоли комбинация ОАИК и рубомицина приводила к активации процессов липопероксидации: содержание МДА увеличилось на 50% (p<0,05), снизился РЛПО на 44% (p<0,001) и АОА на 18% (p<0,05) на фоне снижения активности каталазы на 60% (p<0,001). При применении ОАИК на фоне введения рубомицина количество патологических митозов в краевой зоне опухоли уменьшилось на 51% (p<0,001), в сравнении с таковым показателем в группе животных, получавших только химиопрепарат. Применение рубомицина в изучаемой дозе приводило к уменьшению массы опухоли, ИМО, ИТРО составил 33,54±7,05% (p<0,05). В условиях комбинации рубомицин+ОАИК было дополнительное снижение массы опухоли на 47% (p<0,05), ИМО на 32% (p<0,05), повышение ИТРО на 91% (p<0,001) по сравнению с группой получавших монотерапию рубомицином.

Выводы. Использование отрицательных аэроионов кислорода на фоне ХТ рубомицином способствовало снижению уровня эндогенной интоксикации, снижению накопления вторичных продуктов перекисного окисления липидов, росту антиокислительной защиты ткани печени и сердца на фоне роста холангиоцеллю-лярного рака РС-1 по сравнению с монотерапией рубомицином. Кроме того, дополнительное применение отрицательных аэроионов кислорода повышало противоопухолевую активность рубомицина, что проявлялось уменьшением массы опухоли, повышением ИТРО, снижением количества патологических митозов.

З. С. Смирнова, Л.М. Борисова, М.П. Киселева,

Т.Д. Миникер, Л.В. Эктова, С.Я.Мельник ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ СОЕДИНЕНИЯ ЛХС-1208 (N-ГЛИКОЗИЛИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ИНДОЛО[2,3-а]КАРБАЗОЛА)

РОНц им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

В последние десятилетия за рубежом N-гликозиды замещенных индоло[2,3-а]карбазолов вызывают большой интерес в качестве потенциальных противоопухолевых препаратов, и некоторые из них уже проходят клинические испытания. Установлено, что N-гликозилированные производные индоло[2,3-а]карбазола могут действовать на одну или несколько мишеней, например, протеинкина-зу С, топоизомеразы, киназы, ДНК. Поэтому противоопухолевая активность индолокарбазолов может быть обусловлена их способностью взаимодействовать со многими мишенями и, следовательно, индуцировать разные пути клеточной гибели. Выявленная ранее высокая противоопухолевая активность у двух производных индоло [2,3-а]карбазолов послужило основанием для продолжения исследований в этом ряду соединений.

Целью настоящего исследования явилось изучения противоопухолевой активности нового соединения ЛХС-1208, модифицированного по пиррольному кольцу и синтезированного в лаборатории химического синтеза.

Материалы и методы. Противоопухолевую активность соединения изучали на перевиваемых опухолях мышей: лимфолейкозе Р-388, LLC и меланоме В-16. В опытах использовали гибридов ВДр1. Критерии эффективности: ТРО, % и УПЖ, %. Соединение растворяли в 10 %-ном р-ре ДМСО и вводили в/б 5 дней в широком диапазоне доз 10^100 мг/кг.

Результаты. ЛХС-1208 оказывает терапевтический эффект на Р-388, равный 119 % УПЖ в дозе 100 мг/кг. На LLC в дозах 75 и 100 мг/кг также выявлен высокий терапевтический эффект: ТРО = 91-72% и сохраняется в течение 8 дней. При изучении противоопухолевой активности ЛХС-1208 на меланоме В-16 выявлена четкая зависимость терапевтической эффективности от дозы и в дозе 100мг/кг наблюдается 91% ТРО непосредственно после окончания лечения и 58% ТРО через 5 дней.

Заключение. Результаты по противоопухолевой активности соединения ЛХС-1208 дают основание продолжить изучение его эффективности на других моделях опухолей мышей.

З. С. Смирнова1, Л.М. Борисова1, М.П. Киселева1,

П.А. Капитанов2, А.Б. Капитанов1 ОЦЕНКА ЛЕЧЕБНОГО И ЛЕЧЕБНОПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ЭФФЕКТА ТОМАТОЛА НА РПЖ R3327 MatLyLu КРЫС :РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2Icon Holding, Дублин, Ирландия

Рак предстательной железы - одна из основных причин смертности среди мужчин старше 50 лет. За-

болеваемость РПЖ очень сильно отличается в зависимости от региона. В России в настоящее время наблюдается тенденция к выходу этого заболевания на первое место в структуре онкологической и онкоуро-логической заболеваемости мужской части населения. РПЖ составляет 2,9% всех онкологических и 36% онкоурологических заболеваний. К сожалению, в нашей стране у подавляющего большинства мужчин данное заболевание выявляется при наличии клинических проявлений, т.е. диагностируются распространенные формы РПЖ.

В этой связи в последнее время ученые разных стран уделяют большое внимание новой области исследований - фитохимиопрофилактике гиперплазии простаты и РПЖ с помощью химических соединений из растений, употребляемых в пищу человеком. Наиболее перспективным в этом отношении является ли-копин - каротиноид, входящий в состав томатов и некоторых фруктов.

Целью исследования является оценка лечебного и лечебно-профилактического эффекта препарата Тома-тол, содержащего каротиноид ликопин, при гормононезависимым раке предстательной железы R3327 MatLyLu крыс Copenhagen.

Материал и методы. Работа выполнена на кры-сах-самцах линии Copenhagen массой 200-250 г R3327 MatLyLu перевивали подкожно в правую подмышечную впадину по 200 000 опухолевых клеток в 0,2 мл среды 199. Критерием оценки терапевтического эффекта служило ТРО, %. Томатол вводили в дозе 10 мг на кг массы тела крысы перорально с использование зонда. При изучении лечебно-профилактического действия Томатол вводили перорально в течение 13 дней до перевивки опухоли и затем через 72 часа после перевивки R3327 MatLyLu еще в течение 20 дней. Терапевтическое действие Томатола изучали после его перорального введения в течение 20 дней через 72 часа после перевивки R3327 MatLyLu.

Результаты. Лечебно-профилактическое действие Томатола при R3327 MatLyLu вызывает стойкий терапевтический эффект, который сохраняется в течение 17 дней наблюдения и составляет 58% - 41% ТРО. При использовании лечебного режима введения То-матола наблюдается только кратковременный статистически значимый противоопухолевый эффект на 10 день после перевивки R3327 MatLyLu, который составляет 52% ТРО.

Полученные данные дают основание продолжить изучение профилактического и лечебного действия Томатола при РПЖ.

Усов А.И.1, Евсенко М.С.2, Автономова А.В.2,

Исакова Е.Б.2, Бухман В.М.2-3,Леонтьева М.И.2, Краснопольская Л.М. 2

ПОЛИСАХАРИДЫ ИЗ МИЦЕЛИЯ G.LUCIDUM КСИЛОМАННАН И ФУКОГАЛАКТАН: ПОЛУЧЕНИЕ

И ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЕ СВОЙСТВА

:ИОХ им. Н.Д. Зелинского РАН, Москва 2НИИ ИА им. Г.Ф. Г аузе РАМН, Москва 3РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Трутовик лакированный, Ganoderma lu-cidum (Curt.:Fr.) P. Karst. - один из наиболее известных лекарственных базидиомицетов. Из плодовых тел, ба-зидиоспор и мицелия G.lucidum выделены вещества, обладающие различными биологическими свойствами, прежде всего противоопухолевыми и иммуномодулирующими. Метаболиты G.lucidum, отвечающие за эти свойства, относятся преимущественно к полисахаридам и тритерпенам.

Цель настоящей работы. Получении опытной партии погруженной биомассы G.lucidum в условиях производственного биореактора, выделении индивидуальных полисахаридов и оценки их противоопухолевых свойств в опытах in vivo.

Материалы и методы. В работе использовали штамм G.lucidum коллекции лаборатории биосинтеза биологически активных соединений НИИ НА им. Г.Ф. Гаузе РАМН. Для погруженного культивирования G.lucidum использовали биореактор. Выделение ксиломаннана и фукогалактана проводили по методике Усова А.И. и сотр. [Биохимия, 2009. - Том 74. -Вып. 5. - С. 657-67]. Противоопухолевую активность оценивали в стандартных онкологических системах -рост привитых подкожно мышам-гибридам B6D2Fj солидных лимфомы Р388, меланомы В16 и карциномы молочной железы Ca755. Препараты вводили как однократно на 3 с опыта, так и ежедневным курсом с

3 по 12 сут. Путь введения через рот или внутримышечно. Разовые дозы от 0,2 до 20 мг/кг. Проводили также антисупрессорную обработку мышей некоторых групп однократной инъекцией циклофосфамида в дозе 50 мг/кг в/бр на 3 с опыта. За достоверные принимали отличия при Р<0,05.

Результаты. Ксиломаннан изучен во всех указанных моделях. Полисахарид во всех изученных режимах вызывает сильное устойчивое торможение роста опухоли без проявлений токсичности. При однократном введении его активность проявляется сильнее у мышей, получивших антисупрессорную обработку циклофосфамидом. Фукогалактан пока изучен только при курсовом внутрижелудочном введении мышам, привитым клетками Ca755. Полисахарид проявил сильную противоопухолевую активность.

Заключение. Впервые получены 2 новых полисахарида G.Lucidum. Оба полисахарида, Ксиломаннан и Фукогалактан, проявляют высокую избирательную противоопухолевую активность в отношении солидных мышей и заслуживают дальнейшего углубленного изучения.

И.И. Файнголъд1, Р.А. Котельникова1,

Н.П. Коновалова1, В. С. Романова2, Д.В. Мищенко1,

ДА. Полетаева1, Г.Н. Богданов1, А.И. Котельников1

АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ

ГИБРИДНЫХ СТРУКТУР

НА ОСНОВЕ ФУЛЛЕРЕНА С 60

И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ХТ

'ИПХФ РАН, Черноголовка

2ИЭОС им. А.Н. Несмеянова РАН, Москва

Введение. В настоящее время повышенный интерес вызывают прикладные аспекты химии нано-размерных углеродных кластеров и гибридных структур на основе фуллерена С60 (ГСФ), в которых роль мембранотропных стереоспецифических носителей группировок с заданными физиологическими свойствами выполняют фуллерены.

Цель исследования. Изучение антиоксидант-ной активности ГСФ и их применение в экспериментальной ХТ.

Материалы и методы. В работе исследованы ГСФ: С60-Рго(ОН), C60-Pro(NO2), C60-Pro(NO2)2, C60-Pro(carnosine). Антиоксидантную активность ГСФ изучали по изменению интенсивности ПОЛ биологических мембран гепатоцитов в присутствии производных фуллерена. Интенсивность ПОЛ оценивали по содержанию МДА - промежуточного продукта окисления полиненасыщенных жирных кислот. Исследование противоопухолевого эффекта при комбинированной терапии цитостатиком ЦФ с

ГСФ проводили на самцах-гибридах ББР1 с лейкемией Р-388. Для проведения эксперимента выбраны низкие субтерапевтические дозы цитостатика. Препараты вводили внутрибрюшинно. Эффективность терапии оценивали по проценту излеченных животных и УПЖ, % животных.

Результаты. Показано, что под влиянием гибридных соединений на основе фуллерена С6о в значительной степени замедляется накопление МДА. При этом наиболее эффективным действием обладает фуллеренил-карнозин С60-Рго(сато8Іпе), который подавляет ПОЛ в 4 раза интенсивнее, чем остальные производные. Этот эффект объясняется тем, что, с одной стороны, углеродный сфероид фуллерена С 60 является акцептором свободных радикалов, а с другой стороны - карнозин катализирует распад пероксидов и усиливает антиоксидант-ные свойства ГСФ. Полученный результат представляется важным в свете использования ГСФ в экспериментальной онкологии.

Монохимиотерапия гибридными соединениями на основе фуллерена С60 не оказывает противоопухолевого эффекта. При комбинированной терапии все ГСФ приводили к повышению противоопухолевого эффекта ЦФ и излечению части животных. Максимальный терапевтический эффект проявлялся излечением 65% и 80% животных при совместном применении ЦФ с нитратами аминокислотных производных фуллерена С60 (С60-Рго(КО2) и С60-Рго(КО2), соответственно), при этом средняя продолжительность жизни животных увеличивалась примерно в 1,5-2 раза по сравнению с терапией одним циклофосфамидом. Поскольку известно, что N0 является эффектором апоп-тоза, этот факт подтверждает влияние нитратов аминокислотных производных фуллерена С60 на антилей-кемическую активность ЦФ.

Выводы. Гибридные соединения на основе фуллерена С 60 являются биоантиоксидантами и хорошими адъювантами для «классического» противоопухолевого агента циклофосфамида на модели лейкемии Р-388. Результаты работы вносят существенный вклад в решение фундаментальных проблем нанотехнологии биологически активных веществ и их применения в медицинской практике.

Е.П. Федорова, О.В. Колотова,

О. Л. Воронова, А. А. Чурин КОРРЕКЦИЯ ГЕМАТО-И ГЕНОТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ПАКЛИТАКСЕЛА

ЭКСТРАКТОМ ШЛЕМНИКА БАЙКАЛЬСКОГО

НИИ фармакологии СО РАМН, Томск

ХТ в современной онкологии наряду с оперативным способом и лучевым воздействием является одним из важнейших компонентов лечения. Значимой остается проблема повреждения клеток здоровых тканей вследствие низкой селективности анти-бластомных средств. Актуальным является поиск корректоров, снижающих токсическое действие ци-тостатиков на пораженные ткани.

Данное исследование посвящено изучению гема-то- и генотоксичности паклитаксела, а также возможности коррекции выявленных эффектов экстрактом шлемника байкальского.

Эксперименты проведены на 80 мышах линии СВА/Са Ьас и 100 нелинейных аутбредных крысах-сам-ках. Паклитаксел мышам вводили однократно в/б в МПД 40,0 мг/кг, крысам однократно в/в в МПД 5,0 мг/кг. Экстракт шлемника байкальского вводили по 40 мг/кг рег оі' курсом в течение 5 дней.

Изучение показателей кроветворных органов проводили стандартными гематологическими методами. Цитогенетические нарушения оценивали по модифицированному методу Форда. Введение паклитаксела через 6 и 24 часа у крыс приводило к снижению содержания незрелых и зрелых гранулоцитов, эритронормобластов и лимфоцитов. В периферической крови отмечено развитие ретикулоцитопении, нейтропении, лимфоцитопении. Введение экстракта шлемника байкальского способствовало увеличению общей клеточности костного мозга за счет повышения числа сегментоядерных лейкоцитов. Количество эритроидных клеток было увеличено на протяжении всего периода исследования. В периферической крови отмечено возрастание абсолютного количества лейкоцитов за счет повышения содержания нейтро-филов и лимфоцитов, а так же увеличение числа ретику-лоцитов на протяжении всего периода исследования. Через 24 часа после введения паклитаксела у мышей наблюдалось увеличение числа аберрантных хромосом, доли поврежденных клеток и количества полиплоидных клеток. Введение экстракта шлемника байкальского до инъекции цитостатика, снижало количество аберраций и общее число поврежденных метафазных пластинок.

Таким образом, применение экстракта шлемника байкальского в качестве корректора на фоне действия паклитаксела приводило к нормализации процессов кроветворения и оказывало генопротекторные эффекты при его применении до введения цитостатика.

Фрадкин В. Г.

ОПЫТ КЛИНИЧЕСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО СРЕДСТВА НУКЛЕОСПЕРМАТ НАТРИЯ

ГУЗ МООД

Введение. В ГУЗ МООД использование препарата «Нуклеоспермат натрия» проводится с 2005 г. у больных со злокачественными новообразованиями различных локализаций, получающих самостоятельное, комбинированное или комплексное лечение. Известно, что препарат активизирует процессы пролиферации, миграции и дифференцировки нейтрофиль-ных гранулоцитов, эритроцитов, тромбоцитов и лимфоцитов. Кроме того, лекарственное средство активирует и повышает содержание клеток-киллеров СД4+, стимулирует антителообразование, что обусловливает резкое усиление иммунного ответа и оказывает положительное влияние на течение раневого процесса после обширных хирургических вмешательств, обладает дезинтоксикационным эффектом.

Цели исследования. Оценка гемостимулирующего эффекта препарата и действия на иммунный статус пациентов. Оценка возможности его профилактического применения для предотвращения развития ней-тропении у пациентов, получающих ХТ и/или ЛТ.

Материалы и методы. Препарат применяли у 20 пациентов отд. общей радиологии с разными онкологическими диагнозами. Пациентам проводили ЛТ в комбинации с разными режимами ХТ. Нуклеоспермат натрия применяли в дозировке 75 мг/день в течение 3-10 дней и в тах сут. дозировке 150 мг у некоторых пациентов. Введение препарата проводили одновременно с продолжением химиолучевой терапии.

Результаты. Г емостимулирующий эффект отмечен у 18 пациентов (90%). Средний срок восстановления числа лейкоцитов составил от 4 до 9 дней. У большинства применение препарата купировало лейкоцитопе-нию, что дало возможность продолжить лечение по плану. Наиболее оптимальные результаты мы получили при введении препарата по 75 мг в течение 5 дней. Отмечена положительная динамика течения раневого

процесса у пациентов с обширными хирургическими вмешательствами, получающих комбинированное лечение. Введение препарата больные переносили удовлетворительно. Побочные эффекты были незначительны, проходили самостоятельно.

Выводы. Нуклеоспермат натрия показал высокую эффективность в профилактике нейтропении при комбинированном/комплексном лечении. Преимущество средства - возможность его применения одновременно с химиолучевой терапией. Наши данные позволяют рекомендовать Нуклеоспермат натрия для профилактики/лечения нейтропении при проведении лучевой, хи-миолучевой терапии, а также для профилактики общих и местных реакций в период и после окончания комбинированного и комплексного лечения.

Е.В. Хорошева1., Г.К. Герасимова1,

Е.М.Трещалина1, А.Л. Николаев2 ПРЕОДОЛЕНИЕ

ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК С ПОМОЩЬЮ УЗ-ВОЗДЕЙСТВИЯ В КОМБИНАЦИИ С ТЕРАФТАЛОМ IN VITRO

1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2МГУ им. М.В. Ломоносова, Москва

В настоящее время интенсивно проводится исследование биологических эффектов локального нетеплового ультразвукового воздействия. Ранее показано in vivo, что сочетание УЗ воздействия с препаратом терафтал, не обладающим собственной цитотоксической активностью, приводит к повышению циторедуктивного действия УЗ на перевиваемые опухоли животных (Е.М. Tре-щалина, Н.В. Андронова). Принимая во внимание разнообразные эффекты, обусловливающие сонодинамиче-ское действие TФ, в том числе повреждение клеточных мембран, изучена in vitro возможность подавления роста опухолевых клеток с фенотипом МЛУ с помощью УЗ воздействия и его комбинации с TФ.

Материалы и методы. Воздействие УЗ на клеточную культуру проводили на генераторе УЗ, разработанном для исследований in vitro. Клетки линии К5б2/4 с индуцированной устойчивостью к Dox инкубировали

1 час с TФ (10-5М) при 37 °С в культуральных флаконах по 50 мл. Затем проводили УЗ-воздействие на клеточную суспензию в течение 3 мин. в 2 режимах: постоянном с несущей частотой 2,б4 МГц с мощностью

1 Вт/см2 и импульсном - с той же несущей частотой и импульсом 20 Гц; 225 Гц; б10 Гц; 1240 Гц. Цитотоксиче-ский эффект определяли М7Т-тестом через 72 ч. Чувствительность клеток к Dox оценивали по величине ЕС50, которую рассчитывали методом регрессионного анализа. Контролем служили клетки без УЗ-воздействия.

Результаты. Однократное УЗ-воздействие в постоянном режиме снижает устойчивость клеток К5б2/4 к доксо-рубицину в 10 раз, а в импульсном режиме 225 Гц; 1240 Гц; 20 Гц в 100; 50 и 25 раз соответственно. УЗ-воздействие в постоянном режиме в сочетании с TФ в качестве соносенсибилизатора снижает устойчивость к докорубицину в 2,5 раза эффективнее, чем один УЗ. Наблюдаемый эффект сохраняется как минимум в течение трех клеточных генераций. Однако TФ не усиливает циторедуктивный эффект УЗ-воздействия в импульсном режиме.

Выводы. Однократное УЗ-воздействие низкой интенсивности с несущей частотой 2,б4 МГц в постоянном и импульсном режиме мощностью 1 Вт/см2 вызывает снижение устойчивости клеток К5б2/4 с фенотипом МЛУ к доксорубицину. Соносенсибилизатор TФ усиливает эффект УЗ, применяемого только в постоянном режиме.

Работа выполнена при финансовой поддержке Правительства г. Москвы.

Т.Ю. Хричкова, В.Е. Гольдберг, Н.О. Попова, В.А. Шаталова, Е.С. Бурштейн ВЛИЯНИЕ ХИМИОТЕРАПИИ НА ОСНОВЕ ПРЕПАРАТОВ ТАКСАНОВОГО РЯДА НА КОСТНОМОЗГОВОЙ РЕЗЕРВ НЕЙТРОФИ-ЛОВ У БОЛЬНЫХ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ

НИИ онкологии, НИИ фармакологии СО РАМН, Томск

На сегодняшний день достоверно подтверждена выраженная эффективность таксансодержащих химиотерапевтических режимов адриабластин/таксотер (АТ) и таксотер/цисплатин (ТР) при лечении распространенных форм РМЖ и РЛ соответственно. Частым осложнением указанных режимов химиотерапии является угнетение гранулоцитопоэза.

Одним из наиболее чувствительных методов изучения функционального состояния гранулоцитарного ростка является преднизолоновая проба, позволяющая определять запас в костном мозге зрелых ней-трофилов и способность их к выходу в периферическую кровь в ответ на введение кортикостероидов.

Целью настоящей работы явилась оценка резервных возможностей кроветворной ткани у больных РМЖ и РЛ, получающих лечение по схемам, включающим таксотер.

В ходе работы было обследовано 77 больных РМЖ, получающих химиотерапию по схеме АТ и 45 больных РЛ, леченых по схеме ТР. Показатели периферической крови исследовали стандартными гематологическими методами. По данным предни-золоновых проб оценивали состояние костномозгового резерва нейтрофильных гранулоцитов.

Использование режима АТ приводило к достоверному снижению общее количество лейкоцитов (ОКЛ) только на два срока исследования (после 1 и

2 курсов ХТ). Применение схемы ТР вызывало уменьшение ОКЛ после каждого курса химиотерапии с восстановлением к началу следующего.

При введении преднизолона больным РМЖ и РЛ было выявлено преходящее повышение числа ней-трофилов в периферической крови, что свидетельствует о наличии типичной реакции на гормональный препарат. Совершенно другая картина имела место при использовании режимов АТ и ТР в лечении вышеназванных пациентов, а именно наблюдалось не только достоверное увеличение выброса нейтрофилов почти на все часы пробы, но и возрастание величины максимального выброса данных клеток на все сроки исследования.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что, наряду с выраженным противоопухолевым эффектом, изученные комбинации цитостатических препаратов характеризуются щадящим воздействием на костномозговые резервы гранулоцитарного ростка, что весьма значимо в связи с расширяющимся диапазоном применения таксансодержащих режимов цитостатического лечения.

Шатова О.П.

СТИМУЛЯЦИЯ АДЕНОЗИН-ОПОСРЕДОВАННОГО АПОПТОЗА ФТОРУРАЦИЛОМ

ДНМУ им. М. Г орького, Донецк

Аденозиндезаминаза (АДА) - ключевой фермент метаболизма пуриновых нуклеотидов гидролитически превращает аденозин в инозин и аммиак. Известно прямое влияние химиопрепаратов на активность этого фермента. Антиметаболит 5-фторурацил уменьшает активность этого фермента в 2 раза при

инкубации в течение 10 минут, а циклофосфан и метотрексат увеличивает активность этого фермента приблизительно в 2-3 раза.

Цель. Выяснить возможность связывания 5-фторурацила с аденозином согласно правилу Чар-гофа, путем увеличения аденозина в инкубационной среде в 2 раза.

Материалы и методы. Определение АДА основано на изменении оптической плотности реакционной смеси при X 265 нм, обусловленном дезаминированием аденозина до инозина.

Серия опытных проб содержала в 2 раза больше субстрата (аденозина), по сравнению с контролем. Все пробы содержали 5-фторурацил.

Результаты и выводы. В контрольной пробирке активность АДА 25,7±3нмоль/(мин*мг), а в опытной 62±17нмоль/(мин*мг), что приблизительно соответствует нормальному значению. При увеличении количества аденозина активность АДА увеличивается, что возможно свидетельствует о том, что фторура-цил образует связи с аденозином и таким образом уменьшает активность фермента. Уменьшая активность АДА, 5-фторурацил имеет еще один механизм цитостатического действия. При ингибировании АДА накапливается аденозин, который вызывает конденсацию хроматина и фрагментацию ДНК, то есть апоптоз.

А.С. Шатурова, Е.А. Дудко, О.С. Бурова, ТА. Богуш ОПТИМИЗАЦИЯ ИФА ЭР МЕТОДОМ ПЦР РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Цель исследования. ЭР а и в являются молекулярными мишенями антиэстрогеновых противоопухолевых препаратов и важнейшими прогностическими маркерами течения опухолевого процесса. Тем не менее, до настоящего времени не существует подходов к количественной оценке ЭР и в клинической практике определение эстрогенового статуса опухоли проводится полуколичественно при имму-ногистохимическом исследовании в опухоли экспрессии только ЭРа.

Строго количественное дифференцированное определения уровня экспрессии ЭРа и ЭРв как в опухолевом узле, так и в каждой опухолевой клетке является чрезвычайно важным.

Настоящее исследование посвящено оптимизации метода оценки уровня экспрессии ЭРв для рутинного клинического использования.

Материалы и методы. Методом иммунофлуоресценции с использованием проточной цитофлуоримет-рии исследована экспрессия ЭРв в клетках культуры РМЖ MCF-7 и в клетках, полученных из хирургических образцов РМЖ. Использовали антитела: первичные моноклональные к ЭРв (ab288/14C8,Abcam), вторичные поликлональные (козий IgG, конъюгированный с FITC, против мышиного IgG-F2772, Sigma), изотип

- мышиный IgG2a (ab18414, Abcam).

Среднюю флуоресценцию клеток анализировали на проточном цитофлуориметре FACScan (Becton Dickinson) с помощью программы WinMDI, количество специфически окрашенных клеток определяли методом Колмогорова Смирнова.

Результаты

1. Для увеличения срока хранения опухолевого материала оптимизированы условия фиксации: показана идентичность взаимодействия специфических антител с ЭРв при фиксации в 0,01% и 4% растворе формальдегида.

2. В культуре клеток МСБ-7 определен диапазон концентраций антител, в котором наблюдается линейное увеличение числа специфически окрашенных клеток в анализируемой суспензии и интенсивности специфической флуоресценции каждой клетки.

3. В линейном диапазоне концентраций антител показано увеличение специфического окрашивания клеток культуры МСБ-7 при увеличении времени инкубации с первичными и вторичными антителами от 30 мин до

1,5 ч.

4. Выход специфического окрашивания клеток МСБ-7 на плато (окрашивание всех клеток, экспрессирующих ЭРр в исследуемой суспензии) достигнут при увеличении времени инкубации со вторичными антителами до 20 часов после 1,5-часовой инкубации с первичными антителами.

5. При исследовании экспрессии ЭРр в клетках рака молочной железы, полученных из опухолей пациентов, воспроизведены все закономерности, описанные в культуре клеток МСБ-7: возможность фиксации опухолевого материала в 4 %-ном растворе формальдегида; наличие линейной зависимости специфического окрашивания клеток от концентрации антител при кратковременной (30 мин или 1,5 ч) инкубации с первичными и вторичными антителами; выход на плато количества специфически флуоресцирующих клеток при увеличении продолжительности инкубации со вторичными антителами до 20 ч.

Выводы. Оптимизированный метод имммунофлуо-ресцентного анализа позволяет проводить количественную оценку ЭРр в солидных опухолях человека: количественно оценивать число клеток, экспрессирующих ЭРр и уровень экспрессии рецепторов в каждой клетке. Предложенный метод легко воспроизводим, минимально субъективен и пригоден для рутинной клинической практики. Поддержано Грантом РФФИ № 09-04-13560.

М.Я. Шашкина1, Г.И. Кабацкая2, В.В. Решетникова1, И.Ж. Шубина1, С.А. Зорина , С.А. Хрусталев1,

А.Е. Хубулова3, А.В. Сергеев1 ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ И МЕДИКОБИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СОЗДАНИЯ ПРЕПАРАТОВ «ЧАГОВИТ» И «ЧАГАЛЮКС»

1РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва 2ГОУ ВПО ММА им. И.М. Сеченова, Москва

3 ГОУ ВПО СО ГМА, Владикавказ

Препараты на основе экстрактов трутового гриба чаги (ЭЧ) широко используются в фитотерапии заболеваний ЖКТ, печени, почек, при острых и хронических отравлениях и для профилактики онкологических и сердечно-сосудистых заболеваний.

Целью нашего исследования явилось создание и доклиническое изучение двух новых препаратов на основе ЭЧ - «Чаговит» (ЧВ) и «Чагалюкс» (ЧЛ).

Результаты. Нами была разработана современная технология получения ЭЧ с наиболее оптимальными физико-химическими и биологическими свойствами. В предварительных исследованиях с использованием методов иммунофармакологии (ИФ) изучена биологическая активность ЭЧ в зависимости от географических регионов сбора сырья, сезона заготовки и размеров (возраста) трутового гриба. Исследовано влияние температуры экстрагента, времени экстракции, разме-

ров частиц размолотого гриба (0,1-1 мм), а также методов высушивания экстрактов (лиофилизация, распылительная сушка, инфракрасное облучение), условий и сроков хранения сухого ЭЧ на иммуномодулирующую активность (ИА). Изучен микроэлементный состав (К, Ма, Mg, Мп, Си, 2п), содержание тяжелых металлов (РЬ, И£, Со), мышьяка в различных образцах ЭЧ. При разработке рецептуры и технологии производства готовой лекарственной формы (ЛФ) препаратов были также использованы методы ИФ. ЛФ препаратов ЧВ и ЧЛ разработана в виде твердых желатиновых капсул с минимальным использованием балластных вспомогательных веществ. Разработаны критерии стандартизации и качества ЛФ препаратов, химикоаналитические методы контроля активной субстанции в ЛФ. Проведены исследования по сохранности ЛФ в течение 2-х лет при различных температурных режимах. Разработана нормативно-техническая документация и осуществлено опытно-промышленное производство препаратов.

После получения соответствующего разрешения осуществлен промышленный выпуск ЧВ и ЧЛ. В настоящее время препараты имеются в аптечной сети. В доклинических исследованиях изучено влияние ЭЧ и ЧВ на гепатотоксичность, гематоксичность и иммунотоксичность, индуцированные длительным введением крысам канцерогена МТ-диэтилнитрозамина (ДЭНА) или ацетата свинца (АС). ЧВ ингибировал канцерогенез, индуцированный ДЭНА, снижал частоту появления опухолей пищевода и печени, снижал степень ма-лигнизации и множественность опухолей, удлинял латентный период образования опухолей и увеличивал продолжительность жизни животных. Длительное введение ЧВ уменьшало частоту хромосомных повреждений, вызванных ДЭНА, и снижало показатели перекис-ного окисления липидов. ЧВ и ЭЧ при длительном введении животным одновременно с АС уменьшали проявление гематотоксичности, корректировали вес животных и продолжительность их жизни. Вторичный иммунодефицит, индуцированный у мышей ВАЬВ/с хроническим введением АС, частично корректировался ЭЧ, что проявлялось в увеличении пролиферативной активности спленоцитов и усилении образования Т-киллеров в смешанной культуре лимфоцитов.

Выводы. Проведенные исследования позволяют рассматривать ЧВ и ЧЛ в качестве потенциальных средств химиопрофилактики рака.

З.С. Шпрах, Л.И. Смирнова, А.П. Смирнова,

Л.П. Сушинина, С.В. Устинкина, В.Н. Осипов,

А.П.Будько, Н.А. Дмитричева,И.В. Ярцева ЦИФЕТРЕЛИН - РАЗРАБОТКА ПРОЕКТА ФСП НА СУБСТАНЦИЮ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Цифетрелин - один из аналогов пептидного гормона соматостатина, синтезированный в лаборатории химического синтеза РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Высокая противоопухолевая активность ци-фетрелина на ряде опухолей мышей позволили рекомендовать препарат для широких доклинических исследований и потребовало разработать методы контроля качества и стандартизации цифетрелина.

Цель исследования - выбор критериев качества и разработка методик контроля качества активной фармацевтической субстанции Цифетрелин.

Материалы и методы. Синтез Цифетрелина осуществляли классическими методами пептидной химии, при синтезе фрагментов использовали метод смешанных ангидридов. Очистку субстанции проводили хроматографически на колонках с силикагелем.

Проект ФСП на активную фармацевтическую субстанцию разрабатывали в соответствии с требованиями действующих нормативных документов по контролю качества лекарственных средств.

ОСТ 91500.05.001-00, ГФ XII, часть 1 и ГФ XI.

Результаты. Оценку качества препарата проводили по показателям, принятым для контроля качества активных фармацевтических субстанций: описание, подлинность, растворимость, температура плавления, удельное вращение, посторонние примеси (родственные соединения), сульфатная зола и тяжелые металлы, вода, определяемая по методу К. Фишера, количественное определение. Подлинность цифетрелина подтверждали хроматографическими методами - в тонких слоях сорбента (ТСХ) и ВЭЖХ и спектральными характеристиками. Все изученные серии субстанции были практически свободны от золы, тяжелых металлов и содержали не более 1,0 % воды. Для определения посторонних примесей в субстанции цифетрелина и количественного определения использовали метод ВЭЖХ. Установлено, что во всех сериях препарата количество единичных примесей не превышало 1,0 %, а суммы примесей - 5 %. Количественное определение показало содержание в субстанции не менее 95 % активного вещества.

Выводы. Полученные результаты подтвердили стандартность получаемых в лабораторных условиях серий Цифетрелина и позволили разработать проект ФСП на активную фармацевтическую субстанцию.

A.Е. Щекотихин1, И.Д. Трещалин1, Н.А. Лесная2,

B.И. Романенко2, Е.М. Трещалина2,

М.Н. Преображенская1 ПРОТИВООПУХОЛЕВАЯ АКТИВНОСТЬ СТЕРЕОИЗОМЕРОВ ХИНИЗАРИНА*

'НИИНА им Г.Ф. Гаузе РАМН, Москва 2РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Ранее нами было показано, что стереоизомеры хинизарина* обладают высокой активностью в отношении опухолевых клеток с МЛУ, резистентность которых обусловлена экспрессией трансмембранного Р-гликопротеина и делецией опухолевого гена-супрессора p53. Наиболее активным оказался хинизарин, причем его стереоизомеры несколько различаются по спектру антипролиферативной активности. Так, в отношении клеток с обоими типами МЛУ ^-изомер (шифр ЛХТА-1115) более активен, чем 5-изомер (шифр ЛХТА-1114). Эффективность изомеров на животных ранее не изучалась.

Цель исследования: скрининг R- и 5-изомеров хинизарина на противоопухолевую активность на мышах с лимфолейкозом Р388.

Материалы и методы. Использованы мыши-самцы БВА2 с внутрибрюшинно (в/б) перевитым Р388. Лечение проведено в/б однократно на 2 сут или ежедневно на 2-6 сут после трансплантации лейкоза. Агенты вводили однократно в разовых дозах 90-120 мг/кг или курсом в разовых дозах 25 и 30 мг/кг (суммарно 125 и 150 мг/кг). Противоопухолевый эффект оценен по УПЖ, рассчитанному в процентах по соотношению леченой и контрольной группам (п=3-4), минимальный критерийУПЖ>25%. Значимыми считали различия при р<0,05.

Результаты. Показано, что ЛХТА-1114 в однократной дозе 40 мг/кг был мало активен, УПЖтах=18%, а при дозе 80 мг/кг приводил к гибели мышей. При курсовом лечении в дозе 25 мг/кг ЛХТА-1114 показал активность на уровне УПЖ=33%, гибель мышей наступала при разовой дозе 30 мг/кг.

ЛХТА-1115 при однократном введении в дозах 50-80 мг/кг был активен и приводил к УПЖ=25-40%, а при курсовом лечении в разовых дозах 25-30 мг/кг давал УпЖ=33-50% без гибели от токсичности.

Признаков раздражения брюшины при применении обоих агентов не отмечали.

Заключение. Результаты скрининга in vivo показали, что на в/б лейкозе Р388 у мышей оба изомера хинизарина в изученных дозах и режимах применения при в/б введении оказывают значимое противоопухолевое действие. Наиболее активным и лучше переносимым был Л-изомер, что определяет его перспективность для дальнейшего углубленного изучения в качестве потенциального противоопухолевого средства.

Работа выполнена при поддержке грантами РФФИ №08-04-12005-офи и РФФИ-TNSC №07-03-92000-ННС-а.

Якунина М.Н., Трещалина Е.М.

СИСТЕМНАЯ ХТ С ТАКСОТЕРОМ

ПРОТИВ ВНУТРИПЛЕВРАЛЬНОЙ ХТ

ЦИКЛОФОСФАМИДОМ

ПРИ ОПУХОЛЕВОМ ПЛЕВРИТЕ У КОШЕК

РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва

Введение. Злокачественный ОП у кошек часто является наиболее тяжелым проявлением метастази-рования РМЖ и сопровождается накоплением плеврального выпота (ПВ), что резко сокращает продолжительность жизни.

Одним из традиционных методов лечения ОП у кошек считается внутриплевральная (в/пл) ХТ цик-лофосфамидом (ЦФ). В гуманитарной практике у больных РМЖ для лечения метастатического ОП используется последовательно системная, а потом в/пл ХТ. В последнее время при системном лечении ОП при РМЖ изучаются таксаны [Колядина И.В. и соавт., 2009 г.].

Цель исследования. Сравнить эффективность системной ХТ с таксотером и в/пл ХТ циклофос-фамидом при метастатическом ОП кошек с РМЖ.

Материалы и методы. Проведен анализ 18 историй болезни кошек с РМЖ, осложненном ОП, диагностированном рентгенологически и верифицированным цитологически. У всех животных ОП развился после оперативного удаления опухоли, некоторые из них в адьювантном периоде получили ХТ доксорубицином или таксотером.

Животные с ОП были разделены на 2 группы.

1. Экспериментальная_(п=12), в адьювантном режиме проведено 3-6 курсов ХТ таксотером по 30 мг/м (п=7) или 3 курса ХТ (интервал 21 д) таксотер20 мг/м2 + доксорубицин 20 мг/м2 (п=5).

2. Контрольная (п=6), адьювантно проведено 1-4 курса (интервал 1 нед) в/пл ХТ ЦФ 250 мг/м2.

Эффективность лечения оценена по задержке или прекращению накопления ПВ (рентгенологически; симптоматически), а также по времени до прогрессирования (ВДП) и медиане продолжительности жизни (МПЖ).

Результаты. Группа эксперимента. У 3 из 12 кошек (25%) отмечены задержка накопления и уменьшение объема ВП. Достоверное прекращение накопления ПВ отмечено у 7 из 12 кошек (58,3%, p<0,05), в случае адьювантной ХТ доксорубицином или при отсутствии ХТ в анамнезе - 71,4% а ХТ таксотером - 40% кошек. В 2 случаях (16,7%) наступило прогрессирование ОП.

*3-аминометильные производные пирроло[2,3-й] хинизарина

Без признаков ОП 3 мес прожили 47%; 6 мес

- 23,9% кошек, ВДП=1,79 мес. После лечения 3 мес пережили 56,9%; 6 мес - 41,9%, а 11 мес - 21% кошек, МПЖ=2,8 мес.

В группе контроля: у всех кошек наступило прогрессирование ОП, задержки или прекращения накопления выпота не отмечено, 1 мес прожили только 20% кошек, ВДП=МПЖ=0,6 мес.

Заключение. У кошек с РМЖ и развившемся опухолевым плевритом в отличие от в/пл терапии

циклофосфамидом 250 мг/м2 системная ХТ с таксо-тером 20-30 мг/м2 в монстежиме или в сочетании с доксорубицином 20 мг/м достоверно более результативна по всем параметрам.

Сравнительная эффективность лечения ОП с таксотером заключается в достоверной задержке или прекращении накопления плеврального выпота в 58,3% случаев, достоверном увеличении времени до прогрессирования в 3 раза (р<0,00017) и медианы продолжительности жизни в 4,6 раза (р<0,0004).

Издание 2-е, переработанное и дополненное

ЭНЦИКЛОПЕДИЯ

КЛИНИЧЕСКОЙ

ОНКОЛОГИИ

Готовится к печати Издательская группа РОНЦ