CC BY
70
УДК 615.27
ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕКСИДОЛА И ДИОСМИНА ПРИ СТРЕССЕ У ЖИВОТНЫХ
Н. О. Крюкова1, В. Е. Новиков2
1Кафедра управления и экономики фармации Смоленской государственной медицинской академии,
Россия, 214019, Смоленск, ул. Крупской, 28 2Кафедра фармакологии с курсом фармации ФПК и ППС Смоленской государственной медицинской академии,
Россия, 214019, Смоленск, ул. Крупской, 28
В статье приведены результаты экспериментальных исследований по влиянию диосмина и мексидола на иммобилизационно-болевой стресс. Оценивалась «триада» стрессорного повреждения и интенсивность перекисного окисления липидов в сыворотке крови и гомогенате желудка экспериментальных животных. Диосмин и мексидол предохраняют слизистую оболочку желудка от стрессорного повреждения, снижают массу надпочечников и увеличивают массу тимуса, т. е. лекарственные вещества обладают стресспротекторной активностью. Исследуемые лекарственные вещества существенно уменьшают содержание продуктов перекисного окисления липидов в сыворотке крови и гомогенате желудка животных. Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что диосмин и мексидол обладают стресспротекторной активностью.
Ключевые слова: стресс, перекисное окисление липидов, диосмин, мексидол
EFFICIENCY OF BEMYTHYL AND DIOSMIN IN STRESS IN EXPERIMENTAL ANIMALS
N. O. Krjukova, V. E. Novikov
Smolensk State Medical Academy, Russia, 214019, Smolensk, Krupskoy str., 28
In article results of experimental researches on influence diosmin and mexidol on stress are presented. Estimate «triad» stress damage and intensity of lipid peroxidation in blood serum and stomach homogenate of experimental animals. Thus, diosmin and mexidol protect stomach mucous membrane from stress damages, reduce weight of the adrenal glands and increase thymus weight, i. e. diosmin and mexidol possess stress-protective activity. Diosmin and mexidol reduces lipid peroxidation in whey of blood and stomach homogenate of animals. On the basis of the received results we draw a conclusion that diosmin and mexidol possess stress protective properties.
Keywords: stress, lipid peroxidation, diosmin, mexidol
Стресс, как известно, представляет собой совокупность защитных и повреждающих реакций организма, возникающих в результате нейроэн-докринных и метаболических сдвигов в ответ на действие чрезвычайных или патологических факторов, проявляющихся адаптационным синдромом. Стрессорные факторы, действующие на организм, вызывают в нем цепь защитно-приспособительных реакций, заключающихся в изменении нервных, гормональных, метаболических и физиологических процессов. Формирование защитных эффектов адаптации обеспечивается активацией генетического аппарата, изменением метаболизма клетки, а также изменением функционирования практически всех основных систем организма. Любые сильные воздействия окружающей среды вызывают стандартную стресс-реакцию. При кратковременном действии стрессов умеренной интенсивности происходит усиление функционирования органов и мобилизация организма. Одним из возможных компонентов быстрой реакции на стресс является активация перекисного окисления липидов (ПОЛ) [2]. При свободно-радикальном окислении липидов происходит модификация ли-
пидного матрикса мембраны, приспособление ее молекулярной организации к изменившимся условиям внешней среды, т.е. изменяется пластичность мембранного ответа на внешнее воздействие. На этом фоне снижаются функциональные возможности органов и систем организма.
Поэтому актуальной задачей остается поиск стресспротекторов в ряду веществ с антиокси-дантной и антигипоксантной активностью. Среди таких веществ хорошо зарекомендовал себя отечественный синтетический антиоксидант мекси-дол, который был создан на основе эмоксипина с включением в его молекулу янтарной кислоты, что обеспечило расширение терапевтических возможностей препарата. Действие мексидола заключается в антиоксидантном и мембранопро-текторном эффектах, которые обеспечиваются ингибированием свободнорадикального окисления липидов клеточных мембран и модулированием синтеза простагландинов, повышением активности антиоксидантных ферментов организма, повышением содержания полярных фракций липидов и снижением соотношения холестерин/ фосфолипиды, а также активацией энергосинте-
зирующих функций митохондрий [3]. Кроме того, в этой связи вызывают интерес как перспективные лекарственные средства, эффективно регулирующие процессы окисления и перооксидации, растительные флавоноиды и в частности диос-мин - основной флавоноид травы вики изменчивой. Флавоноиды, являясь антиоксидантами, способны влиять на ключевые звенья развития патогенетических процессов, связанных с нарушением перекисного окисления липидов мембран, эти вещества характеризуются определенным сродством к липидам, что связано с наличием ги-дроксигрупп в агликонах и углеводных фрагментах гликозидов. Стабилизация мембран обеспечивается способностью флавоноидов регулировать процессы свободно-радикального перекисного окисления фосфолипидов, входящих в структуру мембран. Легко окисляясь, флавоноиды способствуют восстановлению других веществ, либо пред охраняют их от окисления [6]. Они хорошо переносятся организмом даже при продолжительном применении в больших дозах.
Цель исследования - изучение эффективности диосмина и мексидола при иммобилизационно-бо-левом стрессе крыс.
Методика
В эксперименте использовали крыс-самцов линии Вистар, массой 200-220 г, которые содержались на стандартном рационе питания вивария. Животных группировали по 6 крыс. Диосмин вводили перорально один раз в сутки в дозе 100 мг/кг 7 дней до стресса. В качестве препарата сравнения выступал мексидол, который вводили перорально в дозе 50 мг/кг по той же схеме. Выбранная доза соответствовала рекомендованной для клинической практики (с пересчетом дозы на животных). Иммобилизационно-болевому стрессу крысы подвергались в течение 24 часов. Далее животных де-капитировали, взвешивали тимус, надпочечники и исследовали стрессорное повреждение слизистой оболочки желудка (СОЖ) для оценки «триады» стрессорного повреждения [5]. Площадь язвенных дефектов СОЖ определяли, используя прозрач-
ную миллиметровую пленку. Индекс Паулса, или индекс изъязвления, (ИП) вычисляли по формуле: ИП = А х в / 100, где А - среднее количество язв на 1 животное; В - количество животных с язвами в группе (в%). Противоязвенную активность (ПА) препаратов определяли как отношение ИП контрольной группы к опытной. Препарат считали активным, если ПА в терапевтической дозе равен 2 и более [4]. Оценку интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) в сыворотке крови и су-пернатанте гомогената желудка животных проводили методом хемилюминесценции на отечественном хемилюминометре фирмы «Диалог» с помощью программы <CLM>. В качестве оценочного показателя использовалась величина светосуммы, отражающая интенсивность образования свободных радикалов и участие в процессе свободнора-дикального окисления антиоксидантных систем. Все болезненные манипуляции животным проведены под легким эфирным наркозом.
Статистическую обработку результатов производили на ПЭВМ с помощью прикладного пакета «Statistica». Обработанные данные представлены в виде М±т, где М - среднее арифметическое, m -стандартная ошибка среднего. Статистическую достоверность оценивали путем применения t-критерия Стьюдента для непарных выборок. Проверку статистических гипотез осуществляли на уровне зависимости равной 0,05 [1].
Результаты исследования и их обсуждение
Установлено, что в результате 24-часовой иммобилизации у крыс развивается комплекс дистрофических изменений внутренних органов, характерных для стрессорной реакции: инволюция тимуса и гипертрофия надпочечников в 2 раза по сравнению с данными у интактных животных (табл. 1).
При визуальном обследовании желудка животных контрольной группы выявлено: язвенные дефекты отмечались в 100% случаев, сильная гиперемия слизистой оболочки, складки утолщены, кровоизлияния, эрозии и язвы, площадь которых в среднем была 7,38±1,74 мм2, индекс Паулса -8,00 (табл. 2).
Таблица 1. Масса надпочечников и тимуса экспериментальных крыс ^±m)
Группа, n=10 Масса надпочечников, мг/0,1 кг массы тела % к интакту Масса тимуса, мг/0,1 кг массы тела % к интакту
Интактные животные 28,20±2,80 100 102,62±6,43 100
Контрольные животные 52,95±3,91 р<0,001 187,76 52,18±5,10 р<0,001 50,85
Диосмин, 100 мг/кг 33,17±3,18 р<0,05; р1<0,001 117,62 88,82±4,15 р<0,001; р1<0,001 86,55
Мексидол, 50 мг/кг 29,17±1,47 р>0,05; р1<0,001 103,44 90,65±3,80 р<0,001; р1<0,001 88,34
Примечание. Здесь и во всех таблицах п - количество животных, р - достоверность по отношению к ин-тактной группе животных, р1 - достоверность по отношению к контрольной группе животных.
Таблица 2. Влияние диосмина и мексидола на развитие стрессорного поражения СОЖ (М±т)
Группа аблюдения n=10 Площадь язвенных дефектов, мм2 % к контролю Количество животных с язвенными дефектами, % Среднее количество язвенных дефектов на 1 крысу ИП ПА
Контроль 7,38±1,74 - 100 8,00±1,79 8,0 -
Диосмин, 100 мг/кг 0,83±0,20 р<0,001 11,25 100 1,83±0,75 р<0,001 1,8 4,4
Мексидол, 50 мг/кг 0,42±0,30 р<0,001 5,69 90 1,17±0,75 р<0,001 1,4 5,7
Кроме того, иммобилизационно-болевой стресс сопровождается выраженной индукцией ПОЛ, о чем свидетельствует увеличение светосуммы свечения сыворотки крови в 7 раз и в 5 раз - супернатан-та гомогената желудка по сравнению с аналогичными показателями у интактных животных (табл. 3).
Профилактическое курсовое введение диосмина в дозе 100 мг/кг на фоне 24-часовой иммобилизации, оказывает выраженное антистрессорное действие, о чем свидетельствует уменьшение выраженности «триады Селье»: масса надпочечников снижается на 37%, масса тимуса увеличивается на 70% (табл. 1), а также уменьшается площадь деструкций СОЖ в 9 раз по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. В частности, гастропротекторное действие диосмина проявляется в достоверном уменьшении индекса Паулса 1,8 против 8,0 в контроле (табл. 2). ПА в этой группе составила 4,4, то есть вещество обладает гастро-протекторными свойствами. При этом, хотя у всех крыс, получавших диосмин, были обнаружены язвенные дефекты, слизистая оболочка была слабо гиперемирована, складки не утолщены, обнаруживались единичные точечные кровоизлияния, не на-
блюдалось образования полосовидных язв, тогда как у животных контрольной группы данное повреждение встречалось в 80% случаев. Кроме того, профилактическое введение животным диосмина сопровождается ингибированием процессов ПОЛ: уменьшение на 76% площади светосуммы свечения сыворотки крови и на 65% супернатанта гомогената желудка по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы (табл. 3).
В эксперименте показано, что фармакотерапев-тическая эффективность диосмина при стресс-индуцированном повреждении сопоставима с таковой у препарата сравнения - мексидола. При иммо-билизационно-болевом стрессе на фоне профилактического введения мексидола масса надпочечников снижается на 45%, масса тимуса увеличивается на 74% по сравнению с данными у контрольных животных (табл. 1). Также уменьшается количество деструкций СОЖ по сравнению с контрольной группой животных - индекс Паулса 1,4 (табл. 2). При этом у крыс, получавших мексидол, язвенные дефекты были обнаружены в 90% случаев, площадь их была в среднем в 17 раз меньше, чем в контрольной группе. ПА составила 5,7 - лекарственный пре-
Таблица 3. Показатели площади светосуммы свечения сыворотки крови и гомогената желудка экспериментальных животных (М±т)
Группа наблюдения n=10 Светосумма свечения супернатанта гомогената желудка, отн. ед. % к интакту Светосумма свечения сыворотки крови, отн. ед. % к интакту
Интактные животные 42 332,50±3 609,24 - 47 561,83±4 619,37 -
Контрольные животные 212 217,83±59 350,45 р<0,001 501,31 343 384,00±37 019,56 р<0,001 721,97
Диосмин, 100 мг/кг 74 118,67±8 618,58 р<0,001; р<0,001 175,09 81 683,50±6 878,64 р<0,001; р<0,001 171,74
Мексидол, 50 мг/кг 60 803,00±5 894,87 р<0,001; р<0,001 143,63 75 681,17±7 474,99 р<0,001; р<0,001 159,12
парат обладает гастропротекторной активностью. Выявлено также уменьшение на 78% светосуммы свечения сыворотки крови и на 71% супернатанта гомогената желудка по сравнению с контрольной группой животных (табл. 3).
Вывод
Иммобилизационно-болевой стресс у экспериментальных животных проявляется изменением массы надпочечников, тимуса, выраженным повреждением морфологической структуры СОЖ и активацией процессов свободно-радикального окисления
в желудке и сыворотке крови. Диосмин и мексидол в значительной мере предохраняют СОЖ от стрес-сорного повреждения, а также снижают массу надпочечников и увеличивают массу тимуса, существенно уменьшают содержание продуктов ПОЛ в сыворотке крови и гомогенате желудка животных. Диосмин в меньшей степени, чем мексидол нивелирует стрес-сорное повреждение. Изученные лекарственные средства обладают стресспротекторной активностью, основным механизмом стресспротекторного действия веществ является ингибирование процессов свободно-радикального окисления.
Список литературы
1. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Перевод с английского. - М.: Практика, 1999. - 495 с.
2. Зорькин В. И. Экспериментальное исследование гастропротекторного действия эмоксипина, димефосфона и их комбинаций: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Саранск, 2003. - 18 с.
3. Меньщикова Е. Б., Ланкин В. З., Зенков Н. К. и др. Прооксиданты и оксиданты. - М.: Слово, 2006. - 556 с.
4. Пупыкина К. А., Басченко Н. Ж., Макара Н. С. Лечебное действие противоязвенного сбора // Фармация. - 2006. -№ 3. - С. 37-38.
5. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармаколгических веществ. Под общей ред. члена-корр. РАМН, проф. Р. У. Хабриева. - М.: «Медицина», 2005. - 832 с.
6. Шаренко О. М. Химико-технологическое обоснование использования вики изменчивой, вики Гроссгейма и вики обрубленной как источников получения гепатозащитных и венотонизирующих средств: Автореф. дисс. ... канд. фармац. наук. - Пятигорск, 2005. - 22 с.
