CC BY
3УДК 619: 616.993.192 АНТИМИКРОБНАЯ АКТИВНОСТЬ НОВЫХ ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ РЯДА АМИДОВ ЖИРНЫХ КИСЛОТ IN
VITRO И IN VIVO
Фетисов Леонид Николаевич, к.в.н., ведущий научный сотрудник, ORCID: 0000-0002-2618-1079, SPIN-код: 8809-2266, AuthorID: 508873,
e-mail: fetisoff.leonid2018@yandex. ru Зубенко Александр Александрович, д.б.н., главный научный сотрудник, ORCID: 0000-0001-7943-7667, SPIN-код: 7776-8122,
AuthorID: 180846, e-mail: [email protected] Святогорова Александра Евгеньевна, к.с.-х.н., ученый секретарь, старший научный сотрудник, ORCID: 0000-0003-4233-1740, SPIN-код: 2369-0027, AuthorID: 719399, e-mail: [email protected] Стрельников Богдан Андреевич - лаборант-исследователь, bogdan. bogdan. 7474@mail. ru Северо - Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт - филиал федерального государственного бюджетного научного учреждения « Федеральный Ростовский аграрный научный центр», Новочеркасск, Россия
Аннотация. Амиды жирных кислот являются разновидностью поверхностно-активных веществ (ПАВ), представляющих собой класс соединений, обладающих разнообразной биологической активностью. Антибактериальная активность этих соединений имеет широкий спектр действия. Они могут быть использованы в качестве антиинфекционных средств при бактериозах и протозоозах и могут найти широкое применение
в области медицины и ветеринарии. Актуальность разработки новых ПАВ и расширение спектра их применения часто отмечается в научных статьях отечественных и зарубежных авторов. В качестве исходного материала используются синтетические жирные кислоты, жирные спирты, различные масла и жирные амины. Целью данного исследования является разработка новых поверхностно-активных вещества на основе амидов жирных кислот и изучение их биологической активности.
Ключевые слова: поверхностно-активные вещества, амиды жирных кислот, микробное число, антибактериальная активность
ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF NEW SURFACTANTS OF A NUMBER OF FATTY ACID AMIDES IN VITRO AND IN VIVO
Fetisov Leonid Nikolaevich, Candidate of Veterinary Sciences,Leading Researcher, ORCID: 0000-0002-2618-1079, SPIN code: 8809-2266, AuthorlD: 508873, e-mail: fetisoff.leonid2018@yandex. ru Zubenko Alexander Alexandrovich, Doctor of Biological Sciences, Chief Researcher, ORCID: 0000-0001-7943-7667, SPIN code: 7776-8122, AuthorlD: 180846, e-mail: [email protected] Svyatogorova Alexandra Evgenievna, Candidate of Agricultural Sciences, Academic Secretary, Senior Researcher, ORCID:
0000-0003-4233-1740, SPIN code: 2369-0027, AuthorID: 719399, e-mail: [email protected] Strelnikov Bogdan Andreevich, laboratory researcher. bogdan. bogdan. 7474@mail. ru
North - Caucasus Zonal Scientific Research Veterinary Institute -Branch of the Federal State Budget Scientific Institution «Federal Rostov Agricultural Research Centre», Novocherkassk, Russia
Annotation. Fatty acid amides are a variety of surfactants (surfactants), which are a class of compounds with diverse biological activity. The antibacterial activity of these compounds has a wide range of effects. They can be used as anti-infective agents for bacteriosis and protozoa and can be widely used in the field of medicine and veterinary medicine. The relevance of the development of new surfactants and the expansion of the range of their application is often noted in scientific articles by domestic and foreign authors. Synthetic fatty acids, fatty alcohols, various oils and fatty amines are used as the starting material. The purpose of this study is to develop new surfactants based on fatty acid amides and study their biological activity.
Keywords: surfactants, fatty acid amides, microbial number, antibacterial activity
Введение. Необходимость разработок новых ПАВ и расширение спектра их применимости постоянно отмечается в отечественной и зарубежной литературе. [1, 7, 9, 14] Маневич, Б. В. и соавт. (2017) представили в своей работе результаты определения эффективности новой дезинфекционной композиции на основе катионных ПАВ, обладающих высокой биоцидной активностью [4]. Yiling Li at all (2023), исследовали новые четвертичные аммониевые соединения в качестве новых разновидностей ПАВ, установили помимо высоких антибактериальных свойств также противовирусную активность, в том числе в отношении коронавирусов [16]. Linda Bazina at all (2019) синтезировали новые типы четвертичных аммониевых солей, полученных из хинуклидин-3-ола и алкильной цепи переменной длины [12]. Было установлено, что новые ПАВ
были активны в отношении грампозитивных бактерий в диапазоне 0,06 - 3,9 мкг/мл и микромицетов в диапазоне 0,12 - 3,9 мкг/мл. Hiroki Kourai at all (2006) синтезировали новые ПАВ из ряда бисчетвертичных аммониевых соединений, биологические тесты показали, что соединения обладают широким спектром антибактериальной и антимикотической активности [11]. В работе Бодряковой М. А. и соавт. (2018) представлены результаты изучения влияния катионных ПАВ на рост и развитие цыплят [2]. Клименко А.И. и соавторы (2017) предложили новый способ лечения ран у животных с применением антимикробного препарата неантибиотического происхождения на основе амида жирной кислоты [5]. Дробин Ю.Д. и соавт. (2018) в своей статье приводят данные по исследованию влияния синтетических ПАВ ряда амидов жирных кислот на сохранность, динамику роста, морфометрические показатели непородных цыплят и цыплят кросса Росс 308. По их данным установлена ростостимулирующая активность при выпаивании цыплятам растворов амидов лауриновой и миристиновой кислот [3]. Дробин Ю. Д. и соавт. (2019) показали, что выпаивание 0,01% водного раствора амида миристиновой кислоты (катионоактивное ПАВ) оказывает энтеропротекторное действие при микотоксикозах, снижая уровень заболеваемости и падежа птицы [6].
В работе Deisi Altmajer Vaz et all (2012) изучено влияние ПАВ на стенку бактериальных клеток. Авторы сделали вывод, что применение ПАВ влияет на проницаемость клеточных мембран за счёт изменения термодинамических характеристик мембран. Данные изменения могут быть использованы для повышения терапевтической эффективности лечебных препаратов [10].
В ряде работ изучены теоретические аспекты влияния ПАВ на мембраны клеток [8, 13, 15]. В нашей работе представлены результаты изучения антимикробной активности поверхностно-активных веществ ряда амидов жирных кислот.
Материалы и методы.
Химическая часть. Выбор катионных ПАВ. В работе использовали катионные ПАВ из ряда амидов жирных кислот, которые описаны в наших статьях и патентах. Синтез их проведен с учетом выявленных зависимостей строение - биологическая активность - токсичность. Получен ряд соединений общей формулы, представленной на рисунке 1.
CH3-(CH2)n-(C=O)-R
1(a-n)
Где n - число метиленовых звеньев в молекуле жирной кислоты Рис. 1. Общая формула соединений
Амиды 1 получают из соответствующих кислот 2, например, лауриновой (n=10) или миристиновой (n=12), или другой жирной кислоты
и N, №диметил-1,3-диаминопропана 3 по схеме, указанной на рисунке 2.
\
O N— / _/
R-COOH + N ^^ N — R-C / '
I
2 3 1
1(n=10; 12)
Рис. 2. Схема получения амидов жирных кислот
Амиды жирных кислот для придания им водорастворимых свойств изучали в виде солей с минеральными и органическими кислотами.
Биологическая часть. Для оценки антибактериальной активности соединений использовали метод серийных разведений в жидкой питательной среде (питательный бульон ГРМ ТУ 9398-021), МИК выражали в мкг/мл. В качестве тест культур использовали взвеси стандартных штаммов Staphylococcus aureus (штамм ВКМ V-128) и Escherichia coli (штамм ВКМ V-820), учитываемая бактериальная нагрузка составляла 125 тысяч м.кл/мл.
Препаратами сравнения были ципрофлоксацин (антибиотик из ряда фторхинолонов) и фуразолидон (нитрофурановый препарат).
В отдельном опыте на молодых лабораторных крысах изучали влияние амида миристиновой кислоты на состав микрофлоры кишечника при длительной выпойке (7 дней) водного раствора. По окончании выпойки у крыс взяли изолированный участок кишечника на границе тонкого и толстого кишечника длиной 10 см. В содержимом этого участка определяли число микробных клеток путем высева на селективные питательные среды: Эндо-агар для выделения эшерихий (Е.соИ sp.), Висмут-агар для выделения сальмонелл ^а1т^р.), Лакто-агар для выделения лактобактерий. Использовали метод Коха, который широко применяют для определения численности жизнеспособных клеток в различных естественных субстратах и в лабораторных культурах, согласно которому каждая колония является потомством одной клетки. Это позволяет на основании числа колоний, выросших после посева на плотную питательную среду определенного объёма, определенной степени разведения исследуемой суспензии, судить об исходном содержании в ней клеток микроорганизмов. Результаты количественного определения микроорганизмов учитывали в условных, так называемых колониеобразующих единицах (КОЕ). Количество клеток в 1 мл исследуемого субстрата вычисляли по формуле, представленной на рисунке 3.
(М х р : V
Где N - количество клеток в 1мл; М - среднее число колоний, выросших после посева из данного разведения R; V - объем суспензии, взятый для посева.
Результаты исследований. В таблице 1 представлены результаты определения бактериостатической активности синтезированных нами амидов жирных кислот в условиях т уИго.
Таблица 1. Антибактериальная активность новых катионных ПАВ,
установленная в жидкой питательной среде методом серийных разведений
№ Номер Химическое название Минимальная
п/п соединения* ингибирующая концентрация, мкг/мл
St. aureus E. coli
1 «726» N-(3 -диметиламинопропил) амид миристиновой кислоты 6,25 6,25
2 «735» N-(3 -диметиламинопропил) амид пальмитиновой кислоты 6,25 6,25
3 «737» ^бензилпроизводное К^-диметиламинопропил амида пальмитиновой кислоты 6,25 6,25
4 «738» N-(3 -диметиламинопропил) амид Олеиновой кислоты 12,5 -25,0 6,25 - 12,5
5 «752» n=10 диметиламинопропиламид лауриновой кислоты 62,5 31,25 - 62,5
6 «809» диметиламинопропиламид каприновой кислоты >250,0 >250,0
7 Препарат сравнения Ципрофлоксацин 15,6 15,6
8 Препарат сравнения Фуразолидон 15,6 7,8
* - указаны номера соединений согласно списку в лабораторном журнале
Данные таблицы 1 свидетельствуют, что большинство амидов жирных кислот обладают более высокой бактериостатической активностью, чем левомицетин и тетрациклин. Амиды миристиновой, пальмитиновой и олеиновой кислот, превосходят или близки по активности ципрофлоксацину и фуразолидону. Амиды жирных кислот в равной степени подавляют рост грамположительных и грамотрицательных бактерий.
Результаты опыта in vivo по определению микробного числа бактерий в содержимом кишечника молодых крыс в результате длительного
выпаивания водного раствора амида миристиновой кислоты представлены в таблице 2.
Таблица 2. Микробное число содержимого кишечника молодых крыс в результате длительного выпаивания им 0,01% водного раствора ПАВ 726 (амид миристиновой кислоты)
Питательная среда и вид бактерий Опытные группы Контрольные группы
1 2 3 1 2 3
Агар-эндо (E.coli sp.) 106 103 106 107 106 107
Лакто-агар (Lactobacterium sP.) 104 104 104 109 109 108
Висмут-агар (Salmonella sp.) 105 100 104 107 108 107
Результаты этого исследования показали снижение микробного числа бактерий, в том числе условно-патогенных видов, в содержимом кишечника лабораторных крыс в результате длительного выпаивания им 0,01% водного раствора амида миристиновой кислоты (ПАВ 726).
Длительное выпаивание молодым крысам водного 0,01% раствора амида миристиновой кислоты (ПАВ 726) в два цикла по7 дней с перерывом в 7 дней не привело к развитию общей токсической реакции, к поражению внутренних органов. У животных опытной группы отметили снижение общего микробного числа бактерий в содержимом кишечника.
Выводы. Исследования антимикробной активности амидов жирных кислот, проведенные в условиях in vitro и in vivo, показали, что ПАВ этого ряда обладают высокой бактериостатической активностью в отношении референтных штаммов грамположительных и грамотрицательных бактерий, а также вызывают значительное снижение числа бактерий в содержимом кишечника животных.
Литература
1. Взаимодействие эпоксидированного соевого масла (ЭСМ) с первичными аминами как способ формирования поверхностно-активных
веществ / А. И. Клименко, А. А. Зубенко, В. В. Чекрышева [и др.] // Ветеринария и кормление. - 2024. - № 3. - С. 65-68. - DOI 10.30917/АТТ-УК-1814-9588-2024-3-12. - EDN JBBXDK.
2. Влияние катионных ПАВ на строение стенки кишечника цыплят / М. А. Бодрякова, Л. Н. Фетисов, А. А. Зубенко, А. Н. Бодрякова // Актуальные проблемы и методические подходы к диагностике, лечению и профилактике болезней животных : Материалы международной научно-практической конференции, пос. Персиановский, 08 февраля 2018 года. -пос. Персиановский: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Донской государственный аграрный университет", 2018. - С. 25-30. - EDN YVWTEA.
3. Исследование поверхностно-активных веществ в качестве стимуляторов роста молодняка птицы / Ю. Д. Дробин, А. А. Зубенко, Л. Н. Фетисов [и др.] // Ветеринария и кормление. - 2018. - № 1. - С. 14-15. - EDN YQVLQP.
4. Маневич, Б. В. Возможности повышения бактерицидных свойств катионных биоцидов / Б. В. Маневич, Ж. И. Кузина, Т. В. Косьяненко // Переработка молока. - 2017. - № 6(212). - С. 16-19. - EDN YZJWOP.
5. Препарат нового поколения для лечения ран у животных / А. И. Клименко, А. А. Зубенко, А. Н. Бодряков, Н. М. Сербиновская // Актуальные проблемы и методические подходы к диагностике, лечению и профилактике болезней животных : Материалы всероссийской научно-практической конференции, пос. Персиановский, 10 февраля 2017 года. - пос. Персиановский: Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Донской государственный аграрный университет", 2017. - С. 59-63. - EDN YQRROL.
6. Протективные свойства поверхностно-активных веществ при микотоксикозах птиц / Ю. Д. Дробин, Н. А. Солдатенко, А. А. Зубенко [и
др.] // Ветеринария и кормление. - 2019. - № 5. - С. 46-47. - DOI 10.30917/ATT-VK-1814-9588-2019-5-19. - EDN XOLFGD.
7. Синтез и биологическая активность поверхностно активного вещества на основе эпоксидированного соевого масла / А. А. Зубенко, А. И. Клименко, Л. Н. Фетисов, А. Е. Святогорова // Ветеринария и кормление. -2024. - № 5. - С. 52-55. - DOI 10.30917/ATT-VK-1814-9588-2024-5-12. -EDN QXOSHI.
8. Aleksandra Wypych, Kamil Szpotkowski, Stefan Jurga, Ludwik Domka, Maciej Kozak. Interactions of a cationic surfactant - (benzyloxymethyl) dodecyldimethylammonium chloride with model biomembrane systemsOriginal Research Article^Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 108, 1 August 2013, Pages 212-218
9. Complexes of Mn(II) and Co(III) with 2-Amino-N'-(pyridin-2-ylmethylene)benzohydrazide: Synthesis, Structure, and In Vitro Biological Activity / A. K. Matiukhina, А. E. Vladimirova, Е. N. Zorina-Tikhonova [et al.] // Russian Journal of General Chemistry. - 2023. - Vol. 93, No. S2. - P. S596-S604. - DOI 10.1134/s1070363223150276. - EDN VGAHBV.
10. Deisi Altmajer Vaz, Eduardo J. Gudina, Encarnacion Jurado Alameda, Jose A. Teixeira, Ligia R. Rodrigues. Performance of a biosurfactant produced by a Bacillus subtilis strain isolated from crude oil samples as compared to commercial chemical surfactantsOriginal Research Article. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 89, 1 January 2012, Pages 167-174
11. Hiroki Kourai, Tadao Yabuhara, Akihiro Shirai, Takuya Maeda, Hideki Nagamune/ Syntheses and antimicrobial activities of a series of new bis-quaternary ammonium compounds//European Journal of Medicinal Chemistry Volume 41, Issue 4, April 2006, Pages 437-444 https ://doi.org/10.1016/j.ejmech.2005.10.021
12. Linda Bazina, Ana Maravic , Lucija Krce , Barbara Soldo , Renata Odzak, Viljemka Bucevic Popovic, Ivica Aviani , Ines Primozic , Matilda Sprung/
Discovery of novel quaternary ammonium compounds based on quinuclidine-3-ol as new potential antimicrobial candidates // European Journal of Medicinal Chemistry Volume 163, 1 February 2019, Pages 626-635 https: //doi. org/10.1016/j. ej mech.2018.12.023
13. Sahar Noori, Andleeb Z. Naqvi, Wajid H. Ansari, Kabir-ud-Din. Experimental and theoretical approach to cationic drug-anionic gemini surfactant systems in aqueous mediumOriginal Research Article. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 115, 1 March 2014, Pages 71-78
14. Synthesis, Structure, and Biological Activity of New Metal Carboxylate Complexes Containing a Glycoluril Fragment / V. V. Baranov, N. I. Vikrishchuk, A. A. Zubenko [et al.] // Russian Journal of General Chemistry. - 2023. - Vol. 93, No. 4. - P. 863-869. - DOI 10.1134/s1070363223040126. - EDN AVUDSN.
15. Vivek Borhade, Sulabha Pathak, Shobhona Sharma, Vandana Patravale. Clotrimazole nanoemulsion for malaria chemotherapy. Part I: Preformulation studies, formulation design and physicochemical evaluationOriginal Research Article. International Journal of Pharmaceutics, Volume 431, Issues 1-2, 15 July 2012, Pages 138-148).
16. Yiling Li, Bolei Li , Xiao Guo , Haohao Wang , Lei Cheng/ Applications of quaternary ammonium compounds in the prevention and treatment of oral diseases: State-of-the-art and future directions// Journal of Dentistry Volume 137, October 2023, 104678 https: //doi. org/10.1016/j .j dent.2023.104678
References
1. Interaction of epoxidized soybean oil (ESM) with primary amines as a method of formation of surfactants / A. I. Klimenko, A. A. Zubenko, V. V. Chekrysheva [et al.] // Veterinary medicine and feeding. - 2024. - No. 3. - pp. 65-68. - DOI 10.30917/ATT-VK-1814-9588-2024-3-12. - EDN JBBXDK.
2. The effect of cationic surfactants on the structure of the intestinal wall of chickens / M. A. Bodryakova, L. N. Fetisov, A. A. Zubenko, A. N. Bodryakova // Current problems and methodological approaches to the diagnosis, treatment and prevention of animal diseases : Materials of the international scientific and practical conference, village. Persianovsky, February 08, 2018. - village Persianovsky: Federal State Budgetary Educational Institution of Higher professional Education "Don State Agrarian University", 2018. - pp. 25-30. -EDN YVWTEA.
3. Investigation of surfactants as growth stimulators of young poultry / Yu. D. Drobin, A. A. Zubenko, L. N. Fetisov [et al.] // Veterinary medicine and feeding. - 2018. - No. 1. - pp. 14-15. - EDN YQVLQP.
4. Manevich, B. V. Possibilities of increasing the bactericidal properties of cationic biocides / B. V. Manevich, J. I. Kuzina, T. V. Kosyanenko // Milk processing. - 2017. - № 6(212). - Pp. 16-19. - EDN YZJWOP.
5. A new generation drug for the treatment of wounds in animals / A. I. Klimenko, A. A. Zubenko, A. N. Bodryakov, N. M. Serbinovskaya // Actual problems and methodological approaches to the diagnosis, treatment and prevention of animal diseases : Materials of the All-Russian scientific and practical conference, village Persianovsky, February 10, 2017. - village Persianovsky: Federal State Budgetary Educational Institution of Higher professional Education "Don State Agrarian University", 2017. - pp. 59-63. -EDN YQRROL.
6. Protective properties of surfactants in mycotoxicosis of birds / Yu. D. Drobin, N. A. Soldatenko, A. A. Zubenko [et al.] // Veterinary medicine and feeding. - 2019. - No. 5. - pp. 46-47. - DOI 10.30917/ATT-VK-1814-9588-2019-5-19. - EDN XOLFGD.
7. Synthesis and biological activity of a surfactant based on epoxidized soybean oil / A. A. Zubenko, A. I. Klimenko, L. N. Fetisov, A. E. Svyatogorova
// Veterinary medicine and feeding. - 2024. - No. 5. - pp. 52-55. - DOI 10.30917/ATT-VK-1814-9588-2024-5-12. - EDN QXOSHI.
8. Aleksandra Wypych, Kamil Szpotkowski, Stefan Jurga, Ludwik Domka, Maciej Kozak. Interactions of a cationic surfactant - (benzyloxymethyl) dodecyldimethylammonium chloride with model biomembrane systemsOriginal Research Article.nColloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 108, 1 August 2013, Pages 212-218
9. Complexes of Mn(II) and Co(III) with 2-Amino-N'-(pyridin-2-ylmethylene)benzohydrazide: Synthesis, Structure, and In Vitro Biological Activity / A. K. Matiukhina, A. E. Vladimirova, E. N. Zorina-Tikhonova [et al.] // Russian Journal of General Chemistry. - 2023. - Vol. 93, No. S2. - P. S596-S604. - DOI 10.1134/s1070363223150276. - EDN VGAHBV.
10. Deisi Altmajer Vaz, Eduardo J. Gudina, Encarnacion Jurado Alameda, Jose A. Teixeira, Ligia R. Rodrigues. Performance of a biosurfactant produced by a Bacillus subtilis strain isolated from crude oil samples as compared to commercial chemical surfactantsOriginal Research Article. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 89, 1 January 2012, Pages 167-174
11. Hiroki Kourai, Tadao Yabuhara, Akihiro Shirai, Takuya Maeda, Hideki Nagamune/ Syntheses and antimicrobial activities of a series of new bis-quaternary ammonium compounds//European Journal of Medicinal Chemistry Volume 41, Issue 4, April 2006, Pages 437-444 https ://doi.org/10.1016/j.ejmech.2005.10.021
12. Linda Bazina, Ana Maravic , Lucija Krce , Barbara Soldo , Renata Odzak, Viljemka Bucevic Popovic, Ivica Aviani , Ines Primozic , Matilda Sprung/ Discovery of novel quaternary ammonium compounds based on quinuclidine-3-ol as new potential antimicrobial candidates // European Journal of Medicinal Chemistry Volume 163, 1 February 2019, Pages 626-635 https: //doi. org/10.1016/j. ej mech.2018.12.023
13. Sahar Noori, Andleeb Z. Naqvi, Wajid H. Ansari, Kabir-ud-Din. Experimental and theoretical approach to cationic drug-anionic gemini surfactant systems in aqueous mediumOriginal Research Article. Colloids and Surfaces B: Biointerfaces, Volume 115, 1 March 2014, Pages 71-78
14. Synthesis, Structure, and Biological Activity of New Metal Carboxylate Complexes Containing a Glycoluril Fragment / V. V. Baranov, N. I. Vikrishchuk, A. A. Zubenko [et al.] // Russian Journal of General Chemistry. - 2023. - Vol. 93, No. 4. - P. 863-869. - DOI 10.1134/s1070363223040126. - EDN AVUDSN.
15. Vivek Borhade, Sulabha Pathak, Shobhona Sharma, Vandana Patravale. Clotrimazole nanoemulsion for malaria chemotherapy. Part I: Preformulation studies, formulation design and physicochemical evaluationOriginal Research Article. International Journal of Pharmaceutics, Volume 431, Issues 1-2, 15 July 2012, Pages 138-148).
16. Yiling Li, Bolei Li , Xiao Guo , Haohao Wang , Lei Cheng/ Applications of quaternary ammonium compounds in the prevention and treatment of oral diseases: State-of-the-art and future directions// Journal of Dentistry Volume 137, October 2023, 104678 https: //doi. org/10.1016/j .j dent.2023.104678
УДК 618:619
ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ МИКРОФЛОРЫ СЕКРЕТА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ К АНТИБИОТИКАМ ПРИ МАСТИТЕ У
КОШЕК
Чекрышева Виктория Владимировна, директор, д.в.н., доцент, ORCID: 0000-0002-2793-321X, SPIN-код: 5247-5424, AuthorID: 810594,
e-mail: veterinarl987@mail. ru Северо - Кавказский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт - филиал Федерального государственного
