CC BY
68
ОРИГИНАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
УДК б1б.3б:б1б,153.922:575:577.15:б15.244)-092.9
Н.А. Власова, А.Ж. Гильманов, В.А. Максимов, Л.В. Гладских, Н.Ж. Басченко
ДИНАМИКА АКТИВНОСТИ 7а-ГИДРОКСИЛАЗЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ГИПЕРХОЛЕСТЕРИНЕМИИ НА ФОНЕ МЕДИКАМЕНТОЗНОЙ КОРРЕКЦИИ
Ведущая роль печени, т.е. гепатоцита, в нарушении липидного обмена сегодня ни у кого не вызывает сомнений. Значение этих нарушений в развитии и прогрессировании атеросклероза, ЖКБ (холестериновый холе-литиаз), липидного дистресс-синдрома трудно переоценить, т.к. главным физиологическим механизмом холестеринового го-меостаза является э кскреция желчных кислот с желчью в процессе их энтерогепа-тической циркуляции по принципу «обратной связи», регламентирующему внутри-печеночный синтез стероида и его метаболизм в желчные кислоты. Эти процессы строго сбалансированы и происходят при непосредственном участии ферментов, главными из которых являются ГМГ-КоА-редуктаза и 7а-гидроксилаза [3].
7а-гидроксилаза - фермент, катализирующий первую реакцию, лимитирующую скорость окисления холестерина в первичные желчные кислоты - холевую и хеноде-зоксихолевую. Субстратом для фермента является свободный холестерин микросо-мальной мембраны. Эстерифицированный холестерин в реакциях не участвует. Для 7а-гидроксилазы доступно от 30 до 70 % всего
эндогенного холестерина мембраны. Очевидно, в реакции гидроксилирования в первую очередь используется вновь синтезируемый холестерин и холестерин ЛВП в противоположность холестерину, поступившему в клетку извне в составе ЛНП.
Этот фермент локализован в эндоплаз-матическом ретикулуме гепатоцитов и относится к надсемейству цитохромов Р 450 -СУР 7. Фермент в печени находится под контролем множественных факторов: концентрации желчных кислот, ХС, гормонов и лекарственных соединений. Регуляция активности 7а-гидроксилазы желчными кислотами происходит по принципу обратной связи после их реабсорбции в кишечнике и транспорта через портальную вену в клетки печени.
Уменьшение поступления желчных кислот в печень в результате дренирования желчного протока и применения ионнооб-менных смол стимулирует 7а-гидроксилазу. Ингибирующее действие на ее активность оказывают первичные желчные кислоты, введенные в диету.
До конца не ясна роль субстрата реакции (холестерина), в отличие от продуктов
Пермский медицинский журнал
2006 том XXIII № 6
(желчных кислот), в регуляции скорости желчегенеза. Защита от гиперхолестерино-мии через ускорение желчегенеза выражена у крыс и собак; у человека, как и у кроликов, - отсутствует, т.е. гиперхолестеринемии диетического происхождения могут быть результатом неспособности печени отвечать на эти нагрузки увеличением синтеза желчных кислот вследствие неиндуцируемости 7а-гидроксилазы [5]. В связи с этим обнаружение индукторов этого фермента может открыть возможности для лечения гиперхо-лестеринемии.
Цель работы - на модели функциональной нагрузки холестерином у крыс оценить повреждение печени по содержанию в гомогенате одного из продуктов процесса ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) (реакция с ТБК по методу Стальной и Гари-швили) [1], уровень ХС в сыворотке крови ХС-оксидазным методом [1, 2], изменение скорости гидроксилирования холестерина и ее динамику на фоне медикаментозной терапии гепатотропными препаратами по активности фермента 7а-гидроксилазы [4].
Материалы и методы
Опыты проводились на 48 беспородных белых крысах-самцах массой 180-200 г. Было сформировано 4 экспериментальные группы по 6 животных в каждой, получавших медикаментозную коррекцию препаратами гепатосан, карсил, энтеросан и ал-лохол, в группе контроля - 15 животных, в интактной группе - 9. Животные всех групп содержались в стандартных условиях вивария. У пяти групп животных индуцировали гиперхолестеринемию (диета, содержащая 2,5% ХС и растительное масло), одна группа была интактной. В дальнейшем в че-
тырех группах из пяти крысы получали медикаментозную терапию гепатосаном, кар-силом, энтеросаном и аллохолом, а в группе контроля - воду. После индуцирования ги-перхолестеринемии и по окончании курса лечения животным внутривенно вводили альбумин - стабилизированную эмульсию Н-холестерина, определяя уровень МДА в го-могенатах печени, радиоактивность образующейся 3 Н20 в моче и подсчет весового коэффициента всех животных - по отношению массы тела животного к весу печени.
Для определения активности 7а-гидроксилазы использовали (7а - Н 3 меченый холестерин), скорость окисления которого измеряли по выведению с мочой, образующейся в этой реакции 3 Н2О, при этом использовали метод, основанный на том, что в реакции 7а-гидроксилирования ХС один атом трития переходит в состав воды и, таким образом, количество тритие-вой воды в плазме и в моче отражает скорость протекания реакции гидроксилиро-вания ХС в микросомальной системе печени [4].
7 (п) - а - 3Н - ХС фирмы Ате^ат (Великобритания) вводили внутривенно, предварительно стабилизируя его в виде эмульсии с 10%-ным альбумином. Крысам вводили по 0,4 мл альбуминстабилизиро-ванной эмульсии накануне, на 17-й день холестериновой диеты и на 21-й день с момента начала медикаментозной терапии, специально собирая мочу, для подсчета которой использовали сцинтилляционный счетчик.
Радиоактивность мочи крыс измеряли на сцинтилляционном счетчике ТЕМЖЕИ ЬБС тип 425-034 фирмы Шпс1ех (Финляндия). Для этого 0,5 мл мочи помещали
в 10 мл сцинтилляционной жидкости ЖС-8 и определяли активность счета, DPM. Радиоактивность рассчитывали на 1 мл мочи. Радиоактивность тритиевой воды в моче отражала скорость гидроксилирования ХС в печени. Энтеросан - это природная смесь высушенной массы покровной пластины мускульного желудка птицы, состоящая из застывшего секрета простых желез и покровного эпителия, содержащая гликопротеиды, гликоза-миногликаны, желчные и нуклеиновые кислоты, сиаломуцины. Гепатосан - лиофини-зированные клетки печени Hepar suis, содержащие незаменимые аминокислоты, фосфолипиды, микроэлементы, ферменты (протеазы катепсинов).
120 100 80 60 40 20 0
%-
100,0
гепатосан карсил энтеросан аллохол контроль
Контроль - модель гиперхолестеринемии
Рис. 1. Уровень МДА в гомогенате печени при экспериментальной гиперхолестеринемии на фоне лечения гепатосаном, карсилом, энтеросаном, аллохолом (% от контроля)
Результаты и обсуждение
На фоне экспериментальной гиперхо-лестеринемии реализуются два сдвига в метаболизме печени:
- во-первых, увеличивается содержание МДА в гомогенате с 3,7±1,2 до 19,7±1,5, т.е. в пять раз (табл. 1);
- во-вторых, холестериновая нагрузка у животных вызывает повышение уровня радиоактивности тритиевой воды в моче с 508 до 656 БРМ, что свидетельствует о повышении активности 7а-гидроксилазы, что согласуется с данными [6, 8] (табл. 2). Масса животных снижалась на фоне гиперхоле-стеринемии.
150 % 125 — 100 —
137,3
117,9
108,5
103,6 100,0
75 50 25
гепатосан карсил энтеросан аллохол контроль
Контроль - модель гиперхолестеринемии
Рис. 2. Активность холестерол 7 а-гидроксилазы на фоне лечения гепатосаном, карсилом, энтеросаном, аллохолом (% от контроля)
0
В четырех экспериментальных группах животных, получавших медикаментозную терапию препаратами гепатосан, карсил, энтеросан и аллохол, наблюдались однонаправленные изменения в виде повышения уровня радиоактивности тритиевой воды,
т.е. ускорение гидроксилирования 7 (п) -а - 3Н - ХС в печени. Повышение активности 7а-гидроксилазы на фоне лечения гепа-тосаном было максимальным и составило 1035±34,6 БРМ. Карсил оказался на втором месте - 889,0±10,8 БРМ, энтеросан - на
Пермский медицинский журнал
2006 том XXIII № 6
третьем (818,8±17,5). В группе животных, получавших аллохол, не наблюдалось ускорения процессов желчегенеза и активности фермента (608 БРМ) (см. рис. 2).
На фоне нагрузки ХС его содержание в плазме крови животных составляло более 10 ммоль/л (в контроле 1,95±0,05). При лечении гепатосаном уровень ХС достоверно снижался до 3,7 ммоль/л (р<0,05), в группе карсила - до 6,9 ммоль/л, в группе энтеро-сана - до 6,2 ммоль/л, в группе аллохола -до 9,1 ммоль/л (р>0,05) (см. рис. 1).
Помимо положительной тенденции к нормализации липидного профиля у животных наблюдалось понижение уровня МДА на фоне терапии (в большей степени гепатосаном), что может свидетельствовать о восстановлении физиологических функций печени, антиоксидантной и мембрано-стабилизирующей активности.
Вес печени у животных после лечения уменьшался во всех группах, но в наибольшей степени - в 1,8 раза - у животных, получавших гепатосан. В других группах весовой коэффициент печени хотя и приближался к норме, но в меньшей степени, что свидетельствововало о сохранении гиперемии и функционального напряжения органа в условиях гиперхолестеринемии.
Выводы
1. Экспериментальная гиперхолесте-ринемия у крыс приводит к активации ключевого фермента биосинтеза желчных кислот - ХС-7а-гидроксилазы в печени, что согласуется с общеизвестными литературными данными [5, 6, 7, 8].
2. Действие гепатотропных лекарственных препаратов сопровождается дополнительной индукцией микросомальной ХС-
гидроксилазы и гипохолестеринемическим эффектом, который убывает в ряду «гепато-сан - карсил - энтеросан» и практически отсутствует у аллохола.
Таким образом, гепатосан можно рассматривать в качестве потенциального индуктора 7а-гидроксилазной активности.
Библиографический список
1. Андреева, АИ. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой / АИ. Андреева, ЛА. Кожемякин, АА. Кишкун // Лаб. дело. -1988. - №41. - С. 41-46.
2. Арехович, ВН. Современные методы в биохимии / ВН. Арехович. - М.: Медицина, 1977. - С. 66-68.
3. Билиарный сладж: от патогенеза к лечению: метод. рекомендации / АА. Ильченко, ТВ. Вихрова, ЮН. Орлова, СЮ. Силь-вестрова. - М., 2004. - С. 32.
4. Твердохлиб, АА. Никаноров, ВК. Филипов, БА Фролов, С. Н Афонина, ФЗ. Меер-сон. АС SU 1476380 А 1 В.П..
5. Холестериноз/ ЮМ. Лопухин, АИ. Ар-чаков, ЮА. Владимиров, ЭМ. Каган. - М.: Ме-дицина,1983. - С. 268.
6. A cholesterol ester transfer protein inhibitor attenuates atherosclerosis in rabbits / H. Okamoto, F. Yonemori, K. Wakitani et al. // Nature. - 2000. - Vol. 406. - P. 203-207.
7. Izzat, NN New molecular targets for cholesterol lowering therapy / NN. Izzat, ME. Deshazer, SL Loose-Mitchell // The Journal for Pharmacology and Experimental therapeutics. - 2000. - Vol. 293. - № 2. - Р. 315-320.
8. Pharmacodynamic interaction between the new selective cholesterol absorption inhibitor ezetimibe and simvastatin / T. Kosoglou,
I. Meyer, B. Musiol et al. // Atherocslerosis. -2000. - R 135-151.
N.A. Vlasova, A.Zh. Gilmanov, V.A. Maksimov, L.V. Gladskikh, N.Zh. Baschenko
DYNAMICS OF 7-ALPHA HYDROXYLASE
ACTIVITY IN EXPERIMENTAL HYPERCHOLESTERINEMIA ON THE BASIS OF MEDICAMENTOUS CORRECTION
The effect of cellular and plant origin preparations on rate of cholesterol hydroxyla-tion (by 7a-hydroxylase activity) in rats was investigated on the models of dietary hypercho-lesterinemia and in conditions of medicamen-
tous therapy with hepatoxan, carsil, enterosan and allochole. Experimental hypercholes-terinemia has been found to lead to activation of key enzyme of bile acids biosynthesis in the liver. The effect of hepatotropic preparations is accompanied by additional induction of micro-somal hydroxylase and hypocholesterinemic effect which is reduced in the line of hepato-san - carsil - enterosan.
Keywords: cholesterine, 7a-hydroxylase, pharmaceutical therapy.
БГМУ, г. Уфа, «Медминипром», г. Москва Материал поступил в редакцию 9.10.06 © Власова Н.А., Гильманов А.Ж., Максимов В.А., Гладских Л.В., Басченко Н.Ж., 2006
УДК 615.37:52.82
В.В. Юшков, Т.А. Юшкова, А.С. Ларионов О ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВАХ ТРАНСФЛАВИНА
Лекарственные средства, полученные из лейкоцитов и лимфоцитов крови, представляют интерес, поскольку они обладают иммуномодулирующими свойствами [2]. Первым зарегистрированным в России препаратом такого класса является аффинолей-кин [1]. Он включен в национальный формуляр как средство для лечения офтальмо-герпеса с затяжным течением и присоединением вторичной инфекции [3]. Нами был получен из лейкоцитов крови доноров, вакцинированных протии вируса клещевого энцефалита, еще один представитель данного класса лекарственных средств - транс-флавин, который проявлял иммуномодули-рующую активность [4].
Вместе с тем в генезе офтальмогерпеса и клещевого энцефалита играет существенную роль воспаление. Целью нашего иссле-
дования стало изучение противовоспалительной и анальгетической активности трансфлавина.
Материалы и методы
Эксперименты выполнены на 310 белых мышах массой 16-18 г. Воспаление моделировали субплантарным введением 0,1 мл 1%-ного каррагенина. О противовоспалительной активности препаратов судили по торможению воспалительной реакции, регистрируемой онкометрически через 1,3 и 5 часов после инъекции флогогена. О механизме противовоспалительного действия судили по влиянию обследуемых препаратов на развитие воспаления, вызываемого гис-тамином или серотонином.
Анальгетическую активность выявляли в тестах «горячей пластинки» и «уксусных
