CC BY
22
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ И ТЕХНОЛОГИИ
УДК 618.36-002.2:615.835.3:612.017.1
ДИНАМИКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ИММУНИТЕТА, ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ И АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ЗАЩИТЫ У БЕРЕМЕННЫХ С ХРОНИЧЕСКОЙ ПЛАЦЕНТАРНОЙ НЕДОСТАТОЧНОСТЬЮ ПОД ВЛИЯНИЕМ ОЗОНО- И ГИПЕРБАРОТЕРАПИИ
Х. М. КлементеАпумайта1, А. В. Мурашко1, С. В. Пак2, Г. О. Гречканев2, С. А. Дворянский3, Э. М. Иутинский3
'Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова, г. Москва, 2 Нижегородская государственная медицинская академия, г. Н Новгород, 3Кировская государственная медицинская академия, г. Киров
Обследовано 400 беременных с компенсированной формой хронической плацентарной недостаточности (ХПН), ведущими осложнениями у них были гестоз, анемия и угроза прерывания беременности. 200 больных получали в комплексе лечения медицинский озон в чередовании с актовегином. 100 женщин получали сеансы ГБО в чередовании с актовегином в дозе 160 мг. 100 пациенток лечились традиционными методами. Проводили определение общего количества Т- и В-лимфоцитов, субпопуляций Т-лимфоцитов, уровня иммуноглобулинов А, М, G. Также определялась концентрация циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОл) и состояния антиоксидантной системы защиты исследовалась по уровням продуктов ПОЛ и содержанию антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы.
На фоне лечения медицинским озоном и ГБО имело место снижение уровней цИК, цитотоксиче-ских клеток, натуральных киллеров, содержание иммуноглобулинов М в сочетании с возрастанием уровня иммуноглобулинов G- и Т-хелперов. На фоне озонотерапии было зафиксировано максимальное снижение интенсивности перекисного окисления липидов по всем изучаемым параметрам в сочетании с усилением активности антиоксидантной защиты. ГБО и традиционное лечение не привели к столь же значимым положительным сдвигам.
Ключевые слова: хроническая плацентарная недостаточность, иммунитет, перекисное окисление липидов, озонотерапия, гипербарическая оксигенация.
Введение
Согласно современным взглядам, плацентарная недостаточность проявляется своеобразным клинико-морфологическим симпто-мокомплексом, возникающим в результате патологической реакции плаценты на различные экзо- и эндогенные факторы [2, 7, 8].
48
Не последнее место в этом занимают иммунологические нарушения [1, 3, 6] и дисбаланс в системе перекисное окисление липидов — антиоксидантная защита [4, 5].
Цель исследования — выявить иммунологические нарушения и изменения в системе перекисное окисление липидов — анти-оксидантная защита при компенсированной
форме хронической плацентарной недостаточности (ХПН) и возможности их коррекции с помощью озонотерапии и гипербарической оксигенации (ГБО).
Материал и методы
ИССЛЕДОВАНИЯ
Для выполнения поставленных в работе цели и задач обследовано 400 беременных с компенсированной формой ХПН, ведущими осложнениями у них были гестоз, анемия и угроза прерывания беременности. Верификацию диагноза проводили по балльной шкале оценки степени тяжести хПН и состояния фетоплацентарного комплекса, предложенной И. С. Сидоровой.
200 больных (первая группа) получали в комплексе лечения медицинский озон (200 мл озонированного физраствора, приготовленного с использованием рабочей концентрации озона 400 мкг/л, № 5—7) в чередовании с актовегином в дозе 160 мг, № 5—7. 100 женщин (вторая группа) получали сеансы ГБО в барокамере БЛКС-37 при давлении 1,0—1,3 атм. в течение 40 мин в чередовании с актовегином в дозе 160 мг. 100 пациенток (третья группа) лечились традиционными методами (реополиглюкин 200—400 мл с тренталом 5 мл внутривенно капельно, в сочетании с актовегином по 160 мг).
Оценка иммунологического статуса пациенток до и после лечения включала определение общего количества Т- и В-лимфоци-тов, субпопуляций Т-лимфоцитов, уровня иммуноглобулинов А, М, & Также определялась концентрация циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК).
Содержание CD3+, CD4+, CD8+, CDl6+, CD20+, СD25+ лимфоцитов исследовали непрямым иммунофлуоресцентным методом с помощью набора моноклональных антител.
Количественное определение иммуноглобулинов А, М, G в сыворотке крови проводилось методом радиальной иммунодиффу-зии по Манчини с использованием моноспецифических сывороток против ^М, Результаты исследований выражались в г/л. Определение цИК проводилось методом В. Гашковой.
С целью определения интенсивности процессов перекисного окисления липидов (ПОл) и состояния антиоксидантной системы защиты (АОСЗ) исследовались следующие параметры: уровень первичных продуктов ПОЛ — диеновых коньюгатов (ДК), триено-вых коньюгатов (ТК), и конечных продуктов ПОЛ — оснований Шиффа, содержание антиоксидантного фермента супероксиддис-мутазы (СОД).
Содержание ДК определяли при помощи спектрофотометра СФ-26 в метанол-гексано-вой липидной фракции (5 : 1) при длине волны 233 нм и выражали в единицах оптической плотности относительно количества общих липидов (ед. опт. пл./мг ОЛ). Основания Шиффа (ОШ) определяли с помощью флуорометрического метода при длине волны возбуждения 365 нм и длине волны эмиссии 420 нм и выражали в условных единицах свечения на мг общих липидов (усл. ед./мг ОЛ). Содержание общих липидов в сыворотке крови определяли при помощи диагностических наборов «1аЛета». Активность антиоксидантного фермента — катала-зы — определяли спектрофотометрически по убыли перекиси водорода в среде, единицы измерения — Ед./г Нв в мин; супероксид-дисмутазы — в тесте с нитросиним тетразо-лием, единицы измерения — Ед./г Нв в мин.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Анализ данных, характеризующих исходное состояние иммунитета у беременных с компенсированной формой хПН, выявил
нарушение процессов активации иммуно-компетентных клеток. Абсолютное количество лейкоцитов и лимфоцитов у них не выходило за пределы нормальных значений. Изучение показателей клеточного звена иммунной системы обнаружило незначительное снижение лимфоцитов с фенотипом CD3+ по сравнению со здоровыми беременными. Содержание Т-хелперов ^4+) не отличалось от нормального, а количество цитоток-сических клеток (CD8+) было повышено и сопровождалось снижением иммунорегуля-торного индекса (ИРИ). Отмечались достоверное увеличение уровня натуральных киллеров (CDl6+), а также тенденция к повышению активационных рецепторов к ИЛ-2 (CD25+). Отклонения параметров гуморального иммунитета выражались в более высоком содержании популяции клеток с фенотипом СD20+, ^М и циркулирующих иммунных комплексов малых размеров (7% ЦИК).
Наше исследование выявило, что терапия медицинским озоном и ГБО оказала однонаправленное иммунокорригирующее действие. Так, во всех группах имело место снижение уровней ЦИК, однако степень его зависела от вида лечения. На фоне озоноте-рапии ЦИК уменьшились в среднем на 53,6±3,7 ед./мл, ГБО привела к сокращению данного показателя на 24,1±2,6 ед./мл, использование актовегина способствовало уменьшению ЦИК на 12,0±1,5 ед./мл (рис. 1).
В двух основных группах отмечалась тенденция к некоторому увеличению количества общих Т-лимфоцитов (CD3+), что сочеталось с ростом Т-хелперов ^4+) на 8% в первой основной группе и на 9% во второй основной группе. Одновременно с этим произошло снижение цитотоксических клеток (CD8+) на 12% и 11% соответственно. В результате ИРИ в основных группах вырос в 1,4 раза и стал достоверно выше аналогичного показателя контрольной группы. Количество натуральных киллеров после озоноте-рапии уменьшилось на 17% (р<0,05), на фоне ГБО (р<0,05) — на 10%. Уровень активационных рецепторов к ИЛ-2 (CD25+) снизился соответственно на 26% и 19%.
В обеих основных группах также достоверно уменьшилось содержание иммуноглобулинов М (рис. 2), в то же время отмечена тенденция к возрастанию уровня иммуноглобулинов G в среднем на 8% и 9% соответственно.
Традиционное лечение оказало наименее выраженное влияние на иммунологические параметры больных.
Исследования ДК в крови больных ХФПН показали, что исходный уровень составлял в среднем в первой основной группе 0,21±0,006 ед. опт. пл./мг ОЛ, во второй
1,4 1,42 1,35 1,39 1,36
^
0,8
О)
-до 1- после 2-ДО 2- после 3-до 3- после
лечения лечения лечения лечения лечения лечения
1 — первая группа (на фоне озонотерапии); 2 — вторая группа (на фоне ГБО); 3 — третья (контрольная) группа (на фоне традиционного лечения).
Рис. '. Влияние различных видов терапии на уровень ЦИК Рис. 2. Влияние различных видов терапии на содержание в крови больных с ХФПН иммуноглобулина М при компенсированной форме ХПН
основной группе — 0,22±0,005 ед. опт. пл./мг Ол, в контрольной группе — 0,20±0,007 ед. опт. пл./мг Ол, что достоверно не отличается (р>0,05) (табл.).
Повторное изучение дК по окончании лечения выявило их снижение на фоне озо-нотерапии до 0,14±0,007 ед. опт. пл./мг Ол (р<0,05), т. е. на 25,9%. Во второй основной группе снижение составило 13,6% (р<0,05), в контрольной группе было недостоверным. Таким образом, значение данного показателя оказалось минимальным после озоноте-рапии.
Аналогичной была сравнительная динамика ТК, уровень которых уменьшился в результате озонотерапии на 47,5% (р<0,05), а в результате ГБО и лечения актовегином значение показателя достоверно не изменилось, оказавшись в 1,75—1,88 раза (р<0,05) больше по сравнению с первой основной группой.
По окончании лечения уровень Ош в первой основной группе достиг 12,36± ±0,09 отн. ед./мг Ол, что достоверно на 32,1% ниже (р<0,05), чем при исходном анализе.
Во второй основной группе снижение показателя было достоверным, но менее значительным, и составило 11,6% от исходного (р<0,05), а в контрольной группе вообще было недостоверным.
Исследование влияния сравниваемых методов лечения на показатель активности СОд выявил положительную динамику только при условии использования озонотерапии в комплексе лечения — он возрос с исходных 492,1±13,0 Ед./г Нв в мин до 555,8±11,0 Ед./г Нв в мин, т. е. на 12,9%, тогда как после ГБО и традиционного лечения уровень данного ан-тиоксидантного фермента имел лишь тенденцию к росту. Таким образом, лишь медицинский озон оказался в состоянии принципиально улучшить показатели ПОл — АОСз, в результате чего все они пришли к норме, чего нельзя сказать, оценивая результаты ГБО и традиционного лечения.
Полученные результаты подтверждают известное мнение [2, 4, 5, 8] о роли свободно-радикальных процессов в генезе хронической плацентарной недостаточности, а также свидетельствуют о выраженном положитель-
Таблица
Влияние озонотерапии, ГБО и традиционного лечения на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы защиты у беременных с ХФПН
Группа больных ДК, ед. опт. пл./мг ОЛ ТК, ед. опт. пл./мг ОЛ Основания Шиффа, отн. ед./мг ОЛ СОД, Ед./г Нв в мин
до после до после до после до после
1-я осн. группа 0,21± ±0,006х 0,14± ±0,007* 0,061± ±0,011 х 0,032± ±0,06* 18,22± ±0,05 х 12,36± ±0,09* 492,0± ±13,0 х 555,8± ±11,0*
2-я осн. группа 0,22± ±0,005 х 0,19± ±0,009* х 0,059± ±0,08 х 0,056± ±0,05 х 19,35± ±0,04 х 17,09± ±0,07* х 476,1± ±12,0 х 487,6± ±9,0 х
Контр. группа 0,20± ±0,007 х 0,19± ±0,008* х 0,062± ±0,03 х 0,60± ±0,02 х 18,57± ±0,03 х 18,39± ±0,02 х 489,4± ±10,0 х 497,5± ±8,0 х
Норма <0,21 <0,03 <14,8 513,0—548,5
Примечание. * (р<0,05) — коэффициент достоверности различий в группе после лечения; х (р<0,05) — коэффициент достоверности различий по сравнению с аналогичным показателем здоровых беременных.
ном влиянии медицинского озона на процессы ПОЛ и АОСЗ, что является патогенетическим обоснованием его применения в комплексной терапии компенсированной формы данной патологии.
Вывод
Озонотерапия и ГБО оказывают выраженное иммуномодулирующее действие, а также корригирующее влияние на процессы перекисного окисления липидов и анти-оксидантную систему защиты при компенсированной форме ХПН, при этом медицинский озон проявляет наиболее выраженное лечебное действие.
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК
1. Боровская Т. Ф. Особенности иммунных взаимоотношений в системе мать — плацента — новорожденный при угрозе прерывания беременности и ОГ-гестозе/ Т. Ф. Боровская, Е. А. Ганычева, В. К. Козлов //Иммунология.— 1998.— С. 46—49.
2. Макаров И. О. Современный взгляд на патогенез фетоплацентарной недостаточности/И. О. Макаров, И. С. Сидорова// Мать и дитя: матер. VII Всерос. науч. форума.— М., 2005.— С. 134.
3. Назаренко Л. Г. Об иммунологических аспектах синдрома задержки развития плода/Л. Г. Назаренко, Л. В. Антипенская// Акушерство и гинекология.— 1992.— № 2.— С. 28—32.
4. Показатели ПОЛ у беременных с гестозом/А. М. Торчинов, С. Г. Цахилова, Д. Х. Сарахова и др.//Мать и дитя: матер. 2-го регион. форума.— Сочи, 2008.— С. 90—91.
5. Показатели процесса деградации белков и антиокислительной системы при нормаль-
ной беременности/С. О. Бурмистров, Т. И. Опарина, В. М. Прокопенко и др.// Акушерство и гинекология.— 2001.— № 6.— С. 17—20.
6. Филинова Н. Ю. Участие плацентарных иммунологических и белковых факторов в патогенезе задержки внутриутробного развития плода у беременных с гестозом: автореф. дис. ... канд. мед. наук/Н. Ю. Фили-нова.— Иваново, 2000.— 24 с.
7. Филиппов О. С. Плацентарная недостаточность.— М.: МЕДпресс-информ, 2009.— 160 с.
8. Филиппов О. С. Плацентарная недостаточность: современный взгляд на проблему/О. С. Филиппов, Е. В. Карнаухова, А. А. Казанцева.— Красноярск, 2005.— 254 с.
H. M. Klemente Apumayta, A. V. Murashko, S. V. Pak, G. O. Grechkanev, S. A. Dvoryanskiy, E. M. Iutinskiy
DYNAMICS OF IMMUNITY, LIPID PEROXIDATION AND ANTIOXIDANT DEFENSE INDICES IN PREGNANT WOMEN WITH CHRONIC PLACENTAL INSUFFICIENCY UNDER THE EFFECT OF OZONO-AND HYPERBAROTHERAPY
Examination of 400 pregnant women with compensated form of chronic placental insufficiency (CPI) was fulfilled. The leading complications were gestosis, anemia and threat of abortion. Ozonotherapy and hyperbaric oxygenation (HBO) resulted in lowering of circulating immune complex, cytotoxic cell and natural killer levels, immunoglobulin M content combined with rise in immunoglobulin G and T-helper levels. Against the background of ozonotherapy, maximal reduction of lipid
peroxodation intensity by all the parameters combined with intensification of antioxidant defense activity was registered. Hyperbaric oxygenation and traditional treatment had no such significant positive progress. Results of investigation confirmed that ozonotherapy and HBO have marked immunomodulating effects and correcting influence on lipid peroxidation processes and antioxidant defense system in compensated CPI form, at the same time, medical ozone has the most pronounced therapeutic action.
Keywords: chronic placental insufuciency, immunity, lipid peroxidation, ozonotherapy, hyperbaric oxygenation.
Контактная информация: Хесус Мануель Клементе Апумайта, канд. мед. наук, докторант кафедры акушерства и гинекологии Московской медицинской академии им. И. М. Сеченова, 119991, г. Москва, ул. Еланского, 2/1, тел. 8 (495) 248-56-69
Материал поступил в редакцию 10.09.2009
