CC BY
40
Medical Immunology (Russia)/ Медицинская иммунология ОрЫгЫНаЛЬНЬ1@ C^fttt^ftbW Meditsinskaya Immunologiya 2018, Т. 20, № 1, стр. 61-72 * ^ . . . . . 2018, Vol. 20, No 1, pp. 61-72
© 2018, спбро рааки Original articles © 2018, spb raaci
ВЗАИМОСВЯЗЬ СОДЕРЖАНИЯ Th- И Т-РЕГУЛЯТОРНЫХ КЛЕТОК В КРОВИ И ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛОВ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЭНДОМЕТРИТОМ И АДНЕКСИТОМ
Савченко А.А.1' 2, Каспаров Э.В.1, Арутюнян С.С.1, Борисов А.Г.1, 2, Кудрявцев И.В.3' 4 5, Гвоздев И.И.1, Мошев А.В.1
1ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр „Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"», обособленное подразделение «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера», г. Красноярск, Россия
2 ФГБОУВО «Красноярский государственный медицинский университет имени проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения РФ, г. Красноярск, Россия
3 ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург, Россия
4 ФГАОУВПО «Дальневосточный федеральный университет», г. Владивосток, Россия
5 ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия
Резюме. Целью исследования явилось изучение особенностей взаимосвязи содержания Th-и Т-регуляторных клеток в крови и хемилюминесцентной активности нейтрофилов у больных хронически эндометритом и аднекситом. Обследовано 89 женщин репродуктивного возраста (от 18 до 45 лет) с хроническим эндометритом (48 чел.) и аднекситом (41 чел.). В качестве контроля обследовано 98 здоровых женщин аналогичного возрастного диапазона. Исследование фенотипического состава Th- и Т-регуляторных клеток проводили методом проточной цитометрии с использованием прямой иммунофлуоресценции цельной периферической крови. Состояние респираторного взрыва нейтро-фильных гранулоцитов исследовали с помощью хемилюминесцентного анализа. В качестве индикаторов хемилюминесценции использовали люминол и люцигенин. При хроническом эндометрите установлено повышение количества в крови неактивированных и активированных Th-клеток и Treg. Высокая интенсивность респираторного взрыва нейтрофилов определяется повышением уровня синтеза первичных и вторичных активных форм кислорода (АФК). Однако длительный инфекцион-но-воспалительный процесс при хроническом эндометрите приводит к истощению метаболических резервов нейтрофильных гранулоцитов для синтеза первичных АФК. При данном заболевании с показателями респираторного взрыва нейтрофилов взаимосвязаны только активированные Th-клетки (экспрессирующие CD62L), что реализуется в сокращении времени активации НАДФН-оксидазы и стимулировании антигениндуцированного синтеза вторичных АФК. У больных хроническим аднекситом содержание Th-клеток в периферической крови соответствует контрольному диапазону, тогда как количество Treg, а также активированных Th-клеток и Treg значительно превышает контрольный диапазон. Респираторный взрыв нейтрофилов крови у больных хроническим аднекситом реализуется при дисбалансе синтеза первичных и вторичных АФК: при сниженной активности НАДФН-
Адрес для переписки:
Кудрявцев Игорь Владимирович
ФГБНУ «Институт экспериментальной медициныI»
197376, Россия, Санкт-Петербург,
ул. акад. Павлова, 12.
Тел.: 8(812) 234-29-29.
E-mail: [email protected]
Образец цитирования:
А.А. Савченко, Э.В. Каспаров, С.С. Арутюнян, А.Г. Борисов, И.В. Кудрявцев, И.И. Гвоздев, АВ. Мошев «Взаимосвязь содержания Th- и Т-регуляторньк клеток в крови и хемилюминесцентной активности нейтрофилов у больнькхроническим эндометритом и аднекситом» //Медицинская иммунология, 2018. Т. 20, № 1. С. 61-72 doi: 10.15789/1563-0625-2018-1-61-72 © Савченко АА и соавт., 2017
Address for correspondence:
Kudryavtsev Igor V.
Research Institute of Experimental Medicine 197376, Russian Federation, St. Petersburg, Acad. Pavlov str., 12. Phone: 7 (812) 234-29-29. E-mail: [email protected]
For citation:
A.A. Savchenko, E.V. Kasparov, S.S. Arutyunyan, A.G. Borisov, I.V. Kudryavtsev, I.I. Gvozdev, A.V. Moshev "Relationship between the Th and Tregulatory cells in blood, and chemiluminescent activity of neutrophils in patients with chronic endometritis and adnexitis", Medical Immunology (Russia)/ Meditsinskaya Immunologiya, 2018, Vol. 20, no. 1, pp. 61-72. doi: 10.15789/1563-0625-2018-1-61-72 DOI: 10.15789/1563-0625-2018-1-61-72
оксидазы наблюдается высокий уровень синтеза вторичных АФК. С помощью корреляционного анализа установлено, что при хроническом аднексите имеется единственная взаимосвязь между уровнем Т-хелперов и показателями респираторного взрыва нейтрофилов, характеризующая отрицательное влияние Т^клеток на индекс активации нейтрофилов. В то же время при данном заболевании обнаружены многочисленные и тесные положительные взаимосвязи между количеством неактивированных и активированных Тге; и практически всеми показателями респираторного взрыва нейтрофилов. Предполагается, что длительное стимулирующее воздействие Т^клеток и Тге; на нейтрофильные гранулоциты приводит к истощению метаболических резервов для реализации респираторного взрыва, что и является одним из механизмов иммунопатогенеза, способствующим хронизации инфекци-онно-воспалительного процесса.
Ключевые слова: Т-хелперы, Т-регуляторные клетки, нейтрофилы, респираторный взрыв, хронический эндометрит, хронический аднексит
RELATIONSHIP BETWEEN THE Th AND T REGULATORY CELLS IN BLOOD, AND CHEMILUMINESCENT ACTIVITY OF NEUTROPHILS IN PATIENTS WITH CHRONIC ENDOMETRITIS AND ADNEXITIS
Savchenko A.A.a' b, Kasparov E.V.a, Arutyunyan S.S.a, Borisov A.G.a' b, Kudryavtsev I.V.a' b' c, Gvozdev I.I.a, Moshev A.V.a
a Krasnoyarsk Research Center, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation
b Krasnoyarsk State V.F. Voino-Yasenetsky Medical University, Krasnoyarsk, Russian Federation c Research Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg, Russian Federation d Far Eastern Federal University, Vladivostok, Russian Federation e First St. Petersburg State I. Pavlov Medical University, St. Petersburg, Russian Federation
Abstract. The aim of present study was to investigate the specific relationships between contents of Th and T regulatory cells in blood, and chemiluminescent activity of neutrophils in patients with chronic endometritis and adnexitis. The study involved 89 women of reproductive age (18 to 45 years) with chronic endometritis (n = 48) and adnexitis (n = 41). As a control, we have examined 98 healthy age-matched women. Phenotypic composition of Th and T regulatory cells was studied by flow cytometry using direct immunofluorescence of whole peripheral blood. The state of the respiratory burst in neutrophilic granulocytes was examined by chemiluminescence analysis. Luminol and lucigenin were used as indicators of chemiluminescence. An increase in the number of non-activated and activated Th cells and Treg has been established in blood of patients with chronic endometritis. High intensity of neutrophil respiratory burst was determined as increased level of primary and secondary reactive oxygen species (ROS) synthesis. However, a long infectious and inflammatory process accompanied by chronic endometritis could lead to depletion of metabolic reserves in the neutrophil granulocytes, in terms of primary ROS synthesis. Only activated (CD62L- expressing) Th cells show interrelations with neutrophil respiratory burst indices in this disease, as demonstrated by reduced activation time of NADPH-oxidase and stimulation of secondary antigen-induced ROS synthesis. The contents of Th cells in peripheral blood of the patients with chronic adnexitis corresponded to the control range, whereas amount of Treg, as well as activated Th cells and Treg significantly exceeds the control range. The respiratory burst of blood neutrophils in patients with chronic adnexitis exhibited a synthetic imbalance of primary and secondary ROS: along with reduction in NADPH-oxidase activity, there is a high level of secondary ROS synthesis. By means of correlation analysis, we have revealed that, in chronic adnexitis, there is a unique relationship between the level of T helpers and neutrophil respiratory burst indices, thus characterizing a negative effect of Th cells upon the neutrophil activation index. At the same time, numerous and close positive relationships between the number of non-activated and activated Treg and virtually all indices of respiratory neutrophil blast were found in this clinical condition. It is assumed that the long-term stimulating effect of Th cells and Treg on neutrophilic granulocytes leads to depletion of metabolic reserves necessary for implementation of a respiratory burst. This finding could be one of mechanisms supporting immunopathogenesis which contributes to chronization of infectious and inflammatory process.
Keywords: Th cells, Tregulatory cells, neutrophils, respiratory burst, chronic endometritis, chronic adnexitis
Введение
В структуре гинекологических инфекцион-но-воспалительных заболеваний лидирующее положение занимает острый и хронический эндометрит и аднексит [1, 32]. Они также являются наиболее частой причиной тяжелых осложнений, таких как сепсис, перитонит, тубоовариальный абсцесс, спаечный процесс, бесплодие, невынашивание беременности и хроническая тазовая боль. В основе этиопатогенеза эндометритов и аднексита лежит инфекционный процесс, развивающийся в результате восходящей инфекции из цервикального канала и вызывающий развитие иммуновоспалительной реакции [5, 33]. Ключевую роль в развитии воспалительных процессов играют нейтрофильные гранулоциты. Нейтрофилы быстро мобилизуются в очаг воспаления, от их фагоцитарной активности во многом зависит эффективность противомикробной защиты организма [3, 18, 27, 30]. Обладая широким набором рецепторов, нейтрофилы очень чувствительны к окружающей среде и при малейшем нарушении гомеостаза модулируют свои функции, направленные на его восстановление. Одним из важных аспектов проявления функциональной активности нейтрофилов является респираторный взрыв, развивающийся при взаимодействии клеток с объектами фагоцитоза, интенсивность которого формируется синтезом активных форм кислорода (АФК) [4, 6, 21].
Известно, что функциональная эффективность нейтрофилов во многом регулируется Т-лимфоцитами. Так, Т-хелперы 1 и 2 типа активируют миграцию и повышают фагоцитарную активность нейтрофилов [18, 26, 29]. Более того, имеются данные, что интерлейкин-4 может опосредованно, через индукцию экспрессии хемотак-сических факторов эндотелиальными клетками легких, стимулировать миграцию нейтрофиль-ных гранулоцитов [18]. Доказано стимулирующее влияние ТЫ7-лимфоцитов на функциональную активность нейтрофилов, активируется хемотаксис клеток [27, 34]. Значительный интерес вызывают исследования влияния Т-регуляторных клеток (Treg) на функцию нейтрофилов. Обнаружено, что Treg снижают экспрессию интегри-нов на поверхности клеток и уровень синтеза цитокинов нейтрофилами, что является важным фактором в хронизации инфекционных заболеваний [19, 20].
Целью исследования явилось изучение особенностей взаимосвязи содержания Th-и Т-регуляторных клеток в крови и хемилюми-несцентной активности нейтрофилов у больных хроническим эндометритом и аднекситом.
Материалы и методы
Обследовано 89 женщин репродуктивного возраста (от 18 до 45 лет) с хроническим эндоме-
тритом (48 чел.) и аднекситом (41 чел.). Проводилось комплексное обследование, включающее расширенную кольпоскопию, цитологические и морфологические методы. В качестве контроля обследовано 98 здоровых женщин аналогичного возрастного диапазона.
Исследование фенотипического состава Th-и Т-регуляторных клеток проводили методом проточной цитометрии с использованием прямой иммунофлуоресценции цельной периферической крови с использованием моноклональ-ных антител (Beckman Coulter, США), меченных FITC (fluorescein isothiocyanate), PE или RDI (phycoerythrin), ECD (phycoerythrin-Texas Red-X), PC5 (phycoerythrin-cyanin 5) и PC7 (phycoerythrin-cyanin 7) в следующей панели: CD62L-FITC/ CD127-PE/CD3-ECD/CD25-PC5/CD4-PC7. Распределение антител по каналам флуоресценции проводили в соответствии с принципами формирования панелей для многоцветных ци-тофлуориметрических исследований [2]. Про-боподготовку осуществляли по стандартной методике [23]. Лизис эритроцитов проводили по безотмывочной технологии с использованием реагента VersLyse (Beckman Coulter, США). Анализ окрашенных клеток проводили на проточном цитофлуориметре FC-500 (Beckman Coulter, США) [22]. В каждой пробе анализировали не менее 50 000 лимфоцитов.
Состояние респираторного взрыва нейтро-фильных гранулоцитов исследовали с помощью хемилюминесцентного анализа [6]. В качестве индикаторов хемилюминесценции использовали люминол и люцигенин. Оценка спонтанной и зи-мозан-индуцированной хемилюминесценции осуществлялась в течение 90 минут на 36-каналь-ном хемилюминесцентном анализаторе «БЛМ-3607» (Россия). Определяли следующие характеристики: время выхода на максимум (Tmax), максимальное значение интенсивности (Imax), а также площадь под кривой (S) хемилюминесценции. Усиление хемилюминесценции, индуцированной зимозаном, оценивали отношением площади индуцированной хемилюминесценции ^инд.) к площади спонтанной ^спонт.) и определяли как индекс активации ^инд.^спонт.).
Все исследования выполнены с информированного согласия испытуемых и в соответствии с Хельсинкской декларацией Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2013 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266.
Описание выборки производили с помощью подсчета медианы (Ме) и интерквартильного
размаха в виде 1 и 3 квартилей (Q0 25-Q0 75). Достоверность различий между показателями оценивали по непараметрическому критерию Ман-на—Уитни. Для исследования силы взаимосвязей показателей вычислялся коэффициент ранговой корреляции по Спирмену. Статистический анализ осуществляли в пакете прикладных программ Statistica 8.0 (StatSoft Inc., 2007).
Результаты
Цитометрическое исследование фенотипа лимфоцитов периферической крови позволило установить, что только у больных хроническим эндометритом в периферической крови повышается относительное и абсолютное количество CD3+CD4+ лимфоцитов (табл. 1.). Процентный уровень CD3+CD4+CD62L+ клеток также увеличен только у больных хроническим эндометритом, тогда как абсолютное содержание данной фракции клеток повышено относительно контрольных значений и при хроническом эндометрите, и при хроническом аднексите. У больных с хроническим течением эндометрита и аднекси-та в крови повышено относительное и абсолютное количество CD3+CD4+CD127LowCD25High и CD3+CD4+CD127LowCD25HighCD62L+ лимфоцитов.
При исследовании активности и кинетики лю-цигенин-зависимой хемилюминесценции нейтро-филов обнаружено, что у больных хроническим эндометритом и аднекситом сокращается время выхода на максимум спонтанной и зимозан-индуцированной хемилюминесценции клеток (табл. 2). Однако время выхода на максимум спонтанной хемилюминесценции нейтрофилов при хроническом аднексите снижается более выражено, чем при хроническом эндометрите. Только у больных хроническим эндометритом относительно контрольных значений и выявленных у пациенток с хроническим аднекситом обнаружено повышение максимума интенсивности и площади под кривой спонтанной и зимозан-индуцированной хемилюминесценции нейтро-филов. Причем увеличение площади под кривой индуцированной хемилюминесценции при эндометрите относительно контрольного уровня менее выражено, чем повышение площади под кривой спонтанной хемилюминесценции, что выражается в снижении величины индекса активации нейтрофилов по люцигенин-зависимой хемилюминесценции.
В то же время у больных хроническим аднек-ситом наблюдается понижение площади под кривой спонтанной люцигенин-зависимой хе-милюминесценции нейтрофилов относительно контрольного диапазона и значений, выявленных у пациентов с хроническим эндометритом, а также снижение максимума интенсивности и пло-
щади под кривой зимозан-индуцированной хемилюминесценции также контрольных значений и выявленных при хроническом эндометрите.
При исследовании люминол-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов крови обнаружено, что у больных хроническим эндометритом повышен максимум интенсивности и площадь под кривой спонтанной и зимозан-индуци-рованной хемилюминесценции относительно контрольных значений (табл. 3). У больных хроническим аднекситом установлено уменьшение времени выхода на максимум спонтанной и индуцированной хемилюминесценции относительно контрольных значений и выявленных у пациентов с хроническим эндометритом. При хроническом аднексите также повышается максимум интенсивности и площадь под кривой спонтанной и индуцированной хемилюминес-ценции нейтрофилов относительно контрольных значений. Однако площадь под кривой спонтанной и индуцированной хемилюминесценции при хроническом аднексите ниже, чем при хроническом эндометрите.
С помощью корреляционного анализа исследованы особенности взаимосвязи между содержанием Т1- и Т-регуляторных клеток и хе-милюминесцентной активностью нейтрофилов. Обнаружено, что у лиц контрольной группы время выхода на максимум спонтанной люцигенин-зависимой хемилюминесценции отрицательно взаимосвязано с абсолютным содержанием CD3+CD4+CD62L+ и CD3+CD4+CDШLowCD25шgll CD62L+ клеток (г = -0,51, р = 0,030 и г = -0,47, р = 0,049 соответственно). Абсолютное количество CD3+CD4+CDШLowCD25Higll лимфоцитов также отрицательно коррелирует с максимумом интенсивности индуцированной люцигенин-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов (г = -0,50, р = 0,034).
У больных хроническим эндометритом относительное количество CD3+CD4+CD62L+ лимфоцитов положительно взаимосвязано с площадью под кривой зимозан-индуцированной люминол-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов (г = 0,36, р = 0,029), тогда как абсолютный уровень данного типа клеток отрицательно коррелирует с временем выхода на максимум спонтанной люцигенин-зависимой хемилюминесценции (г = -0,32, р = 0,028) и положительно — с максимумом интенсивности индуцированной люми-нол-зависимой хемилюминесценции (г = 0,37, р = 0,026).
У больных хроническим аднекситом относительное количество CD3+CD4+ лимфоцитов отрицательно коррелирует с индексом активации по люминол-зависимой хемилюминесценции нейтрофилов (г = -0,35, р = 0,024). В то же время про-
ТАБЛИЦА 1. СОДЕРЖАНИЕ Th- И Т-РЕГУЛЯТОРНЫХ КЛЕТОК В КРОВИ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЭНДОМЕТРИТОМ И ХРОНИЧЕСКИМ АДНЕКСИТОМ (Ме, Q0,25-Q0,75)
TABLE 1. CONTENTS OF Th- AND T-REGULATORY CELLS IN BLOOD IN PATIENTS WITH CHRONIC ENDOMETRITIS AND CHRONIC ADNEXITIS (Ме, Q0,25-Q0,75)
Показатели Parameters Контроль, n = 98 Control Эндометрит, n = 48 Endometritis Аднексит, n = 41 Adnexitis
1 2 3
Ме Q0,25-Q0,75 Ме Q0,25-Q0,75 Ме Q0,25-Q0,75
CD3+CD4+, % 43,0 35,0-48,0 47,55 43,18-53,69 44,8 40,3-48,7
p1 < 0,001
CD3+CD4+, 109/L 0,83 0,56-1,16 1,02 0,85-1,26 0,87 0,74-1,13
p1 = 0,001 p2 = 0,049
CD3+CD4+CD62L+, % 29,4 24,6-35,88 38,1 30,5-43,2 34,2 28,6-37,2
p1 < 0,001 p2 = 0,008
CD3+CD4+CD62L+, 109/L 0,58 0,43-0,78 1,58 1,18-1,96 1,57 1,22-1,87
p1 < 0,001 p1 < 0,001
CD3+CD4+CD127LowCD25High, % 5,4 4,1-6,7 16,77 13,14-21,05 21,7 16,2-26,1
p1 < 0,001 p1 < 0,001 p2 = 0,009
CD3+CD4+CD127LowCD25High, 109/L 0,10 0,07-0,14 0,35 0,25-0,52 0,44 0,30-0,63
p1 < 0,001 p1 < 0,001
CD3+CD4+CD127LowCD25HighCD62L+, % 3,8 2,9-4,87 10,8 7,3-14,9 12,01 7,84-15,04
p1 < 0,001 p1 < 0,001
CD3+CD4+CD127LowCD25HighCD62L+, 109/L 0,07 0,05-0,10 0,26 0,14-0,35 0,23 0,14-0,34
p1 < 0,001 p1 < 0,001
Примечание. р, - статистически значимые различия с контрольными показателями; р2 —//- с показателями больных эндометритами.
Note. р1, statistically significant differences versus controls; р2, statistically significant differences versus patients with endometritis.
центный уровень CD3+CD4+CD127LowCD25ш8h клеток уже положительно взаимосвязан с временем выхода на максимум индуцированной люци-генин- и люминол-зависимой хемилюминесцен-ции нейтрофилов (г = 0,37, р = 0,017 и г = 0,32, р = 0,038 соответственно). Относительное количество CD3+CD4+CD127LowCD25Hi8hCD62L+ клеток положительно взаимосвязано с большинством хемилюминесцентных показателей нейтрофилов: максимумами интенсивности спонтанной и индуцированной люцигенин-за-висимой хемилюминесценции (г = 0,47, р = 0,002 и г = 0,45, р = 0,003 соответственно), площадью под кривой спонтанной и индуцированной хемилюминесценции (г = 0,46, р = 0,002, в обоих случаях), временем выхода на максимум индуцированной люцигенин-зависимой и люминол-за-висимой хемилюминесценции (г = 0,32, р = 0,039 и г = 0,47, р = 0,002 соответственно), а также с максимумом интенсивности и площадью под кривой спонтанной и индуцированной люми-нол-зависимой хемилюминесценции (г = 0,45, р = 0,003, г = 0,47, р = 0,002, г = 0,56, р < 0,001
и г = 0,52, р < 0,001 соответственно). Абсолютный уровень CD3+CD4+CD127LowCD25Hi8hCD62L+ лимфоцитов также положительно коррелирует со следующими хемилюминесцентными показателями нейтрофилов: максимумом интенсивности и площадью под кривой спонтанной люци-генин-зависимой хемилюминесценции (г = 0,39, р = 0,015 и г = 0,38, р = 0,019 соответственно), площадью под кривой зимозан-индуцированной хемилюминесценции (г = 0,32, р = 0,048), временем выхода на максимум спонтанной люми-нол-зависимой хемилюминесценции (г = 0,45, р = 0,005), а также с максимумом интенсивности и площадью под кривой спонтанной и индуцированной люминол-зависимой хемилюминесцен-ции (г = 0,38, р = 0,020, г = 0,46, р = 0,004, г = 0,39, р = 0,015 и г = 0,38, р = 0,018 соответственно).
Обсуждение
Т-хелперы являются наиболее многочисленной субпопуляцией Т-лимфоцитов, осуществляющих стимулирование развития адаптивных иммунных реакций при инфекционных
ТАБЛИЦА 2. ЛЮЦИГЕНИН-ЗАВИСИМАЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕИТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЭНДОМЕТРИТОМ И ХРОНИЧЕСКИМ АДНЕКСИТОМ (Ме, Q0,2-Q0,75) TABLE 2. LUCIGENIN-DEPENDENT CHEMILUMINESCENT ACTIVITY OF NEUTROPHILIC GRANULOCYTES IN PATIENTS WITH CHRONIC ENDOMETRITIS AND CHRONIC ADNEXITIS (Ме, Q0,25-Q0J5)
Показатели Parameters Контроль, n = 98 Control Эндометрит, n = 48 Endometritis Аднексит, n = 41 Adnexitis
1 2 3
Ме Q0,25-Q0,75 Ме Q0,25-Q0,75 Ме Q0,25-Q0,75
Спонтанная люцигенин-зависимая хемилюминесценция Spontaneous lucigenin-dependent chemiluminescence
Tmax, sec. 2093 1425-2881 1456 1169-1788 1174 1083-1512
р1 < 0,001 р1 < 0,001 р2 = 0,038
Imax, o.e. x 103 Imax, conv. units * 103 7,74 2,61-16,54 21,12 9,42-38,99 6,90 1,77-16,23
р1 < 0,001 р2 < 0,001
S, o.e. x sec. x 107 S, conv. units * sec. * 107 1,52 0,40-4,11 3,70 1,64-6,29 0,85 0,23-1,82
р1 = 0,001 Р1 = 0,022 р2 < 0,001
Зимозан-индуцированная люцигенин-зависимая хемилюминесценция Zymosan-induced lucigenin-dependent chemiluminescence
Tmax, sec. 1738 1389-2331 1370 1190-1556 1195 1028-1552
р1 < 0,001 р1 < 0,001
Imax, o.e. x 103 Imax, conv. units * 103 14,14 7,59-28,96 29,39 17,35-47,53 8,34 3,66-23,47
р1 < 0,001 р1 = 0,034 р2 < 0,001
S, o.e. x sec. x 107 S, conv. units * sec. * 107 2,52 1,07-6,46 4,50 2,68-7,02 0,98 0,41-2,79
р1 = 0,041 р1 = 0,001 р2 < 0,001
SMHfl./ ScnoHT. Sind/Ssp 1,77 1,17-3,11 1,48 1,07-1,97 1,57 1,17-1,97
р1 = 0,017
Примечание. См. примечание к таблице 1.
Note. As in Table 1. Tmax, time to maximum; Imax, maximum intensity value, reflecting the maximum reactive oxygen species level synthesis; S, area under the curve describing total synthesis of reactive oxygen species during 90 min; Sind/Ssp , a ratio between zymosan-induced and spontaneous lucigenin-dependent chemiluminescence.
процессах [7, 8, 11]. В то же время в состав Т-хелперов (CD3+CD4+ клетки) входят Treg (CD3+CD4+CD127LowCD25High), осуществляющие супрессорное воздействие на развитие Т-клеточного иммунитета [7, 9, 17]. Обнаружено, что у больных хроническим эндометритом в периферической крови повышается содержание как самих Т-хелперов, так и активированных Т-хелперных клеток, экспрессирующих маркер CD62L. CD62L является мембранным гликопротеином, принадлежащим к семейству L-селектинов, который экспрессируется на широком спектре клеток иммунной системы, лиган-дами для него являются CD34 на эндотелии сосудов, GlyCAM-1 на HEV (high endothelial venules)
лимфоузлов и MadCAM-1 на эндотелиальных клетках GALT (gut associated lymphoid tissues) [14, 24]. Рецептор обеспечивает слабые межклеточные взаимодействия, благодаря которым движение клеток вдоль сосудистой стенки замедляется и происходит их экстравазация и «хоуминг» в периферические лимфоидные органы. У больных хроническими аднекситами количество Т-хелперов в периферической крови соответствует контрольному диапазону, тогда как абсолютное содержание активированных Т-хелперов также повышено. Уровень Treg и активированных Т-регуляторных клеток (экспрессирующих CD62L) в крови у больных хроническим эндометритом и аднекситом повышено относитель-
ТАБЛИЦА 3. ЛЮМИНОЛ-ЗАВИСИМАЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ АКТИВНОСТЬ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМ ЭНДОМЕТРИТОМ И ХРОНИЧЕСКИМ АДНЕКСИТОМ (Ме, Q0,25-Q0,75) TABLE 3. LUMINOL-DEPENDENT CHEMILUMINESCENT ACTIVITY OF NEUTROPHILIC GRANULOCYTES IN PATIENTS WITH CHRONIC ENDOMETRITIS AND CHRONIC ADNEXITIS (Ме, Q0,25-Q0,75)
Показатели Parameters Контроль, n = 98 Control Эндометрит, n = 48 Endometritis Аднексит, n = 41 Adnexitis
1 2 3
Ме Q0,25-Q0,75 Ме Q0,25-Q0,75 Ме Q0,25-Q0,75
Спонтанная люминол-зависимая хемилюминесценция Spontaneous lucigenin-dependent chemiluminescence
Tmax, sec. 969 567-1559 1216 322-1657 246 171-866
р12 < 0,001
Imax, o.e. x 103 Imax, conv. units * 103 10,83 4,06-30,88 67,08 22,11-86,83 44,41 11,92-83,87
р1 < 0,001 р1 < 0,001
S, o.e. x sec. x 107 S, conv. units * sec. * 107 1,49 0,45-5,09 11,10 3,79-15,16 4,39 1,09-9,32
р1 < 0,001 р1 = 0,018 р2 = 0,008
Зимозан-индуцированная люминол-зависимая хемилюминесценция Zymosan-induced lucigenin-dependent chemiluminescence
Tmax, sec. 1072 796-1459 1116 521-1700 815 213-1088
р12 < 0,001
Imax, o.e. x 103 Imax, conv. units * 103 21,25 7,55-62,59 103,14 42,68-128,37 47,22 16,04-116,16
р1 < 0,001 р1 = 0,020
S, o.e. x sec. x 107 S, conv. units * sec. * 107 2,43 0,92-8,42 17,92 9,41-22,27 6,46 2,66-16,76
р1 < 0,001 р1 = 0,024 р2 = 0,003
SMHfl./ ScnoHT. Sind/Ssp 1,89 1,34-2,87 1,61 1,27-2,14 1,69 1,28-2,57
Примечание. См. примечание к таблице 1.
Note. As in Table 1.
но контрольных значений. Можно предположить, что повышенное количество Т-хелперов, как не экспрессирующих, так и экспрессирую-щих CD62L-рецептор, у больных хроническим эндометритом определяется высоким уровнем Т^. При этом регуляторная активность Т-лимфоцитов при хронических аднекситах превалирует, так как при данном заболевании не наблюдается повышенного уровня Т-хелперов.
Состояние респираторного взрыва нейтро-филов определяется уровнями синтеза первичных и вторичных АФК и опосредует процессы фагоцитоза и киллинга [3, 6, 16]. Интенсивность респираторного взрыва была исследована с помощью двух хемилюминесцентных индикаторов: люцигенина и люминола. Люцигенин окисляется и люминесцирует только под влиянием суперок-
сид-радикала, который определяется как первичная АФК и синтезируется в системе НАДФН-оксидазы [4, 6, 28]. Люцигенин не проходит через мембрану клеток и связывается с супероксид-радикалом только во внеклеточном пространстве. Соответственно, исследование люцигенин-за-висимой хемилюминесценции нейтрофилов позволяет охарактеризовать состояние активности НАДФН-оксидазы и уровень выделения супероксид-радикала для реализации механизма внешнего киллинга в обследуемых группах.
Обнаружено, что уровень синтеза супероксид-радикала нейтрофилами крови в группах обследуемых больных значительно различается. Так, у больных хроническим эндометритом установлено повышение активности НАДФН-оксидазы в нейтрофилах, находящихся в состоянии отно-
сительного покоя (спонтанная люцигенин-за-висимая хемилюминесценция) и при дополнительной антигенной индукции респираторного взрыва (зимозан-индуцированная люцигенин-зависимая хемилюминесценция). Однако повышение интенсивности синтеза супероксид-радикала нейтрофилами при дополнительной антигенной индукции у пациентов данной группы относительно контрольных значений менее выражено, чем для клеток, находящихся в состоянии относительного покоя, что определяется снижением величины индекса активации ^инд.^спонт.). Индекс активации характеризует уровень метаболических резервов клеток, необходимых для реализации респираторного взрыва при дополнительной антигенной индукции [3]. Соответственно, можно заключить, что у больных хроническим эндометритом наблюдается истощение метаболических резервов для активации НАДФН-оксидазы в активированных нейтрофилах крови. Кроме того, у больных хроническим эндометритом выявляется сокращение времени выхода на максимум спонтанной и индуцированной люцигенин-зависимой хеми-люминесценции. Данный показатель характеризует скорость развития респираторного взрыва от момента регуляторного или антигенного воздействия на клетку до максимальной активации ферментов, синтезирующих АФК [4]. Следовательно, синтез первичных АФК в нейтрофилах крови при хроническом эндометрите осуществляется с ускорением, характерным для активированных клеток, но при истощении метаболических резервов для стимулированной активации НАДФН-оксидазы.
В то же время у больных хроническим аднекси-том обнаружено снижение активности НАДФН-оксидазы (как относительно контрольного диапазона, так и значений, выявленных у пациентов с хроническим эндометритом) в нейтрофилах крови, находящихся в состоянии относительного покоя и при дополнительной антигенной стимуляции. При этом также выявляется сокращение времени выхода на максимум спонтанной и индуцированной люцигенин-зависимой хемилю-минесценции. Следовательно, при хроническом аднексите выявляется истощение метаболических резервов для активации НАДФН-оксидазы, что проявляется в снижении интенсивности лю-цигенин-зависимой хемилюминесценции и сокращении времени ее выхода на максимум.
Формирование пула вторичных АФК в нейтрофилах осуществляется целым комплексом ферментов: супероксиддисмутаза, каталаза, миелопе-роксидаза и др. [3, 13]. Для оценки интенсивности синтеза вторичных АФК нейтрофилами крови нами использовалась люминол-зависимая
хемилюминесценция. Люминол также способен проходить через клеточные мембраны и вступать в хемилюминесцентную реакцию, как с первичными, так и вторичными АФК внутри клетки [3, 31].
Обнаружено, что у больных хроническими эндометритом и аднекситом в нейтрофилах крови повышен уровень синтеза вторичных АФК, как для клеток, находящихся в состоянии относительного покоя, так и при дополнительной антигенной индукции респираторного взрыва. Однако при хроническом аднексите выявляется менее выраженное относительно контрольного диапазона увеличение интенсивности люминол-зависимой хемилюминесценции по сравнению с выявленным при хроническом эндометрите. При этом у пациентов с хроническим аднекси-том наблюдается сокращение времени выхода на максимум люминол-зависимой хемилюми-несценции.
С помощью корреляционного анализа установлены особенности взаимосвязи содержания Т^клеток и Тге; в крови с интенсивностью респираторного взрыва нейтрофилов. Так, у здоровых людей уровень Тге; в крови находится в отрицательной зависимости с уровнем максимальной активности НАДФН-оксидазы, тогда как повышение количества активированных Т^клеток и Те; в крови сокращает время активации данного фермента в нейтрофильных гранулоцитах.
У больных хроническим эндометритом также обнаружена взаимосвязь, характеризующая ускорение активации НАДФН-оксидазы ней-трофильных гранулоцитов с повышением содержания активированных Т^клеток в крови. Кроме того, повышение уровня данной фракции Т-лимфоцитов в периферической крови также приводит к увеличению интенсивности респираторного взрыва нейтрофилов за счет зимозан-ин-дуцированного синтеза вторичных АФК.
У больных хроническим аднекситом количество Т^клеток отрицательно взаимосвязано с индексом активации нейтрофилов по люми-нол-зависимой хемилюминесценции, тем самым определяя, что стимулирующее влияние Т-хелперов на нейтрофилы может проявляться и в истощении метаболических резервов для реализации респираторного взрыва. При этом у пациентов данной группы выявлены многочисленные и тесные положительные взаимосвязи между количеством неактивированных и активированных Тге; и практически всеми показателями респираторного взрыва нейтрофилов.
Известно, что трансформирующий фактор роста-р (TGF-P), являясь одним из основных цитокинов Тге;, ингибирует хемокин-индуци-рованную активацию нейтрофилов, снижает
мигрирующую способность клеток [10]. Механизм действия TGF-p на нейтрофилы осуществляется через ингибирование Ras-зависимого протеина, стимулирующего CalDAG-гуанин нуклеотидный обмен, что и приводит к снижению экспрессии интегринов. В то же время через PI3K/Akt (phosphoinositide 3-kinase/serine/ threonine-specific protein kinase) и MAPK (mitogen-activated protein kinase) сигнальные пути TGF-p стимулирует экспрессию АФК-продуцирующих ферментов [12, 15, 25], что и проявляется в увеличении синтеза АФК.
Таким образом, при хроническом эндометрите и аднексите установлены характерные для каждого заболевания изменения в количестве Th-клеток и Treg в периферической крови, а также изменения показателей респираторного взрыва нейтрофилов. При хроническом эндометрите установлено повышение количества в крови неактивированных и активированных Th-клеток и Treg. Высокая интенсивность респираторного взрыва нейтрофилов определяется повышением уровня синтеза первичных и вторичных АФК. Однако длительный инфекцион-но-воспалительный процесс при хроническом эндометрите приводит к истощению метаболических резервов нейтрофильных гранулоцитов для синтеза первичных АФК. При данном заболевании с показателями респираторного взрыва нейтрофилов взаимосвязаны только активированные Th-клетки (экспрессирующие CD62L), что реализуется в сокращении времени активации НАДФН-оксидазы и стимулировании анти-ген-индуцированного синтеза вторичных АФК.
У больных хроническим аднекситом содержание Т^клеток в периферической крови соответствует контрольному диапазону, тогда как количество Тге;, а также активированных Т^клеток и Тге;, значительно превышает контрольный диапазон. Обнаружено, что у больных хроническим аднекситом респираторный взрыв нейтрофилов реализуется при дисбалансе синтеза первичных и вторичных АФК: при сниженной активности НАДФН-оксидазы наблюдается высокий уровень синтеза вторичных АФК. С помощью корреляционного анализа установлено, что при хроническом аднексите имеется единственная взаимосвязь между уровнем Т-хелперов и показателями респираторного взрыва нейтрофилов, характеризующая отрицательное влияние Т^ клеток на индекс активации нейтрофилов. В то же время при данном заболевании обнаружены многочисленные и тесные положительные взаимосвязи между количеством неактивированных и активированных Тге; и практически всеми показателями респираторного взрыва нейтрофилов. В целом регуляторное действие Тге; на нейтрофилы может реализоваться через различные сигнальные пути, что при хроническом аднекси-те выражается в стимулирующем действии Тге; на респираторный взрыв нейтрофилов. Однако длительное стимулирующее воздействие Т^кле-ток и Тге; на нейтрофильные гранулоциты приводит к истощению метаболических резервов для реализации респираторного взрыва, что и является одним из механизмов иммунопатогенеза, способствующих хронизации инфекционно-вос-палительного процесса.
Список литературы / References
1. Борисов А.Г., Савченко А.А., Соколовская В.К. Заболеваемость, связанная с нарушениями функции иммунной системы (на примере Красноярского края) // Здравоохранение Российской Федерации, 2014. Т. 58, № 6. С. 38-41. [Borisov A.G., Savchenko A.A., Sokolovskaya V.K. The morbidity related to disorders of immune system function as exemplified by the Krasnoyarsk region. Zdravookhranenie Rossiyskoy Federatsii = Healthcare of the Russian Federation, 2014, Vol. 58, no. 6, pp. 38-41. (In Russ.)]
2. Кудрявцев И.В., Субботовская А.И. Опыт измерения параметров иммунного статуса с использованием шести-цветного цитофлуоримерического анализа // Медицинская иммунология, 2015. Т. 17, № 1. С. 19-26. [Kudryavtsev I.V., Subbotovskaya A.I. Application of six-color flow cytometric analysis for immune profile monitoring. Meditsinskaya immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2015, Vol. 17, no. 1, pp. 19-26. (In Russ.)] doi: 10.15789/1563-0625-2015-1-19-26.
3. Савченко А.А., Здзитовецкий Д.Э., Борисов А.Г. Иммунометаболические нарушения при распространенном гнойном перитоните. Новосибирск: Наука, 2013. 142 с. [Savchenko A.A., Zdzitovecky D.E., Borisov A.G. The immune and metabolic disorders by the widespread purulent peritonitis]. Novosibirsk: Science, 2013. 142 p.
4. Савченко А.А., Здзитовецкий Д.Э., Борисов А.Г., Лузан Н.А. Хемилюминесцентная активность ней-трофильных гранулоцитов и уровни концентрации цитокинов у больных распространенным гнойным перитонитом // Цитокины и воспаление, 2013. Т. 12, № 1-2. С. 115-119. [Savchenko A.A., Zdzitoveckij D^., Borisov A.G., Luzan N.A. Chemiluminescent activity of neutrophilic granulocytes and cytokine concentrations in patients with advanced purulent peritonitis. Tsitokiny i vospalenie = Cytokines and Inflammation, 2013, Vol. 12, no. 1-2, pp. 115-119. (In Russ.)]
5. Савченко А.А., Каспаров Э.В., Арутюнян С.С., Борисов А.Г., Кудрявцев И.В., Мошев А.В. Феноти-пический состав В-лимфоцитов у женщин с хроническим эндометритом и аднекситом // Медицинская иммунология, 2016. Т. 18, № 4. С. 379-384. [Savchenko A. A., Kasparov E.V., Arutyunyan S.S., Borisov A.G., Kudryavtsev I.V., Moshev A.V. Phenotypic profile of B-lymphocytes in women with chronic endometritis and adnexitis. Meditsinskaya immunologiya = Medical Immunology (Russia), 2016, Vol. 18, no. 4, pp. 379-384. (In Russ.)] doi:10.15789/1563-0625-2016-4-379-384.
6. Шкапова Е.А., Куртасова Л.М., Савченко А.А. Показатели люцигенин- и люминол-зависимой хеми-люминесценции нейтрофилов крови у больных раком почки // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2010. Т. 149, № 2. С. 201-203. [Shkapova E.A., Kurtasova L.M., Savchenko A.A. The indicate^ of the lucigenin- and luminol-dependent chemiluminescence of blood neutrophils by the patients with kidney cancer. Byulleten eksperimentalnoy biologii i meditsiny = Bulletin of Experimental Biology and Medicine, Vol. 149, no. 2, pp. 201-203. (in Russ.)]
7. Ярилин А.А. Иммунология. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. 752 с. [Yarilin A.A. Immunology]. Moscow: GEOTAR-Media, 2010. 752 p.
8. Aberle J.H., Schwaiger J., Aberle S.W., Stiasny K., Scheinost O., Kundi M., Chmelik V., Heinz F.X. Human CD4+ T Helper Cell Responses after Tick-Borne Encephalitis Vaccination and Infection. PLoS ONE, 2015, Vol. 10, no. 10, e0140545. doi: 10.1371/journal.pone.0140545.
9. Alroqi F.J., Chatila T.A. T Regulatory cell biology in health and disease. Curr. Allergy Asthma Rep., 2016, Vol. 16, no. 4, p. 27.
10. Artz A., Butz S., Vestweber D. GDF-15 inhibits integrin activation and mouse neutrophil recruitment through the ALK-5/TGF-PRII heterodimer. Blood, 2016, Vol. 128, no. 4, pp. 529-541.
11. Bouchery T., Kyle R., Ronchese F., Le Gros G. The differentiation of CD4(+) T-Helper Cell Subsets in the Context of Helminth Parasite Infection. Front. Immunol., 2014, Vol. 5, p. 487.
12. Das S.J., Lovicu F.J., Collinson E.J. Nox4 Plays a Role in TGF-P-dependent lens epithelial to mesenchymal transition. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 2016, Vol. 57, no. 8, pp. 3665-3673.
13. Douillard S., Rozec B., Bigot E., Aillet L., Patrice T. Secondary reactive oxygen species production after PDT during pulmonary tumor growth in sera of nude mice. Photodiagnosis Photodyn. Ther., 2013, Vol. 10, no. 1, pp. 62-71.
14. Florek M., Schneidawind D., Pierini A., Baker J., Armstrong R., Pan Y., Leveson-Gower D., Negrin R., Meyer E. Freeze and thaw of CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells results in loss of CD62L expression and a reduced capacity to protect against graft-versus-host disease. PLoS ONE, 2015, Vol. 10, no. 12, e0145763. doi: 10.1371/journal.pone.0145763
15. Ge A., Ma Y., Liu Y.N., Li Y.S., Gu H., Zhang J.X., Wang Q.X., Zeng X.N., Huang M. Diosmetin prevents TGF-P1-induced epithelial-mesenchymal transition via ROS/MAPK signaling pathways. Life Sci., 2016, Vol. 153, pp. 1-8.
16. Kazumura K., Sato Y., Satozono H., Koike T., Tsuchiya H., Hiramatsu M., Katsumata M., Okazaki S. Simultaneous monitoring of superoxides and intracellular calcium ions in neutrophils by chemiluminescence and fluorescence: evaluation of action mechanisms of bioactive compounds in foods. J. Pharm. Biomed. Anal., 2013, Vol. 84, pp. 90-96.
17. Khan M.A., Moeez S., Akhtar S. T-regulatory cell-mediated immune tolerance as a potential immunotherapeutic strategy to facilitate graft survival. Blood Transfus., 2013, Vol. 11, no. 3, pp. 357-363.
18. Lavoie-Lamoureux A., Moran K., Beauchamp G., Mauel S., Steinbach F., Lefebvre-Lavoie J., Martin J.G., Lavoie J.P. IL-4 activates equine neutrophils and induces a mixed inflammatory cytokine expression profile with enhanced neutrophil chemotactic mediator release ex vivo. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 2010, Vol. 299, no. 4, pp. L472-L482.
19. Lewkowicz N., Klink M., Mycko M.P., Lewkowicz P. Neutrophil - CD4+CD25+ T regulatory cell interactions: a possible new mechanism of infectious tolerance. Immunobiology, 2013, Vol. 218, no. 4, pp. 455-464.
20. Lewkowicz P., Lewkowicz N., Sasiak A., Tchorzewski H. Lipopolysaccharide-activated CD4+CD25+ T regulatory cells inhibit neutrophil function and promote their apoptosis and death. J. Immunol., 2006, Vol. 177, no. 10, pp. 7155-7163.
21. Li H., Zhao Y., Li W., Yang J., Wu H. Critical role of neutrophil alkaline phosphatase in the antimicrobial function of neutrophils. Life Sci., 2016, Vol. 157, pp. 152-157.
22. Luider J.1, Cyfra M., Johnson P., Auer I. Impact of the new Beckman Coulter Cytomics FC 500 5-color flow cytometer on a regional flow cytometry clinical laboratory service. Lab. Hematol., 2004, Vol. 10, pp. 102-108.
23. Maecker H., McCoy P., Nussenblatt R. Standardizing immunophenotyping for the human immunology project. Nat. Rev. Immunol., 2012, Vol. 12, pp. 191-200.
24. Mahnke K., Useliene J., Ring S., Kage P., Jendrossek V., Robson S.C., Bylaite-Bucinskiene M., Steinbrink K., Enk A.H. Down-Regulation of CD62L Shedding in T Cells by CD39(+) Regulatory T Cells Leads to Defective Sensitization in Contact Hypersensitivity Reactions. J. Invest. Dermatol., 2017, Vol. 137, no. 1, pp. 106-114.
25. Moreno-Caceres J., Mainez J., Mayoral R., Martin-Sanz P., Egea G., Fabregat I. Caveolin-1-dependent activation of the metalloprotease TACE/ADAM17 by TGF-P in hepatocytes requires activation of Src and the NADPH oxidase NOX1. FEBS J., 2016, Vol. 283, no. 7, pp. 1300-1310.
26. Papadaki G., Kambas K., Choulaki C., Vlachou K., Drakos E., Bertsias G., Ritis K., Boumpas D.T., Thompson P.R., Verginis P., Sidiropoulos P. Neutrophil extracellular traps exacerbate Th1-mediated auto-
immune responses in rheumatoid arthritis by promoting DC maturation. Eur. J. Immunol., 2016, Vol. 46, no. 11, pp. 2542-2554.
27. Pham van L., Germaud N., Ramadan A., Thieblemont N. MyD88 modulates eosinophil and neutrophil recruitment as well as IL-17A production during allergic inflammation. Cell. Immunol., 2016, Vol. 310, pp. 116-122.
28. Rezende F., Prior K.K., Löwe O., Wittig I., Strecker V., Moll F., Helfinger V, Schnütgen F., Kurrle N., Wempe F., Walter M., Zukunft S., Luck B., Fleming I., Weissmann N., Brandes R.P., Schröder K. Cytochrome P450 enzymes but not NADPH oxidases are the source of the NADPH-dependent lucigenin chemiluminescence in membrane assays. Free Radic. Biol. Med., 2017, Vol. 102, pp. 57-66.
29. Takele Y., Adem E., Getahun M., Tajebe F., Kiflie A., Hailu A., Raynes J., Mengesha B., Ayele T.A., Shkedy Z., Lemma M., Diro E., Toulza F., Modolell M., Munder M., Müller I., Kropf P. Malnutrition in healthy individuals results in increased mixed cytokine profiles, altered neutrophil subsets and function. PLoS ONE, 2016, Vol. 11, no. 8, e0157919. doi: 10.1371/journal.pone.0157919.
30. Tan S.Y., Weninger W. Neutrophil migration in inflammation: intercellular signal relay and crosstalk. Curr. Opin. Immunol., 2016, Vol. 44, pp. 34-42.
31. Trujillo M. Analysis of the lmmunity-related oxidative bursts by a luminol-based assay. Methods Mol. Biol., 2016, Vol. 1398, pp. 323-329.
32. Wadhwa N., Raoot A. An unusual case of adult filarial oophoritis. Int. J. Gynecol. Pathol., 2011, Vol. 30, no. 6, pp. 549-552.
33. Yasui T., McCann K., Gilbert R.O., Nydam D.V., Overton T.R. Associations of cytological endometritis with energy metabolism and inflammation during the periparturient period and early lactation in dairy cows. J. Dairy Sci., 2014, Vol. 97, no. 5, pp. 2763-2770.
34. Zhang Z., Zhong W., Spencer D., Chen H., Lu H., Kawaguchi T., Rosenbaum J.T. Interleukin-17 causes neutrophil mediated inflammation in ovalbumin-induced uveitis in DO11.10 mice. Cytokine, 2009, Vol. 46, no. 1, pp. 79-91.
Авторы:
Савченко А.А. — д.м.н., профессор, руководитель лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии ФГБНУ«Федеральный исследовательский центр „Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"», обособленное подразделение «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера»; заведующий кафедрой физиологии ФГБОУ ВО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения РФ, г. Красноярск, Россия
Каспаров Э.В. — д.м.н., профессор, директор Научно-исследовательского института медицинских проблем Севера, заместитель директора ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр „Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"», г. Красноярск, Россия
Арутюнян С.С. — врач гинекологического отделения Научно-исследовательского института медицинских проблем Севера, г. Красноярск, Россия
Authors:
Savchenko A.A., PhD, MD (Medicine), Professor, Head, Laboratory of Molecular and Cellular Physiology and Pathology, Krasnoyarsk Research Center, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Research Institute of Medical Problems of the North; Head, Department of Physiology, Krasnoyarsk State V.F. Voino-Yasenetsky Medical University, Krasnoyarsk, Russian Federation
Kasparov E.V., PhD, MD (Medicine), Professor, Director, Research Institute of Medical Problems of the North, Deputy Director, Krasnoyarsk Research Center, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Krasnoyarsk, Russian Federation
Arutyunyan S.S., Physician, Department of Gynecology, Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation
Борисов А.Г. — к.м.н., ведущий научный сотрудник лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии ФГБНУ«Федеральный исследовательский центр „Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"», обособленное подразделение «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера»; доцент кафедры инфекционных болезней ФГБОУ ВО «Красноярский государственный медицинский университет им. проф. В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения РФ, г. Красноярск, Россия
Кудрявцев И.В. — к.б.н., старший научный сотрудник отдела иммунологии ФГБНУ «Институт экспериментальной медицины», Санкт-Петербург; старший научный сотрудник ФГАОУВПО «Дальневосточный федеральный университет», г. Владивосток; доцент кафедры иммунологии ФГБОУ ВО «Первый Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П. Павлова» Министерства здравоохранения РФ, Санкт-Петербург, Россия Гвоздев И.И. — младший научный сотрудник лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр „Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"», обособленное подразделение «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера», г. Красноярск, Россия
Мошев А.В. — младший научный сотрудник лаборатории клеточно-молекулярной физиологии и патологии ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр „Красноярский научный центр Сибирского отделения Российской академии наук"», обособленное подразделение «Научно-исследовательский институт медицинских проблем Севера», г. Красноярск, Россия
Поступила 25.03.2017 Принята к печати 02.05.2017
Borisov A.G., PhD (Medicine), Leading Research Associate, Laboratory of Molecular and Cellular Physiology and Pathology, Krasnoyarsk Research Center, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Research Institute of Medical Problems of the North; Assistant Professor, Krasnoyarsk State V.F. Voino-Yasenetsky Medical University, Krasnoyarsk, Russian Federation
Kudryavtsev I.V., PhD (Medicine), Senior Research Associate, Department of Immunology, Institute of Experimental Medicine, St. Petersburg; Senior Research Associate, Far Eastern Federal University, Vladivostok; Assistant Professor, Department of Immunology, First St. Petersburg State I. Pavlov Medical University, St. Petersburg, Russian Federation
Gvozdev I.I., Junior Research Associate, Laboratory of Molecular and Cellular Physiology and Pathology, Krasnoyarsk Research Center, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation
Moshev A.V., Junior Research Associate, Laboratory of Molecular and Cellular Physiology and Pathology, Krasnoyarsk Research Center, Siberian Branch of the Russian Academy of Sciences, Research Institute of Medical Problems of the North, Krasnoyarsk, Russian Federation
Received 25.03.2017 Accepted 02.05.2017
