Динамика показателей люминол- и люцигенин-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов кровиу больных раком желудка после хирургического лечения

Боякова Нина Васильевна; Винник Юрий Семенович; Филькин Геннадий Николаевич; Селин Сергей Михайлович; Петрова Елена Олеговна

ДИНАМИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ЛЮМИНОЛ- И ЛЮЦИГЕНИН-ЗАВИСИМОЙ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ НЕЙТРОФИЛОВ КРОВИ У БОЛЬНЫХ РАКОМ ЖЕЛУДКА ПОСЛЕ ХИРУРГИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ

Нина Васильевна Боякова1, Юрий Семенович Винник1, Геннадий Николаевич Филькин1, Сергей Михайлович Селин2, Елена Олеговна Петрова1 ('Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого,

ректор — д.м.н., проф. И.П. Артюхов, кафедра общей хирургии имени профессора М.И. Гульмана, зав. — д.м.н., проф. Ю.С. Винник, кафедра онкологии и лучевой терапии с курсом ПО, зав. — к.м.н., доц. P.A. Зуков; 2Красноярский краевой клинический онкологический диспансер имени А.И. Крыжановского,

Резюме. Изучены особенности продукции первичных и вторичных активных форм кислорода (АФК) нейтро-фильными гранулоцитами больных раком желудка (РЖ). В период до хирургического лечения снижены показатели люминол- и люцигенин-зависимой хемилюминесценции (ХЛ) относительно контрольных величин. На 1-сутки после операции наблюдается активация кислород-продуцируюгцей системы нейтрофилов, связанной с этапом образования первичных АФК, в то же время, сохраняется недостаточность каскада биохимических реакций, обеспечивающих образование вторичных АФК. Нейтрофилы крови больных РЖ на 7-е сутки после оперативного лечения характеризуются стабилизацией механизмов, регулирующих базовый уровень продукции АФК, однако наблюдается выраженная активация метаболических реакций, направленных на продукцию вторичных АФК при стимуляции клеток опсонизированным зимозаном.

Ключевые слова: нейтрофилы, хемилюминесценция, рак желудка, активные формы кислорода.

INDICATORS DYNAMICS LUMINOL-DEPENDENT AND LUCIGENIN-DEPENDENT CHEMILUMINESCENCE OF NEUTROPHILS IN BLOOD AT PATIENTS WITH STOMACH CANCER AFTER SURGICAL TREATMENT

Nina Vasilyevna Boyakova1, Yury Semenovich Vinnik1, Gennady Nikolaevich Filkin1, Sergey Mikhaylovich Selin2, Elena Olegovna Petrova1

(Krasnoyarsk State Medical University named after Professor V.F. Voyno-Yasenetsky; Krasnoyarsk Regional Clinical

Oncology Center named after A.I. Kryzhanovsky, Russia)

Summary. Features of production of primary and secondary active forms of oxygen (AFO) by neutrophilic granulocytes of patients with stomach cancer (SC) were studied. During the period to surgical treatment parameters of luminol-dependent and lyutsiginin-dependent chemiluminescence (CL) are decreased relative to reference quantity. For first 24 hours after surgical operation activation of oxygen producing system of neutrophils connected with a stage of primary AFO formation is observed, at the same time, insufficiency of the biochemical reactions cascade providing secondary AFO formation remains. Neutrophils of patients blood with SC for the 7th days after surgical treatment are characterized by stabilization of the mechanisms regulating a basic level of AFO production, however the evident activation of the metabolic reactions directed on production of secondary AFO at stimulation of cages by opsonized zymosan is observed.

Key words: neutrophils chemiluminescence, stomach cancer, active forms of oxygen.

Нейтрофильные гранулоциты характеризуются уникальными адаптационными возможностями, широко реализующимися в норме и на фоне развития патологических процессов [1,4]. Следует отметить, что нейтрофильные гранулоциты не только обладают бактерицидной активностью, но и наряду с другими им-мунокомпетентными клетками играют важную роль в

Имеются сведения об изменении функционально-метаболических характеристик нейтрофилов при развитии опухоли. Однако влияние опухоли на функциональную активность нейтрофилов может быть разнонаправленным. Изменения зависят от типа, локализации и стадии онкологического процесса [2,3].

Согласно современным представлениям, киллинго-вый механизм нейтрофилов опосредован активацией кислородного метаболизма при разных стимулирующих воздействиях, а непосредственными медиаторами цитотоксичности выступают активные метаболиты кислорода, генерируемые в системе НАДФН-зависимых оксидаз, миелопероксидазы, а также окислительного метаболизма арахидоновой кислоты [7,9].

Первичным метаболитом АФК является супероксидный анион, количество которого в ходе ХЛ анализа определяется в присутствии люцигенина в реакционной среде. К вторичным продуктам относятся перекись водорода, гидроксильный радикал и синглетный кислород, вступающие в реакцию с люминолом [5,6]. Изучение параметров люминол- и люцигенин-зависи-

мой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоци-тов периферической крови позволяет выявить механизмы формирования дисбаланса продукции АФК, которые, как известно, играют важную роль в реализации эффекторного потенциала клеток [8,10]. Параллельное использование двух индукторов хемилюминесценции позволяет выявить звено кислородзависимого метаболизма нейтрофилов, на уровне которого происходит сбой продукции активных кислородных радикалов.

Цель исследования: изучение особенностей продукции первичных и вторичных АФК нейтрофильными гранулоцитами больных РЖ до операции и в динамке после хирургического лечения.

Материалы и методы

На базе отделения абдоминальной хирургии Красноярского краевого клинического онкологического диспансера обследованы 32 больных резектабель-ным РЖ (Т, ,1МП ,МП) в возрастном диапазоне 40-55 лет, диагноз верифицирован морфологически. В группах наблюдения на 1-е и 7-е сутки после хирургического лечения — по 28 пациентов с РЖ. Контрольную группу составили 62 здоровых донора.

Исследование проводилось в полном соответствии с «Хельсинской декларацией», под наблюдением локального этического комитета. Все участники исследования подписывали протокол добровольного информированного согласия на участие в нём.

49

Для проведения ХЛ анализа к 5 мл гепаринизированной венозной крови добавляется 1 мл полиглюкина, и помещается на 30 минут в термостат (37°С). Лейкоцитарный супернатант дважды отмывается в растворе Хенкса (без фенолового красного) по 10 мин при 400 g. Конечная концентрация лейковзвеси — 2 млн кл/мл. Пробы включают в себя 200 мкл лейкоцитарной взвеси, 20 мкл донорской сыворотки (AB(IV) Rh"), 240 мкл раствора Хенкса (без фенолового красного) и 50 мкл люминола или 50 мкл люци-генина (100 мкг/мл («Sigma» USA)). Затем пробы помещают в ХЛ-анализатор «CL 3606М» (Россия) и оценивают спонтанную ХЛ реакцию. Через 45 минут добавляют в пробы по 40 мкл опсонизи-рованного зимозана (2мг/мл («Sigma», USA)), и оценивают индуцированную ХЛ реакцию. Результаты ХЛ анализа характеризуют по следующим параметрам: времени выхода на максимум интенсивности ХЛ (Т max), максимальному значению интенсивности ХЛ (I max) и площади ХЛ кривой (S). Усиление ХЛ, индуци-рованой зимозаном, оценивают по соотношению S индуцированной к S спонтанной, и обозначают индексом активации.

По результатам проведенных исследований в пакете электронных таблиц MS Excel 7,0 была сформирована база данных, на основе которой с помощью Statistica 6,0 производился статистический анализ. При обработке данных вычислялись медиана и квантили (Me; C2S-C7S). Проверку гипотезы о статистической значимости выборок проводили с помощью критерия Манна-Уитни, а также использовали критерий Вилкоксона для анализа

Таблица 1

Люминол- и люцигенин-зависимая ХЛ нейтрофилов периферической крови больных РЖ до хирургического лечения (Me; С -С )

Здоровые доноры (n=62) Больные РЖ (п=32)

Показатели Люминол-зависимая реакция 1 Люцигенин-зависимая реакция 2 Люминол-зависимая реакция 3 Люцигенин-зависимая реакция 4

Спонтанная хемилюминесценция

T max (сек.) 505,50 208,50 — 1502,50 1989,00 1624,00 — 2440,00 864,50 273,00— 1654,00 586,50 105,50 — 2016,00 р2<0,01

1 max (o.e. *103) 6,67 3,04 — 18,70 1,22 0,79 — 8,99 2,78 0,37—12,65 р,<0,05 0,46 р2<0,05

S, (o.e..*105) 2,06 1,23 — 4,60 0,57 0,36—1,93 0,78 0,18

Индуцированная зимозаном хемилюминесценция

T max (сек.) 1270,00 862,00 — 1779,00 1799,00 719,00 — 2525,00 1349,50 742,00 — 2040,00 965,00 423,50 — 2177,00 р2<0,001

1 max (o.e. *103) 10,54 4,98 — 41,70 1,94 8,98 1,19 — 27,46 р,<0,05 0,76 р2<0,001

S2 (o.e. *105) 3,78 1,53 — 9,40 0,78 0,53 — 3,21 5,07 0,48—16,80 0,30

SA 1,87 1,52 — 3,00 1,65 2,48 1,20 1,00—1,60 р2<0,001

выборок с попарно связанными вариантами Результаты и обсуждение

У больных РЖ в период до хирургического лечения ней-трофильные гранулоциты периферической крови характеризуются уменьшением времени выхода на максимум интенсивности спонтанной люциге-нин-зависимой ХЛ. При индукции клеток опсонизированным зимозаном отмечено ускорение времени реагирования на стимул на фоне сниженной интенсивности продукции первичных АФК относительно соответствующих величин в группе здоровых доноров. Кроме того, следует отметить пониженный, по сравнению с контролем индекс активации люцигенин-за-висимой ХЛ. Анализ данных люминол-зависимого ХЛ ответа нейтрофилов крови больных РЖ до хирургического лечения показал пониженный уровень как спонтанной, так и стиму-

Примечание: р - статистически значимые различия с показателями люминол-зависимой ХЛ здоровых доноров; р,- статистически значимые различия с показателями люцигенин-зависимой ХЛ здоровых доноров.

лированной продукции вторичных АФК относительно показателей контрольной группы (табл. 1).

На 1-е сутки после хирургического лечения у больных РЖ сохраняются изменения показателей индуцированного опсонизированным зимозаном люцигенин-зависимого ХЛ ответа нейтрофилов крови, а именно, ускорено время выхода на максимум и снижена интенсивность свечения клеток. Величина индекса активации люцигенин-зависимой ХЛ нейтрофилов остается сниженной относительно контрольного диапазона (табл. 2). Следует также отметить, что на 1-е сутки после операции наблюдается уменьшение времени выхода на максимум интенсивности спонтанной люминол-зави-симой ХЛ клеток по сравнению с соответствующим по-

Таблица 2

Люминол- и люцигенин-зависимая ХЛ нейтрофилов периферической крови больных РЖ на 1-е сутки после операции (Ме; С

-с75)

Здоровые доноры (п=62) Больные РЖ (п=28)

Показатели Люминол-зависимая Люцигенин-зависимая Люминол-зависимая Люцигенин-зависимая

реакция 1 реакция 2 реакция 3 реакция 4

Спонтанная хемилюминесценция

Т max 505,50 1989,00 503,00 1000,00

(сек.) 208,50 — 1502,50 1624,00 — 2440,00 200,00 — 979,00 483,50— 1645,50

1 max 6,67 1,22 3,15 0,57

(о.е.*103) 3,04—18,70 0,79 — 8,99 0,58—14,19 0,33 — 9,94

S, 2,06 0,57 1,910 0,24

(о.е.*105) 1,23 — 4,60 0,36—1,93 0,33—10,03 0,16 — 5,43

Индуцированная зимозаном хемилюминесценция

Т max (сек.) 1270,00 862,00 — 1779,00 1799,00 719,00 — 2525,00 1245,00 545,00 — 2039,00 1487,00 538,00— 1976,50 р2<0,01

1 max 10,54 1,94 22,78 0,52 0,26 — 3,61 р2<0,05

(o.e. *103) 4,98 — 41,70 1,10-6,53 0,52 — 59,65

S2 3,78 0,78 14,40 0,35

(o.e. *105) 1,53 — 9,40 0,53 — 3,21 0,53 — 29,40 0,15 — 1,96

Vs! 1,87 1,65 2,50 1,00 — 9,05 1,06 0,45 — 1,85 р2<0,01

Примечание: то же, что для табл. 1.

50

Таблица 3

Люминол- и люцигенин-зависимая ХЛ нейтрофилов периферической крови больных РЖ на 7-е сутки после операции (Ме; С

-с75)

Здоровые доноры (n=62) Больные РЖ (п=28)

Показатели Люминол-зависимая реакция 1 Люцигенин-зависимая реакция 2 Люминол-зависимая реакция 3 Люцигенин-зависимая реакция 4

Спонтанная хемилюминесценция

T max (сек.) 505,50 208,50— 1502,50 1989,00 1624,00 — ?440г00 656,00 656,00—1216,00 869,00 400,00 — 1374,00 р <0,05

1 max (o.e. *103) 6,67 3,04—18,70 1,22 0,79 — 8,99 1,41 0,41 — 14,22 Р,<0,05 0,435 0,315 — 03,60 Р2<0,05

S, (o.e. *105) 2,06 1,23 — 4,60 0,57 0,36—1,93 0,48 0,14 — 6,03 0,16

Индуцированная зимозаном хемилюминесценция

T max (сек.) 1270,00 862,00 — 1779,00 1799,00 719,00 — 2525,00 1059,00 422,00— 1657,00 959,00 315,00—1668,00 Р2<0,01

1 max (o.e. *103) 10,54 4,98 — 41,70 1,94 1,10 — 6,53 12,53 0,91 — 55,96 1,43 0,43 — 3,50

s, (o.e. *105) 3,78 1,53 — 9,40 0,78 0,53 — 3,21 7,52 0,40 — 35,60 0,59

SA 1,87 1,52 — 3,00 1,65 3,63 1,50 — 5,46 Р,<0,01 1,215 0,94—1,94 Р2<0,01

Примечание: то же, что для табл.1

казателем в период до хирургического лечения (р<0,05).

Исследования показателей ХЛ ответа нейтрофилов крови на 7-е сутки после хирургического лечения установил, что по-прежнему наблюдаются ускоренное время выхода на максимум и низкая интенсивность свечения клеток при спонтанной люцигенин-зависимой реакции, а также снижен индекс активации ХЛ по сравнению с величинами здоровых доноров. Кроме того, отмечается низкий уровень спонтанной интенсивности продукции вторичных АФК нейтрофилами периферической крови, о чем свидетельствуют данные люминол-зависимой ХЛ реакции (табл. 3).

Необходимо отметить, что на 7-е сутки после хирургического лечения у больных РЖ увеличивается величина индекса активации люминол-зависимого ХЛ ответа клеток, как относительно показателя в период до хирургического лечения, так и по сравнению со значениями в группе контроля (р<0,05).

Параллельное использование двух индукторов ХЛ — люминола и люцигенина позволяет оценить относительное соотношение уровней продукции первичных и вторичных высокоэнергетических оксидантов ней-трофильными гранулоцитами периферической крови.

Так, в период до операции у больных РЖ соотношение общего количества первичных и вторичных АФК при спонтанной ХЛ реакции составляет 1:4 при стимулированной ХЛ реакции — 1:2, в то время как у здоровых доноров эти величины составляют 1:3 и 1:5, соответственно. Следовательно, соотношение 1:2 является недостаточным для развития полноценного цитопато-генного эффекта нейтрофилами, и является отражением опухолевой иммуносупрессии.

На 1-е сутки после операции соотношение общего количества первичных и вторичных АФК при спонтанной ХЛ составляет 1:8, при стимулированной ХЛ — 1:2,

что свидетельствует о значительной активации внутриклеточной кислород-продуцирую-щей системы, связанной с этапом образования первичных высокоэнергетических кислородных метаболитов и сохраняющейся недостаточностью каскада образования вторичных АФК.

На 7 сутки после операции соотношение общего количества первичных и вторичных АФК при спонтанной ХЛ составляет 1:3, при стимулированной ХЛ — 1:12. В данный период у больных РЖ нейтро-филы периферической крови характеризуются нормализацией механизмов, регулирующих базовый уровень продукции АФК, однако наблюдается выраженная активация метаболических реакций, направленных на продукцию вторичных АФК при стимуляции клеток опсо-низированным зимозаном.

Адекватное соотношение продукции первичных и вторичных высокоэнергетических оксидантов нейтрофилами определяет развитие полноценного системного воспалительного ответа в послеоперационном периоде, направленного на утилизацию и репарацию поврежденных собственных тканей, а также на ограничение экспансии патогенных микроорганизмов и условно-патогенной микрофлоры. Следует отметить, что чрезмерная активация кислородзависимого метаболизма нейтрофилов может способствовать вторичной альтерации тканей. В свою очередь, недостаточная продукция АФК нейтрофилами сопряжена с неспособностью данной клеточной популяции противостоять возросшей антигенной нагрузке, что может стать причиной инфекционных послеоперационных осложнений.

Таким образом, проведенные исследования выявили особенности кислородного метаболизма нейтрофиль-ных гранулоцитов периферической крови у больных РЖ. Анализ параметров люминол- и люцигенин-за-висимой ХЛ наглядно демонстрирует дисбаланс продукции первичных и вторичных АФК, что приводит к нарушению реализации эффекторного потенциала нейтрофилов крови больных РЖ.

Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Прозрачность исследования. Исследование не имело спонсорской поддержки. Исследователи несут полную ответственность за предоставление окончательной версии рукописи в печать.

Декларация о финансовых и иных взаимодействиях. Все авторы принимали участие в разработке концепции и дизайна исследования и в написании рукописи. Окончательная версия рукописи была одобрена всеми авторами. Авторы не получали гонорар за исследование.

Работа поступила в редакцию: 16.11.2014.

ЛИТЕРАТУРА

1. Долгушин И.И., Андреева Ю.С., Савочкина А.Ю. Нейтрофильные ловушки и методы оценки функционального статуса нейтрофилов. — М.: Изд-во РАМН, 2009. — 208 с.

2. Куртасова Л.М., Семенов Э.В., Зуков P.A., Шкапова Е.А.

Изменение количества и функционально-метаболической

активности нейтрофилов периферической крови у больных раком мочевого пузыря // Сибирское медицинское обозре-

ние. — 2014. — Т. 90, №6. — С. 48-52.

3. Куртасова U.M., Шкапова Е.А., Зуков P.A. Изменение функционально-метаболической активности нейтрофилов периферической крови у больных почечно-клеточным раком в динамике заболевания // Вестник РАМН. — 2014. — №114. Пинегин Б.В., Маянский А.Н. Нейтрофилы: структура и 5. Плескова С.Н., Михеева Э.Р Модуляция кислородзависи-

мого и кислороднезависимого метаболизма нейтрофильных гра-нулоцитов квантовыми точками // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. — 2011. — Т. 151, №4. — С. 452-454.

iНе можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

6. Babior В.М. Phagocytosis and oxidative stress // Am. J. Med. — 2000. — Vol. 109. — P. 33-44.

7. Cave A.C., Brewer A.C., Narayanapanieker A., Ray R., et al. NADPH oxidases in cardiovascular health and disease // Antioxid. Redox. Signal. — 2006. — Vol. 8. — P. 691-728.

8. Elinav E., Nowarski R., Thaiss C.A., et al. Inflammation-induced cancer: crosstalk between tumours, immune cells and

microorganisms // Nat. Rev. Cancer. — 2013. — Vol. 13, №11. — P. 759-771.

9. Steinbeck M.J., Appel W.H. Jr., Verhoeven A.}., Karnovsky M.J. NADPH-oxidase expression and in situ production of superoxide by osteoclasts actively resorbing bone // J. Cell. Biol. — 1994. —

10. Zhao T., Benard V., Bohl B.P., Bokoch G.M. The molecular basis for adhesion-mediated suppression of reactive oxygen species generation by human neutrophils // J. Clin. Invest. — 2003. — Vol.

REFERENSES

1. Dolgushin I.I., Andreeva Yu.S., Savoehkina A. Yu. Neutrophilic save-all and methods of the assessment of the functional neutrophils status. — Moscow: Izdatelstvo Rossijskoj Akademii Meditsinskikh Nauk, 2009. — 208 p. (in Russian)

2. Kurtasova L.M., Semenov E.V., Zukov R. A., Shkapova E.A. Change of quantity and functional and metabolic activity of neutrophils of peripheral blood at patients with bladder cancer // Sibirskoe Meditsinskoe Obozrenie. — 2014. — Vol. 90, No. 6. — P. 48-52. (in Russian)

3. Kurtasova L.M., Shkapova E.A, Zukov R. A., Change of functional and metabolic activity of neutrophils in peripheral blood at patients with a renal and cellular cancer in the disease dynamics // Vestnik Rossijskoj Akademii Meditsinskikh Nauk. — 2014,—No. 11-12, —P. 104-110. (in Russian)

4. Pinegin В. V., Mayansky A.N. Neutrophils: structure and functions // Immunologia. — 2007. — No. 6. — P. 374-382. (in Russian)

5. Pleskova S.N., Mikheeva E.R. Modulation of oxygen dependent and not oxygen dependent metabolism of neutrophilic granulocytes

by quantum points // Bulleten Experimentalnoj Biologii I Meditsiny. — 2011. — Vol. 151, No. 4. — P. 452-454. (in Russian)

6. Babior B.M. Phagocytosis and oxidative stress // Am. J. Med. — 2000. — Vol. 109. — P. 33-44.

7. Cave A.C., Brewer A.C., Narayanapanieker A., Ray R., et al. NADPH oxidases in cardiovascular health and disease // Antioxid. Redox. Signal. — 2006. — Vol. 8. — P. 691-728.

8. Elinav E., Nowarski R., Thaiss C.A., et al. Inflammation-induced cancer: crosstalk between tumours, immune cells and microorganisms // Nat. Rev. Cancer. — 2013. — Vol. 13, №11. — P. 759-771.

9. Steinbeck M.J., Appel W.H. Jr., Verhoeven A.J., Karnovsky M.J. NADPH-oxidase expression and in situ production of superoxide by osteoclasts actively resorbing bone // J. Cell. Biol. — 1994. —

10. Zhao T., Benard V., Bohl B.P., Bokoch G.M. The molecular basis for adhesion-mediated suppression of reactive oxygen species generation by human neutrophils // J. Clin. Invest. — 2003. — Vol.

Информация об авторах: Волкова Нина Васильевна — ассистент кафедры, 660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, 1, КрасГМУ, кафедра общей хирургии имени проф. М.И. Гульмана, тел. (391) 2487971, e-mail: [email protected]; Винник Юрий Семенович — заведующий кафедрой, д.м.н., профессор; Филькин Геннадий Николаевич — доцент кафедры, к.м.н., доцент; Селин Сергей Михайлович — заведующий отделением абдоминальной хирургии КККОД; Петрова Елена Олеговна — ассистент кафедры.

Information about of the authors: Boyakova Nina Vasilyevna — the assistant to chair, 660022, 1, Partizana Zheleznyaka St., Krasnoyarsk, «Krasnoyarsk State Medical University named after Professor V.E Voyno-Yasenetsky», the department of

general surgery named after professor. M. I. Gulman, ph. (391) 2487971, e-mail: [email protected]; Vinnik Yury Semenovich — head of the department, MD, PhD, DSc, professor; Filkin Gennady Nikolaevich — MD, PhD, the associate professor; Celine Sergey Mikhaylovich — the head of the unit of abdominal surgery; Petrova Elena Olegovna — the assistant to chair.

ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ В АНАЛИЗЕ КАПСУЛ «ОМЕЗ-Д»

Иноземцев Павел Олегович, Илларионова Елена Анатольевна (Иркутский государственный медицинский университет, ректор — д.м.н., проф. И.В. Малов, кафедра фармацевта ческой и токсикологической химии, зав. — д.х.н., проф. Е.А. Илларионова)

Резюме. Предложены оптимальные условия качественного и количественного анализа многокомпонентной лекарственной формы капсул «Омез-Д» с использованием метода микроколоночной высокоэффективной жидкостной хроматографии. Условия анализа: градиентное элюирование в системе 0,05 М калия дигидрофосфат (рН 7,8) — ацетонитрил (MeCN), градиент линейный 1500 мкл от 25% до 65% ацетонитрила при скорости потока 150 мкл/мин и температуре 45 °С.

Ключевые слова: омепразол, домперидон, капсулы «Омез-Д», метод высокоэффективной жидкостной хроматографии, градиент, ацетонитрил, калия дигидрофосфат.

HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY ANALYSIS OF THE TABLETS «OMEZ-D»

P.O. Inozemteev, E.A. Illarionova (Irkutsk State Medical University, Russia)

Summary, ^e optimal conditions for qualitative and quantitative analysis of multicomponent dosage capsul "Omez-D" using the high-performance liquid chromatography. Conditions of analysis: gradient elution system of potassium dihydrophosphate [0.05 M KH7P04 (pH 7.8)] — acetonitrile (MeCN), the gradient line in 1500 mcl of 25 to 65% acetonitrile at a flow rate of 150 ml / min and a temperature of 45°C.

Key words: Omeprazol, domperidon, capsuls "Omez-D", high-performance liquid chromatography method, gradient, acetonitrile, potassium dihydrophosphate.

52