CC BY
30
УДК 579.61+616.9
Сейма О. е., Воронкова О. С.
ДОСЛIДЖЕННЯ М1КРОФЛОРИ УРОГЕШТАЛЬНОГО ТРАКТУ Ж1НОК
ЗА ДО ПО МО ГО Ю МЕТОДУ ПЛР
Днтровський нацюнальний ушверситет ¡меш Олеся Гончара (м. Днтро)
Доогмдження виконаы у рамках реал1заци за-вдань держбюджетно! теми N»1-294-15 «Структурно* функцюналы-ii властивост1 природних MiKpo-бюценоз1в та мехаызми бюлопчно! дм м1кробних препарат1в».
Be туп. Сьогоды проблема ¡нфекцм урогеыталь-ного тракту у жЫок набула особливо! актуальность Це обумовлено тим, що за даними численних до-слщжень, за осташ-ii ктька рок1в значно зросла ix поширенють. При цьому вщм1чаеться переважання малосимптомних i латентних форм, що уекпаднюе д1агностику i л1кування. Це, у свою чергу, сприяе подальшому поширенню ¡нфекцм урогеытального тракту серед населения [13,14].
Видовий склад м1крофлори жшочих статевих ор-ган1в досить стабтьний. Певы BiflMiHHOCTi обумов-леы BiKOM, вагггнютю, фазою менструального циклу. Порожнина матки, маткових труб i яечниюв у HopMi стерильы [1]. Нормальна м1крофлора жЫочих статевих opraHiB надзвичайно р1зномаытна i представлена аеробними, факультативними та анаеробними м1крооргаызмами, причому анаероби у видовому i ктькюному вщношены домЫують [2,15]. У 87-100% здорових жЫок репродуктивного BiKy виявляють aepoÖHi м1кроорган1зми. 3 них переважно виявляють лактобактер11 (45-88%), стрептококи (53-68%), ентерококи (27-32%), коагулазонегативы стафто-коки (34-92%). При виникнены уражень статевих шлях1в у понад 90% Bcix випадюв виявляють уро-патогенн1 м1кроорган1зми, яю вщносяться в першу чергу до грамнегативних бактерм - представниюв родини Enterobacteriaceae (Proteus spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., Serratia spp.), Acinetobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, i з грампозитивних Enterococcus spp., Staphylococcus saprophyticus [10].
М1кробна флора регулюе роботу всього оргаыз-му, тому вивчення i"i складу мае велике значения для можпивост1 попередження ¡нфекцм, у тому чиогм й сечовивщних шлях1в, що поещають провщне мюце у структур! ¡нших ¡нфекцмних захворювань жЫок.
За допомогою якюно! та швидко! д1агностики, яку можна здмснити за допомогою методу пол1ме-разно! ланцюгово! реакцй' можпиво легко вияви-ти хворобу навпъ в латентний перюд. Тому яюсна та своечасна д1агностика ¡нфекцмних досягнення ycniLUHoi профтактики та л1кування ¡нфекцмних захворювань [9].
Мета дослщження: визначити склад м1крофло-ри урогеытального тракту жЫок за допомогою методу пол1меразно! ланцюгово! реакцй при nifl03pi на ¡нфекцмне ураження.
Об'ект i методи дослщження. Для реал1заци мети роботи обстежено бюлопчний матер1ал (3i-скр1бки еп1тел1альних кгмтин з nixBH, уретри, цервг кального каналу), який було отримано вщ 135 жЫок BiKOM вщ 16 до 56 poKiB. Доогмдження виконаы на 6a3i молекулярно-генетично! лаборатори ПРЦ TOB «Незалежна лаборатор1я IHBITPO» з використанням методу ПЛР. Для дослщження бюлопчного матерг алу використано тест-систему «Фемофлор-Скрин» (TOB «НПО ДНК-Технология», РФ) та ампл1фкатор ДТ-96/ДТ-322 (TOB «НПО ДНК-Технология», РФ) в режим! Real time, що дозволяв отримати повну кшьюсну характеристику м1крофлори nixBH та дифе-ренцювати стан ф1зюлопчно1 р1вноваги та дисбак-терюзу. Визначали одночасну присутнють збудни-KiB ¡нфекцмних захворювань та умовно-патогенних MiKpoopraHi3MiB (УПМ) у склад1 м1крофлори nixBH. Стан м1крофлори визначали вщповщно до критерив, наведениху ¡нструкцй до використання тест-набору [8] та загальних кгмычних критерй'в [11], вщповщно до яких виявлення патогенних MiKpoopraHi3MiB визначали як ¡нфекцмне ураження, а виявлення умов-но-патогенних MiKpoopraHi3MiB окремо розцшюва-лося як дисбюз.
Статистичну обробку результа^в здмснювали з використанням програми Origin Lab 7.5 Pro.
Результати дослщжень та Тх обговорення. При обстежены 135жЫокза допомогою методу ПЛР з використанням тест-системи «Фемофлор-скрин» жшок були умовно подтено на три BiKOBi групи: I -ЖШКИ BiKOM ВЩ 16 ДО 25 poKiB, II - жЫкИ BiKOM вщ 26 ДО 42 poKiB, III - ВЩ 43 ДО 56 poKiB, у яких проводили визначення складу м1кробюти урогенггального тракту (табл.).
Вщомо, що до складу м1крофлори В HopMi мо-жуть входити анаеробы грамнегативы палички роду Fusobacterium i грамнегативы коки роду Veillonella. Серед транзиторних MiKpoopraHi3MiB nixBH часттше за ¡нших вдаеться видтити коагулазонегативы ста-фтококи i в першу чергу Staphylococcus epidermidis. KpiM того, Corynebacterium spp., Bacteroides spp., Prevotella spp., Mycoplasma hominis, присутывпом1р-Hin кшькосгп (до 4 КУО/мл) [3,12]. Насттьки ж часто, але в менимй ктькост1 зустр1чають Micrococcus spp., Propionibacterium spp., Veillonella spp., Eubacterium spp. Пор1вняно рщко (менш ыж у 10% обстежених) виявляють Clostridium spp., Bifidobacterium spp., Actinomyces spp., Fusobacterium spp., Ureaplasma urealyticum, Staphylococcus aureus, Neisseria spp., E. coli та ¡HLui кол1формн1 бактери; Mycoplasma fermentans, Candida spp. Mycoplasma hominis i Gardnerella vaginalis виЫвають з матер1алу 10-75%
Таблиця.
Частота виявлення збудникт уражень урогештального тракту жшок р1зних BiKOBMX груп (п=135)
Назва збудника Вкова KaTeropia
16-25 26-42 43-56
Обл^атно-анаеробш мкрооргашзми
Gardnerella vaginalis 24,3% 23,1% 22,2%
flpixxenofliÖHi гриби
Candida spp. 19,6% 28,2% 24,8%
Мкоплазми
Mycoplasma hominis 7,3% 8,1% 18,2%
Ureaplasma spp. 18,2% 16,4% 9,3%
Патогены мкрооргашзми
Trichomonas vaginalis 5,8% 2,4% 1,8%
Chlamydia trachomatis 6,2% 5,3% 3,4%
Neisseria gonorrhoeae 2,4% 1,6% 1,9%
здорових xiHOK без будь-яко! кл1н1чно1 симптоматики [4,5].
У наших досл1дженнях при обстежеш-ii жшок за допомогою методу ПЛР з детекц1ею результат1в в режим1 реального часу з використанням тест-системи «Фемофлор-скрин» серед жшок pi3Horo репродуктивного BiKy було видтено 108 штам1вумов-но-патогеннихта патогенних мкроорган1зм1в.
Серед I вково! групи (16-25 роюв) у бшышй кшь-KOCTi були видтеы представники роду Gardnerella vaд¡па Iiis (24,3%), Ca пdida spp. (19,6%) та Ureap la sma spp. (18,2%). У II вковм rpyni (26-42 роюв) також переважно виявлюваними трупами мкрооргаыз-м1в були др1жджопод1бн1 гриби роду Candida spp. (28,2%), G. vaginallis (23,1%) та Ureaplasma spp. (16,4%). У III вковм rpyni (43-56 роюв) у найбть-
инй KmbKOCTi було видтено Candida spp. (24,8%), G. vaginallis (22,2%) та Mycoplasma hominis (18,2%).
Цкаво вщм1тити, що G. vaginalis у Bcix трупах ви-являлася практично з однаковою частотою, що пщ-тверджуе i"i роль у розвитку дисбютичних розлад1в у ж1нок р1зного вку. Також слщ вщм1тити, що частота виявлення кандид у ж1нок Candida spp. була значно вищою у ж1нок старших вкових груп II i III. Таке значив видтення др1жджопод1бних гриб1в роду Candida spp. у ж1нок р1зних в1рогщно може бути пов'язано 3i зниженням ¡мунного статусу, зменшенням захисних сил макрооргаызму та наявнютю або перенесениям хроычнихзахворювань [6,7].
Висновки
1. 3 використанням тест-системи «Фемофлор-Скрин» було встановлено, що у склад1 мкробю-ти урогенггального тракту ж1нок репродуктивного в1ку переважно виявляються G. vaginalis - 23,2%, Candida spp. - 24,2%, Ureaplasma spp. - 14,6% та M. hominis -11,2%.
2. 3 патогенних мкроорган1зм1в у окремих ви-падках визначали: Trichomonas vaginalis - 3,3%, Chlamydia trachomatis - 4,9%, Neisseria gonorrhoeae - 1,9%.
Перспективи подальших дослщжень. Дослг дження мкрофлори репродуктивних шлях1в з метою виявлення р1зних мкроорган1зм1в при безсимптом-ному HocincTBi е одним з ключових питань сучасно! кл1н1чно! медицини, що дозволяв виявити ¡нфек-цмний процес i розпочати його вчасне лкування. Особливого значения у цьому сенс1 набувае моле-кулярно-генетична д1агностика, зокрема, метод по-л1меразно1 ланцюгово! реакцП, що дозволяв визна-чити наявнють не лише важко культи во ва них форм, а також присутнють мкроорган1зм1в у надмалих юль-костях. Все це вказуе на необхщнють подальшого здмснення мон1торингу ¡нфекцмних та неЫфекцм-них уражень репродуктивного тракту.
/Итература
10.
11.
Anastaseva V.G. Sovremennyie metodyidiagnostiki, lecheniya i profilaktiki bakterialnogo vaginoza/V.G. Anastaseva. - Novosibirsk: Media, 2007. - 17 s.
Bayramova G.R. Hronicheskiy retsidiviruyuschiy vulvovaginalnyiy kandidioz i patologiya sheyki matki / G.R. Bayramova // Ginekologiya. -2007. -T. 9, № 1. -S. 26-28.
VorobevA.A. Disbakteriozy - aktualnaya problema meditsinyi / A.A. Vorobev, N.A. Abramov, V.M. Bondarenko, B.A. Shenderov// VestnikRAMN. -2007. - № 11. - S. 12-18.
Korchinska O.O. Mikroekolohichna systema pikhvy /O.O. Korchinska. - K: Expert, 2006. - 70 s.
Mikroekologiya vlagalischa. Korrektsiya mikrofloryi pri vaginalnyih disbakteriozah /N.N. Volodina [i dr.]; pod red. V.M. Korshunova. - M.: Media, 2001.-350 s.
Nazarova E.K. Mikrobiotsenoz vlagalischa i ego narusheniya / E.K. Nazarova, E.I. Gimmelfarb, L.G. Sozaeva // Klinicheskaya laboratornaya diagnostika. - 2003. - № 2. - S. 25-32.
Pobedinskiy N.M. Kliniko-bakteriologicheskoe obosnovanie kompleksnogo lecheniya bakterialnogo vaginoza u zhenschin reproduktivnogo vozrasta / N.M. Pobedinskiy, O.A. Aksenova, M.G. Aksenova, V.A. Molochkov //Akusherstvo i ginekologiya. -2006.-№ 6.-S. 24-27.
Primenenie metoda polimeraznoy tsepnoy reaktsii v realnom vremeni dlya otsenki mikrobiotsenoza urogenitalnogo trakta u zhenschin (test Femoflor). - M: 2011. - 36 s.
Rahmatulina M.R. Diagnosticheskie i terapevticheskie aspektyi vedeniya patsientoks bakterialnyim vaginozom / M.R. Rahmatulina //Ginekologiya. - 2012. - T. 14, № 4. -S. 27-32.
Hryanin A.A. Bakterialnyiy vaginoz: novyie predstavleniya o mikrobnom biosotsiume i vozmozhnosti lecheniya / A.A. Hryanin, O.V. Reshetnikov// Meditsinskiy sovet. - 2014. - № 17. - S. 128-133.
Clinical diagnosis of bacterial vaginosis / J.A. Simoes, M.G. Discacciati, E.M. Brolazo [et al.] // Int. J. Gynaecol. Obstet. - 2006. -Vol. 94(1). - P. 28-32.
3
6
7
9
12. Diagnostic and therapeutic advancements for aerobic vaginitis / C. Han, W. Wu, A. Fan [et al.] //Arch. Gynecol. Obstet. - 2015. -Vol. 291 (2). - P. 251-257.
13. Donders G.G. Treatment of bacterial vaginosis: what we have and what we miss / G.G. Donders, J. Zodzika, D. Rezeberga // Expert Opin. Pharmacother. - 2014. - Vol. 15 (5). - P. 645-657.
14. Sherrard J. European (IUSTI/WHO) Guideline on the Management of Vaginal Discharge / J. Sherrard, G. Donders, D. White // Int. J. STD AIDS. -2011. - № 22. - P. 421-429.
15. The vaginal microbiome: new information about genital tract flora using molecular based techniques / R.F. Lamont, J.D. Sobel, R.A. Akins [et al.] // BJOG. - 2011. - Vol. 118 (5). - P. 533-549.
УДК 579.61+616.9
ДОСЛ1ДЖЕННЯ М1КРОФЛОРИ УРОГЕШТАЛЬНОГО ТРАКТУ Ж1НОКЗА ДОПОМОГОЮ МЕТОДУ ПЛР
Сейма О. в., Воронкова О. С.
Резюме. 3 використанням тест-системи «Фемофлор-Скрин»у склад1 м1крофлори урогенггального тракту ж1нок репродуктивного в1ку при nifl03pi на ¡нфекцмне ураження показано переважання наступних умовно- па-тогеннихта патогенних м1кроорган1зм1в: G. vaginalis - 23,2%, Candida spp. - 24,2%, Ureaplasma spp. - 14,6%, M. hominis - 11,2%), T. vaginalis - 3,3%, C. trachomatis - 4,9%, N. gonorrhoeae - 1,9%.
Ключов1 слова: фемофлор-скрин, пол1меразна ланцюгова реакц1я, м1крофлора урогенггального тракту, жЫки.
УДК 579.61+616.9
ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОФЛОРЫ УРОГЕНИТАЛЬНОГО ТРАКТА ЖЕНЩИН С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА ПЦР
Сейма О. Е., Воронкова О. С.
Резюме. С использованием тест-системы «Фемофлор-Скрин» в составе микрофлоры урогенитального тракта женщин репродуктивного возраста при подозрении на инфекционное поражение показано преобладание следующих условно-патогенных и патогенных микроорганизмов: G. vaginalis - 23,2%, Candida spp. -24,2%, Ureaplasma spp. - 14,6%, M. hominis - 11,2%, T. vaginalis - 3,3%, C. trachomatis - 4,9%, N. gonorrhoeae -1,9%.
Ключевые слова: фемофлор-скрин, полимеразная цепная реакция, микрофлора урогенитального тракта, женщины.
UDC 579.61+616.9
THE STUDY OF MICROFLORA OF UROGENITAL TRACT OF WOMEN BY PCR METHOD
Seima O. Ye., Voronkova O. S.
Abstract. Today the problem of infections of the urogenital tract of women has become very urgent. This is due to the fact that according to numerous studies, over the past few years their prevalence has significantly increased. The prevalence of hidden and latent forms, which complicates the diagnosis and treatment. This, in turn, contributes to the further spread of infections of the urogenital tract among the population. In the event of injury of the genital tract, in more over 90% of all cases uropathogenic microorganisms are detected. First of all are the gram-negative bacteria - representatives of family Enterobacteriaceae (Proteus spp., Klebsiella spp., Enterobacter spp., Serratia spp.), Acinetobacter spp., Pseudomonas aeruginosa, and gram-positive Enterococcus spp., Staphylococcus saprophyticus, and obligate pathogenic microorganisms. Microbial flora regulates the state of the whole organism, so studying its composition have a great importance for the prevention of infections, including the urinary tract, which occupy a leading place in the structure of other infectious diseases of women. With the help of qualitative and rapid diagnostics, which can be carried out using the polymerase chain reaction method, it is possible to easily detect the disease, even in the latent period. Therefore, qualitative and timely diagnosis of infectious achievement of successful prevention and treatment of infectious diseases.
The aim of the research was to determine the composition of the micro flora of the urogenital tract of women by the polymerase chain reaction method if the infectious lesion is suspected. For the realization of the aim of the research, the biological samples (scrap of epithelial cells from the vagina, urethra, cervical canal), which was obtained from 135 women aged 16 to 56years, were examined. To test biological material using the Real time PCR method, the test system "Femoflor-Skrin" was used. During the examination of biological material from women, 108 strains of opportunistic and pathogenic microorganisms were isolated. Among the first age group (16-25 years old), representatives of the genus Gardnerella vaginallis (24.3%), Candida spp. (19.6%) and Ureaplasma spp. (18.2%) were identified. In the second age group (26-42 years), also the most frequently detectable groups of microorganisms were yeast-like fungi of the genus Candida spp. (28.2%), G. vaginallis (23.1%) and Ureaplasma spp. (16.4%). In the third age group (4356 years) Candida spp. was identified in the largest number (24.8%), G. vaginallis (22.2%) and Mycoplasma hominis (18.2%). It is interesting to note that G. vaginalis in all groups was almost the same frequency, which confirms its role in the development of dysbiosis in women of all ages. It should also be noted that the yeast detection rate for Candidia spp. was significantly higher in women of the older age groups II and III. Research of reproductive micro flora with the purpose of detection of various microorganisms at asymptomatic carrier is one of the key issues of modern clinical medicine, which allows to identify the infectious process and start its timely treatment. Main importance in this sense is acquired by molecular genetic diagnostics, in particular, the method of polymerase chain reaction, which allows to determine the presence of not only severely-cultivated forms, as well as the presence of microorganisms in excessive quantities.
Keywords: femoflor-screen, polymerase chain reaction, micro flora of urogenital tract, women.
Рецензент - проф. Лобань Г. А.
Стаття надшшла 10.08.2017 року
