CC BY
52
рологических групп, содержащих соматические О-антигены, четыре обладали адгезивными свойствами.
4. Максимальное количество изолятов чувствительны к антибиотикам группы цефалоспоринов.
Литература
1. Моторыгин А.В. Количественно-качественная характеристика энтеробактерий при желудочно-кишечных болезнях телят // Ветеринария. 2010. № 8. С. 29-33.
2. Пономарёва И.С., Жуков А.П. Эпизоотическая ситуация по бруцеллёзу в Оренбургской области: ретроспектива и
современность // Аграрная наука, образование, производство: актуальные вопросы: сб. трудов всерос. науч.-практич. конф. с междунар. участ. Новосибирск: изд-во НГАУ, 2014. С. 93-96.
3. Эпизоотологический метод исследования: учебное пособие / В.В. Макаров, А.В. Святковский, В.А. Кузьмин [и др.]. СПб: изд-во «Лань», 2009. 224 с.
4. Dodd C.C. Prevalence of Escherichia coli 0157 in Cattle Feeds in Midwestern Feedlots / M.W. Sanderson, J.M. Sargeant, T.G. Nagaraja, R.D. Oberst, R.A. Smith, D.D. Griffin // The Veterinary Journal. 2007. Р. 52-59.
5. Chernecky С.С. Laboratory tests and diagnostic procedures / С.С. Chernecky, B.J. Berger; 5th ed. St Louis: Saunders Elsevier, 2008. 1232 p.
Действие лизатов бацилл на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний кожи животных
И.В. Савина, к.в.н., Р.М. Нургалиева, к.в.н., ФГБОУ ВО Оренбургский ГАУ
У домашних животных причиной гнойно-воспалительных заболеваний кожи чаще всего являются стафилококки, стрептококки, значительно реже — пневмококки, синегнойная палочка и др. [1].
При лечении этих заболеваний в последнее время врачи сталкиваются с проблемой антибиотико-резистентности возбудителей. Применение лизатов пробиотических бактериальных культур для лечения может явиться решением данной проблемы.
Бактериальный лизат — это продукт расщепления бактериальных клеток на фрагменты. Он включает фрагменты клеточной стенки и их внутриклеточного содержимого, полученные под действием их собственных ферментов (автолизаты), кислот, щелочей и солей (гидролизаты) или при механическом разрушении [2].
Лизат как продукт жизнедеятельности бактерий содержит свободные аминокислоты, различные пептиды, пептидогликаны, дисахариды, полисахариды, фракции цитоплазмы, продукты метаболизма бактерий, витамины группы В.
Специальная методика лизиса при производстве бактериальных лизатов позволяет сохранить важнейшие непатогенные антигенные детерминанты, которые распознаются (считываются) рецепторами иммунокомпетентных клеток как сигнал — угроза с последующим запуском каскада иммунных реакций, таких, как стимуляция фагоцитоза, стимуляция презентации антигена, усиление продукции противовоспалительных цитокинов (IL-4, IL-10), развитие адьювантного эффекта [3].
Среди пробиотических препаратов большой интерес представляют препараты-пробиотики из спорообразующих бактерий рода Bacillus. Российскими учёными на сегодняшний день заявлено более 25 наименований препаратов на основе представителей рода Bacillus [4].
Бациллы является продуцентами полипептидных антибиотиков, многих ферментов, которые
могут подавлять жизнедеятельность микроорганизмов и стимулировать регенерационные и иммунные процессы [5, 6, 10,11].
Поскольку в настоящее время продолжается поиск альтернативных антибиотикотерапии методов лечения, то актуальным является изучение влияния лизатов пробиотических штаммов на возбудителей инфекционных заболеваний животных.
Цель исследования — изучение влияния лизатов пробиотических штаммов бацилл на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний кожи животных.
Исходя из поставленной цели были обозначены следующие задачи:
— выделить из пробиотических препаратов штаммы бацилл и получить их лизаты;
— выделить и определить видовой состав и факторы патогенности возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний кожи;
— определить антагонистическую активность ли-затов в отношении выделенных микроорганизмов;
— изучить влияние лизатов бацилл на факторы патогенности возбудителей.
Материал и методы исследования. Материалом для исследования послужили двадцать проб патологического материала, взятого от животных с гнойно-воспалительными заболеваниями кожи из разных хозяйств Оренбургского района и ветеринарной клиники (при Оренбургском ГАУ). Отбор проб, выделение культур микроорганизмов из патологического материала и определение гемолитической активности микроорганизмов проводили по общепринятым методикам. Идентификация бактерий проводилась на автоматическом микробиологическом анализаторе VITEK 2 Compact. У стафилококков определяли плазмокоагулазную активность по методу В.М. Карташовой (1994) [7]. Образование биоплёнок оценивали по степени связывания ими кристаллического фиолетового в стерильных 96-луночных полистироловых планшетах (O"Toole G. at al., 2000) [12]. Антагонистическую активность лизатов определяли по зонам угнетения роста штаммов микроорганизмов [8].
Для получения лизатов были использованы пробиотические препараты Ветом 1.1, Ветом 2, Ветом 4, Споробактерин. Лизаты бацилл получали методом термолиза [9].
Результаты исследования. Из пробиотических препаратов были выделены различные виды и штаммы бацилл: Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 (Ветом 1), Bacillus licheniformis (Ветом 2), Bacillus subtilis ВКПМ В-7038 (Ветом 4), Bacillus subtilis 534 (Споробактерин). Методом термолиза из них получены лизаты.
В ходе исследования 20 проб, взятых от больных животных, выделили и идентифицировали 15 штаммов микроорганизмов. Они были представлены следующими видами: Staphylococcus aureus, S. epidermidis, S. intermedius, S. vitulinus, S. sciuri, S. xylosus (рис. 1).
S. sciur
S. xylosus 7%
умеренно выраженную плазмокоагулазную активность (на ++).
Биоплёнкообразование — один из факторов патогенности, и его выявление имеет важное диагностическое значение. Коэффициент био-плёнкообразования выше 1,1 был обнаружен у пяти выделенных штаммов: 3-х — S. аureus, S. intermedius, S. epidermidis.
Антагонистическая активность лизатов в отношении всех выделенных штаммов возбудителей определялась по зонам задержки роста микроорганизмов.
Определение антагонистической активности лизатов пробиотических штаммов в отношении золотистого стафилококка выявило следующую картину: наибольшую зону задержки роста давал лизат, полученный из Bacillus subtilis 534 (Споробактерин), наименьшую — лизат из Bacillus licheniformis (Ветом 2), лизаты Bacillus subtilis ВКПМ В-10641 (Ветом 1) и Bacillus subtilis ВКПМ В-7038 (Ветом 4) занимали промежуточное положение (рис. 2).
S.epidermidis 20%
Рис. 1 - Видовой состав микроорганизмов, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях животных
Выявленный видовой состав в целом подтверждает данные литературных источников о ведущей роли в патогенезе S. aureus, S. epidermidis, S. intermedius. Чаще всего среди выделенных микроорганизмов обнаруживался S. aureus (33%), в одинаковом соотношении были представлены S. epidermidis, S. intermedius (по 20%), в 13% случаев выделялся S. vitulinus, а на долю S. sciuri и S. xylosus приходилось по 7%.
На следующем этапе работы были изучены факторы патогенности выделенных штаммов стафилококков.
Одним из факторов патогенности бактерий является наличие гемолизинов — веществ, разрушающих эритроциты. В результате исследования установили, что гемолитическими свойствами обладали 80% штаммов Staphylococcus aureus, а у 20% они отсутствовали. Другие виды стафилококков гемолитической активностью не обладали.
Одним из важнейших факторов патогенности является наличие фермента плазмокоагулазы. Плазмокоагулазную активность проявили все выделенные штаммы Staphylococcus aureus, но в разной степени: у 75% штаммов реакция проявлялась максимально (на +++); 25% штаммов проявляли
12 -, 10 -8 6 4 2 0
лизат Bacillus лизат Bacillus лизат Bacillus лизат Bacillus
subtilis 534 licheniformis subtilis ВКПМ В- subtilis ВКПМ В-
10641 7038
Рис. 2 - Антагонистическая активность лизатов бацилл в отношении Staphylococcus aureus
лизат Bacillus subtilis 534
лизат Bacillus licheniformis
лизат Bacillus subtilis ВКПМ B-10641
лизат Bacillus subtilis ВКПМ B-7038
Рис. 3 - Антагонистическая активность лизатов бацилл в отношении Staphylococcus intermedius
лизат Bacillus лизат Bacillus лизат Bacillus лизат Bacillus subtilis 534 licheniformis subtilis ВКПМ В- subtilis ВКПМ B-10641 7038
Рис. 4 - Антагонистическая активность лизатов бацилл в отношении Staphylococcus epidermidis
8
6
4
2
0
6,2
6
Рис. 5 - Плазмокоагулазная активность Staphylococcus aureus до и после воздействия лизатов бацилл
В отношении Staphylococcus intermedius наибольшую антагонистическую активность проявил лизат бактерий из штамма Bacillus subtilis 534 (Споробак-терин), а наименьшую — лизат бактерий штамма Bacillus licheniformis (Ветом 2) (рис. 3).
В отношении Staphylococcus epidermidis действие всех лизатов оказалось слабее, но более выраженную зону задержки роста давал лизат бактерий из штамма Bacillus subtilis 534 (рис. 4).
Действие лизатов в отношении Staphylococcus vitulinus и Staphylococcus xylosus было слабо выраженным.
После воздействия испытуемых лизатов у всех штаммов Staphylococcus aureus, ранее проявлявших свою гемолитическую активность, наблюдалось полное отсутствие гемолиза.
Плазмокоагулазная активность S. aureus после воздействия исследуемых лизатов имела тенденцию к снижению: 65% штаммов давали образование небольшого подвижного сгустка (реакция на ++); 35% — образовывали сгусток в виде облачка на поверхности жидкости (реакция на +) (рис. 5).
Лизаты вызывали достоверное снижение био-плёнкообразования у всех микроорганизмов, обладавших этой способностью, но лизат бактерий из штамма Bacillus subtilis 534 (Споробактерин) оказался наиболее активным среди них. Он инги-бировал биоплёнкообразование у четырёх из пяти штаммов, особенно у S. epidermidis. Наименьшее влияние на данный показатель оказал лизат, полученный из штамма Bacillus licheniformis.
Вывод. В результате проведённого исследования установлено, что наиболее активно ингибирует рост и размножение стафилококов и их факторов
патогенности лизат, полученный из пробиотиче-ского штамма Bacillus subtilis 534, выделенного из
препарата Споробактерин.
Литература
1. Патерсон С. Кожные болезни собак. М.: «АКВАРИУМ ЛТД», 2000. 178 с.
2. Маркова Т.П., Ярилина Л.Г., Чувирова А.Г. Бактериальные лизаты. Новые препараты // РМЖ. 2014. № 24. С. 1764.
3. Молокеев А.В. Возможности применения в медицине ферментативных лизатов пробиотических микроорганизмов / А.В. Молокеев, Н.А. Зыкова, Н.В. Молокеева, Р.М. Ильина, Т.В. Соколова // Биопрепараты. Профилактика. Диагностика. Лечение. 2010. № 3 (39). С. 60.
4. Похиленко В.Д., Перелыгин В.В. Пробиотики на основе спорообразующих бактерий и их безопасность // Химическая и биологическая безопасность. 2007. № 2—3. С. 20—41.
5. Малик Е.В. и др. Изучение ферментативной активности штамма Bacillus subtilis // Пробиотики, пребиотики, синбио-тики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы: сб. матер. междунар. конфер. М., 2004. С. 143-144.
6. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов // Антибиотики и химиотерапия. 2008. № 2. С. 23.
7. Карташова В.М., Таранова Л.Д. Методические рекомендации по микробиологическому исследованию молока и секрета вымени для диагностики мастита. М.: Россельхозакадемия, 1994. С. 35.
8. Антагонистическая активность лактобацилл / М.В. Тюрин [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2001. № 2. С. 3-8.
9. Пат. 2224792 Российская Федерация, МПКС1,2Ш/20,А61Р3 1/04. Способ получения пробиотического праепарата «Ли-зоспорин», обладающего антибактериальным действием на пневмотропные бактерии / А.Е. Билев; заяв. и патентооблад. Самарский военно-мед. институт; № 2002116989/13; заявл. 25.06.2002; опубл. 27.02.2004.
10. Akihiro Ohno Production of a lipopeptide antibiotic, surfactin, by recombinant Bacilus subtilis in solid state fermentation / Ohno Akihiro, Ano Tarashi, Shoda Makota // Biotechnol. and Biogen. 1995. 47. N 2. P. 209-214.
11. Gupta M. Lytic effect of Bacillus subtilis elastase on gram-positive and negative bacteria / M. Gupta, M. Kaur, K.C. Gupta // Indian J. Exp. Biol. 1992. № 5. P. 380-383.
12. O'Toole G. Biofilm formation as microbial development / G. O'Toole, H.B. Kaplan, R. Kolter // Annu. Rev. Microbiol. 2000. № 54. P. 49-79.
Влияние препаратов растительного происхождения при клиническом мастите коров
Н.А. Татарникова, д.в.н., профессор, ФГБОУ ВО Пермская ГСХА;И.Н.Жданова, к.в.н, ФГБУНПермский ФИЦ УрО РАН
Среди внутренних незаразных болезней крупного рогатого скота наибольшую долю занимают заболевания молочной железы. Они повсеместно распространены и наносят большой экономический
ущерб производителям молочной продукции, предприятиям перерабатывающей промышленности и здоровью человека. Применение новых лечебных и диагностических препаратов, совершенствование техники машинного доения пока не дают желательных результатов в борьбе с маститом [1]. В последние годы в России и за рубежом ведутся
