CC BY
6
Российский
онкологический
конгресс
Экспериментальная онкология
■ Экспериментальная онкология
РАЗРАБОТКА МЕТОДА ИММУНОТЕРАПИИ (CAR-T ТЕРАПИИ) ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ СОЛИДНЫХ ОПУХОЛЕЙ
Авторы: В.К. Боженко, Я.Ю. Киселева, А.М. Шишкин, Е.Л. Джикия, Т.М. Кулинич
Место работы: ФГБУ «Российский научный центр рентгенора-диологии» Минздрава России, Москва Эл. почта: [email protected]
Цель: Разработка технологии получения CAR-T-лим-фоцитов, генетически модифицированных химерными Т-клеточными рецепторами, специфичными к антигенам СА125 и СЕА с применением плазмидного вектора. Проведение комплекса доклинических исследований. Материалы и методы: Мононуклеарные клетки были получены из образцов периферической донорской крови методом лейкофереза, трансфекцию плазмидных конструкций CAR-CA125 или CAR-CEA проводили методом электропора-ции (Amaxa Nucleofector (Lonza)). Исследования эффективности в условиях in vitro проведены на СА125 позитивных культурах клеток рака яичника (OVCAR-3, OVKATE) и на СЕА позитивных культурах рака толстой кишки (НСТ116 и НТ29), в качестве контрольных моделей были использованы НЕК293 (линия не экспрессирующая СЕА) и MCF-7 (не экс-прессирующая СА125). Цитотоксические эффекты оценивали методами МТТ-теста, проточной цитофлуориметрии (Cytomix FC 500 (Beckman Coulter) и с использованием динамической системы мониторинга iCelligence. Контролем специфичности являлись ЛАК-клетки (лимфокинактиви-рованные киллеры). Исследования эффективности in vivo были проведены на моделях опухолей человека (OVCAR-3, НТ29), пассируемых на бестимусных мышах. Оценивались параметры роста опухоли и продолжительность жизни животных при введении генно-модифицированных лимфоцитов в дозах 1 х 105, 5 х 105 и 1 х 106 один раз в неделю. Основные параметры фармакокинетики были исследованы на двух видах животных — мышах и кроликах. Исследования токсичности включали оценку острой, подосторой и специфических видов токсичности. Результаты: Для обеих CAR-Т конструкций в исследованиях in vitro показана эффективность в отношении опухолевых клеток, экспрессирующих специфический антиген. Генно-модифицированные лимфоциты вызывали гибель опухолевых клеток в среднем 72,2 %± 6,1%, преимущественно путем апоптоза (40,2 %± 4,8 %). Исследования эффективности in vivo выявили достоверное торможение роста опухоли и увеличение продолжительности жизни животных при разовых дозах 5 х 105 и 1 х 106 клеток. Исследования фармакокинетики показали, что CAR-T лимфоциты обладают способностью к циркуляции в периферической крови с сохранением в них плазмидной ДНК и продуктов экспрессии (CAR) до 30 суток. Максимальная
концентрация наблюдается в периферической крови. Токсикологические исследования показали, что тестируемые СДк-Т при однократном внутривенном и внутрибрюшин-ном введении в исследуемых эффективных дозах имеют минимальную токсичность.
Заключение: По результатам проведенного комплекса доклинических исследований сделан вывод о безопасности и эффективности разработанной технологии и возможности проведения первой фазы клинических испытаний.
АССОЦИАЦИЯ АМПЛИФИКАЦИЙ 3Q, 5^ 6^ 7Q, 8Q, 9^ 10^ 12^ 16^ ^ СО СМЕРТНОСТЬЮ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ЛОКАЛИЗАЦИЯХ
Авторы: М.К. Ибрагимова, М.М. Цыганов, Н.В. Литвяков Место работы: НИИ онкологии «Томский национальный исследовательский медицинский центр», Томск Российской академии наук
Эл. почта: [email protected]
Цель: Целью настоящего исследования был анализ связи смертности при различных ЗНО и частоты 2-х и более фокальных амплификаций регионов 3q, 5р, 6р, 7q, 8q, 9р, 10р, 12р, "Щ, 16р, 19р по данным проекта ТСвД. Материалы и методы: В работе проанализированы данные ВОЗ по смертности в % от злокачественных новообразований различных локализаций и частота больных с 2 и более изучаемыми амплификациями в опухоли. Опухолевые локализации включали плоскоклеточный рак легкого, аденокар-циному желудка, рак прямой кишки, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак мочевого пузыря, аденокарциному толстой кишки, рак пищевода, рак яичников, меланому, плоскоклеточный рак шейки матки, РМЖ, саркому, рак почки, рак тела матки, аденокарциному простаты и рак щитовидной железы. Определяли частоту(%) встречаемости 2 и более амплификаций вышеуказанных регионов. Общее количество пациентов, включенных в анализ — 8356. В анализ включены данные только по солидным опухолям, из которых исключены опухоли мозга (мультиформная глиобластома, глиомы низкой степени) и уротелиальный рак мочевого пузыря, поскольку по этим конкретным локализациям нет данных по смертности, а также локализации, по которым в базе ТСвД менее 100 больных.
Результаты: Наибольшая частота больных с 2 и более амплификациями идентифицированных регионов наблюдается при плоскоклеточной раке легкого — 72 %, при этой локализации отмечается один из самых высоких уровней смертности — 89 %. Наименьшая частота — при раке щитовидной железы, смертность при этой локализации составила 11%. Отмечается высокий уровень корреляции (к = 0,842 при высоком уровне статистической значимости р = 0,000011) между частотой 2 и более амплификаций идентифицированных регионов в опухоли и смертностью при различных локализациях.
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том / vol. 10 № 3s1 • 2020
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
ТЕЗИСЫ ПОСТЕРНЫХ ДОКЛАДОВ И ПРИНЯТЫЕ К ПУБЛИКАЦИИ
Экспериментальная онкология
При этом, важно отметить, что при некоторых локализациях частота 2 и более амплификаций идентифицированных регионов в опухоли ниже смертности. Это отмечается для рака легкого, желудка, пищевода, толстой кишки, предстательной железы и опухолей головы и шеи. Это означает, что в процессе лечения происходит стимуляция образования амплификаций, больше чем их элиминация под действием лечения. При других локализациях, таких как РМЖ, меланома, рак мочевого пузыря и шейки матки, частота 2 и более амплификаций идентифицированных регионов в опухолях значительно выше частоты смертности. Это свидетельствует о том, что в процессе лечения этих локализаций в большей степени происходит элиминация клонов с амплификациями, чем их появление de novo.
Заключение: Таким образом, анализ связи частоты 2 и более амплификаций 3q, 5p, 6p, 7q, 8q, 9p, 10p, 10q, 12р, 13q, 16p, 18q, 19p со смертностью при различных локализациях показал исключительно высокий уровень корреляции, что свидетельствует об универсальности наличия/отсутствия 2 и более амплификаций идентифицированных регионов как маркера исхода заболевания.
ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ ХИМИОРЕЗИСТЕНТНОСТИ У РАЗНЫХ ЛИНИЙ КОЛОРЕКТАЛЬНОГО РАКА
Авторы: Н.И. Игнатова, И.Н. Дружкова, М. М. Лукина, А.В. Кашина, М.В. Ширманова
Место работы: ФГБОУ ВО «ПИМУ» Минздрава России, Нижний Новгород
Эл. почта: [email protected]
Цель: Создание химиорезистентных линий колоректаль-ного рака и характеристика изменений, происходящих в клетках на этапах формирования резистентности. Материалы и методы: В работе использовались две линии колоректального рака человека НТ29 и НСТ116, отличающиеся по морфологии, выраженности эпителиально-ме-зенхимального перехода, скорости пролиферации и исходному уровню чувствительности к химиопрепаратам. Химиорезистентные линии получали путем многократного воздействия на клетки малыми дозами препаратов 5-фторурацил и оксалиплатин. Исходные концентрации препаратов составляли 1/10 от предварительно установленной IC50 и увеличивались в процессе культивирования до терапевтических концентраций и выше. Критерием формирования химиорезистентности к какому-либо препарату являлось статистически значимое повышение его ингибирующей дозы IC50 (р < 0,05) по сравнению с IC50 нерезистентной линии того же пассажа. На этапах формирования резистентности оценивали морфологические изменения, скорость пролиферации, выживаемость. Также оценивали популяцию опухолевых стволовых клеток по экспресии маркеров CD133, CD44, CD24.
Результаты: Получены резистентные линии колоректального рака НТ29_ОХО, HT29_5FU, HCT116_OXO и HCT116_5FU. Процесс индуцирования химиорезистентности у клеточных линий занял 5 месяцев (20 недель) для HCT116 и 6 месяцев (24 недели) для HT29. В результате для линии НСТ116 при формировании устойчивости к препарату оксалиплатин значение IC50 увеличилось в 25,3 раза (с 0,75 ± 0,16 до 18,98 ± 2,75 мкМ), к препарату 5-фторура-цил — в 14 раз (с 3,16 ± 0,14 до 44,32 ± 3,56 мкМ). Для линии НТ29 значение IC50 для оксалиплатина увеличилось в 3 раза (с 1,97 ± 0,08 до 6,07 ± 0,29 мкМ), а для 5-фторура-цила — в 2,8 раза (с 13,92 ± 2,52 до 38,89 ± 7,6 мкМ). У линии НСТ116 при приобретении устойчивости к ок-салиплатину наблюдалось снижение пролиферативной активности, а для 5-фторурацила время удвоения клеток было увеличено относительно контроля. У линии НТ29 наблюдалось увеличение времени удвоения числа клеток на первых этапах наблюдения, а в конечной точке значения не отличались от контроля. Оценка перекрестной резистентности к оксалиплатину достоверно показала увеличение чувствительности к оксалиплатину клеток HCT116_5FU (3,16 ± 0,14 vs 2,56 ± 0,05 мкМ) и увеличение чувствительности к 5-фторурацилу клеток НСТ116_ОХО (0,75 ± 0,16 vs 0,40 ± 0,06 мкМ). Популяция опухолевых стволовых клеток увеличилась с приобретением линиями резистентности. Заключение: Индуцирование химиорезистентности в разных линиях колоректального рака ведет к специфическим изменениям для каждой линии и сопровождается изменениями пролиферации и пула опухолевых стволовых клеток. Работа поддержана РФФИ № 18-29-09054.
АНАЛИЗ ТАРГЕТНЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ ПЕПТИДОВ -ИНГИБИТОРОВ ЦИКЛИН-ЗАВИСИМОЙ КИНАЗЫ6
Авторы: Т.М. Кулинич, А.В. Иванов, А.М. Шишкин, В.К. Боженко Место работы: ФГБУ «РНЦРР» Минздрава России, Москва Эл. почта: [email protected]
Цель: Определение противоопухолевых свойств последовательностей, полученных с помощью методов математического моделирования и ингибирующих образование комплекса CDK 6/циклин D.
Материалы и методы: Исследованы показатели цитоток-сического и цитостатического воздействия на опухолевые клетки четырех искусственных пептидных конструкций (ИПК). Исследование выполнено in vitro на культурах клеток линий опухолей человека: MCF-7, А549, SKOV-3, НСТ116. Клетки культивировали в стандартных условиях: 37 °С, 5 % СО2, среда DMEM. Анализ проведен методом проточной цитометрии (Cytomics FC500, ВС, США), оценены уровни апоптоза и некроза (Apoptosis Detection Kit, ВС, Inc, Франция), уровень Вс12 (Anti Human Bcl-2 (Caltag Laboratories, США)) и pRb (BD, США). Активность проли-
ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЕ ОПУХОЛИ Российское общество клинической онкологии
том / vol. 10 №3s1 • 2020
MALIGNANT TUMOURS
Russian Society of Clinical Oncology
